膜连蛋白A2及相关钙结合蛋白与宫颈癌新辅助化疗疗效的相关性

目的 探讨膜连蛋白A2和相关的钙结合蛋白与宫颈癌新辅助化疗疗效之间的相关性,以期寻找化疗前预测肿瘤对化疗疗效的指标.方法 选取因早期巨块型(Ⅰb2和Ⅱa2期)宫颈鳞癌行新辅助动脉化疗和宫颈癌根治术的患者68例,其中36例为化疗有效,32例为化疗无效.采用免疫组化SP法,检测患者化疗前、后宫颈癌组织及间质中膜连蛋白A2及4种相关钙结合蛋白的表达情况.结果 (1)膜连蛋白A2及4种相关钙结合蛋白在化疗后宫颈癌组织的表达均高于相应化疗前癌组织(P均＜0.05).(2)化疗前宫颈癌组织中膜连蛋白A2在化疗有效组中的表达强度低于化疗无效组(P＜0.05),化疗前宫颈癌组织中钙粒蛋白A和B在化疗有效组中的表达强度高于化疗无效组(P均＜0.05).(3)膜连蛋白A2、钙粒蛋白A和B蛋白在化疗后宫颈癌间质中的表达均高于化疗前(P均＜0.05);钙血管蛋白和钙调磷酸酶19在化疗前宫颈癌组织间质中的表达显著高于相应化疗后癌组织(P均＜0.05).(4)化疗前宫颈癌间质中钙血管蛋白在化疗有效组中的表达强度高于化疗无效组(P＜0.05).结论 在巨块型宫颈癌患者行新辅助化疗之前,肿瘤组织中钙粒蛋白A和B的高表达、肿瘤间质中钙血管蛋白的高表达、肿瘤组织中膜连蛋白A2的低表达,可以预测化疗药物的敏感性升高.     

钙结合蛋白在健康牙周组织和实验性牙周炎组织的表达分布

目的: 观察比格犬相对健康的牙周组织和实验性牙周炎的牙周组织标本中钙结合蛋白的表达分布和细胞定位,探讨其与牙周炎症的关系和可能发挥的作用。方法: 结扎法诱导建立比格犬下颌第二磨牙实验性牙周炎模型,对侧同名牙作为健康对照,诱导12周后处死,组织脱矿后常规制作连续切片,免疫组织化学法检测钙结合蛋白在比格犬健康和实验性牙周炎的组织标本中的表达和分布,明确细胞定位;免疫细胞化学法检测体外培养的原代人牙周组织细胞中钙结合蛋白的表达。结果: 在健康牙龈组织中,钙结合蛋白表达于牙龈上皮、中性粒细胞,且在结合上皮处呈强阳性表达;牙周炎症病损中,牙龈上皮细胞钙结合蛋白表达水平上调,存在强表达钙结合蛋白的中性粒细胞大量浸润,成纤维样细胞(牙龈结缔组织、牙周膜组织)、骨髓成纤维细胞、微血管内皮细胞存在钙结合蛋白的诱导表达;在体外培养的人牙周膜细胞、人牙龈成纤维细胞中均检测到钙结合蛋白的表达。结论: 钙结合蛋白组成性表达于牙龈上皮细胞、中性粒细胞,可能对维持牙周组织内环境稳定和完整性发挥重要作用。牙周炎症诱导牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞、骨髓成纤维细胞和血管内皮细胞表达的钙结合蛋白可能在抗微生物感染、促炎症细胞迁移等方面发挥作用。     

E-钙黏附蛋白、β-链蛋白及表皮生长因子受体在胆管内癌中的表达及其意义

[目的]研究E-钙黏附蛋白、β-链蛋白及表皮生长因子受体(EGFR)在胆管内癌中的表达及其意义.[方法]利用免疫组织化学法检测3种蛋白质在42例胆管内癌组织中的表达,并分析其与临床、病理因素的相关性.[结果]在胆管内癌中,E-钙黏附蛋白及β-链蛋白在细胞膜中的表达减少率分别为71.4%,88.1%,β-链蛋白在细胞核中的表达率为16.7%,EGFR高表达率为71.4%.E-钙黏附蛋白在癌细胞膜中表达在分化程度(P=0.002)、β-链蛋白在癌细胞核的表达在侵袭深度(P=0.038)、EGFR在癌细胞中表达在周围神经浸润(P=0.041)方面差异均有统计学意义.E-钙黏附蛋白与β-链蛋白在癌细胞膜中表达水平之间有相关性.[结论]E-钙黏附蛋白、β-链蛋白及EGFR的表达与胆管内癌的发展有一定的关系,可做为判断预后的参考指标.     

KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白在结直肠癌中的表达和其对应的临床病理之间相互关系。方法于手术中收集大肠癌组织与癌旁组织各60例(所有手术患者在术前均未进行全身化疗、放疗及其他治疗),采用逆转录酶聚合酶链反应技术检测大肠癌组织及癌旁组织中KL-6黏蛋白与E-钙黏蛋白的RNA表达水平的变化。结果 (1)ELISA法检测结果显示:大肠癌组织中KL-6黏蛋白的表达明显高于癌旁正常组织,而E-钙黏蛋白表达明显低于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达与性别、年龄、临床TNM分期无关,且差异无统计学意义(P>0.05),但与不同肿瘤的分化程度以及有无淋巴结转移有关,且差异有统计学意义(P<0.05)。(2)相关性分析显示KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白在大肠癌中的表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 (1)KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达异常在大肠癌的发生、发展中起重要作用,KL-6黏蛋白和E-钙黏蛋白的表达与大肠癌的分化程度及淋巴结转移情况有相关性;联合检测两者在大肠癌中的表达可能有助于恶性程度的评估与预后判断。(2)KL-6黏蛋白其发挥作用的作用机制可能与其抗粘附作用以及Wnt/β一catenin信号通路的激活密切相关。     

膜联蛋白Ⅱ和钙卫蛋白在胃癌中的表达

目的研究膜联蛋白Ⅱ(annexinⅡ)、钙卫蛋白在胃癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测正常胃组织、胃溃疡组织、胃癌组织中annexinⅡ、钙卫蛋白表达情况,并分析annexinⅡ和钙卫蛋白的表达与性别、年龄、肿瘤浸润深度和淋巴结转移的关系。结果 AnnexinⅡ在胃癌组织的阳性表达明显高于正常胃组织和胃溃疡组织,差异有统计学意义(P<0.01);正常胃组织和胃溃疡组织中Annexin的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。钙卫蛋白在胃溃疡组织和胃癌组织中的阳性表达高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.01);胃溃疡组织和胃癌组织中钙卫蛋白的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。在胃癌组织中annexinⅡ和钙卫蛋白的表达与患者年龄及性别无关(P>0.05);与浸润深度和淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AnnexinⅡ和钙卫蛋白可能参与了胃癌的形成,并且在胃癌形成后的肿瘤生长、浸润、转移过程中起促进作用。     

E-钙黏素在68例食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨E-钙黏素在食管鳞癌中的表达与癌组织分化程度、浸润转移及预后的关系,为预测食管癌浸润转移及临床阻断食管癌转移途径提供理论依据。方法应用免疫组化S-P法检测68例食管癌组织和30例正常食管组织中E-钙黏素蛋白的分布及表达水平并进行统计学分析。结果E-钙黏素蛋白在食管鳞癌和正常食管组织中阳性表达率分别为69.1%(47/68)、100%(30/30),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);E-钙黏素蛋白在高、中、低分化的癌组织的阳性表达率分别为84%(21/25)、72.4%(21/29)、51.1%(8/14),E-钙黏素蛋白在不同分化程度的食管鳞癌组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05);E-钙黏素蛋白在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中阳性表达率分别为57.9%(22/38)、80%(24/30),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);E-钙黏素蛋白在食管鳞癌有纤维膜浸润组和无纤维膜浸润组中阳性表达率分别为71.4%(40/56)、66.7%(8/12),两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论E-钙黏素蛋白的表达与食管鳞癌的发生、分化程度、有无淋巴结转移有关。E-钙黏素在抑制...     

胃泌素对大鼠小肠上皮1,25（OH）2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的影响

目的探讨胃泌素对大鼠小肠上皮1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白(1,25D3-MARRS结合蛋白)表达的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和免疫印迹法,检测胃泌素、奥美拉唑处理后的SD大鼠小肠中1,25D3-MARRS结合蛋白的表达情况与对照组的差异,并测大鼠血清中钙、磷离子的浓度变化。结果大鼠小肠上皮细胞中1,25D3-MARRS结合蛋白分布于胞核、胞浆和胞膜。胃泌素、奥美拉唑均引起大鼠小肠组织1,25D3-MARRS结合蛋白的mRNA和蛋白两个水平表达增高(P<0.05),但其作为一个促小肠钙磷吸收的蛋白,无明显增高血清钙磷浓度的作用(P>0.05)。结论 1,25D3-MARRS结合蛋白作为一个广泛分布的多功能蛋白,受胃泌素的调节,在消化道相关疾病具有很高的研究价值及临床应用前景。     

甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用.方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响.结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内.两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少.它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著.结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用.     

乳腺癌组织中叉头蛋白F1、钙黏附蛋白E、钙黏附蛋白N的表达情况及临床意义

目的探讨乳腺癌组织中叉头蛋白F1、钙黏附蛋白E和钙黏附蛋白N的表达情况及临床意义。方法将患者乳腺癌组织及癌旁组织作为研究样本,检测叉头蛋白F1、钙黏附蛋白E和钙黏附蛋白N的表达情况。结果 32份乳腺癌组织中的叉头蛋白F1、钙黏附蛋白E表达阳性率均显著低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P 0.05),乳腺癌组织的钙黏附蛋白N表达阳性率显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。不同肿瘤大小、TNM分期情况会影响乳腺癌组织中的叉头蛋白F1表达,对比差异有统计学意义(P 0.05)。结论叉头蛋白F1可能会参与乳腺癌的发生发展,值得临床上进一步探讨,以期找到更好干预乳腺癌的新途径。     

原发性肝细胞癌组织中EphA2和E-钙黏素蛋白的表达

目的:探讨EphA2和E-钙黏素蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法:采用免疫组化方法检测EphA2和E-钙黏素蛋白在72例肝癌组织、40例癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达情况.结果:正常肝组织、癌旁肝组织和肝癌组织中EphA2蛋白的阳性表达率分别为50.0%(5/10)、57.5%(23/40)和77.8%(56/72)(H=16.235,P＜0.001),E-钙黏素蛋白的阳性表达率分别为80.0%(8/10)、65.0%(26/40)和40.3%(29/72)(H=9.033,P=0.01 1);EphA2的过表达与肝癌患者的卫星灶、淋巴结转移及癌栓有关(χ2分别为7.160,3.952和4.879,P均＜0.05),E-钙黏素蛋白的过表达与淋巴结转移和卫星灶有关(χ2分别为4.500和6.583.P均＜0.05).肝癌组织中EphA2和E-钙黏素蛋白的表达有关联性(rp=0.280,P=0.032).结论:EphA2和E-钙黏素联合作用,可能在肝癌的侵袭和转移中发挥重要作用.     

转录因子TBX18对乳鼠成纤维细胞的重编程作用

目的探讨窦房结促生长转录因子TBX18对乳鼠心脏成纤维细胞的重编程作用。方法构建携带人TBX18基因的重组腺病毒载体(Ad-TBX18)及只带有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP),转染乳鼠心脏成纤维细胞(CFs),分成实验组A(CFs-TBX18)、对照组B(CFs—GFP)和空白对照组C(CFs)。各组细胞培养8 d观察形态学变化并检测HCN4蛋白、Cox43蛋白及Cox45蛋白的表达情况;再检测心肌肌钙蛋白1(cTn1)蛋白的表达量并记录细胞内钙火花的数量;最后检测α-SMA蛋白的表达及Vimentin蛋白的荧光分布。结果成纤维细胞转染Ad—GFPTBX18后其形态学和搏动功能均未向iSANs转化。转染TBX18的成纤维细胞HCN4表达明显增高,Cox43与Cox45蛋白表达下调。钙火花检测结果显示,空白对照组细胞内有钙火花,而实验组和对照组中均未发现钙火花。cTn1蛋白检测结果表明,实验组中无cTn1蛋白表达。免疫荧光检测显示,各组中均有Vimentin蛋白的红色荧光,实验组中α-SMA高表达,而对照组α-SMA表达明显降低。结论 CFs经TBX18转染后可重编程为高表达HCN4蛋白,和低表达COX43、45蛋白表达较低的肌成纤维细胞(MCFs)。     

钙蛋白酶在缺血性脑损伤中的作用和FNS对其活性的调节及机制的研究

为了探讨钙蛋白酶在脑缺血损伤中的作用及电刺激小脑顶核 (ＦＮＳ)对其活性的调节及其机制 ,本研究采用免疫组化、免疫电镜、ＷｅｓｔｅｒｎＥＰ迹、ＲＴ ＰＣＲ及神经病理学等方法 ,动态观察了脑缺血及再灌注后钙蛋白酶表达、转位及激活 ,Ｃａｌｐａｓ ｔａｔｉｎ(钙蛋白酶抑制蛋白 )的表达及神经病理损伤情况 ,并观察了应用ＦＮＳ后对上述指标的影响。结果显示 ,钙蛋白酶的异常激活在脑缺血及再灌注损伤中起重要作用 ;ＦＮＳ可通过促进钙蛋白酶抑制蛋白的表达 ,抑制钙蛋白酶的活性 ,在脑缺血及再灌注过程中起神经保护作用钙蛋白酶在缺血性…     

EZH2基因在胰腺导管腺癌的表达及与E钙黏附蛋白相关性研究

目的探讨EZH2基因在胰腺导管腺癌中的表达及与E钙黏附蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学法检测32例PDA组织及正常组织中EZH2蛋白及E钙黏附蛋白（E-cadherin）的表达。结果PDA组织及正常组织中EZH2蛋白的表达率分别为87．5％、15．4％（P〈0．05）,EZH2高表达患者伴随着E钙黏附蛋白低表达、肿瘤阳性、肿瘤体积大。结论EZH2在胰腺导管腺癌组织中明显高表达,E-cad在细胞分化机制中可能发挥某种重要作用,提示两者与胰腺导管腺癌的发生、发展密切相关,对于胰腺导管腺癌的早期诊断及判断预后可能有重要的意义。     

血小板54kD钙结合蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的特性研究

猪血小板分子量为9.0×10~(-23)kg钙结合蛋白(简称54kD钙结合蛋白)具有诱导猪肾上腺髓质嗜铬颗粒聚集的活性。嗜铬颗粒聚集与蛋白浓度呈正相关。溶液中游离钙浓度在10~(-6)～10~(-3)mol/L范围内,该蛋白的活性与游离钙浓度成正比,显示该蛋白活性呈显著钙依赖性。镁离子对之有拮抗作用,而钡离子则呈正协同效应,但镁、钡离子并不引起54kD钙结合蛋白(以下简称54kD蛋白)诱导嗜铬颗粒聚集,因此该蛋白诱导嗜铬颗粒聚集的活性是钙特异性的。以上性质提示54kD蛋白与Annexin家族钙结合蛋白的性质非常相似,它可能作为血小板胞内的一种钙受体,介导血小板颗粒之间的相互融合以及颗粒与胞膜的相互作用,在血小板分泌时起重要作用。     

维生素D受体对低氧下结肠细胞屏障蛋白的作用

目的 探究低氧环境对结肠细胞DLD-1屏障蛋白影响及补偿机制。方法 将DLD-1分别给予低氧(l% O₂)、维生素D(100 nmol/L)及低氧联合维生素D处理48 h。Western blot法检测各组细胞中紧密连接蛋白封闭小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白、Claudin-1和上皮细胞钙黏蛋白及维生素D受体(VDR)的表达情况。采用慢病毒包装的方法建立DLD-1的VDR稳转敲降细胞系及对照,给予低氧处理后,检测上述蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,DLD-1低氧处理48 h后紧密连接结构蛋白闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达均增加(P均<0.001),低氧+维生素D联合处理组较单独维生素D处理组除闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达增加外,ZO-1及上皮细胞钙黏蛋白表达也明显增加(P均<0.001)。VDR敲降细胞系低氧处理后,ZO-1(P<0.001)、闭锁蛋白(P<0.05)、Claudin-1(P<0.01)及上皮细胞钙黏蛋白(P<0.001)表达均显著降低。结论 VDR对于低氧状态下结肠细胞系DLD-1肠上皮屏障蛋白表达有调节作用,提示VDR通路可能为低氧环境下保护肠黏膜屏障的另一重要机制。     

CaMKⅡ翻译后修饰在心血管疾病中的作用研究进展

钙离子(Ca~(2+))信号转导途径对维持心血管系统稳态及功能有重要作用。Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)功能繁多且在心血管系统表达丰富,参与调控多种病理生理过程,包括兴奋收缩偶联、兴奋转录偶联、心力衰竭及心律失常等。CaMKⅡ活化可分为经典的Ca~(2+)-钙调蛋白依赖性活化及翻译后修饰(PTMs)。目前已发现的PTMs主要包括氧化应激、亚硝基化、O-连接糖基化、相互作用蛋白等,不同PTMs在急性冠状动脉综合征、缺血再灌注损伤、心力衰竭、心律失常等心血管模型中均发挥重要作用。     

埃兹蛋白、转移相关黏附分子44V6、E-钙黏附素在人结肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin蛋白)、转移相关黏附分子44V6(CD44V6)、E-钙黏附素在人结肠癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组化S-P法检测Ezrin、CD44V6、E-钙黏附素在78例结肠癌组织、30例结肠腺瘤组织、30例正常结肠黏膜中的表达,分析三者与临床病理特征的关系及相关性.结果 结肠癌组织中Ezrin、CD44V6蛋白表达阳性率显著高于结肠腺瘤组织及正常结肠组织(P＜0.01),而有淋巴转移者显著高于无淋巴转移者(P＜0.05);E-钙黏附素蛋白表达阳性率显著低于结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织(P＜0.01),无淋巴转移组明显高于有淋巴转移组(P＜0.01).结肠癌组织中Ezrin、CD44V6蛋白表达水平与肿瘤进展及转移呈正相关(P＜0.05),而E-钙黏附素蛋白表达水平与肿瘤进展及转移呈负相关(P＜0.05).结论 Ezrin、CD44V6、E-钙黏附素可能与结肠癌的侵袭转移相关,三者联合检验能更准确地判断结肠癌的转移情况.     

钙结合蛋白Calbindin-D28k在遗传性高钙尿结石大鼠肾组织中的表达及其作用

目的 研究钙结合蛋白Calbindin-D28k在遗传性高钙尿结石(GHS)大鼠肾脏中的表达,并探讨其在特发性高钙尿症发病中的作用.方法 分别取16只GHS大鼠与16只正常对照组(NC)大鼠新鲜肾脏组织,Western印迹检测Calbindin-D28k蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测其基因表达水平.结果 GHS大鼠Calbindin-D28k蛋白表达水平显著高于NC大鼠(4值分别为0.49±0.02和0.20±0.01,P＜0.05),GHS组Calbindin-D28k mRNA表达水平是NC组的1.21倍[2-(△△CT)值分别为1.21和1.0,P＞0.05].结论 Calbindin-D28k的表达上调可能是由GHS大鼠的维生素D受体高表达和高尿钙所引起,在尿钙重吸收中起重要作用,但不是导致特发性高钙尿症的关键分子.     

过量氟对成骨细胞非折叠蛋白反应的影响

目的探讨钙连接蛋白(CNX)、钙网蛋白(CRT)和免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)在高氟处理人成骨细胞后引起非折叠蛋白反应中的作用。方法免疫印迹法测定不同浓度氟化钠处理人成骨细胞Saos-2 24 h后,细胞内CNX、CRT、生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)和BIP蛋白表达水平。结果高氟能诱导成骨细胞内BIP表达量的增加,抑制CNX表达。对CRT蛋白表达影响较小,仅在氟化钠20 mg/L时表达增高。GADD34在所试细胞中不表达。绘制了4种蛋白相互作用的关系图。结论氟引起非折叠蛋白反应,分子伴侣CNX/CRT循环异常可能是氟骨症骨细胞受损的机制之一。     

女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响

目的研究补肾中药女贞子对去卵巢大鼠钙代谢及维生素D依赖型基因表达的影响。方法大鼠去卵巢手术处理4周后,ig给药治疗14周。血清、尿液及粪便中钙水平采用比色法测定。RT-PCR技术分析小肠及肾脏基因表达。结果大鼠去卵巢后体内钙流失显著增加,表现在血钙下降,尿钙及粪钙排泄增加。女贞子可以有效防止尿钙及粪钙排泄增加,并恢复血钙水平。RT-PCR分析表明雌二醇和女贞子都可以抑制去卵巢引起的小肠维生素D受体(VDR)mRNA表达下降。女贞子对肾脏25-羟基维生素D 1-羟化酶(1-OH ase)及25-羟基维生素D 24-羟化酶(24-OH ase)mRNA无明显作用,但却可以提高肾脏钙结合蛋白-9k(C aBP-9k)及钙结合蛋白-28 k(C aBP-28k)的基因表达。结论女贞子能够改善雌激素缺乏所引起的钙失衡状态,主要是通过提高小肠对活性维生素D的敏感性及加强肾脏对钙的重吸收而发挥作用的。