时间分辨荧光免疫分析用标记试剂——N~1-(对-异硫氰基苄基)-二乙三胺四乙酸钐钠的研制

时间分辨荧光免疫分析是一种利用镧系元素(多用铕、钐和铽离子)作标记物的免疫分析。镧系元素螯合物在激发光作用下,产生发射光,其激发光与发射光之间有很宽的Stokes位移,发射光谱峰很窄,具有不同的最大发射波长,如铽(Tb3 )、铕(Eu3 )和钐(Sm3 )分别为544、613和643nm;其?..     

人生长激素的时间分辨荧光免疫分析及其诊断试剂研制

 [目的]利用时间分辨荧光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）技术,建立人生长激素（human growth hormone,hGH）的快速检测方法并研制其诊断试剂.[方法]采用双抗体夹心法（一株抗GH的单抗用于包被微孔板,另一株抗GH的单抗用于Eu^3＋标记）建立hGH-TRFIA.[结果]hGH-TRFIA的线性测量范围为0.1×10^-3 100×10^-3U/L,灵敏度为0.036×10^-3U/L,批内和批间的变异系数分别为5.3%～8.6%和7.6%～12.8%.与促甲状腺激素（TSH）、卵泡生成素（FSH）、人胎盘催乳素（LH）和黄体生成素（HPL）均无交叉反应.将43份血清标本用本法与Wallac试剂盒同时检测相关系数（r）为0.957.[结论]hGH-TRFIA可作为一种具有灵敏度高、特异性强和测量范围宽的新方法,用于临床GH水平的测定.     

CA125时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 研制CA125时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）试剂盒。方法 采用双抗体夹心法建立CA125 TRFIA试剂盒。对试剂盒各项指标进行评价。结果 该试剂盒的工作范围为10～600U／ml,分析灵敏度为1．07U／ml，批内、批间的精密度分别为4．5％～8．1％，6．9％～11．5％。与CEA、AFP、CA50、CA15-3、CA19-9无交叉反应。稳定性试验表明试剂可以在4℃稳定1年，37℃稳定7d。425份正常血清标本测试该试剂盒的正常参考值范围是0～37U／ml。123份血清标本用本试剂盒与国外其他方法的同类试剂盒同时检测，其相关系数为0．939。结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

梅毒螺旋体抗体时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)建立人血清中梅毒螺旋体(TP)抗体的检测试剂,适用于体检、TP感染及相关症状的临床检测。方法采用双抗原夹心法建立梅毒螺旋体抗体TRFIA检测试剂,对试剂的各项指标进行评价。结果本试剂国家参考品检测结果,阴性、阳性参考品符合率均为100.00%,最低检出限L1、L2检为阳性,L4检为阴性,精密性研究批内批间变异系数均符合试剂检定要求。本试剂与人类免疫缺陷病毒阳性、乙型肝炎病毒阳性、丙型肝炎病毒阳性、类风湿因子阳性、抗核抗体阳性等血样均无交叉反应。用本试剂与进口的酶免法试剂同时检测1 070份临床血样,结果显示对照试剂检出阳性标本484例,本试剂检出阳性标本486例,阳性符合率为99.59%,总符合率达99.43%。结论试剂各项指标均达到临床检测要求,试剂准确快速,安全可靠,具有较高的临床应用价值。     

时间分辨荧光免疫分析技术在寄生虫病诊断中的应用

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluomimmunoassay,TRFIA)是一种新型的体外超微量分析技术,被公认为是目前灵敏度最高的分析方法之一,并以其独特的优势近些年迅速发展,已延伸至生物医学、临床医学研究的各个领域.本文就该技术的研究进展及在某些寄生虫病检测诊断中的相关应用作一简要综述.     

HBV-M时间分辨荧光免疫分析方法学评价

目的探讨TRFIA检测HBV-M方法的相关性、精密度、准确性和重复性。方法不同浓度的HBV-M标准血清及已知高浓度倍比稀释后的5项标志物混合血清标本用TRFIA法分别作定量检测。结果HBsAg、HBsAb、HBeAg3项测得的相对荧光强度与含量之间相关关系良好rHBsAg=0.9999,rHBsAb=0.9924,rHBeAg=0.9999,P<0.01,均有非常显著相关性;而HBeAb和HBcAb则相对较差,P>0.05;已知浓度5项标志物混合血清标本理论值和实测值的相关关系良好,r值均达到0.9980以上,P<0.01;结果准确度较好。结论HBV-MTRFIA精密度、重复性良好并具有较高的可靠性。     

时间分辨荧光免疫分析技术及临床应用

标记免疫分析技术的出现使临床生化分析由常量分析向微量分析转变。20世纪80年代出现的时间分辨荧光免疫分析技术,以其独特的优势成为最有发展前途的非放射免疫标记技术。本文主要介绍时间分辨荧光免疫技术基本原理、基础试剂、基本技术以及近年来临床应用。     

超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的:血清超敏C-反应蛋白(CRP)时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)法的建立. 方法: 采用双抗体夹心法检测血清CRP水平(1株抗CRP的单抗用于包被微孔板,另1株抗CRP的单抗用于Eu3 标记). 结果: TRFIA的线性测量范围为1～1000 mg/L,灵敏度为0.06 mg/L,批内和批间精密度分别为4.0%～7.2%,6.7%～10.8%. 与人IgG和白蛋白未见明显的交叉反应. 109份血清标本用本方法与国外试剂盒同时检测,其相关系数为0.916. 结论: CRP-TRFIA各项指标均达到临床检测要求,可替代国外产品试剂盒,用于临床血清CRP的测定.     

乙肝病毒前S1抗原时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒前S1抗原的检测试剂盒。方法应用双抗体夹心法建立乙肝preS1抗原TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项性能指标进行评估。结果对280份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果显示自制试剂盒的特异性更好;200份正常人血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×4.5。用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为3.4%～7.8%,6.9%～8.4%;检测HBsAg及HBeAg无交叉反应。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,TRFIA法精密度和特异性有较大提高,可替代酶免法试剂盒。     

人催乳素时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研制

目的建立人血清催乳素的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。方法采用双抗体夹心法建立人血清催乳素TRFIA检测试剂盒,对试剂盒的各项指标进行评价。结果试剂盒的定量范围为16～11000mU/L,灵敏度为1.36mU/L,批内批间的精密度分别为2.6%～7.6%,5.7%～9.0%;与人胎盘泌乳素(hPL)、人生长激素(hGH)、人黄体生成素(hLH)和人促卵泡激素(hFSH)无交叉反应。30份异常血样用本试剂盒与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0.997。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒。     

癌胚抗原时间分辨荧光免疫分析法的建立及方法学评价

目的建立癌胚抗原（CEA）时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）法。方法采用两株CEA单克隆抗体（CEA McAb），一株用于固相包被（4．00μg/mL），另一株用于标记铕（Eu3＋）制备Eu3＋-CEAMcAb（1：1600），固相双抗体夹心二步分析法检测人血清中的CEA，并对此方法进行方法学评价。结果本方法与甲胎蛋白（AFP）和糖类抗原19—9（CA19—9）的交叉反应率分别为O．25％和3．58％，而与其他常用肿瘤标志物无交叉反应；低、中、高浓度的CEA质控批内实验变异系数分别为4．75％，4．25％和2．89％，批间实验变异系数分别为9．55％，7．38％和3．69％；平均回收率为95．94％；试剂盒37℃烘烤7d后检测性能基本稳定；并与CEA化学发光免疫分析技术（CLIA）比对试验结果相关系数达0．9986；CEA—TrFIA法检测系统的检测低限（LLD）、生物检测限（BLD）和功能灵敏度（FS）分别为0．4315ng/mL、1．000ng/mL和1．000ng/mL；线性范围为1．000～500．0ng/mL。结论CEA—TrFIA法具有灵敏度高、特异性强、精密性好、线性范围宽、试剂有效期长和非放射性等优点，具有良好的临床应用价值。     

乙型肝炎病毒核心抗体IgM 时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 利用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立乙型肝炎病毒抗HBc-IgM的检测试剂盒.方法 采用捕获法建立抗HBc IgM TRFIA检测试剂盒.对自制试剂盒的各项性能指标进行评估.结果用自制质控品检测分析内和分析间的精密度分别为4.8～7.2%,7.5～8.6%;与抗-HBs,抗-HBc IgG和抗-HBe无交叉反应;对584份血清样本进行检测并与国产酶联免疫法试剂盒对比,结果 显示自制试剂盒的灵敏度更高;300份健康者血清样本检测结果表明,该试剂盒的cutoff值=阴性对照荧光值×3.5.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代酶免法试剂盒.     

实时FQ-PCR与时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎分析

目的：探讨实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）定量检测乙型肝炎病毒（HBV—DNA）与时间分辨荧光免疫分析法对乙型肝炎免疫标志物（HBV—M）检测对乙型肝炎实验室诊断的敏感性。方法：采用两种方法分别对800例本院传染科住院及门诊可疑病人血清标本进行检测。结果：用FQ—PCR检测800例。HBV—DNA阳性例数602,阳性率87．81％,用时间分辨荧光免疫分析法检测800例,HBV—M的阳性例数477,阳性率59．63％,通过χ^2检检,χ^2=2．98,P〈0．05。结论：在乙型肝炎的实验室诊断中,FQ—PCR检测乙型肝炎病毒HBV—DNA更优于时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎免疫标志物HBV—M。     

时间分辨荧光免疫分析技术在检测乙肝标志物中的应用评价

目的:评价时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术在检测乙肝标志物中的应用价值。方法:采用TRF法对5项乙肝标志物检测,并同时进行微粒子酶免技术(MEIA)及ELISA法检测并统计分析。结果:乙肝标志物5项指标的日间变异系数均在5%以下,批内精密度的变异系数<5%,线性测定相关系数为1,各组理论值与实测值之间无差异。靶值与实测值有统计学意义(P<0.01)。乙肝标志物5项指标的携带互污染率小于1.5%,3种方法检测结果临床符合性一致。结论:TRF分析仪采用TRF法对乙肝标志物5项的检测中,TRF法灵敏度高,是一种比较理想的定量检测方法。     

人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白(Hb)时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂,探讨在大便潜血(FOB)检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0.8ng/mL或32ng(Hb)/g(粪便),线性范围为0.8～1000ng/mL或32～40000ng(Hb)/g(粪便)。分析内和分析间变异系数分别为3.4%～8.9%和5.2%～13.4%。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析(GICA)试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100%,GICA法的灵敏度和特异性分别为95.6%、100%。结论Hb-TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。