高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察高浓度游离脂肪酸体外对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用TUNEL法检测高浓度游离脂肪酸培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率，应用定量RT～PCR(QRT—PCR)检测培养后bc1-2、bax、c—myc、p53和fas mRNA的表达。结果：高浓度游离脂肪酸使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加。胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡基因bax、c—myc、fas的tuRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2mRNA表达水平明显下降，p53 mRNA表达水平无明显改变。结论：游离脂肪酸可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bc1-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

胰淀素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察胰淀素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用放免法检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和胰岛β细胞瘤细胞系(βTc3)高糖刺激后上清液的胰岛素水平；应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后bcl-2、bax mRNA的表达。结果：胰淀素使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3胰岛素分泌功能明显下降，使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡的基因bax mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降。结论：胰淀素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法：应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR（QRT-PCR1）检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果：高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中。诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降．致使bcl-2／bax比率明显降低；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病。其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

辐射诱导大鼠肺细胞凋亡及相关基因表达

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是指由基因控制的细胞程序性死亡。辐射作为一种确定的诱发凋亡的方法[1] ,被长期应用于肿瘤的治疗 ,而有关辐射诱导离体正常细胞及肿瘤细胞凋亡的研究已成为热点。另一方面 ,对动物整体辐射后肺细胞凋亡的研究很少报道。我们采用流式细胞术 ,检测γ 射线整体照射后大鼠肺细胞的ＤＮＡ含量及凋亡相关基因Ｂｃｌ 2和Ｂａｘ的表达 ,以探讨诱发凋亡的剂量和时间效应关系。1　材料与方法1 1　动物处理　选用Ｗｉｓｔａｒ纯种雄性大鼠 ,体重 2 0 0～2 5 0ｇ ,由苏医动物中心提供 ,随机分为对照组、0 5和 5 0Ｇｙ…     

类风湿性关节炎与细胞凋亡

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性、全身炎症性自身免疫疾病，主要累及小关节，可伴有心、肺、血管、神经和眼等结缔组织炎性损伤。其病理特征主要为滑膜慢性炎症性增厚、骨与软骨组织的受损，最后导致关节的破坏。RA发病机制较为复杂，包括感染、遗传等因素。近年来发现细胞凋亡异常可导致滑膜组织过度增生、肥厚，从     

肿瘤坏死因子α诱导人乳腺癌MCF7/hGFP-Bax稳定表达细胞凋亡对Bax转移定位的影响

建立人乳腺癌MCF7细胞hGFP-Bax稳定表达细胞系，观察肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的细胞凋亡对Bax自细胞浆转移定位至线粒体的影响。荧光显微镜观察凋亡细胞Bax从细胞浆至线粒体的转移和对细胞核染色体断裂的影响，并观察和测定TNFα诱导细胞凋亡的量效和时效关系。以免疫荧光法观察GFP-Bax从细胞浆转移至线粒体和定位以及细胞色素c(Cyt-c)从线粒体的释出，MTT法测定TNFα的细胞毒作用，TMRE测定观察对细胞线粒体功能的影响。结果显示TNFα诱导的MCF7/GFP-Bax细胞凋亡与Bax自细胞浆转移定位于线粒体密切相关。     

瘦素、脂肪酸对大鼠胰岛细胞凋亡的影响

目的：探讨瘦素、脂肪酸(FA)对大鼠胰岛细胞凋亡的影响及其机制。方法：梯度离心法提取大鼠胰岛细胞，在提取的胰岛细胞培养基中加入瘦素、FA后测定细胞内的甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOSmRNA)表达的水平。结果：FA可增加胰岛细胞内TG、NO及iNOSmRNA水平；瘦素则降低细胞内TG、NO及iNOSmRNA水平。结论：FA是致胰岛细胞脂性凋亡的因素，而瘦素可部分对抗脂性凋亡的发生。     

利培酮与氯氮平对离体胰岛细胞凋亡的影响

目的:探讨利培酮和氯氮平对体外培养胰岛细胞凋亡的影响.方法:利用细胞培养技术,在一定的葡萄糖浓度(5.5mmol/L)和不同作用时间(1h或4 h)下,以1μmol/L利培酮和氯氮平分别作用于体外培养大鼠胰岛细胞,以单染法流式细胞仪检测作用后胰岛细胞的凋亡率,并与相应的对照组比较.结果:利培酮作用于胰岛细胞1h和4h后,细胞凋亡情况与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；氯氮平作用于胰岛细胞1h和4h后,细胞凋亡情况与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；氯氮平作用于胰岛细胞4h后与作用1h后相比,细胞凋亡差异无统计学意义(P＞0.05).结论:氯氮平可以诱导离体大鼠胰岛细胞凋亡,导致胰岛细胞DNA含量减少,而利培酮在本研究中引起离体胰岛细胞发生凋亡的现象不明显.     

细胞凋亡和肿瘤坏死因子在大鼠急性胰腺炎发病中的作用

目的 探讨细胞凋亡和肿瘤坏死因子在大鼠急性胰腺炎发病中的作用。方法 大鼠急性胰腺炎模型制作采用改良十二指肠闭襻法。将60只大鼠随机分成A组(假手术组,对照组)、B组(水肿型胰腺炎组,MAP组)和C组(出血坏死性胰腺炎组,SAP组)三组,分别于术后6小时、24小时剖腹后肉眼观察胰腺形态学改变,并取胰腺标本行荧光显微镜下细胞凋亡形态学观察;细胞凋亡流式细胞光度定量观察凋亡情况,心脏取血测定血清TNF-α含量。结果 (1)细胞凋亡指数MAP组显著高于SAP组和对照组(P<0.05);(2)血清TNF-α含量SAP组显著高于MAP组和对照组(P<0.05)。结论 (1)水肿型胰腺炎细胞凋亡指数比出血坏死性胰腺炎高,细胞凋亡对胰腺腺泡可能具有保护作用;(2)胰腺腺泡细胞凋亡可能受TNF-α调节。     

通关藤对U937细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的利用细胞凋亡基因芯片比较通关藤作用前后U937细胞基因表达谱的改变,探讨通关藤诱导U937细胞凋亡的可能机制。方法利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。提取经和未经50μL/mL通关藤处理的U937细胞的mRNA,逆转录为cDNA,然后用含89个目的基因的细胞凋亡基因芯片(APH-012)进行杂交,GEArray软件分析,通过比较得到通关藤处理前后表达有差异的基因。结果通关藤作用前后表达有差异的基因共36条(占芯片基因总数的44.4%),其中28条(28/89,31.5%)基因表达上调,8条(8/89,8.9%)基因表达下调。这些改变的基因主要包括肿瘤坏死因子配体和受体家族、bcl-2家族、caspase家族、P53家族成员。结论通关藤主要通过上调促凋亡基因及下调凋亡抑制基因来诱导U937细胞凋亡,其中死亡受体途径活化可能在凋亡过程中发挥重要作用。     

金纳多对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的 探讨金纳多对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及caspase-3表达的影响。方法 线拴法制作大鼠脑缺血再灌注模型；30只健康成年SD大鼠随机分3组：假手术组、模型组、金纳多治疗组；每组于脑缺血2h再灌注24h行脑灌注固定取材，采用苏木素-伊红（HE）染色以观察梗死灶的部位和范围；采用原位末端标记法（TUNEL）及免疫组化染色检测脑组织凋亡细胞数及caspase-3蛋白表达。结果 与其它两组相比，金纳多治疗组脑组织病理变化明显减轻，神经细胞凋亡、caspase-3蛋白表达明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 金纳多对大鼠缺血性脑损伤有保护作用，下调caspase-3蛋白表达减少神经细胞凋亡可能是其主要机制之一。     

苦荞提取物对2型糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的干预作用

目的：探讨苦荞提取物对2型糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的干预作用.方法：Sprague-Dawley大鼠分为6组：正常对照组、模型组、二甲双胍组、苦荞提取物低、中、高剂量组.模型组和给药组采用高脂高糖诱导饮食.两周后,腹腔一次性注射链脲佐菌素（STZ,30 mg·kg^-1）建立大鼠2型糖尿病模型.二甲双胍组给予300 mg·kg^-1剂量灌胃,苦荞提取物组分别给予250 mg·kg^-1、500 mg·kg^-1、1 g·kg^-11苦荞提取物灌胃.给药4周后,检测大鼠空腹血糖值和空腹血清胰岛素（FINS）值,处死大鼠,取大鼠胰脏组织,H＆amp;E染色观察形态学变化;TUNEL法观察胰岛细胞凋亡;免疫组织化学法检测细胞死亡信号转导效应酶caspase-3在胰岛中的表达.结果：与模型组比,苦荞提取物组可显著降低大鼠空腹血糖值和空腹FINS值（P〈0.05）.HE结果显示苦荞提取物组和二甲双胍组大鼠胰岛形态未出现明显缩小及胰岛细胞减少情况,TUNEL结果显示苦荞提取物组与二甲双胍组胰岛中胰岛细胞凋亡均明显减少,caspase-3结果显示苦荞提取物组和二甲双胍组中caspase-3表达均有下调趋势（P〈0.05）.结论：苦荞提取物能够有效降低STZ诱导2型糖尿病大鼠胰岛细胞的凋亡.     

河豚毒素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的研究河豚毒素（TTX）心脏停搏液对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法取Wistar大鼠24只,建立Langendorff-Neely离体心脏灌注模型,随机分为3组（n=8）：基础组、STH-2组、TTX组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化测定凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、p53的表达,Westernblot检测Bcl-2蛋白表达。结果STH-2组凋亡指数（AI）（11.20±0.79）%高于TTX组（6.92±1.10）%和基础组（1.34±0.23）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的PEI为（22.63±1.10）%高于STH-2组（13.51±0.67）%和基础组（2.52±0.58）%（P〈0.01）;STH-2组Bax的PEI为（8.04±0.57）%高于TTX组（6.05±0.46）%和基础组（2.14±0.57）%（P〈0.01）。TTX组Bcl-2/Bax为3.78±0.41高于STH-2组1.75±0.15（P〈0.01）。TTX组Bcl-2的相对蛋白含量为（86.1±0.98）%高于STH-2组（53.2±1.76）%和基础组（23.7±2.61）%（P〈0.01）。p53蛋白在各组均未见明显阳性表达。结论与STH-2比较,TTX能减少缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡数,其抗凋亡的机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax比值有关。     

神经生长因子对胰淀素所致大鼠胰岛细胞功能障碍的保护作用

目的:评价神经生长因子(NGF)对高浓度胰淀素所致大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用.方法:以不同浓度胰淀素(1、5、10 μmol/L)孵育原代培养的大鼠胰岛β细胞,制备功能减退的细胞模型,再以不同浓度的NGF(50、100、200 μg/L)孵育高浓度胰淀素(10 μmol/L)作用过的胰岛细胞,分别设立空白对照组,比较各组细胞对四甲基偶氮唑盐(MTY)还原能力和胰岛素的分泌能力.结果:高浓度胰淀素(10 μmol/L)作用后胰岛细胞对MTF还原能力以及基础糖(5 mmol/L)和高糖状态(16.7 mmol/L)下胰岛素分泌量的影响与对照组相比均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞模型制备成功.用不同浓度NGF孵育24h后,随着NGF剂量的增加,此受损胰岛细胞胰岛素分泌量(即24 h胰岛素分泌量)、高糖(16.7 mmo/L)刺激下胰岛素分泌量均明显增加,受损胰岛细胞对MTT还原能力亦逐步增强.结论:NGF可减轻高浓度胰淀素对胰岛细胞活力的抑制作用,并促进胰岛B细胞分泌功能的恢复.     

Antiproliferative and Cytotoxic Effects of Resveratrol in Mitochondria-Mediated Apoptosis in Rat B103 Neuroblastoma Cells

Resveratrol, a natural compound, has been shown to possess anti-cancer, anti-aging, anti-inflammatory, anti-microbial, and neuroprotective activities. In this study, we examined the antiproliferative and cytotoxicity properties of resveratrol in Rat B103 neuroblastoma cells; although it''s molecular mechanisms for the biological effects are not fully defined. Here, we examined the cellular cytotoxicity of resveratrol by cell viability assay, antiproliferation by BrdU assay, DNA fragmentation by DNA ladder assay, activation of caspases and Bcl-2 family proteins were detected by western blot analyses. The results of our investigation suggest that resveratrol increased cellular cytotoxicity of Rat B103 neuroblastoma cells in a dose-and time-dependent manner with IC₅₀ of 17.86 µM at 48 h. On the other hand, incubation of neuroblastoma cells with resveratrol resulted in S-phase cell cycle arrests which dose-dependently and significantly reduced BrdU positive cells through the downregulation of cyclin D1 protein. In addition, resveratrol dose-dependently and significantly downregulated the expression of anti-apoptotic protein includes Bcl-2, Bcl-xL and Mcl-1 and also activates cleavage caspase-9 and-3 via the downregulation of procaspase-9 and -3 in a dose-dependent manner which indicates that involvement of intrinsic mitochondria-mediated apoptotic pathway. In conclusion, resveratrol increases cellular cytotoxicity and inhibits the proliferation of B103 neuroblastoma cells by inducing mitochondria-mediated intrinsic caspase dependent pathway which suggests this natural compound could be used as therapeutic purposes for neuroblastoma malignancies.