日本血吸虫cAMP磷酸二酯酶的研究

用改进的Dowex-1×2短柱层析法分离底物3H-cAMP及产物3H-AMP测定了日本血吸虫匀浆中cAMP磷酸=酯酶的活力,结果表明血吸虫该酶的最适pH在7.5-8.5之间,虫令10天以上的血吸虫酶活力随虫令而上升,41天时酶活力约为104±3×10~3cpm/对/分,雄虫酶活力略高于雌虫。酶活力主要分布于虫体内,体表酶活力很低仅为匀浆中的1/30,在培养中亦不见释出。CTP及GTP对虫该酶有抑制作用。3.3mM敌百虫抑制酶活力65％,呋喃丙胺、硝唑咪及吡喹酮并不明显抑制虫该酶的活力。     

吡喹酮抑制日本血吸虫体表谷氨酰转肽酶

日本血吸虫体表具有γ-GTP,体外试验雄虫体表的γ-GTP活力受吡喹酮抑制23％。应用整体雄虫试验时其酶活力比虫体表的强。吡喹酮抑制体外血吸虫雌虫γ-GTP的活力比雄虫的强.体内试验吡喹酮明显抑制血吸虫雄虫的γ-GTP活力,但不抑制宿主兔肾组织γ-GTP的活力。     

日本血吸虫嘌呤代谢的研究

日木血吸虫匀浆含有ATP、ADP、AMP、尿苷、次黄嘌呤、肌苷、腺苷、腺嘌吟及GTP,并能将ATP迅速转变成次黄嘌呤。血吸虫腺苷磷酸化酶活力为27.3μmole/分/对虫,以台氏液培养24小时后,血吸虫向培养液内排出腺苷磷酸化酶。吡喹酮(8×10~(-4)M)及FormycinA(1.6×10~(-3)M)分别抑制该酶58％及72％。血吸虫雌、雄虫表膜ATP酶活力分别为17.0±2.5与17.3±3.8μ molePi/h/mg膜蛋白。在3mM Mg~(++)存在下,Na~+(100mM)及K~+(20mM)对该酶无激活作用,5×10~(-4)M乌本苷对该酶也无明显的抑制作用。采用聚丙烯酸胺凝胶电泳及等电聚焦法对该酶进行分离和提纯,并在提纯前后测定其Km值。     

蒿甲醚对日本血吸虫磷酸葡萄糖变位酶、醛缩酶、磷酸甘油酸变位酶和烯醇化酶的影响

[目的 ]观察蒿甲醚 (Art)对小鼠体内日本血吸虫磷酸葡萄糖变位酶 (GPM )、醛缩酶 (ALD)、磷酸甘油酸变位酶 (PGM)和烯醇化酶 (ENO)的影响。 [方法 ]小鼠感染血吸虫尾蚴 4～ 5wk后 ,1次灌服Art10 0mg/kg或 30 0mg/kg ,并于 2 4～ 48h后剖杀 ,收集日本血吸虫雌虫和雄虫 ,按NADPH的生成量或NADH的耗用量测定虫体的上述 4种酶活力。 [结果 ]经Art 10 0mg/kg作用 2 4h后 ,雌虫的GPM、ALD、PGM和ENO活力分别较对照组下降 15 %、 19%、 5 0 %和 46 % ,其间差别均具有显著意义 ,而雄虫仅PGM和ENO活力分别下降 2 2 %和 32 % ;48h后 ,雄虫的GPM和ALD活力亦分别下降 2 1%和 18% ,雌虫的GPM、ALD、PGM和ENO及雄虫的PGM和ENO活力则进一步下降。经Art 30 0mg/kg作用后 2 4～ 48h ,雌虫和雄虫的上述 4种酶活力均明显下降 ,且呈一定的时间效应关系。 [结论 ]Art对日本血吸虫尤其是雌虫的上述 4种酶有抑制作用。     

氟乙酸类化合物杀灭日本血吸虫机理的研究

本文研究了小鼠服氟乙酸类化合物后体内血吸虫基本生化成分的变化以及虫体柠檬酸积聚与虫肝移的关系。结果表明小鼠连续给服氟乙酸类药物4天中,除脂类含量的变化较小外,虫体的体重、糖原含量、     

吡喹酮和吡噻硫酮对某些溶酶体酶作用的实验研究

有的抗血吸虫药物具有致癌和致突变作用,如吡喹酮和吡噻硫酮(oltipraz)能调节色氨酸代谢,使膀胱中致癌性色氨酸代谢物蓄积。由于肝脏是血吸虫感染严重影响的主要靶器官,以肝脏中的β-葡糖苷酸酶、核糖核酸酶、醋酸-α-萘酯酯酶三种溶酶体酶的活性,作为致癌性指数观察了曼氏血吸虫感染和抗血吸虫药吡喹酮和吡噻硫酮的影响。     

血吸虫酶类研究进展

酶在血吸虫生物学功能中起着相当广泛而重要的作用,涉及到物质代谢的各方面。本 文总结了关于血吸虫的营养代谢、糖酵解、有氧代谢、虫卵的孵化、幼虫移行、尾蚴的穿透及免疫逃 避、疫苗候选基因等方面的酶学研究进展。     

曼氏血吸虫虫卵纤溶酶的识别及该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原代谢的调节作用

曼氏血吸虫虫卵提取物能抗血小板活化、凝集 ,从而抑制纤维蛋白原聚集形成纤维蛋白 ,抑制血栓形成。Doenhoff等从虫卵中分离出一种相对分子质量为 2 70 0 0的纤溶酶 ,并分析了该酶对曼氏血吸虫感染鼠血纤维蛋白原的代谢作用。选用波多黎各分离的曼氏血吸虫 ,制备尾蚴、成虫和虫卵及其提取物。取 10U血栓素 ,加至含 5 0mg人纤维蛋白原的10mlPBS中 ,混和液加至 10cm培养皿中 ,放入纤维素膜 ,膜表面分别加曼氏血吸虫尾蚴、成虫和虫卵提取物 ,37℃孵育 4h ,摄影观察结果 ,比较尾蚴、成虫和虫卵提取物和不同浓度人纤溶酶的溶解面积大小 ,检测血…     

日本血吸虫成虫的磷酸二酯酶

腺苷环化酶与磷酸二酯酶(PDE)为合成和分解环腺苷酸(cAMP)的两个酶,故细胞内环腺苷酸的水平为这两个酶所调节。近年来证实了哺乳类的组织、细菌、酵母和曼氏血吸虫中普遍存在PDE。本文作者亦研究了日本血吸虫的cAMP PDE,测定了它的活力以及其合适的pH范围和茶叶硷(1.3二甲基黄嘌吟)对它的抑制。自感染小鼠中取得成虫170对(日本株)用含0.5M磷酸钠(pH7.0)的0.15M生理盐水匀浆化后,再经10,000g离心20分钟,以Thompson和Ap-pleman方法(1971)测定上清液与压丸(Pellet)的cAMP PDE活力。     

日本血吸虫腺苷酸环化酶的研究

以~(H)3-ATP为底物,与日本血吸虫匀浆或全虫在37C保温作用,然后用阴离子交换树脂Dowex 1×2(100-200目)短柱(0.5×3cm)层析法一步分离酶反应产物~(H)3-AMP研究日本血吸虫匀浆及体表的腺苷酸环化酶活力。结果表明日本血吸虫腺苷酸环化酶活力的最适pH为7.5,虫龄20～40d的日本血吸虫的酶活力随虫龄增加而增高。40d虫龄成虫的酶活力为每对虫每min可分解~(H)3-ATP产生80000±3000cpm的~(H)3-cAMP,雄虫体表的酶活力高于雌虫。 3.3×10~4呋喃丙胺对血吸虫匀浆的腺苷酸环化酶有轻度抑制作用,而饱和浓度的吡喹酮对血吸虫体表的腺苷酸环化酶有明显的抑制作用,可抑制50％酶活力。     

血吸虫酶类研究进展

酶在血吸虫生物学功能中起着相当广泛而重要的作用，涉及到物质代谢的各方面。本总结了关于血吸虫的营养代谢、糖酵解、有氧代谢、虫卵的孵化、幼虫移行、尾蚴的穿透及免疫逃避、疫苗候选基因等方面的酶学研究进展。     

虫源性代谢产物对日本血吸虫感染小鼠免疫应答的影响

在感染日本血吸虫的小鼠脾淋巴细胞与可溶性虫卵抗原的培养中加入童虫代谢产物后,应答能力有很大增强,而在上述培养中加入成虫代谢产物时,各周的应答能力受到不同程度的抑制,提示虫源性代谢产物在日本血吸虫感染小鼠的增生应答中起着免疫调节作用。这种调节作用与不同发育期的血吸虫所分泌的因子有关.     

干扰素-γ对感染日本血吸虫小鼠GTP酶表达的影响

目的　探讨干扰素 γ(IFN-γ)对小鼠抗日本血吸虫感染保护力的机制。　方法　采用高密度寡核苷酸芯片 (Affymetrix芯片 )结合半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR )方法 ,对BALB/c小鼠感染日本血吸虫过程中脾脏CD4+ T细胞进行基因转录水平分析 ,获得IFN γ诱导鸟苷三磷酸 (GTP)酶家族成员的变化图谱 ;并对其中IFN γ诱导GTP酶 (IGTP)进行分子克隆和序列测定。　结果　小鼠自然感染日本血吸虫过程中 ,IFN γ诱导GTP酶家族成员的基因表达呈现特征性变化 ,感染后 3wk ,基因表达上调或变化不显著 ;感染后 6wk至 13wk ,基因表达持续受到抑制。这种变化特征经RT PCR方法所证实。从小鼠脾脏可扩增出IGTP全长基因 ,但退火温度降低时出现IGTP基因转录缺失。　结论　小鼠急性感染日本血吸虫后 ,体内IFN-γ通路逐步受到抑制 ,针对血吸虫感染的依赖IFN-γ的抗感染保护力下降。     

几种药物对体外培养日本血吸虫成虫毒性作用的研究

目的观察金诺芬、顺铂、阿霉素及化合物4N、H、B、O对体外培养日本血吸虫的毒性作用,以及对硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）活性的抑制作用。方法取日本血吸虫成虫置于RPMI 1640培养基中,培养30～60 min后,加入不同浓度药物,分别于6、24、48、72 h观察虫体活力、形态改变及死亡情况。随后换无药物的新鲜培养基,观察虫体活力的恢复情况,并计算药物半数致死剂量（LD50）。测定药物处理后的成虫匀浆上清液中日本血吸虫TGR的硫氧还蛋白原酶（TrxR）和谷胱苷肽还原酶（GR）的活性。结果 5μg/ml金诺芬作用24 h、20μg/ml 4N作用72 h、60μg/ml H作用72 h、80μg/ml顺铂作用72 h对日本血吸虫成虫致死率分别为100%、60%、66.7%、100%,LD50值分别为2.56、17.59、54.14μg/ml和52.87μg/ml,其他药物对日本血吸虫无作用。金诺芬、4N、顺铂、H对成虫的毒性作用具有不可逆性;金诺芬、顺铂对日本血吸虫的TGR酶活性有抑制作用,其他药物对TGR无作用。5～30μg/ml金诺芬、20～30μg/ml 4N、70～150μg/ml顺铂及60～150μg/ml H作用24 h均可使虫体形态发生改变。结论金诺芬、顺铂、化合物4N和H对体外培养的日本血吸虫成虫具有杀伤作用,其中金诺芬、顺铂杀伤日本血吸虫成虫的作用可能与其抑制TGR活性有关。     

酚酶活性抑制对小鼠体内日本血吸虫产卵的影响

目的观察小鼠体内日本血吸虫雌虫酚酶活性被抑制后对其产卵的影响.方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴20d后,按500mg/(kg*d)腹腔注射酚酶抑制剂-丙烯基硫脲,感染后第45d剖杀小鼠,观察感染小鼠体内日本血吸虫雌虫子宫及小鼠肝脏中虫卵的数量及形态结构.结果与感染对照组相比,实验组小鼠雌虫子宫内虫卵数及每克肝组织虫卵数均明显减少.虫卵形态表现异常,主要是缺失硬化的卵壳结构.结论日本血吸虫雌虫酚酶活性被完全抑制后,雌虫不能产卵;不完全抑制则只能产生无正常卵壳的异常虫卵,证明具有活性的酚酶是虫卵正常形成过程中必不可少的成分,提示血吸虫酚酶有可能作为抗血吸虫病的一个新靶位.     

蒿甲醚对小鼠体内日本血吸虫的己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶和磷酸果糖激酶的影响

目的：研究蒿甲醚（Ａｒｔ）对血吸虫己糖激酶（ＨＫ）、磷酸葡萄糖异构酶（ＧＰＩ）和磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）的影响。方法：感染血吸虫小鼠１次ｉｇＡｒｔ１００或３００ｍｇｋｇ－１,并分别于２４ｈ和４８ｈ剖杀取虫。按生成ＮＡＤＰＨ和耗用ＮＡＤＨ的方法测定上述３种酶活力。结果：感染鼠ｉｇ．Ａｒｔ３００ｍｇｋｇ－１后２４ｈ,♀、虫体ＨＫ活力抑制率分别为３３．３％和１３．７％,ＧＰＩ活力则分别抑制１４．７％和１７．５％,４８ｈ后,♀、虫体的ＧＰＩ活力抑制率分别为４６．２％和３２．９％。但Ａｒｔ剂量为１００或３００ｍｇｋｇ－１时,给药后２４ｈ和４８ｈ的♀虫ＰＦＫ抑制率分别为６４．９％和７１％,均明显高于虫的１６．３％和５４．２％。结论：ＰＦＫ可能是Ａｒｔ作用于血吸虫糖酶解途径的靶酶之一。     

蒿甲醚对小鼠体内日本血吸虫的己糖激酶、磷酸葡萄糖异构酶和磷酸果糖激酶的影响(英文)

目的：研究蒿甲醚（Ａｒｔ）对血吸虫己糖激酶（ＨＫ）、磷酸葡萄糖异构酶（ＧＰＩ）和磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）的影响。方法：感染血吸虫小鼠１次ｉｇＡｒｔ１００或３００ｍｇｋｇ－１，并分别于２４ｈ和４８ｈ剖杀取虫。按生成ＮＡＤＰＨ和耗用ＮＡＤＨ的方法测定上述３种酶活力。结果：感染鼠ｉｇ．Ａｒｔ３００ｍｇｋｇ－１后２４ｈ，♀、虫体ＨＫ活力抑制率分别为３３．３％和１３．７％，ＧＰＩ活力则分别抑制１４．７％和１７．５％，４８ｈ后，♀、虫体的ＧＰＩ活力抑制率分别为４６．２％和３２．９％。但Ａｒｔ剂量为１００或３００ｍｇｋｇ－１时，给药后２４ｈ和４８ｈ的♀虫ＰＦＫ抑制率分别为６４．９％和７１％，均明显高于虫的１６．３％和５４．２％。结论：ＰＦＫ可能是Ａｒｔ作用于血吸虫糖酶解途径的靶酶之一。     

日本血吸虫超氧化物歧化酶保护性免疫力的研究

超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种重要的氧自由基清除剂，广泛存在于生物体，由于它能专一地清除超氧阴离子，酶的特性与功能受到了重视。曼氏血吸虫的ＳＯＤ活力与抗原性已经受到关注［１］，而日本血吸虫的ＳＯＤ是否具有抗原性与诱导机体产生保护性免疫力，国内外文献未...     

曼氏血吸虫胞蚴的乙酰胆硷酯酶的组织化学

作者对曼氏血吸虫母胞蚴及子胞蚴体内的乙酰胆硷酯酶的分布进行了研究。从毛蚴离体培养4天而成的长约280微米的幼期母胞蚴,其神经团及焰细胞含有乙酰胆硷酯酶,但原先分布于毛蚴的神经干、神经连合和乳突的酶活力在变态过程中已消失。从母胞蚴新分离出的幼期子胞蚴体内未发现酶活力,仅在其体壁查见少许阳性反应。经离体培养后,由于尾蚴胚胎的发育,酶活力逐渐增强,阳性颗粒主要沉积于尾蚴胚胎膜上。从感染后21天螺蛳消化腺中分离出的子胞蚴,酶分布情况与离体培养的结果相仿。     

曼氏血吸虫感染小鼠体内细胞色素P450同工酶表达的变化及相关的致癌物代谢酶活性的变化

肝细胞色素P4 50 (CYP)是一个酶的多基因家族 ,在许多药物和异生化合物的代谢中起关键作用。每种CYP同工酶根据其诱导和抑制机制应答不同的外源化合物。已有研究证实了曼氏血吸虫感染对整体CYP的影响。为了研究曼氏血吸虫感染后宿主体内各种CYP同工酶在细胞水平上的改变及其相关的酶活性 ,作者进行了如下研究。曼氏血吸虫尾蚴经皮感染雄性BK TO小鼠 (每只小鼠感染 2 0 0条尾蚴 ) ,于感染后6 ,1 5,30及 4 5天分别杀死 6只小鼠 ,提取肝微粒体蛋白 ,使用细胞色素P4 50ECLWest ern印迹杂交试剂盒检测特异的CYP同工酶 ,同时以相同数目…