早期干预对宫内缺氧缺血大鼠脑功能及神经生长相关蛋白表达的影响

目的 通过建立宫内缺氧缺血大鼠动物模型，研究早期干预能否促进脑组织内神经生长相关蛋白(GAP-43)表达以影响受损脑功能的修复。方法 依照“延迟剖宫”方法建立缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠模型．另一侧未结扎血管的子宫内胎鼠作为对照组。根据随机分组原则，分为HIBD干预组、HIBD非干预组、正常干预组、正常非干预组，每组15只。干预组采用早期视触听觉刺激和丰富环境的早期干预方法，于术后24h开始至生后28d。非干预组常规饲养，不予以干预。而后采用跳台测试、脑电图检测大鼠脑功能；尼氏染色观察脑组织病理学变化；免疫组织化学方法测定脑组织GAP-43表达水平。统计学检验采用SPSS 11．0统计软件包进行处理。     

早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

早期干预对缺氧缺血性脑损伤大鼠学习记忆能力及神经元凋亡的影响

目的　探讨早期干预对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)大鼠学习记忆能力及神经元凋亡的影响。　方法　(1 )结扎 SD大鼠一侧子宫角血管 ,建立 HIBD模型 ,另一侧子宫角血管不予结扎直接剖宫取鼠作为对照 ,制模大鼠和对照大鼠均分为干预组和非干预组。 (2 )采用丰富环境刺激等对两干预组幼鼠进行早期干预 ,干预时间 2 8d。(3)干预结束后应用水迷宫学习记忆能力检测 4组大鼠脑功能。 (4 )采用原位缺口末端标记法 (TU NEL)检测神经元凋亡。　结果　 (1 )水迷宫测试成绩正常干预组优于其他 3组 ,HIBD非干预组最差。(2 )大鼠额皮质、海马凋亡神经细胞中位数 (1 m m× 1 m m)分别为正常干预组 0和 2 ,正常非干预组 2和 4 ,HIBD干预组 5和 6 ,HIBD非干预组8和 9,组间差异有显著性 (P<0 .0 1 )。(3)大鼠学习记忆能力与额皮质凋亡神经元数量密切相关 (P<0 .0 1 )。　结论　早期干预是促进 HIBD大鼠学习记忆能力恢复的有效手段 ,减少 HIBD后持续的神经元凋亡可能是减轻其中枢神经系统后遗症、促进脑功能恢复的机制之一     

生长相关蛋白在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马中的表达变化

目的 研究7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后海马神经组织生长相关蛋白(growth-associated protein,GAP-43)及其mRNA的表达变化.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBD模型,并以正常新生大鼠为对照.以免疫组织化学和RT-PCR法检测不同时相点海马组织GAP-43及其mRNA的表达.结果 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达较同日龄正常大鼠明显增高,表达高峰分别在损伤后第2周和第3周.结论 新生大鼠HIBD后海马GAP-43及其mRNA表达增高,可能与海马损伤后修复有关.     

醒脑静及早期干预对中、重度新生儿缺氧缺血性脑病预后的影响

目的 探讨醒脑静及早期干预对中、重度新生儿缺氧缺血性脑病预后的影响。方法 两组患儿均在采用相应的支持、对症、应用脑活素等治疗基础上，治疗组用醒脑静及早期干预；对照组用复方丹参。结果 治疗组生后28d新生儿20项行为神经测定优于对照组（X^2=6．972，P〈0．01）；生后半年治疗组智力发育指数、精神运动发育指数均优于对照组（t=4．785，P〈0．01；t=5．847，P〈0．01）；生后1年治疗组的智力发育指数、精神运动发育指数均优于对照组（t=5．21，P〈0．01；t=9．763，P〈0．01）。结论 醒脑静及早期干预对中、重度新生儿缺血缺氧性脑病（HIE）有较好的影响。     

环境刺激对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马巢蛋白表达及学习记忆的影响

目的研究不同环境刺激对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)新生大鼠海马巢蛋白(nestin)表达以及学习记忆能力的影响.方法按Rice法制备7日龄SD大鼠HIBD模型,随机分为3组:丰富环境组(enriched environment, EE)、贫瘠环境组(impoverished environment, IE)和标准环境组(standard environment, SE).另设假手术组.各组大鼠于术后第1天开始分别给予不同环境刺激.术后第28天,通过Morris水迷宫实验测试学习记忆能力,免疫组织化学染色检测海马nestin的表达.结果在学习记忆能力上,IE组明显差于假手术组、SE组和EE组,SE组差于假手术组和EE组,假手术组和EE组无显著差异.海马nestin免疫组织化学染色结果显示,EE组大鼠表达强于假手术组、SE组和IE组,SE组强于假手术组和IE组.结论丰富环境刺激可以增加海马nestin的表达,促进神经再生,改善学习记忆能力,而贫瘠环境刺激却使海马nestin表达减少,阻碍神经再生,加重学习记忆能力的损害.     

益气活血法对脑缺血再灌注损伤后神经可塑性影响的实验研究

目的探讨益气活血法对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带神经可塑性的影响及作用机制。方法120只SD大鼠分为假模型组、手术组、益气活血法组、活血法组、益气法组。每组再分为缺血再灌注3、7、14d三个亚组。以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉,复制局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注3、7、14d,用免疫组织化学染色SABC法分别检测缺血半暗带突触素SYP、生长相关蛋白GAP-43的表达。结果缺血再灌注3d,益气组、活血组SYP的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,益气活血组、活血组的GAP-43表达,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;缺血再灌注7、14d,活血组和益气活血组SYP的表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,益气活血组GAP-43表达与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论益气活血法能促进SYP、GAP-43表达,有利于脑缺血后神经细胞轴突的再生以及突触的重塑。     

氯胺酮对SD幼鼠海马GAP-43蛋白的影响

目的观察氯胺酮对7d龄SD幼鼠海马神经元细胞GAP-43表达的影响。方法对7d龄SD幼鼠注射氯胺酮25mg/kg(k1组)、50mg/kg(k2组),对照组注射生理盐水50 ml/kg(k0组),24h后取材,采用免疫组化染色和Western blot技术检测SD幼鼠海马GAP-43蛋白的表达,进行图像分析。结果注射氯胺酮后24h,免疫组化染色GAP-43蛋白阳性细胞计数:k0组为(85.4±15.2)个/mm2,k1组为(67.6±11.5)个/mm2,k2组为(36.6±9.7)个/mm2。Western blot GAP-43蛋白电泳条带灰度值k0组为186.375±7.45,k1组为165.754±7.012,k2组为158.852±8.721。k1组和k2组GAP-43蛋白的表达明显减少。结论注射氯胺酮后24h,SD大鼠海马神经元细胞GAP-43蛋白的表达下调,可能和氯胺酮神经毒性有关。     

尼莫通对缺氧缺血新生大鼠远期学习记忆的影响

目的观察缺氧缺血性脑损伤对远期学习记忆及海马锥体神经元的影响,以及尼莫通治疗的效果。方法选择7日龄Wistar大鼠 34只,行右侧颈总动脉结扎后,吸入8% 氧气 2小时,然后随机取13只立即给予尼莫通160μg/kg 腹腔注射,共5天;对照组给予生理盐水。至生后80～90天时进行Y迷宫分辨学习和记忆保持百分率的检测,然后取脑进行神经病理学检查。结果与正常组相比,缺氧缺血显著降低大鼠Y迷宫分辨学习能力(32.86±8.22, P＜0.01) 和记忆保持百分数 (59.00±21.32%,P＜0.05) ,并且使海马CA1区锥体神经元数密度显著减少 (5.25±1.3×10-4μm-3, P＜0.01)。尼莫通对缺氧缺血大鼠 Y迷宫分辨学习能力有显著提高 (20.69±7.96,P＜0.01),而对记忆保持无明显效果;并且尼莫通使缺氧缺血大鼠海马CA1区锥体神经元数密度增加 ( 9.0±1.5×10-4μm-3, P＜0.01)。结论尼莫通可有效减轻缺氧缺血性脑损伤后海马CA1区锥体神经元的坏死,提高 Y迷宫分辨学习能力,但对记忆保持无明显效果。     

电针对脊髓损伤后神经生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的 探讨电针治疗对脊髓损伤(SCI)组织GAP-43表达水平的影响.方法 用Allen氏改良撞击法制作鼠脊髓损伤模型.44只成年Wistar鼠随机分为11组:正常对照组、SCI后第2,4,7,14,28天组和电针(SCI后电针治疗)第2,4,7,14,28天治疗组,每组4只.用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,免疫组化染色检测GAP-43阳性细胞,用免疫印记(western blot)检测脊髓损伤中GAP-43的变化.结果 GAP-43在正常成年鼠脊髓中微量表达,SCI后表达增加,且电针治疗组较SCI组表达差异有显著性(P＜0.01).术后7 d时,SCI组的GAP-43表达达到高峰,14 d时降至接近初始水平,但电针治疗组GAP-43表达仍维持较高水平.结论 电针可增强损伤脊髓组织GAP-43表达水平,促进损伤脊髓神经元再生和修复,对脊髓损伤起保护作用.     

亚低温对新生大鼠缺氧缺血脑损伤线粒体功能及凋亡的影响

目的　探讨亚低温治疗对新生大鼠缺氧缺血脑损伤 (HIBD)线粒体功能的保护作用及对细胞凋亡的影响。方法　模型动物随机分为常温缺氧缺血组 (肛温 37℃ )和亚低温缺氧缺血组 (肛温 33℃ ) ;对照组为假手术动物 ,于缺氧缺血后 0、2、6、2 4、4 8、72h检测线粒体ATP合成量 ,观察线粒体的超微结构变化 ,并用原位缺口末端标记法 (TUNEL)结合HE染色和Nissl染色检测脑细胞死亡。结果　 37℃缺氧缺血组结扎侧大脑组织线粒体ATP合成量 2h开始下降 ,2 4h下降最明显达正常对照组 36 % (4 5 .0± 6 .1vs 12 2 .5± 6 .7,P <0 .0 1) ,亚低温治疗能显著改善线粒体ATP合成量 ,以亚低温治疗 2 4h升高最明显 (99.0± 8.8vs 4 5 .0± 6 .1,P <0 .0 1) ,37℃缺氧缺血组大鼠脑线粒体肿胀 ,嵴模糊 ,断裂明显 ,基质电子密度增高或出现部分透明区 ,少数线粒体空泡变性 ,而亚低温治疗后大部分线粒体结构保持完整 ;72h亚低温还可显著降低脑细胞凋亡发生率 (2 5 .3± 1.5vs 6 .4±1.7,P <0 .0 1) ,而对细胞坏死无明显改善 (13.0± 1.4vs 11.2± 0 .7,P >0 .0 5 )。结论　亚低温治疗可通过保护缺氧缺血脑损伤后的线粒体功能而特异性地减轻脑细胞凋亡     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤早期视觉诱发电位改变的实验研究

目的 :观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)发生后 0、6、12、2 4、48h闪光视觉诱发电位 (F VEP)的波形变化特征 ,探讨F VEP对HIBD的早期监测作用。方法 :检测 8只正常 7日龄新生鼠F VEP ,12 0只新生鼠随机分为 3组 :假手术组、HIBD组、急性缺氧组各 40只 ,按动物模型建立后 0、6、12、2 4、48h分为 5个时段 ,每组各时段均为 8只 ,采用闪光刺激法检测视觉诱发电位后 ,取脑组织标本作病理切片检查。结果 :①正常 7日龄新生鼠F VEP有一波形分化良好的正相波 ,其潜伏期为 (30 .0± 1.17)ms,波幅为 (4 .0 7± 0 .35 ) μV ;假手术组潜伏期为 (30 .6 7± 1.2 3)ms,波幅为 (4 .10± 0 .42 ) μV ,两组间差异无显著性意义。②HIBD组 0、6、12、2 4、48h潜伏期延长 ,与假手术组各时段差异均有非常显著性 (P <0 .0 1) ;其波幅降低 ,在 0、6h时段与假手术组间差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,12、2 4、48h与假手术组间差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :①新生鼠HIBD发生时 ,F VEP迅速出现潜伏期延长、波幅降低的改变 ,假手术的实施对其波形无明显影响。②缺氧后持续异常的F VEP提示HIBD存在 ,有助于HIBD的早期监测。     

别嘌呤醇对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的　探讨别嘌呤醇 (ALLO)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的影响。方法　将新生 7日龄SD大鼠 14 3只随机分为别嘌呤醇治疗组、缺氧缺血对照组和假手术组 ,缺氧缺血后即刻、2 4和 4 8h分别腹腔注射ALLO或生理盐水 ,然后观察ALLO对HIBD模型鼠缺氧缺血 (HI)后 4 2h脑含水量、72h脑神经元凋亡(TUNEL法 )及超微结构改变、14d体质量增长率、脑病理改变 (海马神经元死亡率 )、30d学习分辨能力和记忆保持能力 (三臂迷宫试验 )等的影响。结果　脑含水量 :治疗组缺血侧 [( 84 .75± 4 .5 2 ) % ]含水量较对照组[( 92 .32± 3.75 ) % ]明显减少 (P <0 .0 1) ;TUNEL染色结果 :HI后 72h缺血侧脑组织可见较多凋亡细胞。治疗组缺血侧皮质凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 93.6± 10 .8)和 ( 110 .5± 16 .9)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 1],治疗组缺血侧海马凋亡细胞数明显低于对照组 [分别为 ( 83.2± 11.5 )和 ( 94 .2± 12 .3)个 / 30 0 0个细胞 ,P <0 .0 5 ];超微结构改变 :对照组凋亡细胞数为 18%左右 (计数 30个视野 ) ,而治疗组为 6 %左右 ,治疗组细胞坏死、丢失也较对照组减轻 ;HI后 14d体质量增长百分率 (WIP) :治疗组 [( 16 7.0± 33.6 ) % ]较对照组 [( 135 .6±4 7.5 ) % ]无显著性差异 (P >0 .0 5     

当归注射液对全脑缺血后神经再塑影响的实验研究

目的 :研究全脑缺血后海马区的神经再塑及当归注射液的影响。方法 :6 0只健康沙土鼠 ,双侧颈总动脉夹闭 1 0min制作全脑缺血再灌注模型 ,分为治疗组和对照组 ,前者经腹腔给予当归注射液 ,后者给予生理盐水 ,另选 6只沙土鼠作为正常组。于术后 1 6h ,1 ,2 ,3,6d采用免疫组织化学方法检测海马区生长相关蛋白 (growth associ atedprotein ,GAP 4 3)、微管相关蛋白 (microtubule associatedprotein ,MAP 2 )和突触素 (synaptophysin ,SYN)表达的变化。结果 :全脑缺血 1 0min再灌注 1 6h至 6d ,动物脑组织各区尚未见明显形态学变化 ,而MAP 2已随再灌注时间的延长表达水平逐渐降低 ,至再灌注 3d达到最低 ,再灌注 6d又轻度上升 ;GAP 4 3和SYN的表达水平则随再灌注延长而不断上升 ,至再灌注 6d达到最高 ;在各时间点 ,治疗组MAP 2、GAP 4 3和SYN的表达水平均高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :全脑缺血后海马区有明显的神经再塑和结构重建 ,活血化瘀药当归可加速这一过程     

细胞凋亡在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

目的：研究细胞凋亡在新生儿缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）中的作用。方法：结扎新生７ｄ龄大鼠左颈总动脉后吸８％浓度氧２ｈ制成ＨＩＢＤ模型,应用苏木素－伊红（ＨＥ）染色、原位缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）、ＤＮＡ电泳分析综合研究新生大鼠ＨＩＢＤ后脑细胞的死亡形式。结果：缺氧缺血（ＨＩ）后０ｈＨＥ染色即发现左侧纹状体有一些神经元呈凋亡早期的改变;ＨＩ后１８ｈＴＵＮＥＬ染色在左脑皮质及纹状体见到阳性凋亡细胞;ＨＩ后２ｄＤＮＡ电泳见到ＤＮＡ梯形带;ＨＩ后２～３ｄ凋亡达高峰;持续至少２１ｄ。结论：３种方法均表明细胞凋亡为ＨＩＢＤ后神经元的主要死亡形式,也是加重脑损伤的一个因素。     

GDNF基因修饰的神经干细胞促进脑中风后大鼠的GAP-43表达

目的研究胶质源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的神经干细胞(NSCs)移植对脑中风后大鼠缺血侧脑组织内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响,探讨GDNF基因修饰的神经干细胞(GDNF/NSCs)移植对大鼠脑中风的神经保护作用机制。方法取新生大鼠脑组织分离培养NSCs,收集第6代前的NSCs备用。用重组腺病毒GDNF转染神经干细胞,制备GDNF/NSCs。暂时性阻塞大鼠大脑中动脉制备脑中风模型,3天后,用脑立体定位仪向中风侧侧脑室分别给予NSCs、GDNF/NSCs和生理盐水。再灌注时间1w、2w、3w、5w、7w后处死大鼠(n=3)。裂解中风侧脑组织,离心后得到脑组织蛋白样品,通过蛋白免疫印迹(Western Blotting)检测GAP-43表达。结果 GDNF/NSCs、NSCs、NS各组GAP-43的表达在1w、2w、3w、5w、7w各时间点均逐渐降低。NSCs组、GDNF/NSCs组显著高于NS组(P<0.05);GDNF/NSCs组高于NSCs组(P<0.05)。结论 GDNF/NSCs移植治疗脑中风的机制可能与促进GAP-43表达有关。     

康复训练对脑梗死大鼠脑GAP-43表达的影响

目的：研究康复训练对脑梗死大鼠脑的生长相关蛋白（GAP－43）表达的影响。方法：SD大鼠采用光化学法制成脑梗死模型后,随机分康复组,制动组,自由组及正常组,每组大鼠在1,3,7,14,21,28d取脑组织免疫组化染色,以观察脑梗死大鼠各组不同时期脑的GAP－43表达。结果：1,3,7,14d脑梗死周边区可见GAP－43阳性细胞,21,28d时梗死周边GAP－43阳性细胞逐渐减少,康复组较制动组在7,14d明显增加,尤以胼胝体为。结论：康复训练可引起损伤周边区GAP－43表达的变化。提示该区有促进神经新生枝芽的生长作用。     

神经生长因子对缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的：探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤（HIBD）与凋亡之间的关系,研究神经生长因子（NGF）对HIBD的保护作用,为用NGF治疗新生儿HIBD提供理论依据。方法：生后7天SD大鼠40只制成HIBD动物模型,随机分成两组：HIBD模型对照组20只,HIBD模型NGF治疗组20只,观察NGF对HIBD模型新生大鼠体重增长情况、死亡率、左右脑重量的影响,并用原位缺口末梢标记（TUNEL）法检测NGF对缺氧缺血后脑细胞凋亡的影响。结果：HIBD模型NGF治疗组体重增长明显高于对照组（P＜0．01）;治疗组实验过程中死亡率明显低于对照组：HIBD模型NGF治疗组与对照组健侧（右侧）脑重量相近,但治疗组患侧（左侧）脑重量明显重于对照组（P＜0．01）;治疗组左右脑重量无显著差异,而对照组左右脑重量差异显著（P＜0．01）;TUNEL染色所见阳性凋亡细胞,其凋亡特征为胞体缩小、核固缩、核碎裂、凋亡小体形成。NGF治疗组阳性细胞均数明显低于对照组（P＜0．01）。结论：NGF治疗减轻了缺氧缺血后脑萎缩和细胞凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1 蛋白的表达

目的　研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果　栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论　脑缺血时脑内HO 1迅速而强烈的表达可能是脑组织对自身损伤的恢复机制