神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用

目的 研究神经酰胺在γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用。方法 用秸核杆菌耐热性多肽抗原（Mtb)刺激正常人PBMC，并用磁珠阳性分选法获得γδ^ T细胞。通过MTT试验观察Mtb，神经酰胺、鞘磷酯脂以及F B1cf γδ^ T细胞的活化作用；FACS检测其对γδ^ T细胞活化诱导的细胞死亡作用。结果 Mtb刺获得的γδ^ T细胞可达73％，磁珠分选后可高达98％；高浓度Mtb，神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδ^ T细胞的活化增殖，而出现活化诱导的细胞死亡，Fumonisin B1则对γδ^ T细胞的活化增殖及活化细胞死亡无明显影响。结论 Mtb可有效地调节γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡，水解鞘磷脂产生的神经酰胺参与了γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡传导。     

神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原诱导的γδT细胞活化及凋亡作用

目的：研究神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）诱导的γδＴ细胞活化及凋亡作用。方法：用结核杆菌低分子多肽抗原刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδＴ细胞。通过ＭＴＴ试验观察神经酰胺、鞘磷脂酰以及神经酰胺合成酶抑制剂ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１对γδＴ细胞的活化作用；ＦＡＣＳ检测其对γδＴ细胞的亡作用。结果：Ｍｔｂ刺激获得的γδＴ细胞可达７３％。磁珠分选后可高达９８％；高浓度神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδＴ细胞的增殖。而出现凋亡，ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１则对γδＴ细胞的增殖及凋亡无明显影响。结论：鞘磷脂水解产生的社经酰胺对γδＴ细胞的有致凋亡作用。     

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ+T细胞的细胞毒活性研究

目的探讨选择性扩增人γδ+T细胞的方法及其细胞毒活性.方法用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ+T细胞,通过MTT试验观察γδ+T细胞对人红白细胞白血病细胞株K562的细胞毒活性.结果 Mtb刺激及磁珠分选后的γδ+T细胞可达73%和98%,效靶细胞比例为10:1时其对K562细胞的杀伤率分别为59%和78.5%.结论 Mtb刺激及磁珠分选所获得的高纯度γδ+T细胞可介导对K562细胞的高效细胞毒活性.     

结核杆菌抗原活化的γδT细胞中ZAP-70的酪氨酸磷酸化特点

目的　观察结核杆菌抗原 (Mtb Ag)活化的γδT细胞信号转导分子ZAP 70酪氨酸磷酸化的特点。方法　用Mtb Ag和抗CD3单克隆抗体 (CD3McAb)体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC) ,诱导活化 ,在含IL 2的培养液中扩增培养 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (MtbAT)和CD3McAb激活的T细胞 (CD3AT)。再分别用Mtb Ag和CD3McAb刺激 ,在不同时间内提取细胞裂解液 ,用抗 酪氨酸磷酸化蛋白抗体作免疫沉淀 ,用抗ZAP 70单克隆抗体进行免疫印迹。结果　MtbAT中γδT细胞可达 6 0 %～ 80 % ,CD3AT中CD3 细胞可达 90 %以上 ,而γδT细胞 <10 % ;MtbAT细胞用Mtb Ag再刺激后 15min时出现ZAP 70的酪氨酸磷酸化 ,30min达高峰 ,可持续到 6 0～ 12 0min ,而CD3AT用CD3McAb再刺激后仅在 5min时检测到ZAP 70的磷酸化。结论　与CD3McAb对普通T细胞的作用比较 ,Mtb Ag刺激可优先活化γδT细胞 ,其对γδT细胞ZAP 70活化的特点是 :较慢、较强、较持久     

Mtb-Ag活化γδT细胞的扩增及对γδT细胞CD69分子表达的影响

目的 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)激活和扩增γδT细胞,观察γδT细胞表面CD69分子表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用Mtb-Ag刺激PBMC,所得细胞用磁珠阳性分选,通过荧光单抗TCR γδPE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例.用γδPE/CD69FITC细胞双染检测初次刺激和再次刺激γδT细胞CD69分子的表达情况.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为(4.9±1.85)％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为(69.2±6.57)％,免疫磁珠阳性分选后达(99.3±8.92)％.Mtb-Ag初次刺激γδT细胞,CD69分子的表达24 h达高峰,为75.2％;Mtb-Ag再次刺激γδT细胞,CD69分子的表达6h达高峰,为72％.结论 Mtb-Ag能特异地刺激PBMC中的γδT细胞增殖,Mtb-Ag初次和再次刺激均可特异性活化γδT细胞.     

4-1BB在人外周血γδT细胞活化中的协同刺激作用

采用结核杆菌(Mtb)低分子多肽刺激人外周血单个核细胞,流式细胞术(FCM)检测不同活化时相γδT细胞膜表面4-1BB分子的表达;用阻断型4-1BB配体(4-1BBL)单抗阻断4-1BB/4-1BBL信号,FCM检测γδT细胞的增殖比率和细胞内产生IFN-γ的情况,同时与阻断CD28/B7-1信号相比较。结果显示,静止的γδT细胞膜表面不表达4-1BB分子,Mtb抗原刺激后6 h,4-1BB即有明显表达(29.71%),48 h达到高峰(49.79%);与未阻断组相比,阻断4-1BB/4-1BBL信号,γδT细胞的增殖效应和细胞内IFN-γ的产生均明显下降(P<0.01),与CD28/B7-1信号阻断组相比,差异无显著性(P>0.05)。提示4-1BB/4-1BBL信号同CD28/B7-1信号一样,可为γδT细胞活化提供协同刺激作用。     

γδT细胞的扩增及其信号转导分子ζ链相关蛋白-70的免疫印迹检测

目的 检测人外周血γδT细胞的信号转导分子ζ链相关蛋白-70 （ZAP-70）的表达.方法 应用淋巴细胞分离液常规分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）刺激PBMC增殖培养,10d后收集细胞,用免疫磁珠阳性分选法分离获取高纯度的γδT细胞;采用免疫印迹方法检测γδT细胞内的ZAP-70分子.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为4.9％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为69.2％,免疫磁珠阳性分选后达99.3％.免疫印迹显示检测到γδT细胞内相对分子质量为70 000的ZAP-70分子的表达.结论 ZAP-70分子在活化增殖的人外周血γδT细胞内高表达.     

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的探讨Ras/Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径.方法分离获取PBMC,用佛波醇酯(PMA)和离子霉素(IM),CD3mAb或Mtb-Ag刺激不同时间,或PBMC先经PD98059处理后再刺激培养;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD69分子的表达;计数培养扩增10天的细胞数量.结果PBMC用PMA+IM刺激6小时,总T细胞和γδT细胞中的CD69表达均达高峰(均＞99%),用CD3mAb刺激24小时,均达高峰(均在55%左右),用Mtb-Ag刺激24小时,亦均达高峰,但总T细胞和γδT细胞中CD69分别为16.0%和75.2%;用PD98059预处理PBMC,可明显抑制Mtb-Ag激活的γδT细胞CD69表达和γδT细胞的增殖.结论Mtb-Ag可特异性激活γδT细胞,其活化信号转导需通过Ras/Erk通路.     

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ＋T细胞的细 …

目的 探讨选择性扩增人γδ＋Ｔ细胞的方法及其细胞毒性。方法 用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ＋Ｔ细胞，通过ＭＴＴ试验观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞观察γδ＋Ｔ细胞对人红白细胞白血病细胞株Ｋ５６２的细胞毒活性。结果 Ｍｔｂ刺激及磁珠分选后的γδ＋Ｔ细胞可达７３％和９８％。效靶细胞比例为１０：１时其对Ｋ５６２细胞的杀     

p38及PI3K在结核杆菌抗原再刺激诱导人γδT细胞凋亡信号转导中的作用

目的：建立结核杆菌抗原（Mtb-Ag）再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；应用信号分子阻断剂观察p38及PI3K信号传导途径在Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡中的作用。方法：用3种浓度Mtb-Ag分别再刺激培养15～25天的Mtb-Ag激活的人T细胞（MtbAT）24小时后，应用Annexin-V-FITC／PI染色流式细胞术（FCM）检测γδT细胞凋亡；用Mtb-Ag（10．0μg／ml）分别再刺激MtbAT3、6、12和24小时后，观察γδT细胞凋亡情况；预先用SB203580（p38途径抑制剂）及LY294002（PI3K途径抑制剂）分别处理MtbAT60分钟，观察Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激3小时后γδT细胞凋亡情况。结果：与对照组相比，10．0和20．0μg／ml MtbAg均显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例分别增加35．63％及38．83％，且此二种浓度MtbAg在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05）；与对照组相比，10．0μg/ml Mtb-Ag再刺激MtbAT3、6、12和24小时均可显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例在44．21％～51．76％之间；且Mtb-Ag再刺激MtbAT3小时实验组与再刺激MtbAT 24小时实验组相比，在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05），后者的凋亡细胞比例仅比前者增加7．55％；Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡可被SB203580（80．0μmol／L）及LY294002（10．0μmol／L）抑制，凋亡抑制率分别为91．6％及43．1％。结论：采用Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激活化的γδT细胞3小时的方法，可建立Mtb-Ag再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；信号分子阻断剂的实验证明，p38途径及PI3K途径均参与了Mtb-Ag再刺激已活化γδT细胞凋亡过程。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.

     

Aspects of the problem of direct introduction of Standards of International Organizations

Editorial note. This article is published as part of a discussion. Particular issues of the article are disputable. First of all, this concerns the so-called “folder” method of introduction of international standards for medical devices to domestic medical practice (i.e., by direct translation of the standards and their publication as standardizing documents). Nevertheless, at least one of the problems, the problem of coordination between domestic state standards for medical devices and international recommendations of ISO and IEC, is undoubtedly of topical importance. Advancement of new health service legislation which is to be approved by law-makers will definitely introduce corrections into the present situation. The Editorial Board of Meditsinskaya Tekhnika believes this article will lessen these problems and to be welcomed by readers.