液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱法鉴定大鼠尿液中药根碱代谢物

目的研究药根碱在大鼠体内的主要代谢产物。方法健康大鼠尾静脉注射12 mg·kg^-1药根碱，收集0～72 h的尿样，尿样经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，经液相色谱-串联电喷雾离子阱质谱(LC-ESI/ITMSⁿ)分析鉴定其中的代谢物。代谢物的结构鉴定主要依据各代谢物与原药的一级质谱电离规律和二级或三级质谱裂解规律间的关联性。结果在大鼠尿样中检测到7种I相代谢产物(如原药的脱氢、脱甲基、羟基化代谢物)及11种II相代谢产物(如甲基化轭合物和葡糖醛酸轭合物)。结论本方法用于大鼠尿样中药根碱的代谢物研究不仅操作简单、快速，而且灵敏度高、专属性强。     

高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法研究大鼠尿内毛果芸香碱代谢产物

首次应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法鉴定了大鼠灌胃给予毛果芸香碱0.2mg后0-8小时内尿中的代谢物。4只大鼠给药毛果芸香碱盐酸盐,收集给药后尿液,固相萃取柱富集、然后应用高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法在线进行多反应监测,进而对尿中微量的代谢物进行了质谱解析。分别定性为毛果芸香碱的葡萄糖醛酸结合物、毛果芸香酸和毛果芸香酸的葡萄糖醛酸结合物。而且发现了各种代谢产物及原形药物在大鼠体内均有构型变化。     

液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的:建立液相色谱-电喷雾串联质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法:色谱条件为 Discovery ODS C_(18)(2.1 mm×100 mm,3μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(65:35,v/v);柱温30℃;流速0.2 mL·min~(-1);进样量5μL。质谱条件为电喷雾电离源(ESI),选择性检测定量离子为 m/z 441.3/325.0(辛伐他汀)和 m/z 427.2/325.0(洛伐他汀,内标)带正电荷的离子峰。样品用乙酸乙酯提取。结果:血浆中辛伐他汀浓度在0.20～20.0 ng·mL~(-1)内呈良好线性关系,r=0.9996。提取回收率为90.0%～92.4%(RSD 6.0%～14.9%),方法回收率在85%～115%之内,日内和日间精密度试验的RSD 均<15%,最低检测浓度为0.2 ng·mL~(-1)。结论:该测定方法经全面考察符合血浆样品的测定要求,可以应用于辛伐他汀的人体药动学研究和生物等效性评价。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的利培酮

利培酮为苯并异噁唑类化合物,通过阻断5-HT2受体和多巴胺D2受体发挥抗精神病作用.同其他抗精神病药物相比,利培酮所引起的椎体外系副作用更少,药效更为明显 .     

大鼠尿中雷诺嗪代谢物的液相色谱串联多级质谱法分析

目的:采用液相色谱串联多级质谱(LC-MSn)法分析大鼠尿中雷诺嗪的代谢物。方法:大鼠按80mg·kg-1灌胃给予雷诺嗪,收集给药后0～24h尿样,用C18固相萃取后进行LC-MSn分析,流动相为乙腈-10mmol·L-1醋酸铵溶液-冰醋酸,流速为0.5mL·min-1,正离子检测,采用全扫描一级、二级和三级质谱同时测定。结果:在给药后的大鼠尿样中可测到12个Ⅰ相代谢物(O-去甲基化、O-去芳基化、羟基化、N-去烷基化和酰胺水解)和9个Ⅱ相代谢物(O-葡萄糖醛酸化和硫酸化)。结论:雷诺嗪在大鼠体内广泛代谢。     

液相色谱-质谱法测定人血浆中的甲哌卡因

目的建立灵敏、快速液相色谱-串联质谱法测定人血浆中甲哌卡因的浓度,并用于人体药动学研究。方法 200μL的血浆样品经甲基叔丁基醚提取处理后,以10 mmol.L-1醋酸铵(含0.5%甲酸)水溶液-乙腈(60∶40,v/v)为流动相,Inertsil CN柱分离,通过电喷雾离子源四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)的方式进行检测,选择离子反应为m/z 247.2→98.0(甲哌卡因)和m/z 235.2→86.0(利多卡因)。结果甲哌卡因在0.500～1 500 ng.mL-1线性关系良好,定量下限为0.500 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均≤10.1%,甲哌卡因和内标利多卡因的提取回收率分别为64.6%～67.4%和64.5%。结论该法选择性强、灵敏度高,适用于人血浆中甲哌卡因的浓度测定。     

高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱分析水苏碱及其大鼠体内代谢物

目的鉴定水苏碱在大鼠体内的代谢物。方法应用高效液相色谱-电喷雾离子阱串联质谱(HPLC-ESI/MSⁿ)技术研究水苏碱的一级质谱电离规律、二级质谱裂解规律及其色谱保留，以此作为水苏碱大鼠体内代谢物分析鉴定的依据；再将健康大鼠空腹灌胃25 mg·kg^-1水苏碱，收集0～24 h的尿样，经C₁₈小柱固相萃取分离纯化后，应用HPLC-ESI/MS分析尿样中水苏碱代谢物。结果在大鼠尿样中发现了母药及其N-去甲基、氧化脱氢、环氧化等6种I相代谢产物及两种环氧化物的甘氨酸轭合II相代谢产物。结论HPLC-ESI/MS法灵敏度高，快速，定性能力强，适合于水苏碱大鼠体内代谢物的分析。     

液相色谱-电喷雾离子阱质谱法研究人尿中阿奇霉素的主要代谢产物

目的：研究阿奇霉素在人尿中的主要代谢产物。方法：受试者口服阿奇霉素后收集0～144 h尿样,经Strata C18-E固相萃取小柱分离纯化后,采用液相色谱-电喷雾离子阱质谱法（LC/ESI-MSn）对样品进行分析,通过比较空白尿样和给药后尿样的总离子流色谱图和选择离子监测色谱图,分析可能的代谢产物。结果：在人尿中共发现了8种代谢产物,通过与得到的代谢产物对照品比较,鉴定出2种代谢产物的结构,并推测出其他6种代谢产物的化学结构。阿奇霉素在人体内的主要代谢途径包括O-去甲基、N-去甲基、N-去甲基后去红霉糖和羟基化。结论：本研究为深入了解阿奇霉素在人体内的代谢情况提供了可靠的方法和参考依据。     

液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中的汉黄芩素

目的建立测定大鼠血浆中汉黄芩素浓度的液相色谱-串联质谱法。方法血浆样品经液-液萃取后,进行色谱分离,采用三重四极杆串联质谱检测,使用大气压化学电离源(APCI),在正离子条件下选择反应监测(SRM)方式进行扫描,用于定量分析的离子分别为m/z 284.8→m/z 269.5(汉黄芩素)和m/z 254.7→m/z 198.5(葛根黄豆苷元,内标)。结果线性范围为0.25～20 ng·mL^-1,最低定量浓度为0.25 ng·mL^-1。以质控样品(QC)计算,在各浓度水平下,此法的批内精密度(RSD)为2.2%～13.1%,批间精密度为5.9%～7.3%;准确度(RE)为-0.3%～1.3%。结论 此法灵敏、快速、准确,可用于大鼠血浆中汉黄芩素浓度测定及临床前药动学研究。     

Structural elucidation of in vivo and in vitro metabolites of anisodine by liquid chromatography-tandem mass spectrometry

Liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESIMSn) was employed to investigate the in vivo and in vitro metabolism of anisodine. Feces, urine and plasma samples were collected after ingestion of 20 mg anisodine to healthy rats. Feces and urine samples were cleaned up by liquid-liquid extraction and solid-phase extraction procedures (C18 cartridges), respectively. Methanol was added to plasma samples to precipitate plasma proteins. Anisodine was incubated with homogenized liver and intestinal flora of rats in vitro, respectively, followed by extraction with ethyl acetate. LC-MSn was used for the separation and identification of the metabolites using C18 column with mobile phase of methanol/0.01% triethylamine solution (2 mM, adjusted to pH 3.5 with formic acid) (60:40, v/v). The results revealed that five metabolites (norscopine, scopine, alpha-hydroxytropic acid, noranisodine and hydroxyanisodine) and the parent drug existed in feces. Three new metabolites (dimethoxyanisodine, tetrahydroxyanisodine and trihydroxy-methoxyanisodine) were identified in urine. Four metabolites (norscopine, scopine, hydroxyanisodine and anisodine N-oxide) and the parent drug were detected in plasma. Two hydrolyzed metabolites (scopine and alpha-hydroxytropic acid) were found in rat intestinal flora incubation mixture, and two metabolites (aponoranisodine and anisodine N-oxide) were identified in homogenized liver incubation mixture.     

LC-MS/MS法快速分析大鼠尿液中他喷他多的代谢物

目的建立快速分析大鼠尿液中他喷他多代谢物的方法。方法大鼠灌胃给予他喷他多,收集空白和给药后0～12 h尿液,以液相色谱-串联质谱法,采用多离子反应监测(multiple reactionmonitoring,MRM)及二级全扫描质谱(full scan MS2)方式,分析尿液中他喷他多的代谢物。结果在大鼠尿液中发现了他喷他多原形药物及其15种代谢物,首次发现了他喷他多脱氢化合物、他喷他多脱氢葡萄糖醛酸结合物。结论本方法简便、快速,适用于大鼠尿液中他喷他多代谢物结构及代谢路径分析。     

液相色谱-串联质谱法测定阿德福韦及其前体化合物在大鼠血浆中的浓度

目的建立测定大鼠血浆中阿德福韦（PMEA）及其前体药物APD2、PMEA-CA的液相色谱-串联质谱（LC．MS／MS）法。方法分别采用不同的血浆样品处理方法和色谱条件测定PMEA及其前体化合物。测定PMEA时,血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,用Discovery C18柱分离,以甲醇-0．5％甲酸（20：80,V／V）为流动相,9-（3-膦酸甲氧基丙基）腺嘌呤为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆样品中的PMEA进行定量分析。测定APD2和PMEA-CA时,血浆样品经固相萃取后,用Hypersil ODS2柱分离,以甲醇一5mmol·L^-1乙酸铵（70：30,V／V）为流动相,格列本脲为内标,采用ESI源以多反应监测方式对血浆中APD2和PMEA—CA进行定量分析。结果PMEA和PMEA-CA线性范围为25～5000μg·L^-1,ADP2的线性范围为10—2500μg·L^-1,日内、日间精密度均〈5．5％。结论本方法专属性强、灵敏度高,适用于PMEA前体药APD2及PMEA-CA的临床前药代动力学研究。     

大鼠粪样中山莨菪碱及其代谢物的串联质谱法检测

目的运用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MSn)法检测大鼠粪样中山莨菪碱及其代谢物。方法收集灌胃山莨菪碱(25 mg.kg-1)的大鼠粪样,用水浸泡后,以乙酸乙酯萃取,采用LC-MS及LC-MSn等方法检测原药及其代谢物。根据代谢物相对分子质量的变化(ΔM)及其多级质谱数据,鉴定并阐述其结构,同时与空白粪样及山莨菪碱相比较。结果在服药后的大鼠粪样中发现山莨菪碱及其7种代谢产物,分别为6β-羟基托品、N-去甲基-6β-羟基托品、N-去甲基脱水山莨菪碱、脱水山莨菪碱、N-去甲基山莨菪碱、羟基山莨菪碱以及托品酸等。结论该方法灵敏、快速、简便、有效,适合于生物样品中的药物及其代谢产物的快速鉴定。     

大鼠粪样中山莨菪碱及其代谢物的串联质谱法检测

目的运用液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MSn)法检测大鼠粪样中山莨菪碱及其代谢物。方法收集灌胃山莨菪碱(25 mg·kg^-1)的大鼠粪样,用水浸泡后,以乙酸乙酯萃取,采用LC-MS及LC-MSn等方法检测原药及其代谢物。根据代谢物相对分子质量的变化(ΔM)及其多级质谱数据,鉴定并阐述其结构,同时与空白粪样及山莨菪碱相比较。结果在服药后的大鼠粪样中发现山莨菪碱及其7种代谢产物, 分别为6β-羟基托品、N-去甲基-6β-羟基托品、N-去甲基脱水山莨菪碱、脱水山莨菪碱、N-去甲基山莨菪碱、羟基山莨菪碱以及托品酸等。结论该方法灵敏、快速、简便、有效,适合于生物样品中的药物及其代谢产物的快速鉴定。     

Simultaneous determination of aceclofenac and its three metabolites in plasma using liquid chromatography-tandem mass spectrometry

A new LC/MS/MS-based method allows simultaneous determination of aceclofenac and its three metabolites (4'-OH-aceclofenac, diclofenac, and 4'-OH-diclofenac) in plasma. After acetonitrile-induced precipitation of proteins from the plasma samples, aceclofenac, 4'-OH-aceclofenac, diclofenac, 4'-OH-diclofenac, and flufenamic acid (an internal standard) were chromatographed on a reverse-phase C(18) analytical column. The isocratic mobile phase of acetonitrile/0.1% formic acid((aq)) [80:20 (v/v)] was eluted at 0.2 mL/min. Quantification was performed on a triple-quadrupole mass spectrometer employing electrospray ionization, and the ion transitions were monitored in multiple reaction-monitoring mode. The monitored transitions for aceclofenac, diclofenac, 4'-OH-diclofenac, 4'-OH-aceclofenac and flufenamic acid were m/z 352.9-->74.9, 296.1-->251.7, 311.8-->267.7, 368.9-->74.9, and 279.9-->235.9, respectively. The coefficient of variation of the assay precision was less than 6.5%, and the accuracy ranged from 93% to 103%. The limits of detection were 2 ng/mL for aceclofenac and 0.2 ng/mL for both diclofenac and 4'-OH-diclofenac. This method was used successfully to measure the concentrations of aceclofenac and its three metabolites in plasma from healthy subjects after administration of a single 100-mg oral dose of aceclofenac. This analytic method is a very simple, sensitive, and accurate way to determine the pharmacokinetics of aceclofenac and its metabolites.     

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中色氨酸及其代谢物浓度

目的建立一种基于高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术同时快速测定人血浆中色氨酸及其代谢产物(犬尿氨酸、犬尿喹啉酸和吲哚丙酸)含量的方法。方法采用甲醇/乙腈(v/v,50/50)沉淀蛋白,以色氨酸-d_5为内标,色谱柱:Ultimate XB-C_(18) HPLC柱(2.1 mm×100 mm,3μm),流动相:水-甲醇(45/55,水相含5 mmol/L醋酸铵和0.2%甲酸),流速:0.3 ml/min,柱温:40℃,分析时间共3 min。质谱采用API4000 QTrap三重四极杆质谱仪的正离子多反应监测模式监测。考察该方法的专属性、线性及定量范围、精密度与准确度、回收率与基质效应以及稳定性。结果色氨酸、犬尿氨酸、犬尿喹啉酸及吲哚丙酸的线性范围分别在100～2×10~4、25～5 000、5～1 000、10～2 000 ng/ml;平均回收率均>90%;日内和日间精密度(RSD)和准确度(RE)均小于15%;稳定性良好。该方法成功测定了90例冠心病患者血浆中的色氨酸、犬尿氨酸、犬尿喹啉酸及吲哚丙酸的浓度。结论该方法简便、快捷、灵敏,可用于人体血浆中色氨酸及其代谢产物浓度的测定。     

超高效液相色谱-串联质谱法快速测定人血浆中氯吡格雷及其代谢物浓度

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中的氯吡格雷(Clo)及其非活性代谢物(CCAM)和活性代谢物(CATM)的浓度。方法 5名健康受试者单剂量口服Clo片300 mg,分别经时采集肘静脉血样进行药动学分析。血浆样品沉淀蛋白后经WATERS ACQUITY UPLC HSS T3柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm)分离,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱。采用电喷雾电离源(ESI)正离子模式、多反应监测(MRM),用于定量分析的离子通道分别为m/z 322.1→211.8(Clo),m/z 356.0→154.9(CATM),m/z 308.3→198.0(CCAM),m/z 253.1→180.0(内标卡马西平)。结果血浆中Clo、CATM和CCAM线性关系良好(r>0.99),日内、日间精密度(RSD)小于12.6%,准确度(RE)在-3.6%~7.6%之间。药动学结果显示,健康受试者单剂量口服Clo片300 mg后,Clo、CATM和CCAM的ρmax分别为(26.57±24.06)、(38.12±22.80)和(8 128.00±1 624.58)ng·m L-1,tmax分别为(1.8±0.8)、(2.0±1.0)和(2.0±1.0)h,AUC0-∞分别为(67.74±48.44)、(212.16±122.58)和(46 982.31±14 496.05)ng·m L-1·h。结论本方法操作简便、灵敏度高、分析时间短,适用于Clo药动学研究和常规血药浓度监测。     

Analysis of tretoquinol and its metabolites in human urine by liquid chromatography–tandem mass spectrometry

Tretoquinol (trimetoquinol), a β2‐agonist, has been explicitly listed on the World Anti‐Doping Agency Prohibited List 2019 since January 2019; however, it has been distributed as an antiasthmatic on the medical market. This study aimed to develop a liquid chromatography–tandem mass spectrometric method for the quantification of tretoquinol (free form plus glucuronide) in human urine for doping control purposes. An excretion study (n = 6) of tretoquinol hydrochloride hydrate (6 mg) was performed, and urine samples were collected prior to oral administration and during the first 48 h, along with spot urine samples at 7 and 14 days after administration. All the urine samples were analysed using the developed method. The limit of detection for the developed method was 0.03 ng/mL. The inter‐day precision for the target analyte was excellent (2.7% to 9.2%), and the inter‐day accuracy of target analyte was ?0.6% to ?3.6%. In all subjects, tretoquinol (free form plus glucuronide conjugate) was identified up to 48 h after administration. The maximum concentrations were in the range of 12.4–78.8 ng/mL and the mean concentration was 55.3 ng/mL. The metabolites O‐methylated tretoquinol, tretoquinol sulphate and O‐methylated tretoquinol sulphate could be also identified in human urine after administration. The longest‐lasting urinary metabolite of tretoquinol currently known, O‐methylated tretoquinol, is also likely to be a useful marker in doping controls.     

紫杉醇及其人血浆中代谢物的电喷雾串联质谱研究

目的:采用电喷雾串联质谱(ESI-MSn)法研究紫杉醇的离子化方式、结构裂解方式及在人血浆中的主要代谢物。方法:紫杉醇对照品溶液经质谱进样,探索其一级质谱的电离规律和二级质谱的裂解规律。通过液相色谱-质谱联用技术分离和鉴定紫杉醇在人体中的代谢物。结果:溶液中的添加剂对紫杉醇的离子化效率有明显促进作用,在ESI正离子模式下紫杉醇以m/z854的[M+H]+丰度最高。紫杉醇裂解过程以脱水和酯键断裂为主,产生多个碎片离子,其中m/z286信号最强并具有较好的稳定性。紫杉醇在人血浆中的代谢物有3个,以6α-羟基紫杉醇为主。结论:紫杉醇及其人血浆中代谢物的质谱行为研究,可为紫杉醇的质谱定性和定量分析以及药物代谢研究提供重要参考。