IgE低亲和力受体基因mRNA表达水平与哮喘的关系

目的 探讨IgE低亲和力受c体(FcεRⅡ,CD23)基因表达水平在哮喘组与正常组间有无差异及基因表达与TlgE水平有无相关.方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-Pc)检测FcεRⅡ基因表达水平,并用t检验作组间比较;直线相关分析基因表达与TlgE水平的相关性.结果 哮喘组TIgE水平与正常对照组之间差异有显著性(t=5.15,P＜0.01);FcεRⅡ基因表达水平在哮喘组与正常组之间差异有显著性(t=4.20,P＜0.01);在哮喘组与正常对照组中,FcεRⅡ基因表达水平均与TIgE水平间呈正的直线相关.结论 FcεRⅡ基因对血浆TIgE水平有调节作用,其功能变化在哮喘发病中可能有重要作用.     

人FcεRⅠα亚基细胞外区的原核表达及其和IgE结合的机制

应用两种不同的表达系统对FcεRⅠα亚基的细胞外区进行克隆和表达，表达产物经纯化后用免疫斑点杂交法检测其与IgE结合的能力，探索IgE与其高亲和力受体FcεRⅠα亚基的细胞外区结合的机制。结果两种体系均成功表达出FcεRⅠα亚基的细胞外区，pBAD／gⅢA表达的FcεRⅠα亚基的细胞外区能与IgE结合，而PQE30表达的FcεRⅠα亚基的细胞外区不能与IgE结合。提示FcεRⅠα亚基的细胞外区已足够和。IgE结合，无需β、γ亚基的存在，其所具有的一定的空间构型和二硫键的形成在与IgE结合时是必需的，而糖基化位点在与IgE的结合时是非必需的。     

FcεR Ⅰ受体α亚基的重组表达、单克隆抗体的制备及特异性鉴定

目的 通过基因重组的方法表达IgE高亲和力受体FeεR Ⅰα亚基,并用重组蛋白制备单克隆抗体.方法 用RT-PCR的方法从过敏性疾病病人外周血嗜碱性粒细胞调取FcεR Ⅰα蛋白基因,经T-A克隆、亚克隆至pET28a( )原核表达载体,将重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),IPTG诱导表达FeεR Ⅰα亚基蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白;并用其免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗FcεR Ⅰα亚基单克隆抗体,用细胞免疫荧光法对单克隆抗体的特异性进行鉴定.结果 成功调取了人IgE高亲和力受体FcεRⅠα亚基的基因,且测序正确;构建原核表达质粒FcεR Ⅰα-pET28a( );成功建立4株稳定分泌抗FcεR Ⅰα亚基的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为G101、C22、G113、G42.通过细胞免疫荧光实验证实,4株单克隆抗体均能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεR Ⅰα亚基.结论 成功利用基因重组技术制备了FcεR Ⅰα亚基蛋白,制备了4株效价高、特异性好的抗FcεR Ⅰα亚基单克隆抗体,为FeεR Ⅰα亚基及其抗体在过敏性疾病中的生物学功能研究奠定了基础.     

IgE高亲和力受体蛋白的制备及其生物功能的鉴定

目的 通过基因工程技术制备人IgE抗体结合其高亲和力受体α段(FcεRIα)蛋白并对其生物学功能进行鉴定,为探讨FcεRIα在过敏性疾病中的作用奠定研究基础.方法 应用基于PCR的精确合成法(PAS)方法获得人FcεRIα基因,构建原核表达载体pET-FcεRIα,低温诱导表达FcεRIα并采用 His标签纯化重组蛋白;通过ELISA法鉴定重组人FcεRIα蛋白的生物功能.结果 扩增出大小约为560 bp的人FcεRIα基因;pET-FcεRIα质粒经双酶切及测序鉴定正确;诱导表达并纯化出相对分子质量大小约为22000的人FcεRIα;重组人FcεRIα能有效检测人血清中的抗FcεRIα自身抗体水平,并且能够与人血清中IgE抗体高效结合.结论 成功制备人FcεRIα蛋白,并初步具备检测人血清中抗FcεRIα自身抗体及IgE抗体的能力,为后续研究提供了有利的实践基础.     

IgE高亲和力受体FcεRⅠ与过敏性疾病的治疗

IgE在一系列急慢性过敏反应如哮喘、变应性鼻炙、异位性皮炎、莩麻疹等疾病中发挥重要作用.IgE与靶细胞上高亲和力受体Fc epsilon RⅠ(FcεR Ⅰ)的结合被认为是Ⅰ型变态反应的关键步骤,FcεR Ⅰ功能主要是传递信号导致介质和细胞因子的产生及抗原呈递.通过抑制或者阻断IgE与FcεR Ⅰ的结合治疗过敏性疾病目前倍受国内外学者的关注.     

MRL-lpr狼疮小鼠B细胞表面FcγRⅡB的表达及其意义

目的：探讨MRL-lpr狼疮小鼠模型中B细胞表面Fcγ受体ⅡB（FcγRⅡB）的表达情况及其病理意义。方法：构建MRL-lpr狼疮小鼠模型,在4、8、12、20周龄时检测外周血总IgG、抗dsDNA抗体、抗ribosomal P0抗体、抗smRNP抗体含量,分析狼疮小鼠的疾病活动度;流式检测20周龄的MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB及CD69表达情况,分析FcγRⅡB的表达情况与B细胞活化的关系。结果：随着周龄的增加,MRL-lpr狼疮小鼠外周血总IgG及抗dsDNA抗体、抗ribosomal P0抗体、抗smRNP抗体含量逐渐升高;MRL-lpr狼疮小鼠外周血及脾脏B细胞表面FcγRⅡB表达丰度明显降低（均有P＜0.05）,CD69表达水平明显升高（P＜0.05）,且正常C57BL/6小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγRⅡB表达上调,但MRL-lpr狼疮小鼠脾脏CD69+的活化B细胞FcγRⅡB表达无明显变化。结论：MRL-lpr狼疮小鼠B细胞表面FcγRⅡB的表达与B细胞的活化有关,FcγRⅡB的表达异常可能是MRL-lpr狼疮小鼠B细胞异常活化的分子机制之一。     

CpG ODN对哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ、FcγRⅡb表达的影响

目的观察CpGODN对哮喘小鼠肺组织FcaRI、FcTRIIb表达的影响,探讨其诱导免疫耐受的相关机制。方法将48只清洁级雄性Balb／c小鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘组（B组）、地塞米松（DXM）治疗组（C组）、CpGODN治疗组（D组）,每组12只。以卵白蛋白（OVA）作用建立小鼠哮喘模型。收集支气管肺泡灌洗液（bronchialalveolarlavagefluid,BALF）计数细胞总数并分类,取肺组织作病理,反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法测定肺组织中FcεRⅠ、FcγRⅡbmRNA的表达。结果（1）电镜观察肺组织超微结构：B组显示支气管及血管周围有较多炎性细胞浸润,肺泡隔内嗜酸粒细胞浸润,c组和D组与B组相比明显减轻。（2）BALF中炎症细胞表达变化：与B组相比,C组、D组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞（eosino—phil,EOS）绝对值以及EOS占细胞总数的百分比（EOS％）均显著减少（P〈0．01）。（3）RT—PCR结果：C组、D组FcεRⅠ mR—NA表达均显著低于B组（P〈0．01）,C组、D组FcγRⅡb mRNA表达均显著高于B组（P〈0．01）。（4）相关分析：小鼠肺组织FcεRⅠ和FcγRⅡb表达呈显著负相关（P〈0．01,n=40）。结论CpGODN能降低哮喘小鼠肺组织FcεRⅠ的表达,增加FcγRⅡb的表达,具有改善气道炎症和诱导免疫耐受的作用。     

探讨嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、FcεRI在哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠的表达

目的：　通过对哮喘-慢性阻塞性肺疾病重叠（asthma-chronic obstructive pulmonary disease overlap,ACO）患者急性期与缓解期嗜碱性粒细胞表面分子表达水平的测量比较,探讨其与病情的关系。方法：　招募健康人32例及收集在锦州医科大学附属第三医院治疗的ACO患者急性期及缓解期各14例,采集肘部静脉血,使用流式细胞术应用3种设门策略获得嗜碱性粒细胞,比较不同时期患者嗜碱性粒细胞表面分子（CD63、CD203c、FcεRI）表达水平与健康组的差异,并对结果和疾病状态进行回顾性研究。结果：　急性期嗜碱性粒细胞CD63平均荧光强度（Mean fluorescence intensity,MFI）较健康组有统计学差异（P<0.05）,急性期CD203c、FcεRI MFI较健康组无统计学差异;缓解期CD63、FcεRI MFI较健康组有统计学差异（P<0.05）,缓解期CD203c MFI较健康组无统计学差异（P>0.05）,急性期与缓解期比较,嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、FcεRI MFI没有统计学差异。急性期、缓解期CCR3⁺、CCR3⁺/CD123⁺HLA-DR^-、CD123⁺HLA-DR^- MFI较健康组有统计学差异（P<0.001）。结论：　ACO患者嗜碱性粒细胞表面分子CD63、FcεRI表达增强,这表明嗜碱性粒细胞参与了ACO的发病,通过检测其表面分子表达量对ACO病情的判断有提示意义。     

大鼠IgECH2-3-FasL融合蛋白真核表达质粒的构建

在人类哮喘及其他过敏反应性疾病中 ,肥大细胞始终处于重要地位。IgE的Fc段与肥大细胞上高亲和力受体FcεRⅠ相连接触发过敏反应。单独的Fc段能封闭其高亲和力受体 ,阻断过敏反应 ,且将关键结合位点定位于Fc段的CH3[1 3 ] 。国外研究发现 ,肥大细胞表面表达Fas,抗Fas抗体能够诱     

结直肠癌中FcγRⅡ和VEGF-A的表达与临床意义

目的:探讨免疫球蛋白G Fc段低亲和力受体Ⅱ (FcγRⅡ) 和表皮生长因子A (VEGF-A)在结直肠癌,发生发展中的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR法,检测FcγRⅡ?VEGF-A基因在56例大肠癌组织和相应切缘正常组织中的表达,分析FcγRⅡ和VEGF-A与患者临床病理特征之间的关系,以及FcγRⅡ与VEGF-A的相关性?结果:FcγRⅡ基因表达在大肠癌组织中较正常组织低,其表达与大肠癌患者的浸润深度和TNM分期相关(均P < 0.05)?VEGF-A基因表达在大肠癌组织中较正常组织高,其表达与大肠癌患者的年龄?肿瘤大小?浸润深度和TNM分期相关(均P < 0.05)?肠癌患者FcγRⅡ基因的表达与VEGF-A呈负相关(r = -0.104, P = 0.002)?结论:FcγRⅡ基因与肠癌的侵袭转移等密切相关,其高表达提示较好的预后,推测可能是通过调控VEGF-A的表达而发挥作用?FcγRⅡ基因有望成为肿瘤免疫治疗的新途径?     

CD40-IgG1Fc融合蛋白真核表达载体的构建及表达

目的 构建人CD40-IgG1Fc融合蛋白的真核表达载体CD40-IgG1Fc/pcDNA3.1( ),并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)表达.方法 应用T-A克隆技术和亚克隆技术,构建人CD40膜外段和IgG1Fc段融合蛋白的真核表达载体CD40-IgG1Fc/pcDNA3.1( ),将其转染入CHO细胞株并筛选,进行稳定表达.通过RT-PCR、Western blot法及ELISA法证实融合基因的表达.结果 成功构建真核表达载体CD40-IgG1Fc/pcDNA3.1( ),并建立CHO细胞稳定表达株.Western blot及ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达.结论 通过基因工程生产的人CD40-IgG1Fc融合蛋白,能够特异性阻断CD40-CD40L的相互作用.     

人IgE重链3-4区蛋白的表达、纯化及功能分析

目的通过基因重组的方法表达IgE Cε3-Cε4区,鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的相互作用,并用重组蛋白免疫小鼠制备血清。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞调取IgE Cε3-Cε4cDNA片段,克隆至pET28a(+)构建原核表达载体IgE Cε3-Cε4-pET28a(+),将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达IgE Cε3-Cε4区蛋白,通过Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白后,用免疫荧光方法鉴定重组蛋白与天然细胞表面受体FcεRⅠ之间的结合能力,并用UniCAP 100全自动分析检测仪对重组抗原进行定量检测与鉴定;用表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗鼠血清,用Western-blot法对多克隆抗体进行鉴定。结果成功调取的人IgE Cε3-Cε4区基因与已报道的序列相一致;获得的IgECε3-Cε4区蛋白相对分子质量(Mr)同预期的结果相一致;IgE Cε3-Cε4能特异性结合人嗜碱性粒细胞表面的FcεRⅠ受体;通过UniCAP 100全自动分析检测仪能够检测到重组抗原并精确到国际单位;免疫鼠血清多抗能特异性结合天然人血清IgE。结论成功构建了IgE C...     

医用臭氧油通过抑制FcεRI/Syk信号通路缓解DNCB诱导的变应性接触性皮炎（英文）

目的：臭氧被广泛用于治疗过敏性皮肤病,如湿疹、特应性皮炎和接触性皮炎。然而其具体的机制仍然不清楚。本研究旨在探讨医用臭氧油对2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导的变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)的治疗作用及其机制。方法：除空白对照组外,其余小鼠均用DNCB处理。采用DNCB建立ACD样小鼠模型,随机分为模型组、基础油组、医用臭氧油组、FcεRI过表达质粒(FcεRI-OE)组和FcεRI空质粒(FcεRI-NC)组;基础油和医用臭氧油组分别采用同等剂量基础油和医用臭氧油进行处理,FcεRI-OE组和FcεRI-NC组分别皮内注射25μg FcεRI过表达质粒和空质粒。记录皮损每日的变化,并使用反射共聚焦显微镜(reflectance confocal microscope,RCM)评估皮损厚度和炎症改变,同时对皮损组织进行苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色、实时聚合酶链反应(real-time PCR)、RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)和免...     

应用A蛋白分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体

目的 分离纯化鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα(高亲和力的IgE的Fc段受体)的单克隆抗体。方法 先培养ER-E5．3细胞，获得大量的含抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体的培养上清。然后应用A蛋白-Sphrose CL-4B制备亲和层析柱，分离纯化细胞培养上清中的单克隆抗体。结果 分离纯化的单克隆抗体纯度高，活性强。结论 应用A蛋白可以很好分离纯化细胞培养上清中的鼠源性抗肥大细胞FcεRⅠα的单克隆抗体。     

MS4A基因家族的特性

MS4A（membrane—spanning 4-domain family，subfamily A）是编码人类和老鼠20多个不同蛋白质的大基因家族，包括CD20、高亲性IgE受体β亚单位（FcεRIβ）和具有造血细胞特性的横跨膜蛋白-IV（HTm4）。人类的CD20被指定为MS4A1、FcεRβ被指定为MS4A2、HTm4被指定为MS4A3，剩余的基因则分别被指定为MS4A4A等6种；老鼠MS4a基因家庭成员被指定为MS4al等15种^[1]。     

扶正治标法对青少年花粉症患者相关基因表达的影响

目的:研究中药治疗花粉症的作用机理。方法:选择50例花粉症患者,口服敏康片,治疗6个月后观察疗效及FcεRIβ,IL-4Rα,IL-5Rα,HLA-A基因表达情况,并以20例变应性皮炎和19例正常人为对照,用Northern blot检测FcεRIβ,IL-4Rα,IL-5Rα的变化。用RT-PCR法检测HLA-A,计算相对光密度值。结果:花粉症组患者症状有明显改善(P<0.05),治疗前后血清总IgE比较差异有统计学意义(P<0.01),花粉症组4个基因的表达治疗前与正常人比较,差异均具有统计学意义(P<0.01),治疗后与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01)。变应性皮炎组治疗前FcεRIβ,IL-4Rα与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗前后FcεRIβ比较,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻炎组、皮炎组HLA-A相对光密度值均较正常组高,两组治疗前后也有不同程度的改善(P<0.05)。结论:中药可以调整花粉症患者相关基因表达,改善患者过敏体质,缓解临床症状。     

免疫复合物对U937细胞和中性粒细胞表面Fc受体表达的调节

目的探讨免疫复合物(ICs)对U937细胞和中性粒细胞表面Fc受体表达的调节.方法将U937细胞或中性粒细胞与各种免疫复合物共同孵育1 h后,用流式细胞仪分析细胞表面各种Fc受体的表达情况.结果 IgG1ICs和IgG3 ICs能上调U937细胞表面FcγRⅡ和FcγRⅢ以及中性粒细胞表面的FcγR I和FcαR I的表达.与各类免疫复合物孵育后中性粒细胞表面FcγRⅡ的表达呈降低趋势.结论免疫复合物能调节中性粒细胞和U937细胞Fc受体的表达,其中以IgG1 ICs和IgG3 ICs最为明显.     

过敏性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞FcεRI和CD63表达研究

目的：检测过敏性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者外周血嗜酸性粒细胞FcεRI和CD63的表达。方法：收集AR患者和健康人（healthy controls,HCs）的外周血,用蒿草花粉和尘螨过敏原粗提液刺激,流式细胞仪检测嗜酸性粒细胞富集群中FcεRI和CD63的表达情况。结果：静息状态下,AR患者[0.92%（0.70%~1.64%）]相比于HCs[0.71%（0.43%~0.97%）]嗜酸性粒细胞比例上调（Z=-2.050,P=0.041）;AR患者[6.19%（3.05%,8.19%）;1 462（1 164,1 720）]FcεRI+嗜酸性粒细胞的比例和平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）比HCs[3.16%（1.55%,4.53%）;808（524,1308）]增加（Z=-2.102,P=0.036）;AR患者[2 031 （1 725,3 338）]CD63+嗜酸性粒细胞的MFI比HCs[1 491（1 297,1 613）]升高36%（Z=-3.192,P=0.002）。0.1 μg/mL蒿草过敏原粗提液[2 618（2 131,3 315）]和1.0 μg/mL蒿草过敏原粗提液[3 108（2 317,3 792）]能诱导AR患者CD63+嗜酸性粒细胞的MFI上调（Z=-2.667,P=0.008;Z=-2.845,P=0.004）。结论：嗜酸性粒细胞表达的FcεRI和CD63参与AR发病。过敏原特异性嗜酸性粒细胞激发试验检测CD63的表达,可能成为AR诊断的补充实验。     

NZW小鼠中CD4+T细胞活化后IL-10R1表达的研究

目的：检测系统性红斑狼疮小鼠（NZW小鼠）CD4＋T细胞在活化后表面IL-10R1的表达变化,为进一步研究白细胞介素10 （Interleukin 10,IL-10）相关免疫疾病的发病机制及进展提供有力支持.方法：取小鼠的脾细胞,经溶血后采用尼龙毛法去除B淋巴细胞,细胞经抗-CD3和抗-CD28多克隆抗体刺激,分别在活化后0,18,24和48h采用流式细胞术以FITC抗-CD4抗体标记CD4＋T淋巴细胞检测il-10r1的表达情况.结果：未活化时NZW小鼠CD4＋T淋巴细胞不表达白细胞介素10受体1 （interleukin receper 1,IL-10R1）,在活化过程中IL-10R1开始表达,表达水平无明显波动,且表达水平远低于C57BL/6小鼠高峰时.而C57BL/6小鼠未活化时不表达IL-10R1,在活化过程中,随时间延长IL-10R1表达增加,24h达到高峰,随后下降,48h情况与0h基本相同.结论：NZW小鼠体内淋巴细胞表面IL-10R1表达水平下降,IL-10对其包括调控功能在内的作用下降.并且NZW小鼠IL-10R1表达时间延长,由于IL-10R1基因免疫调控区的突变,导致IL-10对CD4＋T淋巴细胞调节功能失调.这些都与系统性红斑狼疮发病及进展有关.     

肥大细胞FcεRⅠ受体介导的信号通路分子机制及影响因素的研究进展

Ⅰ型变态反应的发生与免疫球蛋白E(IgE)、肥大细胞上的IgE高亲和力受体(FcεRⅠ)以及变应原三者的交联有关.肥大细胞膜表面FcεRⅠ受体介导的信号传导通路具有复杂交错的分子机制,是过敏反应的关键效应步骤,该信号传导通路也成为药物治疗及免疫治疗的重要作用靶点.体液中的白细胞介素IL-4、IL-33,肥大细胞胞膜上的...