TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因体外协同效应的研究

目的研究TRAIL基因与鸡贫血病毒vp3基因在体外协同诱导肝癌细胞系HepG2凋亡的作用。方法从人外周血淋巴细胞总RNA中扩增出TRAIL基因的cDNA序列,构建含TRAIL基因的真核表达重组体,与鸡贫血病毒vp3基因在体外共转染HepG2细胞,研究其协同诱导HepG2细胞凋亡作用。结果 单独转染TRAIL基因与vp3基因均可诱导HepG2细胞凋亡;将两种基因共转染HepG2细胞,发现其凋亡率明显增加。结论TRAIL基因与vp3基因在诱导HepG2细胞凋亡中存在正协同效应。     

白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控

目的　探讨白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中的基因调控作用。方法　经小鼠尾静脉注射白色念珠菌后 ,采用FCM技术测定胸腺凋亡细胞上 5个凋亡相关基因 ( p5 3,bax ,bcl 2 ,fas和c myc)产物的水平在不同时间组的变化。结果　p5 3和bax两个基因产物的水平明显增加 ;而bcl 2 ,fas和c myc基因产物的水平无明显改变。 结论　白色念珠菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,可能是经由基因调控的转录途径机制而发生 ,p5 3和bax基因在此过程起重要作用     

产单核细胞李斯特菌诱导胸腺细胞凋亡及其基因调控

为研究产单核细胞李斯特菌 (LM )感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用及胸腺细胞凋亡过程中的基因调控 ,小鼠经尾静脉注射LM后 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 (FCM )检测细胞凋亡及凋亡细胞的基因产物表达水平。结果表明LM能诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ,FCM分析显示特征性的凋亡峰。胸腺细胞凋亡于LM (5× 10 5CFU )感染后 8h出现 ,48h达高峰。胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡中p5 3、Bax及c myc基因表达产物明显增加 ,而Bcl 2基因表达产物水平无明显改变。提示LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,p5 3、Bax及c myc基因在LM诱导小鼠胸腺细胞凋亡的基因调控中起重要作用。     

E4orf4蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究与应用

 腺病毒早期基因编码产物在病毒感染宿主细胞后，广泛参与对宿主细胞周期的调控，以利于病毒自身的复制及释放。其中，腺病毒基因早期转录区4第4开放读码框（Adenovirus early region 4 open reading frame 4，E4orf4）编码的E4orf4蛋白，近几年来逐渐引起人们的重视。E4orf4蛋白是由114个氨基酸组成的小分子蛋白，实验证明，通过基因转染在哺乳动物细胞内表达的E4orf4蛋白在细胞质、细胞骨架和细胞核均有聚集。E4orf4蛋白作为一种多功能蛋白，可以下调病毒诱导的细胞信号传导、在转录和转录后水平调节宿主细胞及病毒蛋白的表达并诱导不依赖于p53的细胞凋亡。目前，对E4orf4蛋白诱导细胞凋亡的作用机制的研究，主要有3个方面：①通过结合和激活蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2 A，PP2A）来引起细胞凋亡；②通过对Src家族激酶的调节激活胞质凋亡信号；③对肿瘤细胞选择性诱导凋亡的作用。本文主要对E4orf4蛋白诱导细胞凋亡作用的研究进展，以及这种诱导作用对肿瘤细胞的特异性进行综述。......     

氧化砷诱导食管癌细胞凋亡细胞骨架的改变

我们过去用氧化砷 (Ａｓ2 Ｏ3 )诱导食管癌细胞凋亡[1] ,发现在凋亡早期 ,细胞核未见明显改变之前有线粒体增生反应 ,并首先描述了Ａｓ2 Ｏ3 诱导食管癌细胞的线粒体的形态改变[2 ] 。细胞凋亡的形态有细胞变小 ,皱缩 ,细胞核变圆 ,染色质凝集、靠边。我们发现在羊膜上皮细胞自发凋亡过程中张力微丝的消失[3 ] ,因此使我们考虑到细胞凋亡时 ,细胞形态的改变与细胞骨架的改变的关系。我们以Ａｓ2 Ｏ3 诱导食管癌细胞凋亡 ,观察细胞形态和细胞张力微丝 ,肌动蛋白Ｆ(Ｆ ａｃｔｉｎ)的变化 ,以阐明细胞骨架的改变在细胞凋亡形态改变的意义。一、…     

病毒致细胞程序性死亡分子机制的研究

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称为细胞程序性死亡 ,是细胞自主死亡的过程 ,在组织发生、免疫系统克隆选择、机体内环境稳定等诸多方面有着广泛的生物学意义[1] ,在某些疾病 ,如肿瘤、艾滋病等发病机制中也具有重要意义。参与细胞凋亡基因很多 ,主要有ｂｃ1 2、ｃ ｍｙｃ、ｐ5 3、ｃｅｄ 3、Ｆａｓ/Ａｐｏ 1等。近年研究发现 ,病毒感染是调节细胞凋亡的重要因素 ,病毒感染后不仅可通过自身基因的表达激活或抑制细胞凋亡的发生 ,也可与细胞凋亡调节基因一起共同参与凋亡的调控[2 ] 。下面拟就细胞凋亡的主要相关基因、病毒诱导或抑制细胞…     

柯萨奇病毒B3通过caspase依赖途径诱导HeLa细胞凋亡

目的 评价柯萨奇病毒B3（CVB3）致HeLa细胞死亡的方式及分子机制。方法 用CVB3作用于HeLa细胞,在不同时间收集细胞,通过相差显微镜、电子显微镜、流式细胞仪以及分子生物学手段,HeLa细胞的病变及caspase-3基因mRNA和蛋白质的表达。结果 CVB3作用于HeLa细胞后,细胞很快发生变性和坏死,24h后较多细胞凋亡;caspase基因在病毒作用早期即被活化,表现在caspase-3 mRNA在病毒作用后6h内,迅速增高达峰值。在24h内,又降至接近病毒作用前的水平。caspase-3蛋白表达在42h内逐渐增高。结论CVB3可诱导HeLa细胞发生坏死和凋亡两种反应,坏死早于凋亡,细胞凋亡与caspase-3的表达密切相关。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

p53介导的凋亡相关基因的研究进展

p5 3是重要的细胞周期调控基因之一 ,在参与维持细胞周期的正常运行中起着重要作用。p5 3基因通过诱导细胞发生 G1 期阻滞修复损伤 DNA和诱导细胞凋亡来抑制肿瘤细胞的增殖。在 p5 3基因介导细胞凋亡的通路中 ,有许多已知和未知的相关基因发生作用。本文就 p5 3基因调控细胞凋亡途径的上、下游已知基因作一综述。     

病毒感染与细胞凋亡

细胞凋亡（apoptosis）是在个体发育过程中为维护机体内环境的稳定、调控机体发育、由基因编码的细胞程序性死亡过程，是机体对外界刺激进行的主动应答，贯穿于机体的整个生命活动过程中。细胞凋亡可以自然发生，也可由病毒等外界因素诱导发生。迄今已发现近20种病毒可调节靶细胞凋亡，如HIV-1感染会导致T淋巴细胞、抗原提呈细胞、神经细胞的凋亡，HBV感染引起肝实质细胞和肝癌细胞的凋亡。病毒感染引起细胞凋亡的途径及机制很多，现对其主要途径与机制作一简述。     

细胞凋亡信号转导与心血管疾病

细 胞死亡分为细胞坏死和细胞凋亡。细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏ ｓｉｓ)是指细胞在自身基因调控下 ,启动其内部机制 ,主要是内源性ＤＮＡ内切酶的激活而发生的一种主动性死亡的过程 ,细胞凋亡亢进或受抑在一些疾病发生、发展中居重要地位。由细胞凋亡异常所致的疾病称凋亡失调性疾病 (ｄｉｓｅａｓｅｏｆｄｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ ,ＤＤＡ)。ＤＤＡ和细胞凋亡信号转导有密切关系[1] 。1　细胞凋亡的信号转导研究表明 ,众多的调控基因正逐渐地被组装成一条条信号转导通道 ,并以瀑布式反应相继被激活 ,导致细胞凋亡 ;许多不同…     

VP3 的细胞定位及其诱导乳腺癌细胞凋亡效应研究

目的：研究鸡传染性贫血病毒VP3基因在正常细胞和乳腺癌细胞中不同时间段的定位及其诱导细胞凋亡效应的变化。方法：用PCR方法扩增鸡贫血病毒的VP3基因,克隆至绿色荧光载体pEGFP-C1,构建含VP3的基因重组体,利用FuGENE^R 6 Reagent将pEGFP-C1-VP3分别转染乳腺癌MCF-7和成纤维细胞L929,观察VP3转染24、48、72 h后的细胞定位,并用流式细胞术检测MCF-7不同时间段的细胞凋亡率。 结果：VP3融合蛋白定位于乳腺癌细胞MCF-7核内,并呈现细胞凋亡不同阶段的典型核改变,VP3融合蛋白在L929细胞中经历了由核内迁移到细胞质的变化过程,不引起L929细胞凋亡。结论：VP3在乳腺癌细胞MCF-7中定位于细胞核,并能以诱导凋亡的方式引起癌细胞的死亡,并且凋亡率高于对照组且具有时间依赖性;VP3在正常细胞中定位于细胞质,且不引起凋亡效应。     

PI3-K-AKT信号转导途径与凋亡的关系

PI3-K(phosphatidylinositol3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶)-AKT(v-aktmurinethymomaviraloncogenehomo-log)信号转导途径是细胞内重要的信号转导通路,在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能,其中尤为重要的是它对细胞凋亡、存活的调节作用。细胞凋亡是一个瀑布式的基因表达结果,在其发生与调控过程中有许多基因产物的参与,PI3-K-AKT信号转导途径通过对这些凋亡相关基因的调节作用在凋亡的发生与调控过程中发挥重要的生物学功能。     

Caspases在视黄酸诱导pRARE4-IFNα转染肿瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨视黄酸(RA)及其诱导的外源性α-干扰素(IFNα)抗肿瘤作用与半胱氨酸蛋白酶(caspase)的关系。方法含视黄酸反应元件(RARE)的IFNα表达载体(pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞并证实外源性IFNα基因的表达受RA的诱导后，分析了细胞增殖功能、细胞DNA梯形带，caspase-1、3基因表达，caspase-3活性以及caspase-3特异性抑制剂(DEVD-CHO)对RA和／或IFNα诱导细胞凋亡的抑制作用。结果对RA敏感的HL60细胞和caspase-3基因缺失的MCF-7细胞经RA处理后，增殖能力减弱，出现明显的DNA梯形带，caspase-1基因表达上调节，HL-60细胞caspase-3基因表达上调节，活性升高，DEVDCHO可拮抗RA引起的HL-60细胞caspase-3活性升高，并部分削弱RA引起的细胞增殖抑制和凋亡。结论Caspase-3在RA诱导的细胞凋亡中有重要作用，同时，RA可能通过其它途径诱导caspase-3基因缺失细胞的凋亡。     

五株蓝舌病毒对宫颈癌HeLa细胞作用特性的比较研究

目的 体外研究五株蓝舌病毒(bluetongue virus)致HeLa细胞的作用机制.方法 透射电镜观察感染病毒后细胞超微结构的变化;MTT法和流式细胞仪分别检测病毒对细胞的生长和凋亡的影响;检测凋亡细胞片段化DNA和检测病毒诱导细胞后Caspase-3、-8、-9活性.结果 大量细胞发生病变,出现凋亡和溶解,胞质内可见病毒包涵体及未装配成熟的亚病毒颗粒;五株病毒以浓度依赖方式抑制细胞增殖,且五株病毒的效果有差异;流式细胞仪检测可见各个凋亡阶段的凋亡细胞,并且五株蓝舌病毒感染HeLa细胞的凋亡百分比不一样;DNA-Ladder典型;Caspase-3、-8、-9活性有不同程度的升高.结论 蓝舌病毒能够有效地诱导体外培养的人宫颈癌HeLa细胞进入凋亡,五株蓝舌病毒之间差异明显.     

妊娠期糖尿病胎盘细胞凋亡的调控基因表达的研究

细胞调亡(apoptosis),又称程序性细胞死亡或细胞自杀,是不同于坏死的另一种细胞死亡方式.是在生理和一些病理情况下发生的基本生物现象,是多细胞生物更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段,参与机体生殖、胚胎发育、免疫等生理过程以及肿瘤、病毒感染等疾病发生过程[9].胎盘细胞凋亡研究近年来日益受重视.胎盘是母胎间物质交换的器官,它的完整性对维持妊娠有重要作用,正常妊娠胎盘存在细胞凋亡,随妊娠进展,胎盘细胞凋亡增多.胎盘出现细胞凋亡速率异常可能与某些病理妊娠有关.现已证明,胎儿宫内发育迟缓[15],早产,胎膜早破,先兆子痫[3]等病理妊娠的胎盘细胞凋亡增多,由此提示胎盘细胞凋亡在这些病理妊娠性疾病的发生、发展中起到了重要作用.     

肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。     

Apoptin的分子生物学基础及作用特点

Apoptin是由鸡贫血病毒编码的一种小分子蛋白,它以非P53依赖性途径诱导不同类型人肿瘤细胞的凋亡,不受Bcl-2的抑制作用。令人感兴趣的是Apoptin不诱导人类正常细胞的凋亡,但当正常细胞被病毒转化后则易受Apoptin诱导的凋亡。这些特性使得Apoptin很可能成为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂。     

癌基因bcl—2和病毒在神经细胞凋亡中的关系

细胞凋亡是细胞接受某种或受到某些因素刺激后产生的一种主动的 ,由一些凋亡相关基因相互作用的细胞消亡过程 ,这与坏死不同。细胞凋亡是一种重要的生命现象 ,不仅出现在生理状态下 ,而且更与许多疾病相关联。发育过程中的神经细胞凋亡是保证机体正常发育和维持生理过程所必须的 ,而分化成熟的神经细胞凋亡过程则会引起病理性损害 ,如巴金森病和老年性痴呆[1] 。病毒的感染和复制常与感染性疾病的细胞凋亡有关。在病毒感染早期 ,宿主细胞利用细胞凋亡以阻止病毒的复制和扩散。机体的免疫系统通过凋亡途径杀伤被感染细胞。另方面病毒在感染早…     

伪狂犬病病毒Ea株诱导牛肾细胞凋亡及核基质蛋白的变化

目的研究伪狂犬病病毒(PrV)是否具有诱导组织培养细胞发生细胞凋亡的功能及探讨凋亡细胞核基质蛋白表达的变化。方法利用锥虫蓝(台盼蓝)染色绘制PrV在不同细胞上的增殖曲线;荧光染色观察凋亡细胞核的形态特征;琼脂糖凝胶电泳分析细胞染色体DNA的片段化;高分辨率双向电泳分析细胞凋亡前后核基质蛋白的表达差异。结果膜通透性的DNA特异性结合染料Hoechst 33342染色显示,PrV感染后36h,牛肾(MDBK)细胞核染色质开始固缩、凝聚,细胞核碎裂;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳分析表明,细胞染色体DNA发生片段化,形成“DNA梯状”条带(DNA ladder);尽管PrV可以诱导MDBK细胞发生细胞凋亡,但不能诱导IBRS-2,BHK-21及PK-15细胞发生凋亡。MDBK细胞发生凋亡前后核基质蛋白的表达发生改变,存在表达上调、下调、诱导表达及表达遏制等情况。结论PrV诱导细胞发生细胞凋亡是其致细胞死亡的形式之一,间接反映了PrV与宿主细胞间复杂的相互作用。细胞凋亡前后核基质蛋白表达存在的差异说明PrV致MDBK细胞发生凋亡是自身基因产物或诱导或抑制宿主细胞基因表达的结果。