釉原蛋白在人牙胚发育不同时期表达的免疫组化研究

目的：探讨釉原蛋白在人牙胚发育不同时期的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学方法观察釉原蛋白在不同发育阶段人牙胚中的分布。结果：在前成釉细胞、基底膜及前成牙本质细胞相邻部位都呈阳性反应。牙乳头细胞及牙本质呈阴性反应。釉原蛋白分布于釉质全层，在釉质浅层及与成釉细胞界面处呈线状强阳性染色，在后期矿化成熟时，成釉细胞及釉质染色阴性。结论：釉原蛋白与成釉细胞、成牙本质细胞的分化及釉质的矿化有关。     

降钙素基因相关肽在大鼠切牙和牙周组织中的表达

目的:研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related petide,CGRP)在大鼠切牙成釉细胞、成牙本质细胞和牙周膜细胞中的定位表达。方法:取6周龄Wistar大鼠的下颌骨,常规脱钙,切片,并进行HE染色和免疫组织化学染色,显微镜下观察CGRP在各组织细胞中的定位和表达。结果:CGRP在牙周膜细胞中呈阳性表达,在分泌期成釉细胞和成牙本质细胞中呈强阳性表达。结论:CGRP在牙齿硬组织发育细胞中呈强阳性表达,提示CGRP在釉质和牙本质发育的过程具有一定的意义。     

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：观察牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化，探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期组织标本，采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果：DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞，在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性，在成釉细胞中有一过性表达，即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达，但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论：观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞和成釉细胞的分化及牙本质形成过程。     

小鼠牙齿发育中Pax-9的表达及意义

目的 通过观察PAX-9在牙发育中的分布及变化规律，探索牙齿发生的机制。方法 标本为妊娠10．5～18．5天昆明小鼠分别取胎鼠，分别作HE染色和免疫组化染色，图像分析仪分析。结果 Pax-9表达于胞浆中。蕾状期，牙蕾上皮及间充质细胞不表达Pax-9；帽状期牙乳头细胞表达较强；钟状期早期成牙本质细胞或前成牙本质细胞表达强阳性，内釉上皮细胞、星网状层细胞及牙乳头细胞有微弱表达；钟状期晚期成牙本质细胞、成釉细胞、及釉牙本质界处集中表达，新形成的釉质和前期牙本质染色较强。结论 PAX-9促进牙胚从蕾状期向帽状期转变，调节钟状期成牙本质细胞及成釉细胞的分化及基质分泌，并参与生物矿化过程。     

转化生长因子β(TGF-β)受体在人牙胚中的分布及意义

目的 :探讨TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达和意义。方法 :采用免疫组织化学方法观察TGF - β受体在人牙胚发育过程中的表达情况。结果 :人钟状期TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体在内釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞中染色阳性 ;正在分泌硬组织基质的成牙本质细胞和成釉细胞TGF - βⅠ型、Ⅱ 型受体呈强阳性表达 ;Ⅲ 型受体在前成釉细胞、外釉细胞、牙乳头细胞、成牙本质细胞、成釉细胞以及牙囊中呈弱阳性表达。结论 :TGF - β受体参与了牙胚发育。     

过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响

目的 研究过量氟对大鼠下切牙发育过程中釉蛋白表达的影响。方法 选择20只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。饲养8周后处死,利用HE染色和免疫组织化学染色的方法观察过量氟对大鼠成釉细胞形态及釉蛋白表达的影响。结果 实验组大鼠下切牙成釉细胞由原有的高柱状结构变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,成釉细胞和成牙本质细胞中釉蛋白表达明显低于对照组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论 过量氟可抑制釉蛋白表达,影响釉质发育。     

釉原蛋白在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 研究大鼠切牙牙胚形态分化的不同阶段,釉原蛋白(AmelogeninAm)的表达,探讨釉器细胞的形态分化与功能状态的关系,为探明牙釉质与牙本质在发育、矿化过程中的相互诱导关系及牙釉质蛋白硬组织诱导能力的有无提供实验依据。方法 将标本进行GMA树脂包埋,制作半薄切片后,进行免疫组织化学染色。结果 大鼠牙胚基底部釉器无Am的表达,分化末期内釉上皮细胞呈弱阳性染色,釉基质形成期成釉细胞及釉基质内呈强阳性染色。达到釉基质移行期后阳性反应逐渐减弱,直到釉质成熟期后期阳性反应消失。同时在对应的牙本质和牙本质小管内可以见到釉原蛋白的阳性染色。结论 在釉质形成过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白大部分存留在釉基质内形成釉质,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管、以及成牙本质细胞层内。釉原蛋白向牙本质层扩散和渗透功能上的意义,可能是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质钙化的作用。     

釉原蛋白在大鼠胚发育过程中的表达

目的 研究大鼠切牙牙胚形态分化的不同阶段,釉原蛋白（Amelogenin Am）的表达,探讨釉器细胞的形态分化与功能状态的关系,为探明牙釉质与牙本质在发育、矿化过程中的相互诱导关系及牙釉质蛋白硬组织诱导能力的有无提供实验依据。方法 将标本进行GMA树脂包埋,制作半薄切片后,进行免疫组织化学染色。结果 大鼠牙胚基底部釉器无Am的表达,分化末期内釉上皮细胞呈弱阳性染色,釉基质形成期成釉细胞及釉基质内呈强阳性染色。达到釉基质移行期后阳性反应逐渐减弱,直到釉质成熟期后期阳性反应消失。同时在对应的牙本质和牙本质小管内可以见到釉原蛋白的阳性染色。结论 在釉质形成过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白大部分存留在釉基质内形成釉质,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管、以及成牙本质细胞层内。釉原蛋白向牙本质层扩散和渗透功能上的意义,可以是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质钙化的作用。     

釉质溶解素在人和大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：检测釉质溶解素（enamelysin)mRNA在人和大鼠牙胚发育不同时期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用原位杂交法。结果：人牙胚钟状早期未见釉质溶解素mRNA;钟状晚期,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。釉质溶解素mRNA在大鼠牙齿发育早期表达阴性,在钟状晚期成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论：釉质溶解素m RNA在牙齿发育过程中的表达有时空特异性,提示它可能参与釉质和牙本质的形成。     

钟状期成釉细胞的体外生长研究

目的:通过对乳牙牙胚成釉细胞的体外培养生长情况的研究,了解成釉细胞的生长和分化过程.方法:解剖分离因疾病原因引产遗弃的19周胎儿下颌骨,半侧固定后拍摄数字X线影像,连续切片HE染色;另半侧未固定的组织分离乳牙牙胚成釉器,胶原酶消化法制成细胞悬液,采用差速贴壁和无血清培养基选择性培养成釉细胞.培养的乳牙胚成釉细胞通过细胞角蛋白14免疫细胞染色鉴定,并以RT-PCR方法检测釉质基质蛋白的表达.结果:X线影像显示牙胚冠部有硬组织形成,组织学乳牙牙胚处于钟状期,可见分化的成釉细胞分泌大量细胞外基质,釉牙本质界处釉质已矿化.无血清培养基中牙源性上皮的生长分化良好,细胞角蛋白14染色阳性,RT-PCR显示有釉蛋白、釉原蛋白和成釉蛋白的表达.结论:采用无血清培养基可以选择性的培养乳牙胚钟状期成釉细胞,能够较好反映成釉细胞的生长分化状态.钟状期分化的成釉细胞进入细胞外基质分泌活跃期,并在釉牙本质界处最早出现釉质的矿化.     

The amyloid protein APin is highly expressed during enamel mineralization and maturation in rat incisors

This study investigated the expression and localization of APin (which was previously identified and cloned from a rat odontoblast cDNA library), during ameloblast differentiation in rat incisors, by using in situ hybridization and immunohistochemistry. The subcellular localization of APin varied during ameloblast differentiation, but was stage-specific. APin mRNA was not expressed in pre-ameloblasts, was weakly expressed in secretory ameloblasts, and was strongly expressed in maturation-stage ameloblasts as well as in the junctional epithelium attached to the enamel of erupted molars. In the maturation-stage ameloblasts, APin protein was conspicuous in the supranuclear area (Golgi complex) of smooth-ended ameloblasts as well as in both the supranuclear area and the ruffle end of ruffle-ended ameloblasts. During ameloblast-lineage cell culture, APin was expressed at a low level in the early stages of culture, but at a high level in the late stage of culture, which was equivalent to the maturation stage. APin protein was efficiently secreted from transfected cells in culture. Furthermore, its overexpression and inactivation caused an increase and decrease in matrix metalloproteinase-20 (MMP-20) and tuftelin expression, respectively. These findings indicate a functional role for APin in the mineralization and maturation of enamel that is mediated by the expression of MMP-20 and tuftelin.     

透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达

目的:检测透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的表达,探讨其在小鼠牙胚发育过程中的作用。方法:取不同胎龄的ICR胎鼠,制备小鼠下颌第一磨牙不同发育时期切片,用免疫组织化学实验方法检测透明质酸在下颌第一磨牙牙胚组织中的表达情况。结果:透明质酸在小鼠下颌第一磨牙牙胚的不同发育阶段表达各异。在小鼠磨牙开始发生时,透明质酸即在增厚的牙板上皮中表达,随后在蕾状期牙蕾中央的上皮细胞间可见透明质酸的表达,而在深层的牙源性间充质表达则不明显。自帽状期至钟状晚期,透明质酸在牙胚星网状层细胞间以及牙源性间充质细胞的表达逐渐增强,而在基底膜、内外釉上皮细胞、成釉细胞以及成牙本质细胞所在区域不表达。结论:透明质酸在牙胚发育过程中呈现时间-空间特异性表达。特别是其在星网状层细胞以及牙乳头间充质细胞中的表达随着牙胚的发育逐渐增强提示其可能与牙胚的形态发生密切相关。     

肌动蛋白在大鼠磨牙及其发育中的分布研究

目的：探讨肌动蛋白在大鼠磨牙及其发育中的时空分布及意义。方法：建立大鼠牙胚发育模型。用免疫组化方法检测肌动蛋白在成年和发育期磨牙中的表达。结果：肌动蛋白在钟状期外釉上皮细胞，分泌前期成釉细胞和成牙本质细胞及中间层细胞之间，硬组织形成期成釉细胞Tomes'突和成牙本质细胞胞浆呈阳性表达。结论：肌动蛋白在大鼠磨牙发育过程中的分布具有时空特异性。与细胞的分化程度和功能状态密切相关。     

阻遏蛋白β-TrCP在小鼠牙胚不同发育时期的表达与意义

目的观察Sonic hedgehog（shh）信号转导通路的阻遏蛋白β- TrCP在小鼠牙胚发育不同时期的表达情况，探讨β- TrCP在晚期牙胚发育中的作用与意义。方法取不同发育时期的鼠胚、乳鼠鼠头标本，用标记生物素链亲和素LsAB法观察β- TrCP蛋白在不同发育时期牙胚组织的表达情况。结果β- TrCP在胚胎10.5、13.5、14.5、16.5、18.5 d的小鼠牙胚上皮层与间充质层，以及出生后0、3、6 d的小鼠成釉细胞与成牙本质细胞胞浆呈特征性表达。结论β- TrCP在正常发育小鼠牙胚及成釉细胞与成牙本质细胞特征性表达，提示β- TrCP在牙胚发育中维持/限定shh信号通路的正常信号转导具有重要意义。     

肝细胞生长因子受体在大鼠牙胚发育中的表达及其意义

目的：研究肝细胞生长因子受体(c—Met)在大鼠牙胚发育过程中的时空表达模式。方法：用免疫组织化学方法，检测c—Met在大鼠牙胚发育不同阶段表达的位置。结果：c—Met在牙胚发育的不同阶段表达于牙胚中特定的部位：帽状期(胚胎15d)，内釉上皮阳性表达，中间层及部分星网状层细胞弱阳性表达；钟状期(胚胎19d)，内、外釉上皮阳性表达，但内釉上皮较外釉上皮表达弱，中间层及星网状层细胞弱阳性表达；矿化期(生后7d)，成牙本质细胞阳性表达。结论：c—Met在大鼠牙胚发育过程中的表达具有时空特异性，在牙齿形态发生的过程中具有重要的作用，还可能与牙齿的矿化有关。     

氟抑制小鼠切牙成釉细胞内骨形成蛋白-2表达

目的观察慢性氟中毒对小鼠切牙成釉细胞骨形成蛋白-2(BMP-2)表达的影响，探讨氟斑牙的致病机制。方法建立小鼠慢性氟中毒氟斑牙模型，SABC免疫组化法检测下切牙成釉器细胞内BMP-2的表达分布。结果BMP-2在分泌期成釉细胞、成牙本质细胞表达最强，在中间层细胞，星网状细胞中均有表达，并且随着氟浓度的升高，表达减弱。结论氟抑制BMP-2在成釉细胞中的表达，影响釉基质分泌。     

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人牙胚发育过程中的表达

研究人牙胚不同发育时期Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８Ｋ（ＣａＢ）的表达，以期分析ＣａＢ在人牙体硬组织形成过程中的作用，为探明人牙齿矿化过程中经细胞钙转导机制提供实验依据。方法免疫组化ＡＢ染色。结果人牙胚苗，帽状期成釉器无ＣａＢ的表达，钟状早期成釉器的内番细胞及部分牙乳头表面处于分化状态的细胞弱阳性染色；     

同源异型盒基因Msx—1在小鼠牙齿发育生物矿化过程中的表达研究

目的：研究同源异型盒基因Msx-1在牙齿硬组织形成过程中的表达和意义。方法：采用原位杂交技术检测Msx-1mRNA在出生后1天、7天和14天昆明小鼠磨牙和切牙牙轴质和牙本质形成 的表达。结果：磨牙中,Msx-1mRNA主要表达于生后1天到7天正在极化的前成轴细胞和前成牙本质细胞,处于分泌期的成釉细胞和成牙本质细胞,7天时信号最强;随后其表达随细胞分化的成熟和牙釉质、牙本质基质形成的进展而逐渐下降。切牙中,牙冠部细胞中的表达与磨牙基本相似;但根部分唇则未分化的颈环上皮和外胚间充质细胞始终呈Msx-1阳性表达,结论同源异型盒基因Msx-1转录主要发生于硬组织形成早期阶段,即成釉细胞和成牙本质细胞的极化和分泌阶段,提示Msx-1可能与了小鼠牙胚硬组织形成过程中细胞分化和生物矿化。