人巨细胞病毒体外感染诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡

本研究探讨人巨细胞病毒（hCMV）体外感染是否可引起早幼粒细胞的增殖、分化抑制、诱导其凋亡，并探讨其作用机制。采用hCMV AD169株体外感染早幼粒细胞白血病细胞HL-60，用PCR检测hCMV DNA，用形态学观察、DNA片段化检测及Annexin V／PI染色流式细胞仪检测等方法分析细胞凋亡情况。结果表明：hCMV AD169株在体外能明显抑制早幼粒细胞白血病细胞HL-60的生长，抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系；PCR检测发现病毒感染组HL-60细胞中有hCMV IEA的表达；形态学观察和DNA片段化检测证实了细胞凋亡的存在；流式细胞仪检测结果显示HL-60细胞凋亡率随培养液中病毒浓度的加大和感染时间的延长而增高，二者呈依赖关系。结论：hCMV AD169株在体外可直接感染HL-60细胞；hCMV AD169株在体外感染HL-60细胞后，可抑制HL-60细胞的分化和增殖；hCMV AD169株体外感染HL-60细胞后可诱导其凋亡，且凋亡率与病毒剂量及作用时间呈依赖性关系。     

人巨细胞病毒抑制人巨核系祖细胞增殖的体外研究

目的 探讨人巨细胞病毒（HCMV）对人巨核系祖细胞增殖的影响。方法 收集20份脐血标本,采用巨核系祖细胞体外半固体培养技术,观察HCMV AD169株对巨核细胞集落形成单位（CFU－MK）生长的影响,分别用原位聚合酶链反应（IS－PCR）和RT－PCR检测集落细胞中的HCMV DNA与抑刻早期抗原（IEA）mRNA。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU－MK生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系,经IS－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有HCMV DNA存在;RT－PCR检测发现病毒感染组CFU－MK细胞中有IEAmRNA的表达。结论 HCMV AD169株可直接感染巨核系祖细胞,并抑制其增殖与分化;HCMV对巨核系祖细胞的直接抑制作用可能是该病毒感染后引起血小板减少的原因之一。     

当归多糖在体外抑制HCMV感染所致巨核系细胞凋亡中的作用探讨

本研究探讨当归多糖（angelica polysaccharide,APS）在体外抑制HCMV感染致人巨核系细胞凋亡中的作用。HCMV AD169体外感染巨核系细胞CHRF-288-11,在病毒感染后第3天向试验体系中加入APS。用PCR扩增检测HCMV DNA,用形态学、DNA片段化、细胞表面标志检测APS对HCMV感染所致巨核系细胞凋亡的影响。结果表明：APS在一定程度上能抑制HCMV体外感染诱导的巨核系细胞CHRF-288-11凋亡,且呈剂量依赖性。感染的巨核系细胞CHRF-288-11中有hCMV IEA的表达,形态学和DNA片段化分析证实了细胞凋亡的存在,Annexin V／PI双染流式细胞仪分析显示受感染的CHRF细胞中随着加入APS剂量的减少,凋亡率呈上升趋势。结论：HC—MVAD169株在体外可直接感染巨核系细胞并降低其存活率;HCMVAD169株在体外感染巨核系细胞后可诱导其加重凋亡,凋亡率与时间呈正相关。在HCMVAD169株体外感染巨核系细胞后,向培养细胞中加入APS,可以提高受染细胞的存活率,表明APS对HCMV感染的巨核系细胞有一定的保护作用;APS在一定程度上能抑制HCMV体外感染诱导的巨核系细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

人巨细胞病毒感染巨核祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究

目的探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对人巨核细胞及其前体细胞的抑制作用及其机制 ,并观察HCMV反义寡核苷酸 (ASON)的抗病毒感染作用。方法在半固体培养基上定向诱导CD34 细胞向巨核细胞分化。用HCMVAD16 9病毒株感染培养的巨核细胞和经ASON预处理的CD34 细胞 ,观察CFU MK形成率的变化 ,分别用PCR、RT PCR法检测CFU MK细胞中HCMV即刻早期蛋白 (IEP)基因DNA和mRNA、即刻早期基因 (UL36 )mRNA表达。用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果CD34 细胞在半固体培养基中定向分化为巨核祖细胞。HCMVAD16 9株能明显抑制巨核细胞的体外增殖 ,与灭活病毒组比较 ,三个不同病毒滴度感染组的CFU MK分别减少了 2 1.6 %、33.8%、4 6 .3% ,显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系 ;HCMV感染的CFU MK细胞中可检出HCMVIEP基因DNA、IEP基因mRNA和UL36mRNA。 0 .0 8μmol/L的UL36ASON (UL36Anti)能使HCMV感染细胞CFU MK形成率恢复正常 ,与 10 0 0 0TCID50 HCMV感染组比较 (分别为 5 8.2 4± 7.4 2和 31.17± 4 .4 5 ) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,RT PCR未能检出UL36mRNA。而改变UL36Anti中 1个碱基的ASON(MM1) ,浓度只有达到 0 .4 0 μmol/L才能对抗HCMV的作用。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为 90 .0 0 μmol/L。结     

人巨细胞病毒激活感染诊断的进展

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)对人体的感染过程 ,分为初次感染 (原发性感染 )、激活性感染 (复发性感染 )和位于两者之间的潜伏感染。ＨＣＭＶ一旦感染 ,即终生相伴。潜伏的病毒则以基因或基因产物的形式存在于细胞中 ,多种诱因均可使潜伏的病毒被激活 ,引发明显的临床症状 ,其后果非常严重。目前临床检验面临最大的困惑是如何确诊宿主是否处于ＨＣＭＶ激活感染状态 ?近年来随着国内外免疫分子生物学技术的发展 ,人类对ＨＣＭＶ的感染诊断研究取得了新进展。一、病毒分离与鉴定迄今为止 ,从待检样本中分离到一定量的ＨＣＭＶ已成为该病诊断的金…     

体外人干细胞分化血小板研究进展

血小板输注是临床治疗血小板减少症的主要方法.但是由于血小板采集难度大、使用成本高的特点,再加上献血者数量有限,使得其治疗开展受到很大限制.因此体外生成血小板的相关研究在世界范围内日益受到广泛关注.体外生成血小板具有非供体依赖性、无血小板抗原限制性、低同种异体免疫风险等优点.目前体外产生功能性血小板的效率较低,距离实现体...     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的 推广一种肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的实验室诊断方法.方法 运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒低基质磷蛋白65(pp65)单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的HCMV pp65抗原进行标记识别.结果 检测61例肾移植受者中HCMV pp65抗原阳性36例(59%),有症状的20例(33%),平均抗原指数(98±31)/(2×105)WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)/(2×105)WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论 该法简便、敏感,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

甘草酸对感染人巨细胞病毒的人胚肺成纤维细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨甘草酸对感染人巨细胞病毒(HCMV)的人胚肺成纤维细胞MRC-5增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法 体外培养MRC-5细胞,并将其分为对照组、病毒组、更昔洛韦组(50μg/mL)、甘草酸低剂量组(0.25 mg/mL)、甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)、甘草酸高剂量组(1.00 mg/mL)。接种HCMV不同时间后,分别使用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase3)等蛋白表达情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 CCK8实验结果显示,经HCMV感染48、72 h时,病毒组增殖活性均低于对照组,更昔洛韦组、甘草酸中剂量组、甘草酸高剂量组增殖活性均高于病毒组,差异有统计学意义(P<0.05);甘草酸中剂量组与甘草酸高剂量组增殖活性比较,差异无统计学意义(P>0.05),故选择甘草酸中剂量组(0.50 mg/mL)进行后续实验,并...     

人巨细胞病毒感染对非特异性下腰痛患者内皮功能的影响

目的探讨内皮功能异常与人巨细胞病毒(HCMV)感染致非特异性下腰痛(NLBP)的关系,及其在NLBP发病中的作用。方法NLBP组50例,对照组36例,检测尿沉渣HCMV-DNA和包涵体,外周血HCMV-IgM、IgG和内皮素水平。结果NLBP组尿HCMV-DNA和包涵体,血HCMV-IgM、IgG阳性率高于正常对照组(P<0·05)。NLBP组内皮素水平增高(P<0·05)。结论NLBP常伴有HCMV感染及内皮功能异常。     

脐带造血干细胞和巨核细胞microRNA表达谱的差异

目的探讨定向诱导造血干细胞分化为巨核细胞和血小板的分子机制。方法将脐带造血干细胞培养后,分离巨核细胞,分别提取造血干细胞和巨核细胞总RNA,进行microRNA芯片分析。结果与造血干细胞相比,巨核细胞中表达上调超过2倍的microRNA有183个,下调超过2倍的microRNA有139个。结论造血干细胞和巨核细胞microRNA表达谱存在差异,尤其是多个microRNA与定向分化巨核细胞相关。     

人巨细胞病毒多肽抗原的免疫原性分析

目的分析人巨细胞病毒多肽抗原的免疫原性强弱,寻求与早期诊断相关的抗原成分。方法应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹技术对比分析细胞抗原与病毒抗原的差异,确定病毒多肽抗原的存在,利用不同时期免疫动物的多克隆抗体分析病毒多肽抗原的免疫原性。结果SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和多克隆抗体免疫印迹结果表明分子量为65kD和72kD的人巨细胞病毒多肽抗原免疫原性较强,分子量为51kD和58kD的病毒多肽抗原免疫原性较弱,分子量为150kD的抗原免疫原性最弱。结论65kD和72kD的人巨细胞病毒多肽抗原可以应用于病毒感染的临床确诊。     

骨髓增生异常综合征巨核细胞增殖与凋亡的初步研究

为观察骨髓增生异常综合征 (MDS)巨核系细胞增殖与凋亡状况 ,用CD4 1免疫酶标 (APAAP)结合DNA末端原位标记 (ISEL) ,分析 2 9例MDS患者骨髓塑料冷包埋切片中巨核细胞的增生状况、凋亡数量及特征 ,并以缺铁性贫血 14例作为对照。结果显示 ,2 9例MDS之CD4 1阳性细胞数平均为 (2 6 .2 3± 18.18)个 /毫米2 ,对照组 (15 .6 4± 7.11)个 /毫米2 ,t′2 .5 4 ,P <0 .0 5 ;MDS病例微小巨核细胞明显增多 ,占巨核细胞总数的 31.2 0 % ,对照组仅12 .0 1% ,P <0 .0 1。MDS巨核细胞总数与微小巨核细胞数之间显示正相关 ,r值 0 .70 2 ,P <0 .0 1。MDS之巨核细胞且出现在骨小梁旁的异常分布及成簇现象。MDS巨核系细胞凋亡仅占该系细胞的 4 .4 0 % ;占凋亡细胞总数的9.32 % ,与对照组相比无显著差异。MDS巨核系细胞凋亡仅见于微小巨核细胞 ,且与微小巨核细胞数间存在正相关 (r =0 .5 89) ,但部分显示微小巨核细胞形态学特征的凋亡细胞不表达CD4 1。结论认为 ,MDS确实存在巨核细胞过度增殖及明显病态 ,微小巨核细胞凋亡可能系机体对异常增殖的生理反应 ,未观察到巨核细胞凋亡明显增加可能与晚期凋亡细胞不表达CD4 1有关     

Megakaryocytes: origin of bleeding and thrombotic disorders

Abstract. Thrombocytes of lower vertebrates are nucleated diploid cells, which differentiate directly from stem cells without an interposed megakaryocytic maturation program. With increased complexity of circulatory systems and higher blood pressures, more efficient haemostasis was required. In higher vertebrates and man, megakaryocytes developed which, by way of endomitotic polyploidization, can amplify genes relevant for haemostasis and adapt platelets to different haemostatic demands. As endomitotic polyploidization is regulated by cytokines, it is also influenced by inflammatory or malignant cell growth. The responsiveness of the megakaryocyte system to various stimuli is a possible explanation for the high incidence of thrombohaemorrhagic and thromboembolic disorders in man. For example, thrombotic complications in tumour patients are due to pathologic overstimulation of megakaryocytes. Atherosclerosis is another process which may be caused by inappropriate stimulation of the megakaryocyte system. As this complication does not manifest itself during reproductive ages, it is not going to be corrected by evolution.     

婴儿肝炎综合征中人类巨细胞病毒感染检测方法的比较

目的：探讨婴儿肝炎综合征中人类巨细胞病毒(HCMV)感染的检测方法。方法：用HCMV pp65抗原血症法及荧光定量聚会酶链反应(FQ-PCR)法检测24例患儿34份血浆及多形核白细胞(PMNLs)标本。结果：HCMV pp65抗原血症法诊断巨细胞病毒感染所致婴儿肝炎综合征的特异度为100％，灵敏度为90％；FQ-PCR法检测PNNLs的特异度为100％，灵敏度为60％；血浆FQ-PCR法的特异度为100％，灵敏度为50％。同一份血标本其血浆中的HCMVDNA拷贝数低于PMNLs，使得血浆FQ-PCR法在HCMV诊断及疗效观察方面具有滞后现象。动态观察发现HCMV pp65抗原血症法与FQ-PCR法检测的PMNLs结果与婴儿肝炎综合征患儿的治疗过程有较好的符合率。结论：HCMV pp65抗原阳性与HCMV活动性感染密切相关，可作为婴儿肝炎综合征患儿疗效的观察指标。HCMV pp65抗原血症法与FQ-PCR法可作为临床诊断HCMV症状性感染的一种快速、有效的实验室方法。     

人类巨细胞病毒先天性感染的产前诊断

目的探讨人类巨细胞病毒 (humancy tomegalovirus ,HCMV)先天性感染的敏感指标。方法应用病毒分离培养、ELISA及PCR技术检测原发感染或继发活动性感染孕妇羊水中的HCMV、HCMV IgM、HCMV DNA以及羊水沉渣中的HCMV DNA。结果93例羊水上清液标本分离培养出HCMV 5 2例 ,HCMV IgM 11例 ,HCMV DNA阳性 78例 ,阳性率分别为 5 5 .8%、11.6 %和 83.9%。羊水沉渣HCMV DNA阳性 5 4例 ,阳性率 5 8.1% ,与羊水上清液HCMV分离培养检出率比较差异无显著性 (χ2 =1.78,P >0 .0 5 ) ,但显著高于羊水HCMV IgM抗体的检测 (χ2 =9.2 7,P <0 .0 5 )。而羊水上清液的HCMV DNA检测率均显著高于其他指标的检测 (P <0 .0 5 )。结论羊水上清液HCMV DNA的检测可为先天性HCMV感染的产前诊断提供重要的信息     

人类巨细胞病毒先天性感染的产前诊断

目的探讨人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)先天性感染的敏感指标.方法应用病毒分离培养、ELISA及PCR技术检测原发感染或继发活动性感染孕妇羊水中的HCMV、HCMV-IgM、HCMV-DNA以及羊水沉渣中的HCMV-DNA.结果 93例羊水上清液标本分离培养出HCMV 52例,HCMV-IgM 11例, HCMV-DNA阳性78例,阳性率分别为55.8%、11.6%和83.9%.羊水沉渣HCMV-DNA阳性54例,阳性率58.1%,与羊水上清液HCMV分离培养检出率比较差异无显著性(χ2=1.78,P＞0.05),但显著高于羊水HCMV-IgM抗体的检测 (χ2=9.27,P＜0.05).而羊水上清液的HCMV-DNA检测率均显著高于其他指标的检测(P＜0.05).结论羊水上清液HCMV-DNA的检测可为先天性HCMV感染的产前诊断提供重要的信息.