甲鱼及养殖水中5株带毒力基因O1群霍乱弧菌的分离与鉴定

目的监测杭州市江干区水产品中O1群和O139群霍乱弧菌并对分离菌株进行病原学鉴定及分子分型。方法按《霍乱防治手册》第5版对51份样品进行霍乱弧菌分离与鉴定。运用改良Kirby-Bauer纸片法和PCR检测5株霍乱弧菌对14种临床常用抗生素的敏感性及是否携带ctxA和tcpA毒力基因,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型。结果从51份样品中检出O1群霍乱弧菌5株,其中小川型4株,稻叶型1株。5株霍乱弧菌的ctxA和tcpA毒力基因结果均为阳性。5株菌株对11种抗生素敏感,对红霉素和利福平中介,稻叶型菌株对氨苄西林敏感,小川型菌株对其耐药。PFGE分为两型,两型间仅有一条带的差异。结论本次分离的5株O1群霍乱弧菌均携带ctxA和tcpA毒力基因,故有必要加强对水产品尤其是甲鱼的监测及管理。     

2013－2019年北京市昌平区霍乱弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的了解2013 — 2019年北京市昌平区霍乱弧菌表型及其分子特征。方法采用常规培养方法对2013 — 2019年北京市昌平区疑似霍乱标本进行检测。 对分离鉴定的O1群小川型霍乱弧菌,用NotⅠ和SfiⅠ两种内切酶进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）、用荧光PCR和普通PCR进行9种毒力基因检测,用微量肉汤稀释法进行21种药物敏感试验。结果2013 — 2019年北京市昌平区共分离到29株O1群小川型霍乱弧菌,其中散发病例中分离到10株,一起聚集性疫情中分离到19株。 29株菌经Not Ⅰ和Sfi Ⅰ双酶切后可分成3种PFGE谱型（CP-01～03）,3种PFGE谱型间的相似系数为78.50%～100.00%,以CP-02为主（27/29,93.10%）。 所有菌株均不携带ctxAB基因,携带toxR和hlyA基因,其他毒力基因ompU、tcpA、tcpI、rtxC、zot和ace的携带率分别为89.66%、82.76%、82.76%、44.83%、6.90%和6.90%。 29株菌药敏结果,除头孢唑啉（0.00%）和链霉素（3.45%）敏感率极低外,对其他19种抗菌素为敏感（82.76%～100.00%）。结论2013 — 2019年北京市昌平区的O1群小川型霍乱弧菌为非产毒株,以PFGE谱型CP-02为主,毒力基因toxR和hlyA携带率高,对多数抗生素敏感,提示在防控工作中应关注此类菌株并制定相应的方针政策,减少疫情的发生。     

广东省霍乱病例与环境来源霍乱弧菌的

目的比较分析广东省霍乱病例及环境来源O1/O139群霍乱弧菌抗生素敏感性和分子分型特征。方法选取2006-2007年广东省霍乱病例及相关来源、环境（珠江水体和海水产品）来源的O1/O139群霍乱弧菌。采用血清学、药物敏感性试验和分子生物学方法,研究不同来源的霍乱弧菌在菌型分布、药物敏感性、毒素基因携带以及分子分型方面的异同。结果2006-2007年,广东省共分离各类来源O1/O139群霍乱弧菌170株。其中,病例及相关来源菌株37株,环境来源菌株133株（海水产品来源37株、珠江水体96株）。两种来源菌株的菌型构成均以O1群El Tor稻叶型为主;病例及相关来源菌株以产毒株为主,ctxA毒素基因携带率（83.8%）显著高于环境菌株（4.5%）;药物敏感性试验显示,以产毒株为主的病例及相关来源菌株对萘啶酸和复方新诺明的耐药率（78.8%,78.8%）高于以非产毒株为主的环境来源菌株（50.6%,13.9%,P0.05）。环境来源菌株对多西环素的耐药率（17.7%）高于病例及相关来源菌株（0%,P0.05）。O139群菌株对氨苄西林的耐药率（70%）高于稻叶型和小川型菌株（8.9%,0%,P0.01）。脉冲场凝胶电泳（PFGE）聚类分析显示,O139群霍乱弧菌产毒株之间,O1群霍乱弧菌流行株之间以及其他的O1/O139群霍乱弧菌之间,PFGE型别表现为明显的遗传多样性。结论广东省O1/O139群霍乱弧菌来源复杂多样,霍乱防控形势严峻,需要密切注意菌株型别变异情况及菌株变异趋势。     

浙江省丽水市首起非O1群霍乱弧菌食物中毒分子生物学溯源分析

目的 利用分子生物技术了解引起食物中毒的非O1群霍乱弧菌携带毒力基因情况及耐药性特征.方法 对检出的非O1群霍乱弧菌菌株进行耐药性分析,同时采用聚合酶链反应(PCR)方法进行霍乱弧菌肠毒素基因(Ctx)、小带联结毒素基因(Zot)、辅助霍乱肠毒素(Ace)基因的检测,并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型并作同源性分析.结果 从8例患者和8份食品标本中分离到7株非O1群霍乱弧菌,未检出Ctx、Zot、Ace等毒素基因,检出溶血素,Dienes试验和脉冲场凝胶电泳图谱显示病人分离株和剩余食物检出株同源.经耐药性分析,菌株除对复方新诺明、氨苄西林100%耐药外,对其余抗生素均较敏感.结论 通过实验证实本次食物中毒是由聚餐者共同食用冷菜凤爪所致,流行病学追溯从患者共同食用冷菜和海产品中非O1群霍乱弧菌毒力基因、耐药性和脉冲场凝胶电泳分析为同源菌株.     

广州市一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的病原特征分析

目的 了解2014年广州市某工厂发生的一起非O1/O139群霍乱弧菌食物中毒分离株的耐药特性及分子特征。方法 对分离到的6株非O1/O139群分离株进行生化鉴定、血清学鉴定、药物敏感性实验、毒力相关基因检测和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析。结果 6株分离株经生化鉴定、血清学鉴定为非O1/O139群。药物敏感性分析显示,6株分离株均对氨苄西林、头孢克肟、头孢拉定、阿米卡星、妥布霉素、庆大霉素和多粘菌素B耐药,对诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、呋喃唑酮、四环素、吡哌酸、红霉素和氯霉素敏感。毒力基因聚合酶链反应检测结果显示,所有菌株均携带毒力表达调控基因（toxR）和溶血素基因（hlyA）,未检出霍乱肠毒素基因（ctxA）、毒力协同调节菌毛基因（tcpA）和肠毒素基因（ST）;5株病例分离株和1株冷柜内壁分离株经限制性内切酶NotⅠ消化后的PFGE图谱为同一型别。结论 此次食物中毒的病原体为非O1/O139群霍乱弧菌,具有共同的遗传特征,菌株出现了多重耐药,提示应加强该类菌株的监测,防止大范围扩散或暴发流行。     

2022年北京市通州区一起霍乱疫情分离菌株的病原学特征分析

目的 分析2022年北京市通州区一起霍乱弧菌引起的疫情的病原学特征,并与引起通州区过往疫情的菌株进行比对分析。方法 用实时荧光PCR方法检测样本中O1/O139群霍乱弧菌的特异性基因,同时按常规法对样本进行菌株的分离培养鉴定;用普通PCR方法检测霍乱弧菌的11种毒力基因;用微量肉汤稀释法进行12种药物的敏感性试验,采用NotⅠ限制性内切酶进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和聚类分析,基于全基因组序列进行菌株遗传学分析。结果 本次疫情共检出5株O1群小川型非产毒霍乱弧菌,所有菌株均携带ompU、toxR、tcpI、tcpA^EL、hlyA^EL、hlyA^CL和rtxC基因,不携带ctxAB基因,5株菌耐药情况一致,均为美罗培南–头孢噻肟–头孢他啶–链霉素–氨苄西林–氨苄西林/舒巴坦6种药物耐药,为多重耐药菌株。PFGE分6种带型Ⅰ～Ⅵ,本次疫情菌株带型为Ⅱ型。与通州区既往检出的菌株相比,与2011年2株产毒O1群小川型霍乱弧菌带型较为接近,耐药情况一致,毒力基因携带情况有所差异,但都携带tcpA^EL基因。遗传...     

临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征分析

目的 了解临床分离的非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征。方法 收集2014-2015年北京友谊医院4-10月肠道门诊分离到的非O1/O139群霍乱弧菌,采用微量肉汤稀释法检测霍乱弧菌对15种抗生素的耐药性;PCR检测霍乱弧菌的毒力相关基因。结果 35株非O1/O139群霍乱弧菌对复方新诺明的耐药率(40.0%)最高,其次是氯霉素(28.5%)和磺胺异恶唑(22.6%),对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢西丁、头孢吡肟及亚胺培南完全敏感。毒力基因检测显示所有菌株均携带hlyA和ompU,hapA(97.1%)、rtxA(91.4%)、Ⅵ型分泌系统T6SS(94.3%~97.1%)、Ⅲ型分泌系统T3SS(80.0%~85.7%)和nanH(62.9%)阳性率较高;主要的毒力基因型为hlyA-rtxA-hapA-ompU-nanH-vasA-vasK-vasH-vcsC-vcsV-vcsN-vspD(40.0%)。结论 临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因多样化,对抗菌药物耐药性较高,需加强腹泻病例中非O1/O139群霍乱弧菌的毒力及耐药监测。     

霍乱弧菌在福州闽江水质中实验室存活观察

目的观察霍乱弧菌在福州闽江水质中实验室存活状况。方法采集福州市闽江3处不同水域的水样,分装高压后,分别加一定量的O139群和小川型霍乱弧菌,放置于室温,定期观察鉴定,并对在水中存活的菌株毒力基因进行检测。结果霍乱弧菌在福州闽江琯头、亭江入海口水质中实验室存活时间较闽江洪山桥水质中的长,霍乱弧菌夏秋季的实验室存活时间较冬季长,霍乱弧菌0139群较小川型的实验室存活时间长。O139群和小川型霍乱弧菌水中存活后,菌株毒力检测均为阳性。结论霍乱弧菌的存活时间与不同水质,不同季节,不同菌型相关,水中存活后菌株毒力依然存在。     

2015－2017年北京市顺义区食源性疾病监测腹泻病例霍乱弧菌感染及病原学特征分析

目的研究食源性疾病监测腹泻患者霍乱弧菌感染特点及病原学特征，为科学防控和临床治疗提供依据。方法从2015－2017年北京市顺义区腹泻监测病例的粪便标本中分离培养霍乱弧菌，针对分离菌株进行毒力基因聚合酶链式反应（PCR）检测、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）图谱分析以及抗生素敏感性分析。结果2015－2017年，共收集1 105例腹泻患者，霍乱弧菌的检出率为0.54%（6/1 105），霍乱毒素基因ctxAB均为阴性，血清学分型为非O1/O139型，其中5株霍乱弧菌携带Ⅲ型分泌系统毒力基因。 菌株PFGE聚类分析结果和MALDI-TOF MS图谱聚类结果具有较好的一致性。结论霍乱弧菌流行强度不高，但其感染和病原学监测工作应在食源性疾病监测体系中得到重视。     

一起输入性霍乱弧菌的实验室检测

目的分离培养患者粪便标本中的霍乱弧菌并检测其毒力基因及药物敏感性。 方法常规方法分离菌株，根据其生化及血清学反应结果鉴定菌株，聚合酶链反应 (PCR) 检测毒力基因IctxA、ace、tcpA、zot，/IK-B法测定药物敏感性。 结果 从患者粪便中分离到埃尔托生物型6f霍乱弧菌1株，带有4种毒力基因，对多种药物敏感，不产-内酰胺酶。 结论结果提示该株霍乱弧菌为流行株，对多种常用药物敏感，PCR可较快完成对霍乱弧菌毒力强弱的检测。     

2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性研究

目的 分析2005-2014年上海市O139群霍乱弧菌的分子特征和耐药性。方法 以聚合酶链反应(PCR)方法检测86株O139群霍乱弧菌的霍乱毒素基因(ctxA)、溶血素基因(hlyA)、毒素协调菌毛基因(tcpA)、调控蛋白基因(toxR)和编码霍乱毒素基因的CTX基因组基因(zot、ace)。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法对O139群霍乱弧菌菌株进行分子分型。采用WHO推荐的改良K-B纸片法,对O139群霍乱弧菌菌株进行11种抗菌药物(头孢曲松、强力霉素、诺氟沙星、环丙沙星、复方新诺明、丁胺卡那霉素、四环素、氯霉素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素)敏感试验。结果 患者来源O139群霍乱弧菌菌株93.2%(41/44)为产毒株,水产来源菌株58.3%(21/36)为产毒株,6株水体来源菌株均为非产毒株。PFGE分析将O139群霍乱弧菌分为35个型别。MLST分析将O139群霍乱弧菌分为9个ST型,其中流行菌型为ST 69型,非产毒株以ST 162型为主。86株O139群霍乱弧菌经药物敏感试验分析显示O139群霍乱弧菌产毒株的耐药情况比非产毒株严重。O139群霍乱弧菌产毒株对强力霉素、复方新诺明、四环素、萘啶酸、氨苄西林、庆大霉素的耐药率高。O139群霍乱弧菌非产毒株对萘啶酸耐药严重。结论 上海市患者和水产来源O139群霍乱弧菌构成以产毒株为主。PFGE分型提示水产为霍乱疫情的主要传染源。O139群霍乱弧菌产毒株高度克隆化,流行菌型为ST 69型,耐药情况严重。     

1株致放化疗患者口腔感染霍乱弧菌的鉴定和病原特征分析

摘要：目的?对1例食管癌术后放化疗患者口腔感染的霍乱弧菌进行菌株鉴定和病原特征分析。方法?取患者口腔分泌物进行分离培养并观察细菌形态特征，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行蛋白质水平鉴定，并进行血清群检测；用K-B纸片扩散法进行药敏试验；提取细菌基因组DNA构建文库并进行细菌基因组重测序，通过核糖体多位点序列分型(rMLST)、平均核苷酸相似度(ANI)分析和非冗余蛋白质库(NR)比对，对菌株进行分子生物学鉴定，并进一步对其MLST分子分型和毒力基因进行分析。结果?MALDI-TOF MS鉴定分值为2.151，rMLST分析显示该菌株与霍乱弧菌吻合度为100%，ANI分析显示ANIb值为96.05%，ANIm值为96.56%，NR数据库基因注释得到霍乱弧菌相关的基因2 981个，血清群检测为非O1/O139群霍乱弧菌。药敏试验结果显示该菌对哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、头孢哌酮/舒巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南、美罗培南均敏感。MLST显示该菌株为新的ST型(ST-986)，且携带toxR、hlyA、nanH、hapA、mshA、ompU、rtxC以及T6SS等毒力基因，而未检出ctxAB、tcpA、zot、ace及st等5种毒力基因。结论?检出ST-986新型非O1/O139群霍乱弧菌。临床医生应警惕免疫力低下人群中口腔感染这种病原体的可能性。     

O1和O139群霍乱弧菌超级整合子VchintIA基因的变异

目的 研究不同血清群(型)霍乱弧菌超级整合子整合酶基因(VchintIA)的变异及其与霍乱弧菌分类的关系。 方法 使用聚合酶链反应(PCR)和序列测定的方法对VchintIA基因进行扩增和序列分析。 结果 在实验菌株中,O1El Tor和O139群霍乱弧菌产毒株以及毒素共调菌毛(toxin co-regulated pilus, tcp)基因簇阳性的O1群非产毒株的VchintIA序列完全一致,tcp基因簇阴性的O1群非产毒株的VchintIA序列在核苷酸水平上与产毒株不同,但是在氨基酸水平上相同。O139非产毒株的VchintIA序列在核苷酸和氨基酸水平上均与产毒株的VchintIA不同。 结论 O1和O139霍乱弧菌超级整合子VchintIA存在核苷酸和氨基酸水平上的变异,O139非产毒株中VchintIA的变异与其整合子内部的结构可能相关。     

霍乱弧菌O1血清群产毒株重复基因分析

目的对霍乱弧菌O1血清群产毒株基因组中重复基因数量分布、多样性及两种生物型中重复基因的差异进行分析。方法选择300株引起第6次和第7次大流行的O1群古典型和埃尔托型生物型菌株，使用BLAST和MCL等软件分析重复基因数量分布及两种生物型差异的重复基因；使用序列两两平均距离作为多样性的度量方法分析重复基因的遗传多样性以及在两种生物型之间存在遗传多样性差异的重复基因。结果每株菌平均包含242.63个同源基因簇，其中每株埃尔托型和古典型菌株分别平均包含244.85和209.74个。 筛选到13个在埃尔托生物型与古典生物型之间拷贝数存在显著差异同源基因簇，功能主要包括阴离子、氨基酸等物质的转运、定位、跨膜转运等。 对存在重复基因的同源基因簇的遗传多样性分析，发现在两种生物型之间多样性存在差异的同源基因簇50个，这些基因簇的功能主要包括阴离子、氨基酸、有机底物等转运、定植、底物特异的跨膜转运活性等。结论霍乱弧菌重复基因的进化有一定的功能倾向性，其特征解析对于理解其基因组适应性进化、菌株多样性及两种生物型基因组差异进化提供了新依据。     

浙江省非O1、非O139群霍乱弧菌快速检测与毒力基因研究

目的 建立一种快速检测非O1、非O139群霍乱弧菌方法,并对浙江省部分地区海水产品中非O1、非O139 群霍乱弧菌及其携带毒力基因开展快速检测.方法 采用三糖斜面、氧化酶实验、粘丝实验、无盐胨水等简单生化进行初筛,对全部结果阳性的菌株用聚合酶链反应(PCR)方法检测霍乱弧菌外膜蛋白OmpW以及毒力基因ctxA、hl...     

Molecular analysis of antibiotic resistance gene clusters in vibrio cholerae O139 and O1 SXT constins

Many recent Asian clinical Vibrio cholerae E1 Tor O1 and O139 isolates are resistant to the antibiotics sulfamethoxazole (Su), trimethoprim (Tm), chloramphenicol (Cm), and streptomycin (Sm). The corresponding resistance genes are located on large conjugative elements (SXT constins) that are integrated into prfC on the V. cholerae chromosome. We determined the DNA sequences of the antibiotic resistance genes in the SXT constin in MO10, an O139 isolate. In SXT(MO10), these genes are clustered within a composite transposon-like structure found near the element's 5' end. The genes conferring resistance to Cm (floR), Su (sulII), and Sm (strA and strB) correspond to previously described genes, whereas the gene conferring resistance to Tm, designated dfr18, is novel. In some other O139 isolates the antibiotic resistance gene cluster was found to be deleted from the SXT-related constin. The El Tor O1 SXT constin, SXT(ET), does not contain the same resistance genes as SXT(MO10). In this constin, the Tm resistance determinant was located nearly 70 kbp away from the other resistance genes and found in a novel type of integron that constitutes a fourth class of resistance integrons. These studies indicate that there is considerable flux in the antibiotic resistance genes found in the SXT family of constins and point to a model for the evolution of these related mobile elements.     

中国El Tor生物型霍乱弧菌流行株中非溶血变异菌株分布及进化特征

目的分析第7次霍乱大流行期间中国O1群El Tor型霍乱弧菌流行菌株中非溶血变异菌株的流行分布特征以及进化特征。方法选择1961年以来不同霍乱流行期的O1群El Tor型产毒菌株,测定溶血表型并分析其时间分布特点。 比较菌株溶血素基因hlyA的序列变异及不同序列型的分布,构建这些菌株的核心基因组进化树,分析非溶血株在进化分支中的分布及克隆化特征。结果在第7次霍乱大流行的中国霍乱流行中,溶血素基因hlyA在第1次流行高峰期后,出现了明显的序列型转换。 非溶血株主要出现在始于20世纪70年代的第2次流行中,并成为多见的变异型。 非溶血菌株分布在不同流行期和流行克隆中,没有形成单一的克隆化。 但部分非溶血菌株克隆引起数年的流行扩散。结论O1群El Tor型菌株的非溶血变异独立于基因组逐年累积的克隆进化,很可能是一种随机性较强的变异。