紫柏凝胶通过调节ERK及P38/MAPK信号通路下调宫颈癌荷瘤裸鼠E6、E7蛋白表达研究

目的:观察ERK及P38/MAPK信号通路在紫柏凝胶影响宫颈癌裸鼠移植瘤致癌蛋白E6、E7表达中的作用。方法:体外培养Siha细胞,成功建立人宫颈癌荷瘤裸鼠模型,随机分为模型组,顺铂组(腹腔内注射0.5 ml顺铂,4 d1次),紫柏凝胶高、中、低剂量组(外用紫柏凝胶0.9428、0.4714、0.2357 g/kg,1 d1次),试验期28 d。称取瘤重并测量瘤体积,HE染色观察移植瘤组织病理学变化,免疫组化SP法检测瘤体中的p-p38、p-ERK、E6及E7蛋白表达水平。结果:紫柏凝胶各组的裸鼠肿瘤体积均明显小于模型组(P<0.05),高、中、低剂量组抑瘤率分别为36.23%、31.24%和14.94%。HE染色紫柏凝胶各剂量组移植瘤组织出现明显坏死样改变。与模型组比较,高、中剂量紫柏凝胶组瘤组织的E6、E7蛋白表达水平降低(P<0.05),同时p-ERK及p-p38蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:紫柏凝胶对HPV(+)宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显抑制作用,可下调致癌蛋白E6和E7的表达,其机制可能与抑制ERK及P38/MAPK信号通路有关。     

黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立人鼻咽癌CNE2裸鼠多植瘤模型,随机分为对照组,顺铂组,黄芪注射液高、中、低剂量组,分别ip生理盐水,顺铂,10.40、5.20、2.60 g/kg黄芪注射液,4周后处死CNE2荷瘤裸鼠。通过移植瘤生长曲线、终末瘤质量,计算黄芪注射液的抑瘤率;采用HE染色,于光镜下观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化;采用免疫组化法检测黄芪注射液对各组裸鼠移植瘤组织中凋亡相关蛋白p53、Bcl-2和Bax表达的影响。结果黄芪注射液高、中剂量组移植瘤体积明显低于对照组(P0.05),瘤质量明显低于对照组(P0.01),抑瘤率分别为39.90%、30.77%;黄芪注射液高、中剂量组移植瘤组织中p53、Bcl-2蛋白的表达低于对照组(P0.01);各组移植瘤组织中Bax蛋白表达均呈阴性。结论黄芪注射液对人鼻咽癌CNE2荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡,降低肿瘤组织中p53和Bcl-2蛋白的表达有关。     

参芪排毒汤对宫颈癌组织人乳头瘤病毒E6/E7、P53和PRb基因蛋白表达的影响

目的:研究参芪排毒汤对宫颈癌组织人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA、肿瘤抑制基因(P53)、视网膜母细胞瘤蛋白(PRb)表达水平的影响与意义。方法:选取112例宫颈癌患者进入研究,按随机数字表划分成对照组与治疗组,两组均给予新辅助化疗联合腹腔镜宫颈癌根治术治疗,治疗组在新辅助化疗的同时给予参芪排毒汤口服; 术前评估两组临床疗效,统计不良反应发生情况,术中取癌旁健康组织与病灶病理组织样本检测HPV E6和E7 mRNA表达水平并计算E6/E7比值,检测样本中P53、PRb表达水平; 随访至少3年,比较两组患者的3年无病情进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS),分析新辅助化疗后病理组织中HPV E6/E7、P53、PRb表达水平对PFS、OS的预测价值。结果:治疗组缓解率为83.93%,对照组为62.50%,治疗组缓解率高于对照组(P<0.05); 治疗组不良反应发生率为12.50%,对照组为17.86%,差异比较无统计学意义(P>0.05); 化疗后两组患者癌旁组织中HPV E6/E7比值比较,差异无统计学意义(P>0.05),病理组中HPV E6/E7表达高于治疗组(均P<0.05),两组癌旁与病理组织中P53、PRb比较,差异有统计学意义(均P>0.05); 化疗后宫颈癌组织中HPV E6/E7、P53、PRb表达水平对于患者无病情进展生存时间PFS、OS均具有较高预测价值(AUC>0.9,P<0.05); 治疗组患者PFS、OS均长于对照组(均P<0.05)。结论:在腹腔镜宫颈癌根治术前新辅助化疗中联合应用参芪排毒汤,能够提高术前疗效,抑制宫颈癌组织中HPV E6/E7表达、提升P53、PRb表达水平,从而起到延长患者无病情进展生存时间与总生存时间,改善预后的作用。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤LRP蛋白表达的影响

目的通过观察补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤中LRP蛋白表达影响,探讨补中益气汤治疗肺腺癌的作用机制。方法体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:即A组(A549/DDP荷瘤对照组)、B组(A549/DDP荷瘤+顺铂组)、C组(A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、D组(A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、E组(A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)、a组(A549荷瘤对照组)、b组(A549荷瘤+顺铂组)、c组(A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组)、d组(A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组)、e组(A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组)。测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织LRP蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05,P0.05),顺铂抑瘤率均增加(P0.05,P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,顺铂抑瘤率逐渐增加;顺铂使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达增加(P0.05),A549移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05);补中益气汤使A549/DDP移植瘤组织中LRP蛋白表达减少(P0.05),以中剂量效果最为显著,补中益气汤使A549移植瘤组织中LRP蛋白表达也减少(P0.05),但低、中、高剂量之间效果无显著差异。结论在对顺铂敏感及顺铂耐药的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均可使移植瘤体积缩小,顺铂的抑瘤率增加,LRP蛋白的表达下调。     

复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型E6,E7,p53,Rb蛋白表达的影响

目的采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)研究中药复方排毒止带汤含药血清对人宫颈鳞癌SiHa细胞人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6,E7,p53,pRb蛋白表达的影响。探讨复方排毒止带汤对人乳头瘤病毒的影响。方法将大鼠随机分为空白对照组、25%含药血清组及50%含药血清组。空白对照组口服生理盐水,25%含药血清组及50%含药血清组口服复方排毒止带汤煎剂,将复方排毒止带汤25%含药血清和50%含药血清分别作用于SiHa细胞72,120 h后,采用Western Blot法检测HPV16 E6,E7,p53,pRb蛋白表达,采集数据。统计学分析采用独立样本t检验。结果复方排毒止带汤50%含药血清作用72 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,pRb蛋白表达水平升高,复方排毒止带汤50%含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平较作用72 h明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均<0.05,差异有统计学意义。复方排毒止带汤25%含药血清作用120 h,HPV16 E6,E7蛋白表达水平下降,p53,Rb蛋白表达水平上升,复方排毒止带汤50%含药血清作用120 h HPV16 E6,E7蛋白表达水平较25%含药血清明显下降,p53,Rb蛋白表达水平明显升高,2组相应指标比较P均<0.05,差异有统计学意义。结论复方排毒止带汤含药血清对HPV16 E6,E7,p53,Rb蛋白表达具有明显调控作用,复方排毒止带汤的活性具有一定的时效性。     

食道通结方对裸鼠食管癌移植瘤中TE-1细胞增殖及凋亡的影响

目的通过体内实验观察食道通结方对食管癌细胞株TE-1细胞增殖和凋亡的影响,以进一步明确该方治疗食管癌的作用机制。方法裸鼠皮下接种食管癌TE-1瘤株,将荷瘤裸鼠随机分成模型组、中药组、顺铂组、中药+顺铂组,每组10只,其中中药选取食道通结方。各组均灌胃2周后,处死裸鼠,分离瘤块。称取瘤重,计算肿瘤抑制率;HE染色观察TE-1细胞形态的变化、细胞凋亡的变化;免疫组化检测肿瘤组织内B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase 3)蛋白表达的变化。结果中药组、顺铂组和中药+顺铂组平均瘤重均低于模型组,差异有统计学意义(P0.01),抑瘤率分别为45.95%、48.65%、56.76%;顺铂组平均瘤重与中药组相比差异无统计学意义(P0.05),中药+顺铂组平均瘤重低于中药组,差异有统计学意义(P0.01)。在形态变化上,中药组、顺铂组和中药+顺铂组细胞部分形态呈圆形或卵圆形,细胞核浆比例减小,其中中药+顺铂组变化最为显著;免疫组化结果显示,中药组、顺铂组和中药+顺铂组Bcl-2 OD值明显低于模型组,其中以中药+顺铂组最低,差异有统计学意义(P0.01);中药组与顺铂组比较,差异无统计学意义(P0.05),中药组Bcl-2 OD值高于中药+顺铂组,差异有统计学意义(P0.01)。中药组、顺铂组和中药+顺铂组caspase 3的OD值明显高于模型组,其中以中药+顺铂组最高,差异有统计学意义(P0.01);中药组与顺铂组相比差异无统计学意义(P0.05),中药组caspase 3的OD值低于中药+顺铂组,差异有统计学意义(P0.01)。结论食道通结方具有抑制食管癌细胞株TE-1增殖、促进其凋亡的作用,该作用可能与下调食管癌细胞株TE-1中Bcl-2的表达,上调caspase3的表达相关。     

双氢青蒿素对宫颈癌U14裸鼠移植瘤的作用及对免疫抑制分子的影响

目的研究双氢青蒿素(DHA)对宫颈癌U14裸鼠移植瘤的作用及对免疫抑制分子的影响。方法小鼠左后肢近背部皮下注入U14小鼠子宫颈癌细胞建立宫颈癌移植瘤模型,随机分为对照组,顺铂组(2 mg/kg),双氢青蒿素低、高剂量组(100、200 mg/kg),1次/d,共10 d。考察双氢青蒿素对肿瘤生长及裸鼠体质量的影响,ELISA法检测IL-4、IL-6、TGF-β、PGE_2水平。结果与对照组比较,顺铂组小鼠体质量明显下降,而双氢青蒿素组明显上升(P0.05);顺铂组和双氢青蒿素高剂量组裸鼠瘤重和瘤体积显著降低(P0.05);顺铂组、双氢青蒿素组血清IL-4、IL-6水平差异无统计学意义(P0.05),而TGF-β_1、PGE_2水平显著降低(P0.05)。结论 DHA能抑制U14移植瘤的生长,同时下调U14移植瘤小鼠血清TGF-β_1和PGE_2水平,可为肿瘤化疗提供新思路。     

生脉姜黄散对鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用

目的:探讨生脉姜黄散对人鼻咽癌细胞CNE-2裸鼠移植瘤的放射增敏作用及对细胞周期素依赖性激酶6(cyclin-dependent kinase 6,CDK6)蛋白表达的影响,并讨论其增敏作用的相关机制。方法:通过皮下注射肿瘤细胞的方法建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,荷瘤鼠随机分为空白组、照射组、生脉姜黄散组、生脉姜黄散联合照射组、顺铂联合照射组,其中生脉姜黄散组和生脉姜黄散联合照射组按照药物高、低剂量(12.87,4.29 g·kg-1)各分为2个亚组。经处理后各组隔日测量移植瘤的最大径,计算肿瘤体积抑制率和抑瘤率。免疫组化、蛋白免疫印迹法检测CDK6蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDK6 mRNA表达。结果:与空白组比较,其余各组肿瘤生长都受到一定程度的抑制,与照射组比较,生脉姜黄散(12.87 g·kg-1)联合照射组、顺铂联合照射组肿瘤生长明显受到抑制(P0.05),肿瘤体积抑制率分别为54.94%,64.9%。与照射组比较,生脉姜黄散(12.87 g·kg-1)联合照射组、顺铂联合照射组CDK6 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:生脉姜黄散对人鼻咽癌裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,其增敏作用可能与细胞周期调控因子CDK6相关。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤的抑瘤作用及MRP蛋白表达影响的研究

目的探讨补中益气汤对A549/DDP及A549细胞株荷瘤裸鼠移植瘤的的抑瘤作用及对MRP蛋白表达影响。方法体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗。测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织MRP蛋白的表达。结果顺铂使A549/DDP移植瘤体积无显著变化(P0.05),而A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05),抑瘤率均增加(P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加;顺铂上调A549/DDP移植瘤组织中MRP蛋白表达(P0.05),下调A549移植瘤组织中MRP蛋白表达(P0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤组织中MRP蛋白表达均下调(P0.05),随着中药剂量的增加,MRP蛋白水平越来越低。结论补中益气汤可有效减小移植瘤体积,增加顺铂的抑瘤率,下调MRP蛋白表达,且在顺铂敏感及顺铂耐药的肺癌组织中均有疗效。     

复方大七气汤联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤Bcl-2/Bax表达的影响

目的:探讨复方大七气汤(compound Daqiqi decoction,CDQD)联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤细胞凋亡相关因子Bcl-2/Bax的影响,为临床治疗提供理论依据.方法:将成功建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、CDQD低、高剂量组、顺铂组、顺铂联合中药组,给药3周后处死所有荷瘤鼠剥离瘤体,测瘤体积、瘤重并绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率,以RT-PCR法和Western blot法检测Bcl-2(B细胞白血病/淋巴瘤-2基因)、Bax(与Bcl-2相关的x蛋白)mRNA及蛋白量的表达.结果:①瘤重显示CDQD各剂量组瘤重均有一定程度减轻,与DDP组相比无统计学意义,顺铂联合中药组低于其余各组(P＜0.01);肿瘤生长曲线显示与模型组比较,各用药组瘤体积均有不同程度缩小(P＜0.01).②RT-PCR结果显示促凋亡基因Bax mRNA的表达:与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),其中顺铂联合中药组表达最高,与其余治疗组相比较差异有统计学意义(P＜0.01);抑凋亡基因Bcl-2 mRNA在顺铂联合中药组表达最低(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.③Western blot法显示与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),顺铂联合中药组中Bax蛋白的表达最高(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义;Bcl-2蛋白在顺铂联合中药组表达最低(P＜0.01);CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.结论:CDQD对卵巢癌皮下移植瘤具有促凋亡作用,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡有关;并且与顺铂联合用药具有增效作用.     

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株裸鼠移植瘤作用及其机制的研究

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP裸鼠移植瘤的作用机制。方法 60只裸鼠随机分为6组,空白对照组给予生理盐水0.5ml灌胃,其余5组以5×106/L的A549/DDP接种于裸鼠皮下,待成瘤后,分别给予生理盐水0.5ml灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射同时生理盐水灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射顺铂和高、中、低剂量的补中益气汤灌胃。观察A549/DDP细胞在各组裸鼠的致瘤率,计算抑瘤率;采用免疫组化方法、RT-PCR(real time PCR)检测移植瘤组织中PI3K、AKT的表达水平。结果补中益气汤高、中、低剂量组能不同程度的抑制移植瘤的生长,其中以高、中剂量组最显著,与顺铂组抑瘤率比较有明显的统计学差异(P0.05);移植瘤中PI3K、AKT蛋白表达和mRNA基因的表达在补中益气汤高、中、低剂量组中均有下降,高、中剂量组降低较多,与顺铂组和小剂量比较有统计学差异(P0.05)。结论补中益气汤联合顺铂对肺腺癌移植瘤的增殖有明显的抑制作用,补中益气汤能通过调控PI3K、AKT基因和蛋白的表达而干预顺铂的耐药机制,这种干预作用具有一定的量效关系。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨温下方乙酸乙酯部位对A549细胞移植瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的 探讨温下方乙酸乙酯部位经调控PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞移植瘤生长的作用及机制。方法 建立人肺腺癌A549细胞移植瘤裸鼠模型，随机分为模型组、阳性对照组(顺铂注射液，2.0 mg/kg)和温下方高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg),每组5只，药物干预5周后，取裸鼠肿瘤，称定质量并计算抑瘤率，HE染色观察裸鼠肿瘤病理形态学变化，TUNEL染色检测裸鼠肿瘤凋亡情况，Western blot法检测裸鼠肿瘤组织Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K、MMP-3、caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结果 与模型组比较，顺铂组和温下方各剂量组肿瘤质量和瘤组织p-Akt、p-PI3K、MMP-3、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡阳性细胞面积比例和瘤组织caspase-3蛋白表达升高(P<0.05),肿瘤细胞出现不同程度的坏死。结论 温下方乙酸乙酯部位可抑制裸鼠A549细胞移植瘤的生长，其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路有关。     

健脾解毒方对人结肠癌裸鼠原位移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A ATP7B表达的影响

目的:探讨健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长的增效作用及其对移植瘤铂类耐药相关铜转运蛋白ATP7A、ATP7B表达的影响,揭示健脾解毒方对奥沙利铂增效作用的部分机制。方法:建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,随机分为4组:对照组、奥沙利铂组、健脾解毒方组、健脾解毒方联合奥沙利铂组(联合用药组),治疗后观察各组移植瘤生长情况,采用实时荧光定量-PCR及免疫组化S-P法、Western-blot检测移植瘤中ATP7A、ATP7B mRNA和蛋白的表达。结果:(1)联合用药组的抑瘤率为53.6%,是单用奥沙利铂组的4.25倍;(2)奥沙利铂组裸鼠反复腹腔注射L-OHP后,移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均高于对照组(P<0.05);联合用药组移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达均低于奥沙利铂组(P<0.05)。结论:健脾解毒方对奥沙利铂抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长有增效作用,其增效作用可能与下调移植瘤组织ATP7A和ATP7B的mRNA及蛋白表达,增加细胞内奥沙利铂药物的浓度有关。     

补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响

探讨补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR表达的影响。BALB/C裸鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组和补中益气汤高剂量+顺铂组(高联组)、补中益气汤中剂量+顺铂组(中联组)、补中益气汤低剂量+顺铂组(低联组),培养A549/DDP细胞(浓度为5×106个/m L),接种于各组,观察各组成瘤情况。给予相应治疗,14 d后取瘤组织固定、切片,免疫组织化学方法、Real-time PCR方法检测各组裸鼠移植瘤中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR蛋白和mRNA的表达水平。结果显示补中益气汤联合顺铂可降低移植瘤体积,中联组和高联组的抑瘤率与顺铂组比较,差异有统计学意义(P0.05);与荷瘤对照组比较,中联组和高联组Bad,NF-κB,Survivin,m TOR的蛋白和mRNA的表达明显减少(P0.05),caspase-9的蛋白和mRNA在中联组和高联组的表达逐渐增多,与荷瘤对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);Bad,NF-κB,caspase-9的mRNA,中联组和高联组与顺铂组、低联组、荷瘤对照组比较有统计学意义(P0.05),低联组、顺铂组、荷瘤对照组两两比较,无统计学差异,各因子蛋白和mRNA的表达中联组和高联组比较,无统计学意义。结果表明补中益气汤与顺铂联合作用可抑制A549/DDP移植瘤的生长,补中益气汤抑制A549/DDP移植瘤的作用可能是通过调节Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR,促进细胞凋亡实现的。     

松油烯-4-醇通过线粒体途径诱导宫颈癌Siha细胞凋亡的机制研究

目的 探讨松油烯-4-醇对宫颈癌Siha细胞凋亡的影响以及其可能的机制。方法 采用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养Siha细胞,并将其分为对照组、顺铂组(10μmol/L)和5、7.5、10μmol/L松油烯-4-醇组。MTT法检测不同浓度松油烯-4-醇对Siha细胞增殖的影响,TUNEL荧光染色法和Annexin V-FITC/PI法检测Siha细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测Siha细胞Bax、cytochrome c、caspase9、HPV E6/E7 mRNA表达,Western blot法检测Siha细胞Bax、Bcl-2、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达。结果 松油烯-4-醇(5、7.5、10μmol/L)处理Siha细胞24 h后,细胞增殖能力减弱(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞Bax、cytochrome c、cleaved-caspase9蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),...     

益气除痰方对肺癌A549移植瘤细胞凋亡途径Caspase-4及DNA-PK的影响

目的:探讨益气除痰方是否通过内质网UPR介导的细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用。方法:建立40只肺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型,于接种第7天将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)、顺铂注射液组(0.002 g/kg)、益气除痰方(3.0 g/kg)+顺铂注射液(0.002 g/kg)组及益气除痰方低、高剂量组(3.0、6.0 g/kg),每组8只。中药灌胃给药,1次/d,连用21 d。顺铂注射液腹腔注射,1次/d,连用7 d。干预第22天,处死所有小鼠,测量瘤体质量、体积,采用免疫组化及Western blot法检测肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK的表达。结果:与模型组比较,益气除痰方各剂量组及益气除痰方+顺铂注射液组肿瘤体积、肿瘤质量显著降低,肿瘤组织中Caspase-4、DNA-PK表达均显著升高(P0.01);益气除痰方+顺铂注射液组效果优于顺铂注射液组(P0.05)。结论:益气除痰方对小鼠A549肺癌有一定抑制作用,其机制可能与通过升高Caspase-4、DNA-PK蛋白的表达介导细胞凋亡途径有关。     

扶正康复合剂与顺铂联用抑制移植性肺癌的实验研究

目的:研究扶正康复合剂对移植性肺癌的抑制作用,并探讨其作用机制。方法:将48只NOD/SCID裸鼠随机分为8组:模型对照组,顺铂组,扶正康复合剂低、中、高剂量组,顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组,共8组,每组6只,皮下接种H1975细胞建立移植性裸鼠肺癌模型,接种15 d后开始给药,连续给药7 d,称取体重及瘤重,计算抑瘤率,ELISA法检测裸鼠血清BUN、Cr、TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-6的表达水平,免疫组化法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin的表达情况,q-PCR法检测瘤体组织VEGF、Bcl-2、Bax、Survivin mRNA的表达水平。结果:扶正康复合剂高剂量组、顺铂组、顺铂+扶正康复合剂低、中、高剂量组与模型对照组相比:荷瘤裸鼠瘤质量显著减轻(P<0.05),血清TNF-α水平显著升高(P<0.05),IL-2水平显著升高(P<0.05),血清IL-6水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达量显著减少,Bax表达量增加。其中顺铂+扶正康复合剂高剂量给药组裸鼠抑瘤率最高,两者具有协同作用。与顺铂组相比:顺铂+扶正康复合剂高剂量组裸鼠血清Cr、BUN水平显著降低(P<0.01),顺铂+扶正康复合剂中、高剂量组裸鼠血清TNF-α、INF-γ水平显著升高(P<0.01);顺铂+扶正康复合剂高剂量组Bcl-2、Survivin、VEGF表达量降低,Bax表达量增加。结论:扶正康复合剂与顺铂联用能够降低顺铂的肾损伤作用,调节机体的Th1/Th2细胞免疫平衡,通过抑制Bcl-2、Survivin、VEGF并促进Bax的表达,进而促进肺癌细胞的凋亡。     

肠益煎对裸鼠结肠癌移植瘤抑瘤作用的实验研究

目的探究肠益煎对移植性结肠癌裸鼠肿瘤的抑制作用。方法将接种人结肠癌LOVO细胞悬液于裸鼠皮下成功制备的裸鼠移植性结肠癌模型60只随机分为模型组(A组)、肠益煎组(B组)、5-氟尿嘧啶组(C组)、5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组(D组)、肠益煎+5-氟尿嘧啶组(E组)、肠益煎+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组(F组),每组10只,模拟临床给药。A组给予生理盐水20 m L/(kg·d)灌胃;其他组中肠益煎采用水煎剂12.5 g/(kg·d)灌胃,均每天1次,共14 d;5-氟尿嘧啶及奥沙利铂采用腹腔注射,隔天1次,共5次。疗程中观察并记录裸鼠体质量。疗程结束后处死裸鼠,采集标本,记录瘤质量,计算肿瘤指数和抑瘤率。结果裸鼠去瘤后质量B、C、D、E、F组均显著高于A组(P均<0.05),D、E、F组均显著高于B、C组(P均<0.05),D、E、F组间比较差异均无统计学意义;C、D、E、F组裸鼠瘤质量、肿瘤指数明显低于A、B组(P均<0.05),D、F组明显低于C组(P均<0.05)。C、D、E、F组抑瘤率均明显高于B组(P均<0.05),D、F组明显高于C组(P均<0.05)。结论中药复方肠益煎可以稳定患瘤裸鼠体质量,有一定的抑制肿瘤瘤体生长作用,联合化疗药物5-氟尿嘧啶、奥沙利铂抑瘤效果更佳。     

益肺汤逆转裸鼠移植瘤多药耐药实验研究

目的:研究益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP裸鼠移植瘤多药耐药逆转作用的机理。方法:建立A549/DDP裸鼠移植瘤模型,分为6组,每组10只,分别以生理盐水(对照组)、益肺汤低、中、高剂量(益肺汤低、中、高剂量组)、益肺汤联合顺铂(联合组)、顺铂(顺铂组)进行干预,观察移植瘤的生长状况,隔天测量一次瘤块体积,给药21天后,处死小鼠取瘤组织,称重,实时荧光定量PCR检测多药耐药蛋白(MRP)基因的表达。结果:对照组的移植瘤体积最大,增长最快,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组与其他药物组比较,移植瘤体积最小,抑瘤率最高,差异均有统计学意义(P<0.05)。益肺汤低剂量组与中、高剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而后二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。益肺汤低剂量组与顺铂组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。q=1.37,益肺汤与顺铂在抑制肿瘤生长上有协同作用。实时荧光定量PCR检测的结果显示,益肺汤低、中、高剂量组及联合组的MRP基因的表达量均低于对照组,而顺铂组MRP基因表达量却高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组、中剂量组及高剂量组三者相互比较,差异均无统计学意义(P>0.05),三者与益肺汤低剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益肺汤能逆转A549/DDP移植瘤的多药耐药性,其逆转机制可能是通过下调MRP基因的表达来实现的。     

消癌解毒方对H22荷瘤小鼠移植瘤的抗肿瘤作用机制

目的:通过消癌解毒方(XAJD)对H22荷瘤小鼠移植瘤肿瘤组织全基因组芯片的检测以及对相关蛋白的表达影响,探讨其抑制肿瘤的作用机制。方法:ICR小鼠随机分组,接种H22荷瘤小鼠腹水,移植瘤模型成功后,将模型小鼠随机分为空白组,XAJD低、中、高剂量组(10,30,90 g·kg~(-1)·d~(-1)),顺铂组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1))。给药结束,动物处死并取各组动物瘤体组织,无菌生理盐水洗去血渍,称重,计算肿瘤抑制率,取部分新鲜瘤体组织进行全基因组表达谱芯片检测,部分瘤体组织用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测其相关mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,消癌解毒方低、中、高剂量能够显著降低移植瘤瘤重(P0.05),消癌解毒方中剂量组与顺铂组效果优于消癌解毒方低、高剂量组(P0.01),抑瘤率分别达42.8%,58.6%;全基因组芯片检测分析发现,基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinases,MMPs)和组织金属蛋白酶抑制剂(tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMPs)相关蛋白在消癌解毒方不同剂量组中均发生了明显的改变。Real-time PCR,Western blot检测显示,与空白组比较,MMP-9 mRNA及蛋白在消癌解毒方低、中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),MMP~(-1)2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均显著降低(P0.01),TIMP2 mRNA及蛋白在消癌解毒方中、高剂量组及顺铂组中表达均明显升高(P0.05)。结论:消癌解毒方能够抑制H22荷瘤小鼠移植瘤生长,可通过抑制MMPs相关蛋白的表达,降低肿瘤的转移和复发可能是其抗癌机制之一。