miR-483-3p对结直肠癌DLC1基因表达的影响

背景:抑癌基因表达抑制在肿瘤发生、发展过程中起重要作用。一些microRNAs可通过调节抑癌基因的表达影响肿瘤发生。目的:探讨miR-483-3p对结直肠癌肝癌缺失基因1(DLC1)表达的靶向调节作用。方法:纳入2012年10月~2013年4月南京鼓楼医院收治的结直肠癌患者16例,采用蛋白质印迹法检测癌组织及其相应癌旁非癌组织的DLC1表达,qRT-PCR检测miR-483-3p表达。构建含DLC1 3’非翻译区(3’UTR)的双荧光素酶报告基因质粒,在人结肠癌细胞株HCT116中验证miR-483-3p对DLC1表达的调节作用。以miR-483-3p mimic转染HEK293T细胞,采用蛋白质印迹法检测DLC1表达;以miR-483-3p mimic转染HCT116细胞,采用CCK-8实验检测细胞增殖。结果:结直肠癌组织的DLC1表达水平显著低于癌旁非癌组织,miR-483-3p表达水平显著高于癌旁非癌组织(P0.05)。miR-483-3p mimic可靶向结合DLC1的3’UTR而抑制其表达。转染miR-483-3p mimic的HCT116细胞增殖能力显著增强(P0.05)。结论:DLC1是miR-483-3p的靶基因,miR-483-3p可在转录后水平抑制DLC1表达,参与促进结直肠癌发生。     

结直肠癌组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达变化及意义

目的 探讨结直肠癌组织中微小RNA-876-5p(miR-876-5p)、配对框基因6(PAX6) mRNA的表达变化及意义。方法 选取86例结直肠癌患者，术中留取部分癌组织和癌旁组织。用RT-qPCR法检测组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达；用TargetScan数据库预测miR-876-5p与PAX6的关系，用Pearson相关法分析二者的相关性；随访3年，统计患者3年累积生存率，根据结直肠癌组织中miR-876-5p、PAX6 mRNA表达水平将患者分为miR-876-5p高表达组、miR-876-5p低表达组，PAX6 mRNA高表达组、PAX6 mRNA低表达组，比较各组3年累积生存率。结果 结直肠癌组织中miR-876-5p相对表达量低于癌旁组织，PAX6 mRNA相对表达量高于癌旁组织（P均<0.05）。经在线网站https：//www. targetscan. org/预测，miR-876-5p与PAX6的3’-非翻译区691-697存在结合位点。Pearson相关分析显示，结直肠癌组织中miR-876-5p表达与PAX6 mRNA表达呈负相关（r...     

结直肠癌组织中miR-338-3p、SMO的表达变化及意义

目的观察结直肠癌组织中微小RNA(miRNA)-338-3p(miR-338-3p)与Smoothened(SMO)的表达变化,并探讨其意义。方法 30例结直肠癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,抽提其中的总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR检测标本中的miR-338-3p,用半定量RT-PCR检测SMO mRNA,Western blot检测SMO蛋白。结果结直肠癌组织中miR-338-3p的表达量(2-ΔΔCt)为0.153 7±0.126 4,SMO mRNA的相对表达量为0.371±0.116,SMO蛋白的灰度值为3.195±1.623,癌旁组织分别为0.901 5±0.426 3、0.366±0.117、0.733±0.305,两种组织中的miR-338-3p、SMO蛋白表达量相比,P均<0.01;miR-338-3p与SMO蛋白的表达呈负相关(r=-0.877,P<0.01)。结论结直肠癌组织中miR-338-3p表达明显下调,SMO蛋白表达明显上升;miR-338-3p可能通过转录后基因沉默机制使SMO蛋白表达下降,从而抑制结直肠癌的发生发展。     

miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTPBP2基因靶向调控的研究

［摘要］　目的　探讨miR-145-5p在结直肠癌中的表达及对GTP结合蛋白2（GTPBP2）的调控作用。方法　选择2022年1月至12月在新乡医学院附属商丘市第一人民医院行结直肠癌根治性切除术的44例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织。选择人正常结直肠黏膜细胞FHC、结直肠癌细胞HCT116进行基础实验。采用荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测癌组织、癌旁组织及细胞的miR-145-5p和GTPBP2 mRNA的表达水平。采用Western blot法检测细胞GTPBP2蛋白表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-145-5p与GTPBP2基因的靶向关系。分析结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与患者临床病理特征的关联性。结果　与癌旁组织相比,癌组织中miR-145-5p表达水平显著降低（t=8.189,P<0.001）,GTPBP2 mRNA表达水平显著升高（t=11.230,P<0.001）。Pearson相关性分析结果显示,结直肠癌组织miR-145-5p表达水平与GTPBP2 mRNA表达水平呈负相关（r=-0.503,P<0.001）。miR-145-5p表达水平与结直肠癌远处转移、淋巴结转移以及TNM分期存在显著关联（P<0.05）,但与患者性别、年龄、病灶部位、临床T分期、肿瘤直径的关联性不显著（P>0.05）。与FHC细胞相比,HCT116细胞miR-145-5p表达水平显著降低（P<0.05）,GTPBP2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-145-5p可下调HCT116细胞GTPBP2 mRNA和蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验结果提示miR-145-5p和GTPBP2基因之间存在靶向关系。结论　miR-145-5p在结直肠癌中呈低表达,并与远处转移、淋巴结转移和TNM分期存在显著关联,其可能通过靶向调控GTPBP2表达而影响结直肠癌的发生、发展。     

miR-574-3p在结直肠癌中的表达和作用机制研究

目的 检测并分析结直肠癌组织和细胞系中miR-574-3p的表达情况及其对结直肠癌细胞发生、发展的影响.方法 收集武汉市第三医院11对手术切除结直肠癌患者的癌组织和对应癌旁组织,3种结直肠癌细胞系和1种正常结直肠上皮细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测临床样本及结直肠癌细胞系中miR-574-3p的...     

结直肠癌及癌旁组织中miR-338-3p及MACC1的表达变化及意义

目的观察结直肠癌组织中mi R-338-3p与结直肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)的表达变化,并探讨其意义。方法收集昆明医科大学第二附属医院2015年1月-2015年5月外科手术切除并经病理证实的15例结直肠癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测mi R-338-3p的表达,免疫组化检测MACC1的表达,双荧光素酶报告检测mi R-338-3p与MACC1。结果结直肠癌组织及癌旁组织中mi R-338-3p的相对表达量分别为0.022±0.005和0.071±0.002,差异有统计学意义(P0.05);MACC1在结直肠癌组织中的阳性表达率(66.7%)显著高于癌旁组织(20.0%),差异有统计学意义(P0.01);mi R-338-3p与MACC1的表达呈负相关(r=-0.798,P0.01),mi R-338-3p抑制MACC1的表达。结论mi R-338-3p可能通过转录后基因沉默机制抑制MACCI的表达,从而抑制结直肠癌的发生。     

结直肠癌患者微小RNA-335表达及临床意义

目的探讨miR-335在结直肠癌患者血清及组织中的表达及临床意义。方法选取98例结直肠癌患者为研究对象,另选取90例同期健康体检人群为对照组,采用RT-PCR法分别检测组织和血清miR-335表达水平,分析miR-335表达与结直肠癌患者临床病理特征的相关性,并探讨miR-335对结直肠癌的诊断效能。结果结直肠癌组患者血清中miR-335的相对表达量为(0.63±0.18),癌旁正常组织组血清中miR-335的相对表达量为(0.94±0.25),健康对照组血清中miR-335的相对表达量为(1.09±0.34),3组比较差异有统计学意义(P0.05);不同临床分期、分化程度及是否发生淋巴结转移的结直肠癌患者血清和癌组织中miR-335的相对表达量比较差异显著(P0.05);不同性别、年龄、肿瘤直径及肿瘤类型的结直肠癌患者血清和癌组织中miR-335的相对表达量比较无显著差异(P0.05);血清miR-335对结直肠癌的诊断效能受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.837(95%CI:0.602～1.483),诊断灵敏度为93.29%,特异度为80.71%;癌组织miR-335对结直肠癌的诊断效能ROC曲线下面积为0.901(95%CI:0.711～2.169),诊断灵敏度为94.97%,特异度为82.35%。结论 miR-335在结直肠癌患者血清及癌组织中呈低表达,且其表达水平与结直肠癌进展密切相关。     

结直肠癌组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达变化及其临床意义

目的 观察结直肠癌（CRC）组织微小RNA-331-3p(miR-331-3p)、混合谱系白血病转位辅因子10(MLLT10)mRNA表达变化,并探讨其表达与临床病理特征和上皮间质转化的关系。方法 选择CRC患者156例,取术中获取的CRC组织及其配对的癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-331-3p、MLLT10mRNA表达以及上皮间质转化相关基因E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、锌指转录因子Snail mRNA表达。比较CRC组织与癌旁正常组织miR-331-3p及MLLT10、E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达;分析CRC组织miR-331-3p、MLLT10 mRNA表达与临床病理特征的关系,二者表达的关系及其与E-cadherin、N-cadherin、Snail mRNA表达的关系。结果 CRC组织MLLT10、N-cadherin、Snail mRNA相对表达量均高于癌旁正常组织,miR-331-3p、E-cadherin mRNA相对表达量均低于癌旁正常组织（P均<0.0...     

circCLK3通过靶向miR-654-5p促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

背景 最近的研究已经表明了环状RNA(circularRNA,circRNA)在包括结直肠癌在内的多种癌症进展中的重要调节因子的作用.然而, circCLK3的生物学功能及其调控结直肠癌进展的潜在机制尚不清楚.目的探究circCLK3对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的影响和潜在的分子机制.方法收集本院47例结直肠癌组织及癌旁组织, qRT-PCR法检测circCLK3、miR-654-5p的表达;体外培养SW620细胞并分为:si-circCLK3组、pcDNA-circCLK3组、miR-654-5p组、si-circCLK3+anti-miR-654-5p组及相应的对照组(si-NC组、pcDNA组、miR-NC组、sicircCLK3+anti-miR-NC组);采用CCK8、克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告分析circCLK3与miR-654-5p的靶向关系;采用Westernblot检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9蛋白表达.结果circCLK3在结...     

老年结直肠癌组织中miR-182表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨老年结直肠癌组织中微小RNA(miR)-182的表达及其与临床病理参数的关系。方法选择绍兴市人民医院2010年1月至2011年12月70岁以上老年结直肠癌患者120例结直肠癌组织及其相应的癌旁组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)测定结直肠癌组织和癌旁组织中miR-182水平。结果结直肠癌组织中miR-182水平明显高于癌旁组织(P0.05)。结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移和远处转移明显相关(P0.05),TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、有远处转移患者结直肠癌组织中miR-182水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P0.05);结直肠癌组织中miR-182水平与结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、癌胚抗原(CEA)水平无关(P0.05)。结直肠癌组织中miR-182水平诊断结直肠癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.812,95%CI为0.809～0.815,miR-182水平界值为1.623,灵敏度为86.34%,特异度为77.16%。miR-182低表达患者的生存率明显高于高表达者(P=0.009)。结论老年结直肠癌组织中miR-182水平升高,miR-182水平与结直肠癌的临床分期、淋巴结转移、远处转移有关,有望成为结直肠癌诊断和预后预测的潜在指标。     

microRNA-101和环氧合酶-2在胃癌中的表达及其临床意义

背景：microRNAs是一类对靶基因表达具有转录后调控作用的非编码小RNA。microRNA-101（miR-101）在多种恶性肿瘤中呈低表达,而过表达外源性miR-101可发挥肿瘤抑制作用。前期体内、外实验发现外源性miR-101可抑制胃癌细胞增殖和环氧合酶-2（COX-2）表达。目的：检测胃癌组织中的miR-101、COX-2表达并探讨其临床意义。方法：收集手术切除胃癌组织和配对癌旁非癌组织标本30例,以实时荧光定量RT—PCR检测miR-101、COX-2mRNA表达,分析两者间以及两者与胃癌主要临床病理特征的关系。结果：绝大多数胃癌组织中miR-101表达低下,COX-2mRNA则呈过表达。胃癌组织与癌旁非癌组织间miR-101、COX-2mRNA表达量差异显著（P〈0．01）,且两者表达在癌组织和癌旁组织中均呈负相关（癌组织：r=-0．767,P=0．000;癌旁组织：r=-0．718,P=0．000）。TNMⅢ、IV期胃癌和伴淋巴结转移的胃癌中,miR-101表达分别显著低于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）,COX-2mRNA表达分别显著高于TNMI、Ⅱ期病例和无淋巴结转移病例（P〈0．05）。结论：miR-101与COX-2之间的负相关性可能有助于胃癌的临床诊断;miR-101表达低下伴COX-2过表达与胃癌临床进展和转移有关,对预后判断有一定参考价值。     

PIWI蛋白与结肠癌预后的相关性

背景：PIWI蛋白为人类Argonaute蛋白家族的重要成员,与多种恶性肿瘤的发生、发展和预后相关。本课题组前期研究证实PIWIL1、PIWIL3、PIWIL4与结肠癌的发生、发展显著相关。目的：在前期研究的基础上进一步探讨PIWI蛋白与结肠癌预后的相关性。方法：选择183例携带随访信息的结肠癌病例,按癌组织与癌旁组织配对制成组织芯片,以免疫组化方法检测PIWIL1、PIWIL2、PIWIL3、PIWIL4表达。采用Spearman秩相关系数分析PIWI蛋白表达与结肠癌临床病理指标间的相关性;Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验以及Cox比例风险模型分析PIWI蛋白表达与结肠癌预后间的相关性。结果：PIWIL1-4在结肠癌组织胞质中的表达均显著高于癌旁组织（P=0.000）,且与肿瘤T分期呈正相关（P〈0.01）。生存分析显示癌组织PIWIL1低表达者总生存期显著长于高表达者（P=0.036）,但PIWIL1并非结肠癌预后的独立相关因素。结论：PIWI蛋白参与了结肠癌的发生、发展过程,PIWIL1有望作为结肠癌预后的重要分子标记物。     

房颤患者小分子RNA组学研究结果与分析

目的 探讨非瓣膜病心房颤动（房颤）患者血清小分子RNA（miRNA）全基因组表达差异及其可能的调控作用和早期预警价值.方法 15例房颤患者,分为阵发性、持续性和永久性房颤组,每组5例,对照组5例健康人.射频消融术前和术中分别取外周血和冠状窦血,提取血浆总RNA,使用microRNA芯片（microRNA v 18.0）进行全基因组miRNA表达谱微阵列分析,Volcano Plot法获得差异表达niRNAs,并用tMEV软件进行聚类分析,以及通过mirbase、miranda、targetscan数据库进行靶基因分析,并进行RT-PCR的差异表达验证.结果 房颤组冠状窦血与外周血比较有14个miRNAs表达差异显著,其中6个表达上调：即miR-1266、miR-4279、miR-4787-5p、miR-4666a-3p、kshv-miR-K12-6-3p和miR-3150a-5p,8个表达下调：即miR-892a、miR-3149 、miR-3171、miR-3664-5p、miR-3591-3p、miR-4423-5p、miR-4473和miR-574-3p.其中,miR-1266在阵发性、持续性和永久性房颤组均明显升高,而miR-3171则显著降低.房颤组与对照组外周血及冠状窦血比较miRNAs表达也有明显差异.结论 房颤患者冠状窦血与外周血比较miRNAs表达均有显著差异,而冠状窦血miRNAs更能反映心脏的代谢与调控状况;血清miR-3171、miR-892a、miR-3149在房颤发生发展早期出现且持续表达差异,有可能成为早期预警诊断的标志物;miR-1266、miR-4279、miR-4666a-3p有可能成为未来治疗房颤的干预靶点。     

The role of microRNA deregulation in the pathogenesis of adrenocortical carcinoma

Adrenocortical carcinoma (ACC) is an aggressive tumor showing frequent metastatic spread and poor survival. Although recent genome-wide studies of ACC have contributed to our understanding of the disease, major challenges remain for both diagnostic and prognostic assessments. The aim of this study was to identify specific microRNAs (miRNAs) associated with malignancy and survival of ACC patients. miRNA expression profiles were determined in a series of ACC, adenoma, and normal cortices using microarray. A subset of miRNAs showed distinct expression patterns in the ACC compared with adrenal cortices and adenomas. Among others, miR-483-3p, miR-483-5p, miR-210, and miR-21 were found overexpressed, while miR-195, miR-497, and miR-1974 were underexpressed in ACC. Inhibition of miR-483-3p or miR-483-5p and overexpression of miR-195 or miR-497 reduced cell proliferation in human NCI-H295R ACC cells. In addition, downregulation of miR-483-3p, but not miR-483-5p, and increased expression of miR-195 or miR-497 led to significant induction of cell death. Protein expression of p53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA), a potential target of miR-483-3p, was significantly decreased in ACC, and inversely correlated with miR-483-3p expression. In addition, high expression of miR-503, miR-1202, and miR-1275 were found significantly associated with shorter overall survival among patients with ACC (P values: 0.006, 0.005, and 0.042 respectively). In summary, we identified additional miRNAs associated with ACC, elucidated the functional role of four miRNAs in the pathogenesis of ACC cells, demonstrated the potential involvement of the pro-apoptotic factor PUMA (a miR-483-3p target) in adrenocortical tumors, and found novel miRNAs associated with survival in ACC.     

Serum miR-483-5p as a potential biomarker to detect hepatocellular carcinoma

Background and goals

There are no highly sensitive and specific minimally invasive biomarkers for hepatocellular carcinoma (HCC) to date. The objective of this study was to identify serum microRNAs (miRNAs) as potential HCC biomarkers.

Methods

Using miRCURY LNA? microRNA arrays, the levels of circulating miRNAs in the serum of patients with HCC were compared and controls were matched. Then 253 subjects (112 HCC, 85 chronic hepatitis B [CHB], and 56 healthy controls) were recruited and 12 serum miRNAs were compared by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). It was followed by the comparison of serum miRNA concentrations before and after the surgical resection in HCC group.

Results

Median levels of miR-483-5p and miR-500a were higher in HCC patients than in patients with CHB and in healthy controls (p < 0.0001), but there were no differences between CHB patients and healthy controls (p > 0.05) and miR-483-5p levels were significantly reduced in serum samples obtained 30 days after surgical resection (p < 0.0001). The area under receiver operating characteristic curves of miR-483-5p and miR-500a was 74% (cutoff [Ct] value = 2.824, sensitivity = 74%, and specificity = 66%) and 66% (Ct value = 1.830, sensitivity = 74%, and specificity = 51%) for the prediction of HCC, respectively. In detecting HCC, combining α-fetoprotein (AFP) and serum miR-483-5p (sensitivity = 81% and specificity = 83%) was better than AFP alone (sensitivity = 78%, specificity = 70%).

Conclusion

Our observations suggest that serum miR-483-5p and miR-500a might serve as novel, noninvasive biomarkers for HCC. Serum miR-483-5p might complement AFP in detecting HCC.     

Bves/popdc1、popdc3在结直肠癌中的表达和意义

背景:结直肠癌为常见消化道恶性肿瘤,较易发生肝、肺等远处转移,预测其远处转移风险对于指导综合治疗和判断预后具有重要意义。细胞黏附分子与肿瘤侵袭、转移关系密切。目的:检测结直肠癌组织中的细胞黏附分子Bves/popdc1、popdc3表达,探讨两者在结直肠癌侵袭、转移中的可能作用。方法:选择15例正常结直肠组织和70例结直肠癌手术标本,以免疫组化方法检测Bves/popdc1、popdc3表达,分析结直肠癌组织中的Bves/popdc1、popdc3表达与肿瘤临床病理特征的关系以及两种蛋白表达之间的相关性。结果:Bves/popdc1、popdc3在结直肠癌组织中以低表达为主,高表达率显著低于正常结直肠组织(Bves/popdc1:25.7%对86.7%,P=0.000;popdc3:20.0%对73.3%,P=0.000)。结直肠癌组织中的Bves/popdc1、popdc3低表达与肿瘤分化程度呈负相关(P<0.05),与肿瘤浸润、淋巴结转移、远处转移和TNM分期呈正相关(P<0.05)。Bves/popdc1与popdc3在结直肠癌组织中的表达呈显著正相关(P<0.01)。结论:Bves/popdc1、popdc3在结直肠癌组织中表达下调,并与肿瘤临床分期和转移相关,提示两者在结直肠癌的侵袭、转移中起一定作用。     

结肠癌中雌激素受体和衔接蛋白p66Shc的表达和意义

背景:雌激素和雌激素受体(ER)在结肠癌的发生、发展中起重要作用,然而ER在其中的具体作用机制尚不完全清楚。在甾类激素敏感性肿瘤细胞中,甾类激素可显著上调衔接蛋白p66Shc表达并刺激细胞增殖。目的:探讨ER和p66Shc在结肠癌中的表达特点及其临床意义。方法:以免疫组化方法检测65例石蜡包埋结肠癌组织及其癌旁非癌组织中的ER和p66Shc蛋白表达,分析p66Shc蛋白表达与结肠癌临床病理特征的相关性。结果:ER和p66Shc蛋白表达分别定位于细胞核和细胞质,结肠癌组织中的ER和p66Shc蛋白表达阳性率显著高于癌旁非癌组织(ER:47.7%对0%,P<0.01;p66Shc:49.2%对0%,P<0.01),且两者呈正相关(r=0.43,P<0.05)。p66Shc蛋白表达与结肠癌患者的性别、年龄以及原发肿瘤部位、肿瘤大小、大体类型、浸润深度、淋巴结转移、AJCC分期均无相关性,而与肿瘤组织学分级相关(高分化:22.2%,中分化:47.7%,低分化:75.0%,P=0.046)。结论:结肠癌可能是一种雌激素敏感性肿瘤。雌激素及其受体可能与p66Shc共同参与了结肠癌的发生、发展。