经鼻导入rhG—CSF后脑梗死大鼠内源性神经干细胞的增殖与迁移

目的 探讨人重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）经鼻靶向中枢给药对脑梗死大鼠内源性神经干细胞增殖与迁移的调节作用。方法线栓法制作大脑中动脉阻塞模型（MCAO）,皮下或鼻腔给予rhG-CSF（60μg／kg）。运用5-溴脱氧尿苷嘧啶（BrdU）标记及免疫组织化学法检测局灶性脑梗死大鼠室管膜及脑室下层（SVZ）神经干细胞的增殖。结果正常组及假手术对照组大鼠SVZ区域散在少量BrdU阳性细胞;术后7d和14d,脑梗死组大鼠SVZ区BrdU阳性细胞数明显增加;rhG-CSF组BrdU阳性细胞数进一步增加;经鼻给药组的BrdU阳性细胞数明显高于相应时间点的皮下用药组（P〈0．01）。结论rhG-CSF鼻腔给药可以促进脑梗死后大鼠内源性神经干细胞的增殖和靶向迁移。     

康脑液对脑缺血大鼠5-溴脱氧尿嘧啶核苷及巢蛋白表达的影响

目的进一步探讨康脑液治疗缺血性脑血管病(ICVD)的可能机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组及康脑液高、中、低剂量组各24只,五组均于术前7 d开始灌胃,其中康脑液高、中、低剂量组分别予24、12、6 g/(kg.d)康脑液,假手术组及模型组给予等量蒸馏水,1次/d、直至处死;模型组及康脑液各组均以线栓经右侧颈外动脉插线法建立右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,假手术组仅切开动脉、不阻断;术后24 h五组均开始腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液50 mg/kg,1次/d、直至处死。缺血再灌注后3、7、14、21 d采用免疫组化检测各组BrdU、巢蛋白(Nestin)表达。结果假手术组大脑皮质、海马部位有少量BrdU、Nestin阳性细胞;余四组再灌注7 d时BrdU、Nestin阳性细胞开始增多,14 d达高峰、21 d开始下降,但各时间点均显著高于假手术组(P<0.05或0.01);与模型组比较,康脑液各组BrdU阳性细胞数量在再灌注后各时间点均显著升高(P<0.05或0.01),Nestin阳性细胞数量在再灌注后7、14、21 d显著升高(P<0.05)。结论康脑液可通过上调BrdU、Nes-tin表达促进脑缺血损伤后内源性神经干细胞增殖,此为其治疗ICVD的重要机制之一。     

脑梗死后对成年小鼠室管膜下区神经发生的观察

目的 探讨脑梗死对成年小鼠室管膜下区(SVZ)神经发生的影响.方法 将48只小鼠随机分为假手术组和脑梗死组(各24只),建立局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型.采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记神经干细胞,用免疫组化法观察脑梗死后7、14、21及28 d时,损伤侧SVZ区、纹状体、皮质BrdU阳性细胞数及BrdU分别与微管相关蛋白Doublecortin(DCX)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核心抗原(NeuN)双染细胞数的变化.结果 MCAO术后7d,脑梗死组损伤侧SVZ区、纹状体、皮质BrdU阳性细胞明显增多,假手术组与脑梗死组分别为45.0±5.6和245.0±26.l、0和201.9±21.3、0和159.3±16.4,14d后开始下降(P＜0.05).脑梗死组MCAO术后7和14d,可在小鼠损伤侧SVZ区、纹状体观察到BrdU和DCX阳性细胞;术后28 d,损伤侧纹状体可见BrdU和NeuN阳性细胞,数量均显著多于假手术组(P＜0.05),BrdU和GFAP阳性细胞数差异无统计学意义.结论 脑梗死可促进成年小鼠损伤侧SVZ区、纹状体及皮质的BrdU阳性细胞数增多,并诱导SVZ区干细胞向纹状体迁移且分化为神经细胞,从而促进SVZ区的神经发生.     

骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制

目的 观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果,探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制.方法 建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组.模型制作24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU) 标记处于增殖状态的神经前体细胞,应用免疫组织化学染色检测缺血后7 d脑组织BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数.结果 脑梗死后7 d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU+NSE、BrdU+GFAP阳性细胞数开始增多,上清液高浓度组的上述阳性细胞数明显多于对照组(P<0.01)和低浓度组(P<0.05).结论 骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性神经前体细胞的增殖、分化.     

局灶性脑缺血后神经干细胞增殖及GDNF表达变化的实验研究

目的研究局灶性脑缺血后大鼠脑内神经干细胞(NSCs)增殖情况及与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化的关系。方法将24只SD大鼠随机分为假手术组和模型1组、模型2组、模型3组各6只,后三组用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备局灶性脑缺血模型,分别于术后3、7、14 d处死;假手术组除不以尼龙线阻塞大脑中动脉起始部外,其他操作与模型1组相同。采用免疫组化染色法观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的细胞及巢蛋白(Nestin)、GDNF阳性细胞表达,BrdU/Nestin免疫荧光双标法观察NSCs变化。结果模型2组损伤侧脑室下层(SVZ)BrdU阳性细胞显著多于假手术组(P<0.05),模型3组与假手术组相似;模型2、3组皮层梗死灶周围BrdU阳性细胞均显著多于假手术组(P<0.01、0.05);模型1、2组皮层梗死灶周围Nestin阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.01),BrdU/Nestin免疫荧光双标显示BrdU阳性细胞几乎均为Nestin阳性;模型2、3组皮层梗死灶周围GDNF阳性细胞均显著多于假手术组(P均<0.05)。结论大鼠局灶性脑缺血后3～14 d内源性NSCs增殖加快,GDNF表达增加可能对其起促进作用。     

骨髓基质细胞移植对局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞增殖的动态影响

目的探讨骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植对局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞增殖的动态影响。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。24只健康SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血移植组。大鼠局灶性脑缺血再灌流24 h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)标记处于增殖状态的神经前体细胞,最后一次注射后2 h处死。通过神经缺损评分观察移植后神经功能改善情况。应用免疫组织化学染色及原位细胞凋亡检测脑组织BrdU阳性及凋亡细胞。结果脑梗死后侧脑室室管膜下区、海马齿状回区及梗死灶边缘BrdU阳性细胞迅速增多(P<0.05)。移植BMSCs后BrdU阳性细胞明显多于对照组(P<0.05),随移植时间的延长,增加更趋明显。同时,BMSCs移植后大鼠神经功能得到明显康复,缺血边缘区凋亡细胞明显减少伴梗死体积缩小。结论BMSCs可促进局灶性脑缺血大鼠内源性神经前体细胞的增殖、迁移,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

脑心通对实验性脑缺血大鼠梗死体积和神经巢蛋白的影响

目的观察缺血再灌注损伤(IRI)后大鼠不同时间点梗死体积、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的阳性细胞和神经巢蛋白(Nestin)的表达,探讨脑心通对其影响。方法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定大鼠脑缺血再灌注(IR)后梗死体积;免疫组化法测定第3、7、14天和21天缺血侧BrdU标记的阳性细胞和Nestin的平均荧光强度值。结果 TTC染色发现IR后第7天大鼠脑梗死体积最大,不同剂量的脑心通实验组与模型组间差异显著(P<0.01);IR第3天,模型组、不同剂量脑心通组海马齿状回颗粒下层(SGZ)及室管膜下区(SVZ)已出现BrdU阳性细胞和Nestin表达,第7天时其平均荧光强度值最高,各组内不同时间点BrdU阳性细胞和Nestin平均荧光强度值差异显著(P<0.01);而组间比较无差异(P>0.05)。结论脑心通胶囊对减轻IR损伤后实验鼠梗死体积有一定的促进作用;但未发现脑心通胶囊对SVZ、SGZ区域BrdU阳性细胞和Nestin表达有促进作用。     

清热化瘀方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的 观察清热化瘀方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖的影响.方法 90只大鼠随机分为假手术组、模型组、清热化瘀组3组,采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,观察大鼠缺血损伤后缺血半暗带区的细胞增殖.采用免疫组化法观察脑缺血再灌注后2 d、4 d、7 d、14 d、21 d五个时间点巢蛋白(Nestin)及5-溴脱氧尿苷(BrdU)免疫活性的变化.结果 清热化瘀组大鼠在第2天、第4天、第7天的神经功能缺损评分明显优于模型组(P<0.05);模型组缺血半暗带Nestin和BrdU阳性表达分别于再灌注7 d和14 d达高峰(P<0.05),以后表达逐渐减弱;清热化瘀组可以明显增加缺血再灌注后第4天、第7天、第14天大鼠的Nestin阳性细胞表达(P<0.05);并可以明显增加缺血再灌注后第7天、第14天、第21天大鼠缺血半暗带的BrdU阳性细胞表达(P<0.05).结论 脑缺血损伤可激活神经干细胞,促使其增殖和表达.清热化瘀方可以促进MCAO大鼠缺血半暗带神经干细胞的增殖.     

缺血缺氧性脑损伤对新生鼠脑内神经干细胞的影响

目的观察新生鼠缺血缺氧性损伤后皮层及海马神经干细胞的变化。方法采用新生7d龄SD大鼠制作新生鼠缺血缺氧性脑病模型（HIE），行免疫组化染色，巢蛋白（Nestin）标记神经干细胞。结果正常SD大鼠新生早期的皮层及海马存在一定数量的Nestin阳性细胞，随年龄增加而减少；缺血缺氧后．新生SD大鼠皮层损伤区及其周围、对侧镜区和双侧海马都出现Nestin阳性细胞增多，并以病灶边缘曼加突出，在皮层伤后3d即出现高峰，而海马的高峰期在伤后7d，然后都逐渐减少，至伤后28d均与正常组无差别。结论缺血缺氧能促使新生SD大鼠皮层及海马的神经干细胞增多。     

丹参注射液对脑梗死大鼠双侧脑室室管膜下区神经干细胞分化作用的影响

目的观察丹参注射液对脑梗死大鼠双侧脑室室管膜下区(SVZ)内神经干细胞(NSCs)分化作用的影响。方法成功制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分为丹参注射液组、生理盐水组,每组12只,每组再分为治疗7 d、14 d两个亚组。治疗前和治疗后7 d、14 d采用改良神经功能损害评分(mNSS)评定各组大鼠神经功能,另随机选取12只SD大鼠为假手术组。以免疫荧光染色法检测SVZ内溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/神经特异核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)/NeuN双标阳性细胞。结果治疗7 d和14 d后,丹参注射液组mNSS评分较生理盐水组下降,差异有统计学意义(P0.05);各时间点丹参注射液组双侧SVZ内BrdU/NeuN双标阳性细胞较其他两组增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论丹参注射液能够促进NSCs向神经元分化及改善神经功能,对脑梗死后神经重塑发挥了积极作用。     

人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血后侧脑室下区神经干细胞增殖分化的影响

目的观察人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血后侧脑室下区神经干细胞增殖分化的影响,探讨其促进神经发生的作用。方法将60只Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯缺血组及人参皂甙Rg1治疗组。用Longa线栓法制作成年大鼠大脑中动脉闭塞模型。腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,用免疫单标及双标免疫荧光技术观察人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血后侧脑室下区BrdU免疫活性及BrdU/神经元特异性烯醇化酶和BrdU/胶质纤维酸性蛋白双标免疫活性的影响,并计数作定量分析。结果脑缺血后侧脑室下区存在BrdU阳性细胞分布;应用人参皂甙Rg1后,上述部位及周边脑区BrdU阳性细胞数及双标阳性细胞明显增多(P<0.01)。结论人参皂甙Rg1能诱导侧脑室下区神经干细胞增殖、分化,提示其具有促进神经发生的能力。     

脑梗死后神经干细胞的活化和移植

脑梗死后,缺血核心神经细胞的死亡不可避免。成年哺乳动物脑室下层(SVZ)和海马齿状回颗粒下层(SGZ)等保持着神经发生。脑梗死可促进神经发生。存在于这些部位的神经干细胞(NSC)具有自我更新和多向分化潜能。近年来,NSC的激活和向梗死灶周围迁移等机制逐渐为人们所认识,采取适当的措施激活脑内自然的神经发生、移植外源性NSC治疗脑梗死的研究,给脑梗死后缺损组织结构和功能的修复带来了希望。     

Regulation of neural stem cell in the human SVZ by trophic and morphogenic factors

The subventricular zone (SVZ), lining the lateral ventricular system, is the largest germinal region in mammals. In there, neural stem cells express markers related to astoglial lineage that give rise to new neurons and oligodendrocytes in vivo. In the adult human brain, in vitro evidence has also shown that astrocytic cells isolated from the SVZ can generate new neurons and oligodendrocytes. These proliferative cells are strongly controlled by a number of signals and molecules that modulate, activate or repress the cell division, renewal, proliferation and fate of neural stem cells. In this review, we summarize the cellular composition of the adult human SVZ (hSVZ) and discuss the increasing evidence showing that some trophic modulators strongly control the function of neural stem cells in the SVZ.     

Growth hormone receptor immunoreactivity is increased in the subventricular zone of juvenile rat brain after focal ischemia: A potential role for growth hormone in injury-induced neurogenesis

BackgroundDuring recovery from an ischemic brain injury, a cerebral growth hormone (GH) axis is activated. Whilst GH has been demonstrated to be neuroprotective both in vitro and in vivo, a role for GH in neuro-restorative processes after brain injury has yet to be studied.ObjectiveTo explore a role for GH in injury-induced neurogenesis by examining GH receptor (GH-R) immunoreactivity within the subventricular zone (SVZ) of juvenile rats after brain injury and by testing the proliferative capacity of GH on embryonic mouse neural stem cells.DesignTwenty-one day old rats were subjected to unilateral hypoxic-ischemia of the brain and sacrificed 1–15 days later. Coronal brain sections from these animals and age-matched naïve controls were immunostained for GH-R and cell markers of neurogenesis. The level of GH-R immunoreactivity in the ipsilateral and contralateral SVZ of each animal was semi-quantified both by independent blinded scoring by two examiners and blinded image analysis. To examine the effect of GH on proliferation of embryonic mouse neural stem cells, cells were treated with increasing concentrations of rat pituitary GH for 48 h in the presence of 5′-bromo-2′-deoxyuridine.ResultsThe level of GH-R immunoreactivity in the ipsilateral SVZ was significantly increased 5 days after injury vs. the contralateral SVZ, coinciding both spatially and temporally with injury-induced neurogenesis. The population of GH-R immunopositive cells in the ipsilateral SVZ at this time was found to include proliferating cells (Ki67 immunopositive), neural progenitor cells (nestin immunopositive) and post-proliferative migratory neuroblasts (doublecortin immunopositive). Stimulation of embryonic mouse NSCs with physiological concentrations of rat pituitary GH elicited a dose-dependent proliferative response.ConclusionThese results indicate a novel role for GH and its receptor in injury-induced neurogenesis, and suggest that GH treatment may potentiate endogenous neuro-restorative processes after brain injury.     

脑淋巴引流阻断对大鼠蛛网膜下腔出血后神经干细胞增殖、分化和可塑性的影响

目的 探讨脑淋巴引流途径对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经干细胞增殖、分化和可塑性的影响.方法 采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立成年大鼠SAH模型,用颈淋巴管结扎和颈淋巴结摘除法制作大鼠脑淋巴引流阻断(cerebral lymphatic blockade,CLB)模型.30只大鼠随机分为正常对照组、SAH组和SAH+CLB组(n=10),各组再分为3 d和14 d组(n=5).应用5-溴脱氧脲嘧啶(5-bromodeoxytridine,BrdU)标记增殖的神经干细胞,免疫荧光双重染色检测大鼠皮质、海马和室下区BrdU~+/胶质纤维酸性蛋白(gtial fibrillary acidic protein,GFAP)~+、神经源性分化蛋白(neurogenic differemiation,NeuroD)~+、多聚唾液酸-神经细胞黏附因子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,PSA-NCAM)~+细胞,应用激光共聚焦显微镜观察并计数.结果 与正常对照组比较,SAH组BrdU~+细胞、NeuroD~+/BrdU~+细胞、GFAP~+/BrdU~+细胞以及PSA-NCAM~+/BrdU~+细胞均有不同程度增加(P<0.05或0.01);与SAH组相比,SAH+CLB组BrdU~+细胞、GFAP~+/BrdU~+细胞有所增加(P<0.05或0.01),而NeuroD~+/BrdU~+细胞、PSA-NCAM~+/BrdU~+细胞显著减少(P<0.05或0.01).结论 脑淋巴引流阻断可促进神经干细胞增殖,但不利于神经干细胞向神经元方向分化和可塑性.     

经鼻给予碱性成纤维细胞生长因子治疗大鼠脑梗死的研究

目的探讨经鼻给予碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对脑梗死大鼠内源性神经干细胞再生的影响。方法取成年雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组（n=12）、对照组（n=12）、bFGF组（n=12）。对照组和bFGF组大鼠采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血-再灌注模型,术后第1-6天,分别经鼻给予等渗盐水（30μl）或bFGF（每天30μg,30μl）。在术前及术后第1、7、14、21、28天对脑梗死后大鼠神经功能恢复的程度进行改良神经功能缺损评分（mNSS）。采用苏木素染色法测定脑梗死大鼠在术后第7、28天的脑梗死体积;采用免疫组化法测定术后第7和28天缺血侧室管膜下区（SVZ）及纹状体5-溴脱氧尿核苷（BrdU）阳性细胞数;激光共聚焦观察第7天时BrdU与doublecortin（DCX）的免疫荧光双标染色情况。结果与对照组相比,bFGF组从术后第7天开始,大鼠神经功能就显著恢复,术后第1、7、14、21、28天,对照组mNSS评分分别为8.7±1.0、7.2±0.8、6.7±1.0、6.2±0.8、5.8±1.2;bFGF组分别为8.8±0.8、6.2±0.8、5.3±0.8、5.0±0.6、4.3±0.8。两组间各时间点相比,P值分别为0.756、0.044、0.033、0.016、0.028,显示了其明显的正性干预作用。而对照组与bFGF组大鼠的脑梗死体积差异无显著性。假手术组大鼠无梗死灶。BrdU免疫组化显示,术后第7和28天,经鼻给予bFGF组大鼠在SVZ和纹状体区域BrdU阳性细胞数与对照组相比均显著增高,第7天时,SVZ的大部分BrdU阳性细胞共标不成熟神经元标记物——DCX。假手术组大鼠无明显神经功能缺损症状。结论经鼻给予bFGF,能够诱导脑梗死大鼠内源性神经干细胞的增殖和存活,促进神经功能的恢复。经鼻腔给予bFGF是一种有前途的治疗脑梗死的方法。     

Role of fibroblast growth factor receptors in astrocytic stem cells

There are two well-defined neurogenic regions in the adult brain, the subventricular zone (SVZ) lining the lateral wall of the lateral ventricles and, the subgranular zone (SGZ) in the dentate gyrus at the hippocampus. Within these neurogenic regions, there are neural stem cells with astrocytic characteristics, which actively respond to the basic fibroblast growth factor (bFGF, FGF2 or FGF-β) by increasing their proliferation, survival and differentiation, both in vivo and in vitro. FGF2 binds to fibroblast growth factor receptors 1 to 4 (FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4). Interestingly, these receptors are differentially expressed in neurogenic progenitors. During development, FGFR-1 and FGFR-2 drive oligodendrocytes and motor neuron specification. In particular, FGFR-1 determines oligodendroglial and neuronal cell fate, whereas FGFR-2 is related to oligodendrocyte specification. In the adult SVZ, FGF-2 promotes oligodendrogliogenesis and myelination. FGF-2 deficient mice show a reduction in the number of new neurons in the SGZ, which suggests that FGFR-1 is important for neuronal cell fate in the adult hippocampus. In human brain, FGF-2 appears to be an important component in the anti-depressive effect of drugs. In summary, FGF2 is an important modulator of the cell fate of neural precursor and, promotes oligodendrogenesis. In this review, we describe the expression pattern of FGFR2 and its role in neural precursors derived from the SVZ and the SGZ.