抑郁症大鼠海马CA1区及齿状回毛细血管的体视学研究

目的：研究慢性不可预见性刺激（chronically unpredicted stress,CUS）所致抑郁症模型大鼠海马CA1区和齿状回（den－tate gyrus,DG）体积及毛细血管的改变。方法：选取Sprague Dawley（SD）大鼠,经筛选后随机分为对照组10只和模型组10只。模型组采取慢性不可预见刺激建立抑郁症模型,共给予应激35 d,对照组不给予应激。利用糖水偏好实验和开场实验检测模型是否建立成功。建模成功后,分别从模型组和对照组中各随机选取5只SD大鼠,运用体视学和免疫组化染色相结合的方法对大鼠海马CA1区和DG毛细血管进行定量研究,剩余5只进行相关分子生物学研究。结果：模型组大鼠和对照组大鼠在体质量[（314.81±31.52） g,（349.18±28.23） g,t=2.569,P=0.019]、糖水偏好实验[（82.37±8.44）%,（89.33±3.97）%,t=2.359,P=0.03]、开场实验结果[（48.30±39.49）分,（87.70±38.32）分,u=-1.988,P=0.047]具有统计学差异,模型组较对照组大鼠海马总体积[（88.84±7.51） mm3,（99.89±12.55） mm3,t=2.388,P=0.028]、海马CA1区[（27.78±1.84） mm3,（32.38±3.69） mm3,t=3.522,P=0.004]和DG[（21.02±2.61） mm3,（24.20±3.33） mm3,t=2.377,P=0.029]体积明显减少,模型组较对照组大鼠海马CA1区毛细血管总长度[（8.454±1.010） m,（11.012±1.642） m,t=2.967,P=0.018]、总体积[（0.104±0.019） mm3,（0.151±0.021） mm3,t=3.720,P=0.006]、总表面积[（1.025±0.113） cm2,（1.589±0.313） cm2,t=3.794,P=0.013]、平均直径[（3.884±0.458） μm,（4.580±0.419） μm,t=2.509,P=0.036]下降以及DG毛细血管的总体积[（0.078±0.021） mm3,（0.117±0.024） mm3,t=2.716,P=0.026]、总表面积[（0.838±0.184） cm2,（1.133±0.074） cm2,t=3.32,P=0.011]、平均直径[（3.611±0.493） μm,（4.630±0.635） μm,t=2.834,P=0.022]下降,结果具有统计学意义。结论：抑郁症模型大鼠大脑海马萎缩,CA1区、DG毛细血管改变,海马结构与毛细血管的改变可能参与了抑郁症的发病机制。     

氟西汀对抑郁模型大鼠海马CA1区少突胶质细胞作用的研究

目的：探讨抗抑郁药物氟西汀对抑郁症慢性不可预知性应激（chronic unpredictable stress,CUS）模型大鼠海马CA1区内CNPase+少突胶质细胞的作用。方法：选用青年雄性Sprague Dawley（SD）大鼠（4~6周龄）,随机分为对照组（12只）和模型组（38只）,给予模型组大鼠连续4周的CUS干预。随后依据大鼠的糖水偏好百分比筛选出模大鼠,随机分为CUS组（12只）和CUS+fluoxetine组（FLX组）（12只）,第5~7周CUS组和FLX组继续给予慢性应激,同时FLX组大鼠给予5 mg/（kg·d）氟西汀腹腔注射,对照组和CUS组给予等量生理盐水腹腔注射。干预结束后利用免疫组织化学方法结合现代体视学对大鼠海马CA1区CNPase+少突胶质细胞的数量进行精确的三维定量研究。结果：实验发现,CUS模型组大鼠的体质量（251.4±15.9） g较对照组（323.3±25.9） g明显下降（P=0.00）,但与FLX组大鼠的体质量（257.9±22.7） g相比无差异（P=0.473）。CUS组大鼠的糖水偏好百分比（62.0±14.2）%明显低于对照组（89.2±4.8）%（P=0.000）及FLX组（78.2±12.8）%（P=0.020）。CUS组大鼠海马CA1区CNPase+细胞数量（18 650.7±1 812.0）明显低于对照组（33 606.9±4 471.4）（P=0.007）及FLX组（29 080.7±2 877.5）（P=0.042）。结论：大鼠海马CA1区内少突胶质细胞在抑郁症发病过程中可能起着重要作用,氟西汀治疗可防止抑郁症模型大鼠海马CA1区的CNPase+少突胶质细胞的丢失。本研究结果为探索新的抗抑郁策略提供了形态学基础。     

抗Lingo-1抗体对抑郁症伴认知障碍大鼠海马DG区少突胶质细胞作用的研究

目的：探讨抗Lingo-1抗体对抑郁症伴认知障碍大鼠海马齿状回（dentate gyrus,DG）区少突胶质细胞的作用。方法：4~6周清洁级雄性SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为对照组（10只）和建模组（60只）,建立慢性不可预知性应激（chronic unpredictable stress,CUS）抑郁症模型,为期4周。利用糖水偏好实验筛选出成模大鼠（23只）,随机分为CUS组（12只）及Anti-Lingo-1组（11只）。运用Morris水迷宫评估对照组,CUS组和抗Lingo-1组的行为学水平,采用体视学方法计算各组大鼠海马DG区的少突胶质细胞数量。结果：应激4周和抗Lingo-1抗体治疗3周后,Morris水迷宫实验中,与对照组（3.4±0.2）相比,CUS组（2.4±0.2）大鼠Morris水迷宫第6天穿越平台次数明显降低（F=20.049, P=0.004）;与CUS组比较,抗Lingo-1组（4.3±0.3）大鼠穿台次数明显增加（F=20.049, P=0.000）。体视学研究结果表明,与对照组[（4.9±1.1）×104]比较,CUS组[（3.1±1.3）×104]大鼠海马DG区少突胶质细胞数量明显减少（F=8.747, P=0.026）;与CUS组比较,Anti-Lingo-1组[（6.1±1.1）×104]大鼠海马DG区少突胶质细胞数量明显增加（F=8.747, P=0.001）。结论：抗Lingo-1抗体可以改善抑郁症大鼠的认知障碍,抗Lingo-1抗体对抑郁症伴认知障碍大鼠海马DG区少突胶质细胞的作用可能是抗Lingo-1抗体改善抑郁症大鼠认知障碍的重要形态学基础之一。     

右美托咪定对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质Wnt/β-catenin蛋白表达的影响

目的 观察右美托咪定对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质Wnt/β-catenin 蛋白表达的影响。方法 将48 只雄性SD 大鼠按随机区组的原则分为三组：对照组、模型组和右美托咪定组,每组各16 只。采用大脑中动脉阻塞（Middle cerebral artery occlusion,MCAO）法制造大鼠脑缺血再灌注损伤模型。右美托咪定组于缺血1 h 即刻经尾静脉注射1 μg/kg 右美托咪定作为负荷剂量,持续10 min,随后以0.5 μg/（kg·h）的速率静脉输注至脑缺血2 h。对照组和模型组大鼠按相同方法给予生理盐水。再灌注24 h 时进行神经功能评分后处死大鼠取出脑组织,各组取8 只大鼠脑组织行TTC 染色法测定脑梗死体积,另8 只大鼠采用Western blot 法检测大脑皮质β-catenin 蛋白表达量。结果 与对照组相比,模型组大鼠神经行为学评分明显增加[（3.00±0.82） vs （0±0）,P＜0.05]、脑梗死体积明显增加[（64.23±6.72）% vs （0±0）%,P＜0.05],β-catenin 蛋白表达量明显减少（0.46±0.14 vs 1.12±0.23,P＜0.05）。与模型组相比,右美托咪定组大鼠神经行为学评分（1.69±0.71 vs 3.00±0.82,P＜0.05）、脑梗死体积明显减少[（45.13±8.29）% vs （64.23±6.72）%,P＜0.05],β-catenin 蛋白表达量明显增加[（0.82±0.23） vs （0.46±0.14）,P＜0.05]。结论 右美托咪定能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能与增加大脑皮质中β-catenin 蛋白表达量有关。     

诱发癫痫持续状态后基质金属蛋白酶-2在小鼠海马与皮层中的表达

目的：观察氯化锂-匹罗卡品所致癫痫持续状态（status epilepticus,SE）小鼠皮层和海马基质金属蛋白酶-2（matrix met－alloproteinases-2,MMP-2）的表达变化,探讨 MMP-2在癫痫发病机制中的作用。方法：选用成年雄性C57/BL6小鼠 48只,并随机分成实验组和对照组。实验组小鼠腹腔注射氯化锂-皮罗卡品制备SE模型,在确定模型成功后8 h采取动物标本进行检测。使用 RT-PCR测定 MMP-2 mRNA含量变化,Western blot检测 MMP-2蛋白表达变化,免疫组化观察 MMP-2分别在海马与皮层的分布规律与特点。结果：（1）海马组织中,对照组与实验组MMP-2 mRNA的表达分别为 0.155 5±0.018 1和 0.743 1±0.014 4,皮层组织中的表达分别为0.204 9±0.018 5和0.871 6±0.037 0,实验组MMP-2 mRNA的表达均比对照组高,差异有统计学意义（t=-45.60,P=0.000;t=-71.83,P=0.000）。（2）MMP-2蛋白水平的表达,在海马组织中分别为 0.084 5±0.009 6和 0.728 4±0.245 1,在皮层组织中对照组与实验组分别为 0.155 6±0.003 9和0.912 5±0.027 7,实验组MMP-2蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义（t=-76.52,P=0.000;t=-6.99,P=0.000）。（3）免疫组化结果显示,实验组MMP-2在皮层广泛表达,在海马的表达增加主要以 CA1、齿状回、CA3区为主。结论：SE后小鼠海马及皮层内MMP-2在mRNA和蛋白水平的表达均明显升高,表达增加的区域以海马CA1、齿状回及CA3区为主,提示 MMP-2与癫痫的发生、发展可能有着密切的关系。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究南葶苈子水提液对心衰大鼠心室重构的影响

目的：观察南葶苈子水提液对压力后负荷性 心衰大鼠心室重构的影响并探索PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中的作用。方法：雄性SD大鼠15只,随机分为正常组、模型组、南葶苈子组。4周后处死大鼠,测定各组大鼠心室肥厚指数;HE染色法和电镜观察心室组织病理变化;Western blot检测各组左室心肌组织Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、P-Akt、Akt、P-mTOR、mTOR蛋白表达。结果：南葶苈子组心室肥厚指数为0.0033±0.0002,较模型组0.0037±0.0001降低（P＜0.05）;HE染色和电镜显示南葶苈子组心肌纤维排列不规则和心肌细胞肥厚程度较模型组减轻;Western blot证实,南葶苈子组Bcl-2/Bax蛋白表达灰度值比值0.75±0.20,较模型组0.54±0.18上调（P＜0.05）;Caspase-3/GAPDH蛋白表达灰度值比值1.31±0.22,较模型组1.62±0.26下调（P＜0.05）;而P-Akt/Akt和P-mTOR/mTOR蛋白表达灰度值比值分别为1.50±0.18、1.36±0.32,较模型组1.18±0.21、1.16±0.12上调（P＜0.05）。结论：南葶苈子水提液具有改善压力后负荷性心衰大鼠心室重构的作用,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞凋亡有关。     

姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响,探讨姜黄素神经保护作用机制.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组、姜黄素高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,并以同窝阴性小鼠作为正常对照组.连续灌胃6个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法进行检测.结果 免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较正常组明显增加(P＜0.01),与模型组相比,各干预组IRS-1阳性细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01),p-IRS-1结果与IRS-1结果相反.Western blot检测海马IRS-1和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组化检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组化和Westernblot结果一致.结论 姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并调节IRS-1 mRNA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗阿尔茨海默病作用.     

PI3K/AKT/mTOR途径在慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌萎缩中的作用

目的研究PI3K/AKT/mTOR信号通路在慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法采用单纯熏香烟法复制慢阻肺大鼠动物模型。采用Western blot技术检测慢阻肺大鼠趾长伸肌中PI3K/AKT/mTOR信号通路中PI3K、总的及磷酸化的mTOR（t-mTOR,p-mTOR）、总的及磷酸化的GSK-3β（t-GSK-3β,p-GSK-3β）、总的及磷酸化的4E-BP1（t-4E-BP1,p-4E-BP1）、总的及磷酸化的p70S6K1（t-p70S6K1,p-p70S6K1）蛋白表达变化。结果 Western blot分析结果显示,大鼠趾长伸肌组织中PI3K的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）;t-mTOR、p-mTOR、t-GSK-3β和p-GSK-3β的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05,其中p-GSK-3β两组对照P〈0.01）;t-4E-BP1和t-p70S6K1的蛋白表达在两组间差异不显著（P〉0.05）,p-4E-BP1和p-p70S6K1的蛋白表达慢阻肺组显著高于对照组（P〈0.05）。结论慢阻肺大鼠趾长伸肌组织内PI3K/AKT/mTOR信号通路被激活,可能是骨骼肌萎缩的代偿机制之一。     

TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞

目的：研究转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）激活小鼠肝星状细胞（mouse hepatic stellate cells,mHSC）的具体机制。方法：实验选用mHSC-T25细胞株为实验对象,随机分为激活组（mHSC-T25+10 ng/mL TGF-β1）、抑制组（mHSC-T25+1 μmol/L TGF-β-R1抑制剂）和对照组（mHSC-T25）。qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、TGF-β1、转化生长因子β受体1（transforming growth factorβreceptor1,TGF-β-R1）、Jagged1、血管内皮生长因子（vas－cular endothelial growth factor,VEGF）、肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）等的mRNA表达;细胞免疫荧光法检测α-SMA、Jagged1等蛋白的表达;Western blot检测TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3等蛋白的表达。结果：①TGF-β1刺激组中α-SMA、TGF-β1、TGF-β-R1、Jagged1、VEGF、HGF等mRNA表达量均较对照组明显增加而抑制组均明显下降。α-SMA：激活组（315.1±6.2）%,抑制组（34.3±4.5）% （F=3291.956,P=0.000）;TGF-β1：激活组（524.8±14.3）%,抑制组 （29.0±10.7）%（F=469.534,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组（235.5±15.2）%,抑制组（17.0±2.8）%（F=392.239,P=0.000）;Jagged1：激活组（548.7±16.6）%,抑制组（17.4±4.7）%（F=364.166,P=0.000）;VEGF：激活组（331.9±19.8）%,抑制组（19.5±3.7）%（F=278.407,P=0.000）;HGF：激活组（376.00±6.51）%,抑制组（16.2±2.7）%（F=640.340,P=0.000）。②激活组高表达α-SMA、Jagged1等蛋白,而对照组、抑制组表达明显较少。α-SMA：激活组0.880±0.016,对照组0.481±0.007,抑制组0.207±0.014 （F=2098.556,P=0.000）;Jagged1：激活组0.796±0.015,对照组0.474±0.021,抑制组0.167±0.005（F=1242.556,P=0.000）。③TGF-β1激活组中TGF-β1、α-SMA、TGF-β-R1、Jagged1、Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达量均较对照组明显上调而抑制组均明显下调。TGF-β1：激活组1.180±0.138,对照组0.654±0.061,抑制组0.359±0.012（F=67.706,P=0.000）;α-SMA：激活组1.076±0.063,对照组0.689±0.022,抑制组0.374±0.011（F=239.186,P=0.000）;TGF-β-R1：激活组1.192±0.142,对照组0.710±0.380,抑制组0.378±0.069 （F=57.235,P=0.000）;Jagged1：激活组1.582±0.247,对照组0.817±0.116,抑制组0.364±0.059（F=43.649,P=0.000）;Smad2/3：激活组2.057±0.114,对照组1.203±0.105,抑制组0.664±0.063（F=158.856,P=0.000）;p-Smad2/3：激活组2.088±0.120,对照组1.168±0.107,抑制组0.573±0.120 （F=136.369,P=0.000）。上述实验结果提示,激活组、抑制组与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：TGF-β1通过Jagged1/Notch激活小鼠肝星状细胞并调控其相关生物学活性。     

辛伐他汀对2型糖尿病认知功能障碍的保护作用及其机制研究

背景　2型糖尿病（T2DM）是常见的代谢紊乱性内分泌疾病,以高血糖为特征,长期高血糖状态可引起认知功能损害,表现为记忆和学习障碍、定向障碍、执行力障碍等。与T2DM常见并发症相比,关于中枢神经系统并发症的研究较少。目的　观察辛伐他汀对T2DM大鼠学习记忆能力的影响,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）/p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）信号通路在辛伐他汀改善认知功能中的作用。方法　于2016年9月采用随机数字表法将120只健康雄性SD大鼠分为对照组（40只）、糖尿病组（40只）和辛伐他汀组（40只）,糖尿病组和辛伐他汀组采用腹腔注射链脲佐菌素分别成功制备T2DM大鼠模型38、37只;辛伐他汀组大鼠采用辛伐他汀灌胃,对照组和糖尿病组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠溶液。饲养至32周行Morris水迷宫实验评估大鼠的记忆能力;显微镜下观察各组大鼠海马组织结构的改变,行Western blotting对mTOR、p70S6K、tau、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平进行分析。结果　糖尿病组和辛伐他汀组大鼠空腹血糖均高于对照组,体质量均低于对照组（P<0.01）。糖尿病组和辛伐他汀组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均长于对照组（P<0.05）;辛伐他汀组第2、3、4、5天的逃避潜伏期均短于糖尿病组（P<0.05）。显微镜观察显示,糖尿病组海马神经元数量减少,且排列紊乱,细胞膜皱褶,胞核缺失,细胞器减少;辛伐他汀组海马神经元细胞结构大致正常,数量略减少。糖尿病组和辛伐他汀组的p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K、p-tau/t-tau均高于对照组（P<0.01）;辛伐他汀组的p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K、p-tau/t-tau均低于糖尿病组（P<0.01）。糖尿病组和辛伐他汀组的MDA/β-actin、GSH/β-actin均高于对照组（P<0.01）;辛伐他汀组的MDA/β-actin、GSH/β-actin均低于糖尿病组（P<0.01）。结论　辛伐他汀能够改善T2DM大鼠认知功能,可能与mTOR/p70S6K信号通路的抑制和氧化应激产物生成减少有关。     

EGCG对 APP/PS1 双转基因小鼠神经突触损伤的保护作用

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epi-gallocatechin-3-gallate,EGCG）对APP/PS1 双转基因小鼠中神经突触损伤的保护作用及其可能机制。方法：实验采用APP/PS1 双转基因小鼠,随机分为模型组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）、EGCG组[20 mg/（kg?d）,EGCG灌胃],每组 10 只,另以同窝同性别阴性小鼠10只设立正常组（0.1 mL/10 g,生理盐水灌胃）,共 3组。Morris 水迷宫实验测试各组小鼠逃避潜伏期和跨越平台变化,电镜观察各组小鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测小鼠海马PSD95、GAP43 表达,RT-PCR检测小鼠海马PSD95 mRNA、GAP43 mRNA含量。结果：模型组逃避潜伏期明显延长,海马神经元损伤严重,PSD95表达下降、GAP43表达增高。免疫组化结果表示,EGCG组PSD95平均光密度高于模型组[（0.11±0.03） vs. （0.05±0.02）,P=0.001],EGCG组GAP43平均光密度低于模型组[（0.10±0.03） vs. （0.16±0.04）,P=0.002]。RT-PCR检测结果再次验证,EGCG组PSD95 mRNA表达高于模型组[（0.82±0.11） vs. （0.50±0.06） ,P=0.000],EGCG组GAP43 mRNA表达低于模型组[（1.12±0.11） vs. （1.56±0.16）,P=0.000]。结论：EGCG对 APP/PS1 转基因小鼠的空间学习记忆和突触损伤具有明显的改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构,提高PSD95表达、下调GAP43 表达有关。     

2种超顺磁性Fe3O4纳米粒子的制备及其对大鼠肺部的急性毒性效应

目的：分别制备壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性Fe3O4纳米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）,并探讨其对大鼠肺部的急性毒性效应。方法：采用化学共沉淀法制备壳聚糖和油酸钠修饰的SPIONs并对其进行表征。将54只SD大鼠随机分为生理盐水对照组（n=18）、壳聚糖SPIONs组（n=18）和油酸钠SPIONs组（n=18）。口腔内气管插管给药,对大鼠的一般情况进行观察,分别于给药后24、72 h和第14天随机处死每组中6只大鼠,腹腔静脉取血检测主要血生化指标,取支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）,计数细胞总数和中性粒细胞的数量,HE染色观察肺部的病理改变。结果：（1）制备的SPIONs均为30 nm左右的类球形结晶。（2）大鼠一般情况好,未发生死亡。（3）２实验组血清中的主要血生化指标仅有24 h总蛋白（total protein,TP）含量和14 d碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量２项指标与正常对照组有差异[TP（g/L）24 h组：壳聚糖SPIONs组（n=6）：62.40±3.60,油酸钠SPIONs组（n=6）：69.95±5.16,正常对照组（n=6）：63.22±2.55,F=6.344,P=0.010;ALP（u/L）14 d组：壳聚糖SPIONs组（n=6）：78.83±7.92,油酸钠SPIONs组（n=6）：106.83±26.95,正常对照组（n=6）：99.85±9.63,F=4.336,P=0.033）。（4）实验组BALF中的细胞总数（×104个）在24 h和72 h均高于正常对照组（壳聚糖SPIONs 24 h组（n=6）：780.00±130.58,油酸钠SPIONs 24 h组（n=6）：1 000.00±166.85,正常对照24 h组（n=6）：498.33±114.75,F=19.605,P=0.000;壳聚糖SPIONs 72 h组（n=6）：809.17±197.49,油酸钠SPIONs 72 h组（n=6）：920.00±125.54,正常对照72 h组（n=6）：580.00±123.29,F=7.735,P=0.005）,且油酸钠SPIONs组明显高于壳聚糖SPIONs组,在14 d时均下降（壳聚糖SPIONs 14 d组（n=6）：628.33±133.29,油酸钠SPIONs 14 d组（n=6）：654.17±99.27,正常对照14 d组（n=6）：570.83±94.15,F=0.898,P=0.428）。（5）实验组BALF中中性粒细胞的数量（×104个）在24 h和72 h均高于正常对照组（壳聚糖SPIONs 24 h组（n=6）：45.00±14.12,油酸钠SPIONs 24 h组（n=6）：90.00±24.50,正常对照24 h组（n=6）：1.02±0.33,F=44.565,P=0.000;壳聚糖SPIONs 72 h组（n=6）：9.15±8.82,油酸钠SPIONs 72 h组（n=6）：19.17±5.38,正常对照72 h组（n=6）：1.09±0.57,F=13.791,P=0.000）,且油酸钠SPIONs组明显高于壳聚糖SPIONs组,在14 d时下降至接近正常。（6）实验组的肺部HE染色可以明显看到肺泡断裂,肺泡壁增厚,炎症细胞浸润,油酸钠SPIONs组炎症表现更严重。壳聚糖SPIONs组肺损伤有自我修复的趋势,而油酸钠SPIONs组减轻不明显。结论：壳聚糖SPIONs与油酸钠SPIONs相比,对肺部毒性作用小,并且随着时间的延长,毒性效应逐渐减轻。     

慢性睡眠不足诱导小鼠大脑和肝脏氧化应激和炎症反应

目的：探讨慢性睡眠不足对小鼠肝脑功能的影响及作用机制。方法：20只4 周龄野生雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组（n=10）和睡眠剥夺组（n=10）,睡眠剥夺组小鼠睡眠剥夺45 d后,观察2组小鼠体质量变化;Morris水迷宫实验分析2组小鼠空间学习记忆能力的变化;测量各组小鼠肝重指数、脾重指数和肾重指数;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的含量;酶标比色法检测海马和肝脏超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量;Western blot检测海马和肝脏TNF-α、P53、BCL-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,BAX）、B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白相对表达水平;免疫组化SP法检测海马Ki-67的表达水平。结果：睡眠剥夺组小鼠体质量较正常对照组增加缓慢,空间学习记忆能力减退,肝重指数和肾重指数均增高（t=4.274,P=0.000;t=3.629,P=0.002）,脾重指数明显降低（t=2.380,P=0.029）。与正常对照组相比,睡眠剥夺组小鼠血清TNF-α[（24.440±4.468） vs. （53.719±4.128）]、IL-6[（14.265±3.718） vs. （31.766±4.535）]和IL-1β[（20.383±3.230） vs. （41.916±4.819）]明显增高（t=10.762,P=0.000;t=6.673,P=0.000;t=8.229,P=0.000）,睡眠剥夺组海马和肝脏SOD活力和GSH含量明显降低（t=4.171,P=0.003;t=8.851,P=0.000;t=7.138,P=0.000;t=5.390,P=0.000）。Western blot结果显示,睡眠剥夺组海马和肝脏TNF-α[（0.702±0.088）,（0.818±0.074）]、P53[（0.626±0.103）,（1.225±0.116）]和BAX[（0.978±0.078）,（1.120±0.135）]蛋白相对表达量明显上调（t=13.688,P=0.000;t=11.682,P=0.000;t=6.991,P=0.000;t=10.023,P=0.000;t=13.721,P=0.000;t=10.422,P=0.000）,BCL-2蛋白相对表达量[（0.365±0.059）,（0.380±0.040）]明显下降（t=15.165,P=0.000;t=12.143,P=0.000）,海马齿状回和门区Ki-67蛋白的表达水平明显下降（t=4.171,P=0.003）。结论：慢性睡眠不足可诱导大脑和肝脏的氧化应激,增加血清中炎症因子的浓度,并通过细胞凋亡调节DNA损伤。     

槲皮素通过调节SIRT1/NF-?资B通路抑制压力超负荷大鼠左心室肥厚

目的：通过动物实验探讨槲皮素对压力超负荷大鼠左心室肥厚的保护作用及其可能机制。方法：通过腹主动脉缩窄手术（abdominal aorta stenosis,AAC）构造大鼠左心室肥厚模型。将造模的40只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、AAC组、槲皮素组（Quercetin组）、EX527组,每组10只。Sham组、AAC组每日给予生理盐水灌胃和腹腔注射治疗;Quercetin组给予槲皮素50 mg/（kg·d）进行灌胃和生理盐水腹腔注射治疗;EX527组给予SIRT1特异性抑制剂EX527 5 mg/（kg·d）腹腔注射和槲皮素50 mg/（kg·d）灌胃治疗。4周后,计算心脏质量参数;超声心动图检测心脏功能、左心室后壁厚度;Masson染色检测心肌纤维化程度;免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测I型胶原（collagen type Ⅰ,ColⅠ）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ,ColⅢ）、沉默信息调节因子1（silent information regulator 1,SIRT1）、核因子-?资B（nuclear factor-?资B,NF-?资B）的蛋白表达。结果：槲皮素可增强SIRT1的蛋白表达（Sham组：1.000±0.000,AAC组：0.364±0.071,Quercetin组：1.138±0.070,EX527组：0.293±0.092,F=240.539,P=0.000）,降低心脏质量（Sham组：1.139±0.053,AAC组：1.300±0.056,Quercetin组：0.998±0.085,EX527组：0.924±0.054,F=47.296,P=0.000）、左室后壁厚度（Sham组：1.587±0.136,AAC组：2.657±0.355,Quercetin组：1.800±0.200,EX527组：2.700±0.306,F=37.304,P=0.001）和心肌纤维化程度（Sham组：8.515±1.343,AAC组;23.832±1.095,Quercetin组：13.260±0.674,EX527组：24.162±1.312,F=278.741,P=0.000）,降低ColⅠ（Sham组：1.000±0.000,AAC组：3.132±0.372,Quercetin组：1.556±0.164,EX527组：2.819±0.368,F=82.083,P=0.000）、ColⅢ（Sham组：1.000±0.000,AAC组;2.395±0.437,Quercetin组：1.583±0.287,EX527组：2.434±0.461,F=23.608,P=0.024）、NF-?资B（Sham组：1.000±0.000,AAC组：5.498±0.642,Quercetin组：3.637±0.715,EX527组：5.125±0.682,F=79.912,P=0.005）蛋白的表达;EX527的使用降低了SIRT1蛋白的表达（P=0.000）,增加了心脏质量（P=0.001）、左室后壁厚度（P=0.000）和心肌纤维化程度（P=0.000）,增加了ColⅠ、ColⅢ、NF-?资B蛋白的表达（P=0.001,P=0.024,P=0.023）。结论：槲皮素可减轻压力超负荷大鼠左心室肥厚程度,其机制与调节SIRT1/NF-?资B通路有关。     

载脂蛋白B-100亚单位多聚肽免疫对ApoE-/-小鼠血脂水平和动脉粥样硬化斑块面积影响的研究

目的：探讨载脂蛋白B-100（apolipoprotein B-100,apoB-100）亚单位多聚肽免疫对载脂蛋白E基因缺陷（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的影响。 方法：将ApoE-/-小鼠随机分成3组：模型对照组（A组）、apoB-100亚单位混合组（B组）、apoB-100全肽组（C组）,每组12只。B、C组小鼠给予相应多肽进行皮下免疫注射,A组小鼠皮下注射等体积的生理盐水。所有小鼠高脂喂养25周后全部处死,ELISA法检测特异性IgG抗体滴度,生化仪检测各组小鼠血清总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平,油红O染色后检测主动脉AS粥样斑块面积及其与管腔面积的比值。 结果：（1）B组和C组首次免疫后平均抗体滴度均高于免疫前（1∶962.5 vs. 1∶0.121,t= 9.522,P=0.000;1∶1108.3 vs. 1∶0.121,t=7.531,P=0.000）,差异均有统计学意义;B组和C组二次免疫后平均抗体滴度均高于免疫前（1∶3 582.9 vs. 1∶0.121,t=11.972,P=0.000;1∶3 824.8 vs. 1∶0.121,t= 8.220,P=0.000）,差异均有统计学意义;B组和C组首次二次免疫后平均抗体滴度均高于首次免疫,差异均有统计学意义（t=3.522,P=0.009;t=3.179,P=0.007）。（2）B组的血清TC（16.03 ± 1.49）、TG（1.72 ± 0.12）、LDL-C（2.15±0.16）水平均低于A组（23.44±1.72、3.01±0.26、3.04±0.28）,HDL-C水平（2.87±0.17）高于A组（1.82 ± 0.11）,差异均有统计学意义（t=3.289,P=0.027;t=2.766,P=0.031;t=3.025,P=0.029 t=4.187,P=0.001）;C组血清TC（17.94 ±1.55）、TG（1.88 ± 0.15）、LDL-C（1.97±0.14）水平均低于A组,HDL-C水平（3.01±0.39）高于A组,差异均有统计学意义（t=4.209,P=0.001;t=5.116,P=0.000;t=6.025,P=0.000;t=3.157,P=0.026）。（3）B组和C组动物较A组AS病变程度轻,斑块面积与管腔面积比值小于A组（4.59±1.41）vs.（17.6 ± 5.36）,t=3.465,P=0.021;（3.87 ± 2.05）vs.（17.6±5.36）,t=2.992,P=0.030）,差异有统计学意义。结论：apoB-100亚单位多聚肽可能通过调节ApoE-/-小鼠血脂代谢,影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的形成。     

APP/PS1/LC3三转基因小鼠的构建及其自噬流水平研究

目的：研究APP/PS1/LC3三转基因小鼠的构建及自噬流情况。方法：将CAG-mRFP-eGFP-LC3转基因自噬流模型小鼠与APP/PS1双转基因阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease,AD）模型小鼠交配繁殖,对产下的子代进行基因分型鉴定,选出同时含有 CAG-mRFP-eGFP-LC3基因和APP/PS1的小鼠为APP/PS1/LC3三转基因小鼠,Morris水迷宫实验检测小鼠行为学变化。取6月龄APP/PS1/LC3三转基因小鼠和同窝CAG-mRFP-eGFP-LC3 单转基因小鼠各6只,断头取脑后在透射电镜及荧光显微镜下观察自噬流的变化,采用免疫组织化学法检测老年斑的形成,用Western blot检测自噬标志物。结果：基因分型证实APP/PS1/LC3三转基因小鼠构建成功。Morris水迷宫显示,6月龄APP/PS1/LC3三转基因小鼠找到平台的平均潜伏期和路程均明显增加（F=87.096,P=0.000;F=41.583,P=0.000）,穿越平台的次数明显减少（2.000±0.707 vs. 4.800±0.800,t=2.622,P=0.031）。透射电镜下观察,6月龄APP/PS1/LC3三转基因小鼠脑神经元内出现更多的自噬小泡。荧光显微镜下观察,与同窝CAG-mRFP-eGFP-LC3单转基因小鼠比较,6月龄APP/PS1/LC3三转基因小鼠海马区自噬体及自噬溶酶体数量均明显增高（5.894±0.742 vs. 14.820±3.350,t=0.017,P=0.000;1.204±0.420 vs. 1.840±0.559,t=3.156,P=0.005）,大脑皮质内自噬体数量亦明显升高（1.943±0.415 vs. 10.030±4.382,t=6.364,P=0.000）,但自噬溶酶体数量比较,差异未见统计学意义（0.562±0.207 vs. 0.686±0.195,t=0.156,P=0.878）。免疫组化染色结果显6月龄APP/PS1/LC3三转基因大脑皮质及海马区域出现明显老年斑,而同窝CAG-mRFP-eGFP-LC3单转基因小鼠脑内未见老年斑。Western blot结果显示：与同窝CAG-mRFP-eGFP-LC3单转基因小鼠比较,APP/PS1/LC3三转基因小鼠脑内APP蛋白明显升高（0.294±0.070 vs. 0.690±0.275,t=3.423,P=0.007）,自噬相关蛋白LC3、 Beclin1、P62水平均增高（0.241±0.004 vs. 0.534±0.019,t=37.170,P=0.000;0.479±0.020 vs. 1.180±0.255,t=6.820,P=0.000;0.188±0.007 vs. 0.356±0.021,t=18.850,P=0.000）,但溶酶体膜蛋白LAMP1表达水平降低（1.450±0.065 vs. 0.773±0.043,t=8.705,P=0.000）。结论：APP/PS1/LC3三转基因小鼠自噬被激活,但自噬溶酶体降解受阻,是研究AD自噬流水平的理想动物模型。     

大黄素维持肝硬化大鼠高动力循环状态下肠屏障完整性的研究

目的：观察大黄素对肝硬化大鼠高动力循环状态下肠屏障完整性的维持作用。方法：SD雄性大鼠25只,随机分为对照组5只、肝硬化模型组10只、大黄素干预组10只,模型组与干预组予500ml/L四氯化碳(3mL/100g)皮下注射8周复制肝硬化大鼠模型,对照组大鼠给予生理盐水(3 ml/100g)皮下注射。干预组制模第15天起予大黄素（5mg/mL,5mL/kg）灌胃,对照组和模型组每日给予相当体积的生理盐水灌胃,均1天1次。 8周后处死大鼠,行墨汁推进试验测定肠道传输功能,测定门脉压力,血清生化指标测定,取末端回肠组织及肝脏组织观察组织病理学改变,肠黏膜TUNEL凋亡检测。结果：（1）大鼠小肠黏膜损伤评分：模型组大鼠明显高于对照组（P值＜0.05）,干预组较模型组黏膜损伤减轻。（2）门脉压力:模型组（13.73±1.81）较对照组（5.64±0.88）显著升高, P值＜0.05,大鼠明显处于高循环状态;干预组门脉压力（10.25±1.47）较模型组明显降低,P值＜0.05。（3）血清生化指标（ALT、AST、TB、ALP）水平：模型组(594.22±317.82,1008.33±778.70,6.00±5.29, 802.78±396.94)较对照组(60.20±21.30,149.80±43.03,1.00±0.44,196.20±31.29)显著升高, P值＜0.05,干预组(292.20±140.12,350.40±173.35,18.89±1.02,2.49±1.10,552.20±303.37)较模型组明显降低,P值＜0.05;ALB模型组(16.29±1.26)较对照组(23.42±1.56)明显下降, P值＜0.05,干预组(2.49±1.10)较模型组明显上升,P值＜0.05（4）肠道黑染百分比: 模型组（68.05±2.09）较对照组（81．68±3.15）明显减少, P值＜0.05, 干预组(74.50±4.28)肠道黑染百分比较模型组明显延长,P值＜0.05;（5）肠黏膜凋亡小体：模型组明显多于对照组,而干预组大黄素干预后的小肠上皮细胞凋亡较模型组明显下降。结论：应用大黄素干预大鼠肝硬化进程后,大黄素组大鼠肝脏胶原纤维与网状纤维沉积较少,假小叶少见。大鼠的门脉压力有明显的下降,大黄素组大鼠肝功能明显好转,光镜下小肠黏膜损伤评分显著降低,肠动力明显好转,凋亡减少,大黄素可保护肝硬化门脉高压大鼠的肠屏障功能。     

苯丙氨酸对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响及与mTOR-p70S6K通路的关系探讨

目的 观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70S6K信号通路分子的变化。方法 体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸（1.25、2.5、5、10、20 mmol/L）处理细胞,以KRB平衡液作为对照。通过检测2-NBDG评价细胞葡萄糖摄取能力。用Western blot方法检测细胞内mTOR、p70S6K、胰岛素受体底物（IRS）-1、蛋白激酶B(Akt)的表达情况。结果 与KRB平衡液对照相比,5 mmol/L亮氨酸使C2C12细胞的葡萄糖摄取能力下降了约30%（P=0.001）,5 mmol/L苯丙氨酸使C2C12细胞摄取葡萄糖的能力上升了约40%（P＜0.01）,且苯丙氨酸的这种促进作用随浓度增大有逐渐增强的趋势。苯丙氨酸对细胞内mTOR Ser2448磷酸化水平无明显影响。除1.25 mmol/L外,其它浓度苯丙氨酸均能抑制p70S6K Thr389的表达。亮氨酸使IRS-1 Ser636/639磷酸化水平表达增高（P＜0.01）,除1.25 mmol/L外,其它浓度的苯丙氨酸均有抑制IRS-1 Ser636/639表达的趋势,但与对照相比差异无统计学意义（P=0.381）。高浓度短时间的苯丙氨酸刺激对C2C12细胞内的Akt Ser473表达无明显影响。结论 苯丙氨酸可能通过减少p70S6K的磷酸化,继而减少p70S6K对IRS-1的刺激作用而使细胞葡萄糖摄取能力增强。但苯丙氨酸对mTOR-p70S6K通路的抑制作用不通过Akt的激活。     

断乳前丰富环境暴露促进海马神经发生及其机制研究

目的探讨断乳前丰富环境暴露对海马神经发生的影响及其可能机制。方法36只10日龄的SD大鼠随机分为对照组和丰富环境组,每组18只。10-24日龄时两组大鼠隔日予以Brdu50mg／kg腹腔注射,丰富环境组大鼠每日予以丰富环境暴露20min。24日龄时丰富环境暴露结束后两组各取6只大鼠取海马提核蛋白行钙调蛋白和磷酸化CREB Western印迹检测。63日龄时处死其余大鼠取脑行冰冻切片,取前囟后3．6mm部位切片行尼氏染色,计数右侧海马齿状回细胞数目。BIdu免疫组化后计算右侧海马DG区BrdU阳性细胞数目。免疫荧光双标后计算BrdU阳性细胞分化为神经元（BrdU／NeuN共表达）和星性胶质细胞（BrdU／GFAP共表达）的比率。结果Western印迹检测结果显示与对照组比较,丰富环境组大鼠海马核蛋白的钙调蛋白（0．605±0．03 5 vs 0．245±0．035,t=-10．182,P=0．01）和磷酸化CREB（0．485±0．007 vs 0．220±0．014,t=-23．702,P=0．002）水平较高。尼氏染色后计数前囟后3．6min部位右侧海马齿状回细胞数目,结果显示丰富环境组细胞数目明显多于对照组（1580±72 vs 1375±62,t=-7．461,P〈0．01）。丰富环境组大鼠右侧海马区BrdU阳性细胞数明显多于对照组（5363±487 vs 2984±318,t=-14.177,P〈0.01）,且神经元分化率（85．0％±2．8％ vs 80．2％±2．8％,t=-4．166,P〈0．01）和星形胶质细胞分化率也高于对照组（4．0％±0．5％vs2．6％±0．6％,t=-6．493,P〈0．01）。结论断乳前丰富环境暴露可以促进海马神经发生,其机制有可能与丰富环境暴露促进海马钙调蛋白和CREB活化有关。     

缬沙坦对动脉粥样硬化大鼠模型主动脉内皮细胞保护作用及对血浆内皮脂肪酶水平影响

目的：通过血管紧张素Ⅱ受体阻断剂（angiotensin Ⅱ receptor blocker,ARB）对动脉粥样硬化性大鼠模型进行治疗,探讨ARB对主动脉内皮细胞保护作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,模型组通过高脂饲料建立动脉粥样硬化大鼠模型,实验组增加缬沙坦干预,8周后比较各组主动脉内皮一氧化氮（nitric oxide,NO）、内皮素（endothelin,ET）、细胞色素c（cytochrome,Cyt-c）及内皮脂肪酶（endothelia lipase,EL）水平。结果：实验结束时,模型组HE染色可见明显斑块形成并伴有大量脂质细胞浸润,Cyc-c免疫组化染色显示内皮细胞凋亡阳性率（36.85±12.45）,高于对照组（0.81±0.11）和实验组（13.85±6.41）（P=0.000）,平滑肌细胞凋亡阳性率（9.65±2.62）高于对照组（0.06±0.01）（P=0.000）,但与实验组（7.85±1.34）差异无统计学意义（P=0.058）;模型组和实验组总胆固醇（total cholesterol,TC）和低密度脂蛋白-胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义（P=0.000）;模型组和实验组相比,TC和LDL-C差异也有统计学意义（P=0.000和0.002）;模型组和实验组大鼠ET-1、NO、EL与对照组相比差异均有统计学意义（P=0.000）,与模型组相比,实验组NO水平升高,ET-1、EL水平降低,差异具有统计学意义（P=0.017、0.008和 0.000）。结论：缬沙坦在细胞损伤期,即具有明显内皮细胞保护功能。对动脉粥样硬化患者早期用药,能够保护细胞完整性,减少凋亡发生,起到疾病预防和治疗的重要意义。