异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响

本研究探讨了异种卵泡液对牛卵母细胞体外成熟率的影响。结果表明,在培养基中添加适当浓度的山羊、绵羊、骆驼卵泡液代替血清,牛卵母细胞的成熟率(67．9％、68．5％、65．3％)与血清对照组(72．0％)无显著差异(P＞0．05);在添加山羊、绵羊、骆驼卵泡液的基础上补充激素,卵母细胞的成熟率(70．8％、72．9％、69．7％)也未见明显提高(P＞0．05)。     

蛋白激酶C激活剂对牛卵母细胞体外成熟的影响

近年来的研究证实,除cAMP依赖性蛋白激酶A外,另一在细胞信息传递过程中起重要作用的是磷脂/Ca~(++)依赖性激酶C(PKC)。在大鼠有报道表明,PKC在GnRH诱发卵泡内卵母细胞的成熟过程中起中介作用,因PKC的激活剂OAG、PMA及A23187可在卵母细胞成熟过程中模拟GnRH的作用。然而,在小鼠PKC的激活剂则证明对卵母细胞的成熟具抑制作用,PKC在牛卵母细胞体外成熟中的作用亦未见有报道。因此,本研究将通过测定牛卵母细胞成熟后的受精及早期胚胎发育能力来探讨PKC激活剂在牛卵母细胞体外成熟中的作     

牛卵母细胞体外成熟减数分裂进程及核型变化的研究

为了更加深入了解牛卵母细胞体外成熟减数分裂及其伴随该进程中核型的变化,实验采用常规的牛卵母细胞体外成熟方法及核型染色方法对成熟过程中减数分裂恢复情况及其对应的核型进行了研究。结果表明:牛卵母细胞体外成熟8 h减数分裂抑制恢复率达45.26%,成熟12 h时绝大部分卵母细胞(81.63%)已经恢复了减数分裂抑制状态,正常成熟24 h后GVBD率达91.67%。说明在对牛卵母细胞进行体外成熟过程中卵母细胞可以按照正常的减数分裂进程发育至受精前阶段,经染色后可以较为清楚识别减数分裂各时期细胞核核型形态及其变化规律,为研究牛卵母细胞体外成熟减数分裂抑制恢复的分子机制探讨及体外成熟效率的提高提供了参考价值。     

卵泡液和促卵泡素对卵母细胞体外成熟的影响

本试验研究了卵泡液和促卵泡素对促进卵母细胞体外成熟的影响。试验结果表明，发情期LH排卵前高峰8小时和20小时的卵泡液对卵母细胞体外成熟有明显的促进作用（P＜0．01），但8小时和20小时卵泡液对卵母细胞的促成熟作用差异不明显（P＜0．05），使用卵泡液和促卵泡素共同处理时，促卵泡素能增强卵泡液的作用效果，单独使用促卵泡素时，没有卵泡液所具有促进卵母细胞体外成熟作用的功效。     

体外制备的牛胚胎移植后获得孪生犊牛

据Lu等(1987)报道,体外成熟和受精的牛卵泡卵母细胞在绵羊输卵管内培养一周后,多数胚胎发育到桑椹期和囊胚期。每头受体牛移植两枚这种胚胎,妊娠率达67％。本试验中—牛细胞胚培养到桑椹胚和囊胚的体外培养方法,使体外受精胚胎制造适于移植的牛胚的系统更方便了。在此之前,尽管用过各种培养基和培养方法作体外培养,但成绩不好。显然,胚胎在8细胞期时发育受     

卵母细胞体外成熟体外受精生产犊牛

建立的牛体外受精（ＩＶＦ）程序包括屠宰厂采集卵巢、卵母细胞外培养成熟（ＩＶＭ０、精子体外获能受精和受精卵体外发育成胚泡。将卵巢置于２３℃－３８℃的生理盐水中运输，能使大量的卵母细胞在体外成熟和体外受精后发育成胚泡。卵泡切开后，用一匙子将其内容物刮出以采集多个卵母细胞，而不用１８号针头抽取，这样每对卵可采集卵母细胞１３．４个，用针头抽取每对卵巢仅能采集７．２个。体外成熟和体外受精后，卵裂能力取决于卵     

制约牛体外早期胚胎发育力的因素

本文综述了影响牛体外受精胚胎发育力的因素，这些因素主要归结为配子和培养系统等问题。就配子而言，主要探讨了卵母细胞的核与胞质成熟的程序和处于不同发情周期阶段的卵泡对卵母细胞发育力的影响，还讨论了精子对体外胚胎发育力的影响；本文最后分析了体外受精胚胎的培养系统问题，指出不同发育阶段的早期胚胎对营养物质代谢需求不同，从而需要制定不同的培养基，使早期胚胎按先后顺序分别在不同的培养基中发育，即用序贯培养法提高早期胚胎的发育力。     

生物活性因子对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性因子。结果表明ICP在浓度为 50 0ng/ml时对卵母细胞成熟有抑制作用 ,对胚胎发育无明显作用 ;EGF( 50ng/ml)对牛卵母细胞成熟和胚胎发育均有促进作用     

牛卵母细胞体外成熟培养时间对体外受精及早期胚胎体外发育的影响

本文报道了牛卵母细胞经不同时间体外成熟培养对其后体外受精及早期胚胎体外发育能力的影响。 实验用的母牛卵巢从附近的屠宰场收集。卵母细胞采用穿刺抽取法采集。将外观形态正常的卵母细胞随机分成6组,在含10％发情牛血清的TCM-199培养液中分别经12(G1)、16(G2)、20(G3)、24(G4、对照组)、28(G5)和32小时(G6)的体外成熟培养(IVM)后进行体外受精(IVF),早期胚胎(2-8细胞阶段)在采用卵泡颗粒细胞作为支持细胞的单层上皮细胞液滴中进行 复合培养至囊胚及孵化囊胚阶段。结果表明,经过12—32小时IVM的牛卵母细胞,在IVF后48小时检查,卵裂率均可达到81％以上(80.9％—91.9％);但IVM时间短至12小时(G1)及超过24小时(G5、G6)的卵裂率(分别为80.9％,83.5%和83.4％)显著地低于24小时的对照组(G4,91.9%,P>0.05)。     

牛体外受精卵核移植技术的研究

将采自屠宰场的牛卵巢中的卵母细胞以TCM-199+10％FCS培养成熟,用0.1％的透明质酸酶将卵丘细胞除去,以10微克/毫升的细胞松弛素B处理胚胎后,用固定在显微操作器上的微吸管将卵母细胞透明带内第一极体下面的细胞质吸去一部分,然后将取自体外受精后发育至8细胞期胚胎的卵裂球注入去核卵母细胞的卵周隙之中,将移入卵核的卵母细胞置于融合液中并施以110V,40微秒的脉冲刺激后,将胚胎移入TCM-199+5％OCS的培养液中培养,以观察胚胎的融合率及发育率。结果表明,核移植胚的融合率为71.1%(27/38),发育为2-8细胞期的胚胎占培养的核移植胚胎总数的42.3％(11/26),其中有1枚胚胎发育至桑椹胚阶段。     

牛卵母细胞的孵育和卵细胞的体外受精

本研究的目的是弄清孵育卵母细胞培养液的成分,成熟卵细胞受精和获得早期牛胚胎的条件。试验用卵母细胞是从肉联厂屠宰后母牛卵巢的卵泡腔中分离出来的。卵巢置于有抗菌素(青霉素400单位/毫升、链霉素400微克/毫升、pH值7.2—7.4、温度为0℃)的溶液中。自取出卵巢到从中分离出卵母细胞的时间不得超过8小时。 为了分离出卵母细胞,卵巢置于盛有溶液的器皿中,溶液含有肝素(1单位/毫升)和抗菌素(青霉素100单位/毫升、链霉素100微克/毫升)。将卵巢用     

牛卵母细胞体外成熟,体外受精培养的胚胎玻璃化冷冻试验

牛卵母细胞体外成熟、受精后，培养７天，选择一级桑椹胚、囊胚和膨胀囊胚进行玻璃化冷冻试验胚解冻增大 Ｍｅｎｅｚｏ－Ｂ２液中根据胚胎复原率和孵充率说明：（１）一步平衡玻璃化冷冻的胚胎在ＦＥＳ液中平衡１分钟较适宜；（２）胚胎玻璃化 的效果与胚胎发育阶段密切相关；（３）添加ＢＯＥＣ细胞Ｍdisplay status     

牛卵泡对卵母细胞的体外成熟及体外受精的影响

利用屠宰母牛卵巢，对来自不同大小和不同状态卵泡的卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）进行了系列研究。结果表明，当卵泡直径小于２ｍｍ时，卵母细胞的成熟率、卵裂率、囊胚率显著低于直径为２～５ｍｍ组和直径大于６ｍｍ组（６６．７％比８５．７％和８４．２％；６２．４％比８２．７％和７９．２％；１５．１％比２８．０％和２５．０％ Ｐ〈０．０５）。来自腔前卵泡的卵母细胞也可以成熟、受精、卵裂，甚至发     

发情牛血清和绵羊卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟和受精的影响

本试验研究了绵羊卵泡卵母细胞在体外成熟时,以M-199为基础液,加入FBS,OCS,以及不同直径(小于8mm或大于10mm)卵泡的卵泡液对体外成熟率和体外受精率的影响。在添加同等浓度促性腺激素(FSH,0.4μg/ml;LH,2iu/ml)时,添加5%FBS或5%OCS的成熟率分别为10.00%和69.30%(P<0.05);体外受精分裂率分别为0和60.84%(P<0.05)。在添加以上浓度促性腺激素和5%OCS的基础上添加3%大卵泡液或小卵泡液时,卵母细胞成熟率分别为53.10%和78.20%(P<0.05);体外受精分裂率分别为50.00%和71.67%(P<0.05)。结果表明,发情牛血清配合大卵泡液可以充分满足绵羊卵母细胞体外成熟的需要。     

西门塔尔牛体外胚胎生产效率分析

【目的】文章旨在分析西门塔尔牛活体采卵-体外受精（OPU-IVF）体外胚胎生产效率的影响因素,为提高西门塔尔牛体外胚胎生产效率、优化西门塔尔牛体外胚胎生产流程提供生产依据。【方法】本实验以未经激素处理的西门塔尔牛卵丘卵母细胞复合体（COCs）、进口肉牛冻精为实验材料,通过卵母细胞活体采集（OPU）、体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）、早期胚胎体外培养（IVC）等技术手段,对体外受精后第7 d囊胚率进行统计分析。【结果】不同公牛精液对囊胚发育有影响,不同供体母牛对囊胚发育率影响显著。【结论】相同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率与冻精有关（P<0.05）;不同卵母细胞利用率水平的供体母牛,回收COCs体外受精后,囊胚率随卵母细胞利用率升高而升高（P<0.05）。     

生长因子对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及其体外发育的影响

本研究主要检测α-转移生长因子(TGF-α)及其他生长因子的交互作用对卵母细胞体外成熟及其体外受精后体外发育的影响。从屠宰场收集卵巢,并回收卵母细胞,与生长因子共同培养。然后,通过体外受精和受精卵体外发育培养来检验是否生长因子可提高卵母细胞发育的潜力。本研究共检测了4651枚卵母细胞。试验结果表明,α-转移生长因子可增加卵母细胞发育的潜力,这一作用是通过卵丘细胞的传递进行的。此外,α-转移生长因子和类似胰岛素生长因子的交互作用显著性地增强卵母细胞的发育潜力。然而,β-转移生长因子和表皮生长因子对牛卵母细胞的发育无显著性影响。结果表明,牛卵母细胞体外发育不仅需要一般性的化学物质、氨基酸、维生素,而且需要生长因子进行自身调节。     

不同成熟时间对牛卵母细胞发育及去核效率的影响

本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明,牛卵母细胞在成熟16h时极体出现率达69.3%、分裂率为54.7％、囊胚率仅为6.25%;而成熟24h时极体出现率达76.9%、分裂率为70.0%、囊胚率为27.7%,差异均显著（P＜0.05）。成熟16h的卵母细胞刚刚排出第一极体,细胞核与极体非常近,此时去核率较高;而成熟24h的卵母细胞核已远离第一极体。     

不同培养体系对猪卵母细胞体外发育潜力的影响

目的:研究猪卵母细胞体外成熟的最佳条件,为用体细胞核移植的方法生产转基因克隆猪提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。方法:采用猪卵母细胞体外成熟技术,研究了不同激素组合、猪卵泡液、半胱氨酸和颗粒细胞对猪卵母细胞体外成熟和发育潜力的影响。结果与结论:以15U/mlPMSG 20U/mlhCG成熟率最高,为(70.0±3.30)%,显著高于15U/mlFSH 30U/mlLH、10U/mlPMSG 10U/mlhCG〔成熟率分别为(45.6±5.10)%,(60.0±3.30)%〕,添加激素能促进卵母细胞的分裂,添加15%的猪卵泡液成熟率最高,为(86.7±3.35)%,显著高于5%,10%和20%组〔成熟率分别为(73.3±3.35)%,(71.2±5.08)%和(70.0±6.70)%〕,添加猪卵泡液促进了激活卵母细胞的分裂,在培养基中添加半胱氨酸和颗粒细胞,实验组和对照组成熟率差异不显著(P>0.05),但孤雌激活后卵裂率显著提高(P<0.05)。     

使用抑制素提高绵羊繁殖力

抑制素产生于母畜卵泡的颗粒细胞和公畜睾丸的支持细胞。它是一种水溶性多肽激素,由两个二硫键将一个α亚单位和一个β亚单位连接而成。在卵泡液中抑制素提纯物的分子量,牛分别为58和31KD;羊分别为67和32KD;猪为32KD。抑制素可能选择性地抑制垂体FSH的产生和释放。使用抑制素可以提高绵羊繁殖力。 一、黄体期用抑制素处理 在早期实验中,一般用不含类固醇激素的牛卵泡液直接处理羊。用于采集牛卵泡液的卵巢来自屠宰场,要求在4小时内从直径     

用一步细管法移殖牛体外受精冻胚

本场1985年11月开展了体外受精技术从试验到实用化的研究,1987年4月用一步细管法移植了牛的体外受精的存活冻胚,得到双犊。 体外受精的方法基础按梶原等的方法进行。使用的卵泡卵是1987年11月5日从芝浦牧场的日本黑牛卵巢上取出的150个未成熟卵母细胞。用成熟培养基(在25mM Hep-es缓冲Earle型TCM-199中添加5％灭活供体血清,丙酮酸钠,乳酸钠和抗菌素)在5％二氧化碳、95％氧气、38℃条件下培养24小时。