福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的观察福辛普利（FOS）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3—10代用于实验。实验分为五组：对照组、LPS刺激组（LPS组）、福辛普利（FOS）高、中、低剂量组（分别为FOS1组、FOS2组、FOS3组）。甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定24h和48h两个时间点各组细胞增殖,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定6h、12h和24h细胞培养上清液中ECM蛋白含量;荧光半定量RT-PCR法检测ECM纤维连接蛋白（LN）β2mRNA表达的变化。结果（1）LPS可诱导GMC增殖,FOS可抑制LPS诱导的GMC增殖;（2）正常培养的大鼠GMC可分泌一定量的ECM,LPS组在各时间点分泌ECM均高于对照组（P〈0．01）,而FOS各组分泌ECM均低于LPS组（P〈0．01）;（3）正常培养的大鼠GMC可表达一定量LNβ2 mRNA,LPS组在各时间点LNβ2mRNA表达量均高于对照组,FOS各组表达量均低于LPS组。结论LPS可诱导GMC增殖且分泌ECM增加,FOS可抑制LPS诱导的GMC增殖,从蛋白和mRNA两个水平抑制LPS诱导的GMC分泌ECM增加,为FOS对肾脏的保护作用提供了理论依据。     

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成的影响

目的：结缔组织生长因子（CTGF）是一种重要的参与肾纤维化的细胞因子，为了进一步阐明外源性CTGF的作用机制，该文探讨了外源性CTGF对人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ合成中的作用。方法：将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2 分为3组：①对照组；②CTGF小剂量组（终浓度为2.5 ng/mL）；③CTGF大剂量组（终浓度为20 ng/mL）。用倒置显微镜观察细胞形态变化，RT-PCR检测HK2细胞胶原Ⅲα mRNA水平的变化，免疫组织化学方法观察HK2 细胞胶原Ⅲα的表达。结果：不同浓度的CTGF作用于HK2 细胞48 h后，均可使HK2 细胞由椭圆形变为梭形。大剂量CTGF刺激HK2 细胞48 h后胶原Ⅲα mRNA水平显著升高（P<0.05），大剂量CTGF组HK2 细胞胞浆表达胶原Ⅲα也显著增加（P<0.05）。结论：CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞发生形态改变，大剂量的CTGF刺激可以增加人肾小管上皮细胞胶原Ⅲ的合成。     

促血小板生成素在小胶质细胞炎症模型中的表达与信号通路研究

目的：初步探讨促血小板生成素（thrombopoietin, TPO）在脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导小胶质细胞炎症模型中的信号转导通路。方法：以0.5和1.0 μg/mL浓度的LPS刺激体外培养小鼠小胶质细胞（BV2细胞）建立炎症模型,采用实时荧光定量PCR法检测细胞内TPO及ERK mRNA水平;Western blot法检测TPO及ERK 蛋白水平;使用ELISA方法测定细胞培养液中IL-6和TPO的含量。结果：LPS干预后能显著增加BV2细胞内TPO及ERK mRNA和蛋白水平的表达,尤其以浓度为1.0 μg/mL的LPS干预12 h 时,二者的表达水平达到最高峰;且二者的表达呈显著正相关。结论：ERK1/2信号转导通路参与了BV2细胞炎症损伤中的TPO的活化作用。     

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目的 研究白三烯D4是否参与调节支气管上皮细胞表达嗜酸性粒细胞趋化因子-3(eotaxin-3,Eot-3),探讨白三烯和支气管上皮细胞在气道变态反应性炎症中的作用.方法 用白三烯D4预处理支气管上皮细胞1h,然后用白细胞介素-4(IL-4)刺激细胞24h,RT-PCR法检测Eot-3在mRNA水平的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Eot-3蛋白的表达.结果 未经处理的支气管上皮细胞仅表达微量的Eot-3,用IL-4刺激细胞并培养24h后,在mRAN和蛋白水平的Eot-3表达明显增强,白三烯D4预处理细胞1h,可以使IL-4的这种诱导作用加强.结论 支气管上皮细胞不仅是一种屏障细胞,也是一种效应细胞,在炎症介质的刺激下能表达Eot-3,参与支气管炎症的产生.白三烯D4通过上调IL-4诱导Eot-3在上皮细胞的表达可能是其参与支气管哮喘嗜酸性粒细胞炎症的机制之一.     

系膜细胞来源的白细胞介素-13对系膜细胞细胞因子基因表达的研究(英文)

目的　白细胞介素 1 3(IL 1 3)是新近发现的一种抗炎性细胞因子 ,其在肾小球肾炎中的作用尚不清楚 ,该研究探讨脂多糖 (LPS)对体外培养的人肾小球系膜细胞 (HMC)表达IL 1 3作用以及IL 1 3对HMC促炎性细胞因子、趋化因子和促纤维化因子基因表达的影响。方法　体外培养HMC ,加入不同浓度的LPS和 (或 )IL 1 3后 ,用逆转录 -聚合酶链反应和ELISA检测HMCIL 1 3mRNA表达和细胞培养上清液中IL 1 3蛋白含量 ;应用核酸酶保护法检测HMC肿瘤坏死因子 α(TNF α)、白介素 - 1α(IL 1α)、白介素 - 1 β(IL 1 β)、单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1 )、白介素 8(IL 8)、转化生长因子 - β1 (TGF β1 )mRNA的表达。 结果　未予LPS刺激的HMC不表达IL 1 3mRNA和蛋白 ;LPS呈剂量依赖性和时间依赖性诱导HMC表达IL 1 3mRNA和分泌IL 1 3蛋白。HMC受LPS刺激后 1 2h即可表达IL 1 3mRNA ,4 8h达高峰 ,72h仍维持在较高的水平。HMC受LPS刺激后 2 4h ,其培养上清液中检测到IL 1 3蛋白 ,4 8h和 72h进一步增加。外源性IL 1 3呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的系膜细胞TNF α ,IL 1α ,IL 1 β ,MCP 1 ,IL 8,TGF β1mRNA的表达。应用抗IL 1 3抗体中和内源性IL 1 3后 ,上述炎症因子表达增强。结论　IL 1 3是HMC自分泌因子。IL 1 3可抑制LPS诱导     

二烯丙基二硫诱导人白血病K562细胞凋亡及其对Fas、FasL及caspase-8表达的影响

目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）诱导白血病 K562 细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用 Hoechst 33258 染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术分析不同浓度及不同作用时间 DADS 对 K562 细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR法检测DADS作用48 h后 Fas、FasL、caspase-8 mRNA的表达。结果：DADS可诱导K562 细胞凋亡。DADS(作用细胞24 h)浓度从10 mg/L增至40 mg/L时,其对K562细胞的凋亡率由（11.60±0.83）%增至（37.94±0.87）%;DADS(40 mg/L浓度组)作用时间从24 h增至72 h,其对K562细胞的凋亡率由（37.94±0.87）% 增至（47.02±0.66）%,各实验组随时间、浓度增加凋亡率明显增加 (P<0.05)。DADS作用48 h后,Fas、caspase-8 mRNA 表达水平较对照组上调;FasL mRNA 较对照组下调（P＜0.05）。结论：DADS 呈时间和浓度依赖性诱导白血病K562 细胞凋亡,其凋亡机制可能与上调 Fas、caspase-8,下调 FasL有关。     

甲状腺激素T3诱导K562细胞铁蛋白表达与细胞凋亡和生长的关系

目的：探讨甲状腺激素T3对K562细胞铁蛋白表达及其对细胞凋亡和增殖的影响。方法：收集各组细胞胞浆蛋白，用放射免疫法检测铁蛋白含量，并和流细胞术分析各组细胞凋亡百分率及细胞周期变化。结果：中等浓度及高浓度的T3均能增加K562细胞铁蛋白表达。与空白对照相比有显著性差异（P＜0．05），且随T3浓度增加，铁蛋白的表达亦增高。同一浓度T3与K562细胞共培养，随时间延长，铁蛋白表达增加，与空白对照相比具有显著性差异（P＜0．01）。24h培养组细胞凋亡率较空白对照略有下降，差异有统计学意义，72h培养组T3＝200nM时凋亡百分率明显下降。T3各处理组中S＋G2期细胞比例较空白对照组明显减少（P＜0．01），且72h各组G2＋S细胞百分率较24h明显下降。结论：甲状腺激素T3能诱导K562细胞铁蛋白表达增加，且能干预细胞凋亡和细胞增殖周期。     

PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响

目的 探讨PR-957对A1反应性星形胶质细胞形成的影响。方法 取出生1 d内的雌性大鼠脑皮质培养出原代星形胶质细胞,将细胞分为对照组、LPS组及LPS+PR-957组。LPS组给予5 μmol/L LPS处理48 h,LPS+PR-957组先用PR-957（终浓度200 nmol/L）处理1 h,再用5 μmol/L LPS处理48 h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测补体3（C3,A1反应性星形胶质细胞标记物）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）;采用实时荧光定量PCR法检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖6（glypicans 6,Gpc6）、SPARC样1（SPARC-like 1,Sparcl1）和脂质运载蛋白2（lipocalin 2,lcn2）mRNA的相对表达量。上述各实验均独立重复3次。结果 对照组几乎不表达C3,LPS组与LPS+PR-957组C3水平高于对照组,但LPS+PR-957组的C3水平低于LPS组（P < 0.05）。TNF-α的表达结果与C3一致。与对照组相比,LPS组和LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均降低,lcn2 mRNA表达水平均升高（P < 0.001）;与LPS组相比,LPS+PR-957组的Gpc6 mRNA及Sparcl1 mRNA表达水平均升高,lcn2 mRNA表达水平降低（P < 0.001）。结论 LPS能够诱导星形胶质细胞成为A1反应性星形胶质细胞;PR-957可以抑制LPS诱导的A1反应性星形胶质细胞形成。     

香菇多糖对白介素-1β诱导人胚肺成纤维细胞表型转化的影响

目的：研究白介素-1β（IL-1β）对人胚肺成纤维细胞(FB)向肺肌成纤维细胞转化的影响及香菇多糖（LNT）的作用。方法：体外培养人胚肺FB,用不同浓度IL-1β和LNT作用于细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖情况,免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,RT-PCR检测纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）和α-SAM mRNA的相对表达量。结果：①IL-1β组细胞增殖的吸光度、α-SMA蛋白及FN、ColⅠ和α-SAM mRNA表达均高于对照组（P<0.01）,且随着IL-1β浓度的增加,表达逐渐增高。②LNT呈浓度依赖性抑制IL-1β诱导的细胞增殖及α-SMA蛋白、FN、ColⅠ和α-SAM mRNA表达（P<0.01）。结论：LNT可抑制IL-1β诱导人胚肺FB增殖和肌成纤维细胞转化及细胞外基质积聚。     

拓扑替康对HPB-AM细胞MAGE基因表达的影响

目的：探讨抗肿瘤新药拓扑替康（TPT）对T细胞淋巴瘤系HPB-AM细胞株黑色素病抗原（MAGE）基因表达的影响。方法：以T细胞淋巴瘤系HPB-AM细胞株为研究对象,采用RT-PCR方法检测TPT作用不同时间、不同浓度时对HPB-AM细胞株MAGE基因表达的影响。结果：以0.05 μmol/L, 0.10 μmol/L, 0.15 μmol/L和0.20 μmol/L终浓度的TPT作用于HPB-AM细胞,作用12 h后检测MAGE mRNA,随着TPT浓度的增加,MAGE-3 mRNA和MAGE-4 mRNA的表达水平均明显下调,实验组与空白对照组相对表达量比较,在浓度为0.10,0.15和0.20 μmol/L的TPT作用后差异具有显著性意义(P<0.05)。用浓度0.10 μmol/L的TPT作用于HPB-AM细胞系,作用4,8,12,16 h后检测MAGE mRNA,随着TPT作用时间增长,MAGE-3 mRNA和MAGE-4 mRNA的表达水平明显下调。作用12 h和16 h后,实验组与空白对照组相对表达量比较差异具有显著性意义(P<0.05)。结论：拓扑替康能抑制HPB-AM细胞中MAGE mRNA的表达,且呈剂量和时间依赖性。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：679-682］     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG-132对人红白血病细胞株K562的致凋亡作用及其对凋亡相关基因NF-κB与caspase-3表达的影响。方法：将蛋白酶体通路特异性阻断剂 MG-132 加入K562细胞,用AO/EB细胞形态和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,逆转录-PCR检测NF-κB的转录水平,免疫组化法检测NF-κB与caspase-3的表达,比色法检测caspase-3活性。结果：流式细胞仪检测15 μmol/ L MG-132作用24 h后,凋亡率为(26.5±0.6)％,与对照组(1.2±0.1)％相比明显增多,差异有显著性(P<0．01),MG-132诱导K562细胞凋亡具有量-效关系; RT-PCR检测发现NF-κB mRNA表达下调;免疫组化法检测发现MG-132可降低 NF-κB的表达,增加caspase-3蛋白的表达, 且表达量与MG-132的作用呈剂量相关。结论：MG-132能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与MG-132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而上调caspase-3表达有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：255-258］     

双歧杆菌对内毒素损伤幼年大鼠肠道血管内皮细胞粘附分子－1的影响

目的：双歧杆菌是肠黏膜屏障中生物屏障的主要成分,参与了宿主的消化、营养、代谢、吸收、免疫及抗感染过程,然而其具体的作用机制目前还不清楚。该研究欲探讨双歧杆菌对内毒素损伤幼年大鼠血清和回肠组织的丙二醛（MDA）含量和小肠绒毛间质血管内皮细胞粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法：腹腔注射内毒素制造内毒素损伤动物模型（模型组,E组）,治疗组（T组）提前7 d给予双歧杆菌灌胃,同时设对照组（C组,腹腔注射生理盐水）,于不同时间点处死后检测血清和肠组织中MDA的含量,并用免疫组织化学和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小肠组织ICAM-1蛋白质和核酸水平的变化。结果：E组血清和小肠MDA含量较对照组增加,以6 h增加明显（肠组织：99.88±12.62 nmol/mg prot vs 84.25±12.96 nmol/mg prot,P<0.05;血清：1.67±0.30 nmol/mL vs 1.13±0.20 nmol/mL,P<0.05）;T组MDA含量（6 h：肠组织92.75±9.28 nmol/mg prot;血清1.17±0.23 nmol/mL）较E组下降;E组小肠组织ICAM-1蛋白质和核酸表达增加,分别以6 h和2 h为著,T组改变低于E组（P<0.05）。 结论：内毒素损伤幼鼠血清和小肠MDA含量增加,同时ICAM-1蛋白质和mRNA表达增加,外源性给予双歧杆菌能降低内毒素组MDA和ICAM-1的增加,表明双歧杆菌能通过抑制大鼠体内的MDA含量和ICAM-1的表达而起到一定的肠道保护作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：375-378］     

脑白质损伤新生大鼠脑白质P75NTR蛋白与RhoA mRNA的表达及意义

目的：最近研究发现NgR-P75NTR- RhoA信号通路在神经损伤和重塑方面发挥关键作用,但其确切传导机制及在缺氧缺血后新生动物P75NTR对下游分子RhoA调控变化尚不清楚。该实验在建立新生大鼠缺氧缺血性脑白质损伤(WMD)模型基础上,观察WMD新生大鼠脑白质P75NTR和RhoA mRNA表达变化, 探讨WMD时两者的关系及意义,为临床治疗早产儿WMD提供新思路和实验依据。方法：制备新生大鼠WMD模型,光镜及电镜观察脑组织形态学改变。应用免疫组织化学方法及荧光定量RT-PCR检测对照组及WMD 12,24,48,72 h和7 d组病变侧脑白质P75NTR蛋白及RhoA mRNA表达变化。结果：光镜和电镜形态学发现WMD组缺氧缺血48 h后即有显著的脑室周围脑白质损伤。WMD组大鼠纹状体和胼胝体P75NTR蛋白水平12 h开始升高,48 h达峰值,至72 h略有下降,与对照组比较差异有显著性,均P<0.01,之后下降明显,第7天与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。WMD组大鼠脑白质RhoA mRNA 表达12 h开始升高,48 h达到峰值,与对照组比较,差异有显著性,均P<0.05。72 h仍高于对照组水平,之后开始下降,第7天与对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：WMD新生大鼠脑白质中P75NTR蛋白水平呈现先上升后下降的趋势。其升高与介导神经细胞凋亡和抑制神经轴突再生可能有关,表达下降则与缺氧缺血性损伤加重神经细胞坏死相关。RhoA mRNA的表达变化趋势与P75NTR一致,提示P75NTR水平升高可促使RhoA mRNA高表达。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：317-320］     

秋水仙碱对成纤维细胞产生细胞因子以及分泌细胞外基质的影响

目的　阐明秋水仙碱对体外培养人肾脏成纤维细胞 (FB)产生炎症因子转化生长因子 β1(TGF β1)、白细胞介素 1β(IL 1β)以及细胞外基质的影响。 方法　体外培养人胚胎肾脏FB ,经不同浓度秋水仙碱 ( 5 0 μmol/L、10 0 μmol/L、2 0 0 μmol/L、4 0 0 μmol/L)预处理 1h后 ,加入含 10 0μg/ml脂多糖 (LPS)的FB完全培养液继续培养 18h ,以未经LPS刺激也无秋水仙碱预处理的FB细胞为对照。实验终点收集细胞和上清。分别利用RT PCR方法观察秋水仙碱对FB产生TGF β1和IL 1βmRNA表达的影响 ;ELISA法测定细胞上清TGF β1、IL 1β以及胶原COLⅢ、COLⅣ蛋白含量。结果　 ( 1)单纯 10 0 μg/mlLPS刺激后 ,FB产生TGF β1和IL 1βmRNA分别较未经刺激的正常对照组上调 3倍 (RI值分别为 6 6 1± 1 6、2 2 3± 2 0 ,q =5 90 5 ,P =0 0 0 2 )和 4 7倍 (RI值分别为2 2 0± 2 2、4 7± 0 8,q =10 6 8,P =0 0 0 9)。细胞上清TGF β1和IL 1β蛋白含量均明显高于基础含量 [TGF β1分别为 :( 5 16± 14 )pg/ml和 ( 4 2 0± 5 ) pg/ml(q =80 3,P =0 0 12 ) ,IL 1β分别为 :( 3 4± 0 3) pg/ml和 ( 0 3± 0 1) pg/ml( q=2 97 9,P =0 0 0 3) ]。 ( 2 )秋水仙碱明显抑制FB之TGF β1mRNA以及蛋白表达 ,而     

人巨细胞病毒感染对HEL细胞周期及Cdt1表达的影响

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）感染对人胚肺成纤维（HEL）细胞周期及复制允许因子Cdt1表达的影响,探讨HCMV感染可能的发病机制。方法：用血清饥饿法同步化HEL细胞于G0/G1期, 用HCMV感染同步化的HEL细胞作为感染组（n=106）,同时设模拟感染组为对照组（n=106）。于感染后12,24,48,72,96 h收获细胞。流式细胞术测细胞周期; RT-PCR法检测Cdt1 mRNA的表达水平。结果：①模拟感染组在感染后12 h,24 h 时处于G1期细胞比感染组明显增多,两组比较,差异有显著性（P﹤0.01）。②两组Cdt1 mRNA表达水平在12 h,24 h和48 h时差异均有显著性（P﹤0.05）。模拟感染组Cdt1 mRNA表达水平的高峰出现在感染后12 h,而感染组的高峰则出现在感染后48 h。结论： ①HCMV感染影响了HEL细胞周期,使大部分细胞停滞在G1期。②HCMV感染使HEL细胞复制允许因子Cdt1 mRNA的表达水平迟滞。③HCMV感染可能通过影响复制允许因子Cdt1的生成而干扰宿主细胞周期,影响宿主细胞DNA合成,导致器官功能障碍。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：580-582］