禁水大鼠肾脏与尿液水通道蛋白2表达的改变及意义

目的 研究禁水大鼠肾脏及其尿液ＡＱＰ２（aquaporin2)水通道蛋白量的改变,阐明尿液ＡＱＰ２蛋白与抗利尿激素（ＡＤＨ）的关系及其在监测机体水平衡中的作用。方法 本实验通过建立禁水大鼠模型,用免疫组化和Ｗestern印迹分析法测定肾脏内髓及尿液ＡＱＰ２的含量,并比较禁水组大鼠尿液ＡＱＰ２含量与对照组的差别。结果 禁水组大鼠肾脏ＡＱＰ２蛋白表达量较正常对照组明显增加,且ＡＱＰ２蛋白可在尿液中检测到,禁水时尿液ＡＱＰ２含量明显增多（P<0.01)。结论 ＡＱＰ２是机体缺水时维持机体水平衡的关键蛋白质之一,检测尿液ＡＱＰ２含量监测机体重吸收状况的一种较好的方法。     

Urinary excretion of aquaporin-2 water channel protein in chronic heart failure rats

目的　探讨慢性心力衰竭大鼠模型尿液aquaporin 2水通道蛋白 (AQP2 )浓度的改变及其与肾脏AQP2基因表达的相关性。方法　应用左冠状动脉结扎制备慢性心力衰竭大鼠模型 ,术后第 9周应用Western蛋白即迹测定尿液AQP2浓度和肾脏AQP2蛋白表达水平。结果　慢性心力衰竭大鼠和对照组大鼠尿液AQP2蛋白吸光度比分别为 365 5 %± 10 2 9%和 98 5 %± 4 7 6% (P<0 0 1) ,心力衰竭大鼠尿液AQP2浓度与肾脏AQP2基因表达水平有较好的相关性 (r =0 89,P <0 0 1)。结论　慢性心力衰竭大鼠模型尿液AQP2蛋白浓度明显增加。     

利尿剂对大鼠肾脏水通道蛋白-2基因表达和尿液水通道蛋白2的影响

目的 探讨临床常用利尿剂呋塞米、双氢克尿噻及安体舒通对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AQP2)基因表达及尿液水通道蛋白-2浓度的影响.方法 40只健康SD大鼠随机分成4组:对照组、呋塞米组、安体舒通组、双氢克尿噻组.观测尿量、血钠及尿渗量,应用RT-PCR半定量检测肾内髓质AQP2和血管加压素-2型受体(V2-R)mRNA水平,Westernblotting检测肾髓质AQP2蛋白含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测尿液AQP2浓度.结果 ①与对照组比较,利尿剂组大鼠尿量均显著增多(P＜0.05),尿液中AQP2浓度明显增加(P＜0.05).但呋塞米组尿渗量低于对照组(P＜0.05),而双氢克尿噻组和安体舒通组尿渗量高于对照组(P＜0.05).②呋塞米组肾脏AQP2 mRNA、V2-RmRNA和AQP2蛋白表达较对照组明显增加(P＜0.05),而双氢克尿噻组较对照组明显降低(P＜0.05),安体舒通组有所减少但无统计学差异.结论 三类利尿剂均可显著增加正常大鼠尿液AQP2蛋白的排出.但对正常大鼠肾脏水通道蛋白2基因表达的影响并不相同,双氢克尿噻可以抑制正常大鼠肾内髓质AQP2mRNA和蛋白的表达,呋塞米能增加正常大鼠肾内髓质AQP2mRNA和蛋白的表达.     

卡托普利和洛沙坦对大鼠肾脏水通道蛋白-2mRNA和尿液水通道蛋白-2的影响

目的 探讨卡托普利和洛沙坦对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AQP2)mRNA表达的影响及尿液水通道蛋白-2浓度的改变。方法 30只健康大鼠随机分成3组:正常对照组,卡托普利组,洛沙坦组。经用药后观察血Na⁺、尿量以及尿渗量水平,用RT-PCR半定量检测肾内髓质AQP2及血管加压素2型(V₂)受体mRNA水平,用酶联免疫吸附测定法检测尿液AQP2浓度。结果 卡托普利组与洛沙坦组大鼠尿量均较正常组显著增多,卡托普利组尿渗量低于洛沙坦组和正常组,但尿液中AQP2浓度却高于洛沙坦组和正常组。RT-PCR半定量显示卡托普利组AQP2mRNA较正常组显著降低(P<0.05),V₂受体mRNA没有显著差别。结论 卡托普利可以抑制正常大鼠肾内髓质AQP2mRNA的表达,同时促进肾内AQP2经尿液排出。     

高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4表达的变化及意义

目的探讨高原脑水肿大鼠脑组织水通道蛋白-4(AQP4)表达的变化及意义。方法 16只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为缺氧水肿组和对照组,每组8只,制作大鼠高原缺氧损伤模型。检测2组大鼠脑组织水含量,并采用实时定量聚合酶链反应、免疫组织化学法、Western blot测定大鼠脑组织高原缺氧损伤24 h后AQP4 mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,缺氧水肿组大鼠脑组织水含量增加,水肿明显,AQP4 mRNA和蛋白表达量上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AQP4在高原缺氧脑水肿的形成过程中发挥了重要作用,提示对AQP4的干预可减轻高原脑水肿损伤。     

安体舒通、双氢克尿噻和呋塞米对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2的影响

目的 探讨利尿剂安体舒通、双氢克尿噻片、呋塞米对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2(AQP2)浓度的影响.方法 慢性心力衰竭患者(CHF)303例,分别归入安体舒通组、双氢克尿噻组和呋塞米组,用放射免疫法检测血浆AVP浓度、间接ELISA法检测尿液AQP2浓度,比较用药前后7d血浆AvP浓度、尿液AQP2浓度的变化.结果 呋塞米组血浆AVP浓度较用药前增加明显(P<0.05);与用药前比较,各利尿剂组CHF患者尿液中AQP2浓度明显增加(P<0.05).结论 三类利尿剂均可增加CHF患者尿液AQP2的排出,呋塞米引起尿液中AQP2大量排出被认为可能与过多利尿后引起AVP分泌增加有关,是机体防止水钠过多丢失引起的继发性代偿反应.     

糖尿病大鼠肾组织中水通道蛋白2的表达及意义

目的:检测水通道蛋白2(AQP2)在糖尿病大鼠肾脏表达的变化,探讨其意义.方法:Wistar大鼠随机分为对照组和模型组.模型组40只链脲佐菌素建模,成模后15d、30d、45d、60d取材,每次10只,对照组10只60d一次取材.观察大鼠的一般指标、肾组织病理改变、AQP2免疫组化染色、实时聚合酶链反应法检测肾髓质集合管AQP2的表达.结果:和对照组大鼠相比,模型组均出现多饮、多食、多尿、体重减轻;同时血糖、血肌酐、血渗透压值升高,而尿渗透压值下降(P<0.05).HE染色显示模型组在15d、30d、45d肾脏结构基本正常.而在60d时.部分开始出现肾小球肥大.系膜区增宽,系膜细胞增生、基质增多.AQP2免疫组化染色显示肾脏外髓质部分集合管管腔内壁细胞阳性染色,而肾小球和肾间质未见表达,并且模型组阳性率高于对照组.同样,RT-PCR 半定量显示模型组大鼠肾脏AQP2的表达高于对照组(P<0.05).结论:AQP2在糖尿病大鼠肾髓质集合管组织中的表达增强;AQP2的上调表达可能是糖尿病水代谢异常的机体代偿机制.     

模拟失重条件对大鼠肾小管水通道蛋白2表达影响的研究

目的 探讨模拟失重条件下大鼠肾小管水通道蛋白2(AQP2)表达的变化.方法 采用尾部悬吊法建立失重模型.48只健康雄性Wistar大鼠分为对照组及尾吊3d组、尾吊5d组、尾吊7d组、尾吊2周组、尾吊4周组.分别于观察终点处死各组大鼠,处死前留取血尿标本,分别检测肾功能和尿渗透压.剥离肾脏组织,分离肾皮质和髓质.电镜观察肾小管超微结构.Western blot方法检测AQP2的表达.ELISA检测血清中抗利尿激素(ADH)的水平.结果 ①电镜下尾吊组大鼠肾脏均表现为肾小管不同程度受损,尾吊5d组大鼠肾小管损伤最严重.②Western blot显示尾吊组AQP2的表达较对照组均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),其中尾吊5d组大鼠肾脏AQP2表达最明显(P＜0.01).③尾吊5d组尿渗透压显著升高,与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.01).各组间ADH及肾功能指标差异无统计学意义.④AQP2蛋白表达量与尿渗透压呈正相关性(r =0.468,P=0.003).结论 模拟失重条件能引起大鼠肾小管AQP2表达上升,以尾吊5d组升高最明显.     

精氨酸加压素V2受体拮抗剂对阿霉素肾病大鼠肾脏水通道蛋白的影响

目的 探讨精氨酸加压素V2受体(AVP V2R)拮抗剂对阿霉素肾病大鼠肾脏水通道蛋白的影响。方法 24只大鼠分为正常对照组(NC组)、阿霉素肾病未治疗组(NS组)，阿霉素肾病 AVP V2R拮抗剂干预组(NS-V组)和阿霉素肾病 福辛普利干预组(NS-F组)，每组各6只。在第4周末，检测各组大鼠血、尿钠及渗透压等，同时检测大鼠肾脏AQP2、AQP3、AVP V2R的mRNA和蛋白表达情况。结果①阿霉素大鼠在4周末时有明显的高血钠和高血渗透压，同时伴低尿钠和低尿渗透压，而AVP V2R拮抗剂和福辛普利均能降低血钠，改善高血渗透压，AVP V2R拮抗剂还显著提高尿渗透压和尿钠。②与NC组相比，NS组大鼠肾脏AVP V2R表达明显下调，AVP V2R拮抗剂则使其进一步下调。③AVP V2R拮抗剂能上调阿霉素肾病大鼠肾脏AQP2 mRNA的表达，同时降低肾脏AQP2蛋白表达。而福辛普利和AVP V2R拮抗剂均能减少肾脏AQP3 mRNA和蛋白表达。结论 AVP V2R拮抗剂能改善阿霉素肾病大鼠的水钠潴留状态，其机制可能与其调节AQP2和AQP3的表达有关。     

水通道蛋白2,3,4在内淋巴囊、肾脏的表达及AVP、DDAVP对AQP2表达的影响

目的　从形态学上直接验证水通道蛋白 2 ,3,4 (AQP2 、AQP3、AQP4 )在内淋巴囊上皮 (ES)的表达 ;观察加压素(AVP)及 V- 2受体促效剂——去精氨酸加压素 (DDAVP)对 AQP2 在 ES表达的变化 ,并与肾脏比较 ,为耳肾相关提供客观依据。　方法　成年大鼠 1 0只经活体心脏灌注 ,取双侧颞骨 ,按石蜡包埋技术处理和切片 ,免疫组织化学方法标记确认 AQP2 ,3,4 在 ES的表达 ;成年大鼠 2 0只观察 AVP及DDAVP对 AQP2 在 ES和肾脏表达的影响。　结果　荧光显微镜下 ,AQP2 ,3,4 一抗在 ES细胞膜、细胞质显示荧光染色 ,肾脏集合管主细胞有稳定清晰染色反应。 AVP组和DDAVP组的 ES细胞膜、细胞质 AQP2 的表达明显较 AVP组降低 ,表现为荧光减弱 ,图像分析灰度明显减弱 (与正常阴性对照组相比 ,P<0 .0 1 ) ;AVP组和 DDAVP组 AQP2 的表达差异无显著性 (P<0 .0 5 )。AVP组和 DDAVP组肾脏集合管主细胞细胞膜细胞质 AQP2 表达明显较阴性对照组增强 ,表现为主细胞棕黄色颗粒染色加深 ,图像分析灰度减强 ,密度增加 (P <0 .0 5 ) ,IOD值提高 (P<0 .0 5 ) ,面积增加 (P <0 .0 5 ) ;AVP组和 DDAVP组 AQP2 表达差异无显著性 (P>0 .0 5 )。　结论　内淋巴囊上皮和肾脏集合管均表达AQP2 ,3,4 ;AVP促进肾脏表达 AQP2 ,提高肾脏重吸收的功     

醋制对商陆促利尿作用的影响及其机制研究

目的 探索毒性中药商陆醋制前后对机体利尿作用及相关指标的影响。方法 灌胃给予盐水负荷模型大鼠商陆醋制前后的水煎液,测定给药5 h内尿量变化、血浆抗利尿激素(ADH)、醛固酮(ALD)、心房钠尿肽(ANP)含量及肾脏水通道蛋白AQP2、AQP3、AQP4表达水平。结果 商陆醋制前后均能导致大鼠尿量显著增加（P<0.01）,醋制品较生品组大鼠尿量有显著增强（P<0.05）;商陆生品仅高剂量可显著降低血浆ADH水平（P<0.01）,同时有降低ALD、增加ANP水平的趋势,但无显著性差异;商陆醋品则可显著降低血浆ADH、ALD水平,升高ANP含量（P<0.05~0.01）;商陆生品可显著抑制肾脏中AQP2、AQP3和AQP4蛋白表达（P<0.05~0.01）,醋制后可显著抑制AQP2、AQP3蛋白表达水平（P<0.01）,对AQP4蛋白表达与模型组相比无显著性影响,且醋制品较生品抑制AQP3蛋白表达更显著（P<0.05）。结论 商陆经醋制后仍具有较强的利尿作用,且分子水平的效应比生品更强。商陆利尿作用的机制除与其改变机体体液代谢相关的激素水平外,还可能与其抑制肾脏远曲小管和集合管AQPs蛋白表达,进而抑制水的重吸收有关。      

ELISA法检测心力衰竭模型大鼠尿液水通道蛋白-2的变化及意义

目的：探讨充血性心力衰竭（CHF）模型大鼠尿水通道蛋白－2（aquaporin-2,AQP2）浓度的变化及其与低钠血症的关系。方法：应用左完状动脉结扎制备CHF大鼠模型，对术后大同时期的大鼠应用双抗体夹心ELISA法测定尿AQP2浓度，并测定24h尿量、血钠、尿渗量等指标。结果：ELISA定量检测大鼠42只，显示CHF模型大鼠比对照组尿AQP2的浓度明显增高（P＜0.01），且心力衰竭越重及血钠越低，尿AQP2的浓度越高。结论：用双抗体夹心ELISA法监测的尿液AQP2浓度，可以有效、方便地反映CHF时水潴留和低钠血症情况，为临床防治CHF及水钠失衡提供了新的监测指标和方法。     

卡托普利和洛沙坦对大鼠肾脏水通道蛋白-2 mRNA和尿液水通道蛋白-2的影响

目的 探讨卡托普利和洛沙坦对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AOP2)mRNA表达的影响及尿液水通道蛋白-2浓度的改变。方法 30只健康大鼠随机分成3组；正常对照组，卡托普利组．洛沙坦组。经用药后观察血Na^+、尿量以及尿渗量水平，用RT-PCR半定量检测肾内髓质AOP2及血管加压素2型(V2)受体mRNA水平，用酶联免疫吸附测定法检测尿液AOP2浓度。结果 卡托普利组与洛沙坦组大鼠尿量均较正常组显著增多，卡托普利组尿渗量低于洛沙坦组和正常组，但尿液中AQP2浓度却高于洛沙坦组和正常组。RT-PCR半定量显示卡托普利组AOP2 mRNA较正常组显著降低(P<0．05)，V2受体mRNA没有显著差别。结论 卡托普利可以抑制正常大鼠肾内髓质AOP2 mRNA的表达，同时促进肾内AOP2经尿液排出。     

局部应用PLGA-缓释地塞米松对高温高湿环境下大鼠创伤性脑水肿治疗的研究

目的 研究高温高湿环境下局部应用聚乳酸羟基乙酸(Polylactide acid-glycolic acid copolymer,PLGA)-缓释地塞米松对实验大鼠颅脑损伤的治疗作用及可能机制.方法 成年健康雄性SD大鼠24只,随机分为局部PLGA-缓释地塞米松组,甘露醇组和空白对照组.采用Feeney自由落体法建立大鼠急性颅脑损伤模型后置入高温高湿环境中(35℃、RH 85％).甘露醇组动物分别于致伤后立即接受2g/kg剂量的静脉注射,并于6h后追加维持剂量1次.24h后以干湿重法测量脑含水量变化,免疫组化和原位杂交方法分析测定AQP4蛋白和mRNA的表达.结果 与空白对照组比较,大鼠颅脑损伤后PLGA地塞米松和甘露醇静脉注射组能显著降低AQP4的表达和脑组织含水量(P＜0.05),AQP4-mRNA的表达两组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 局部应用PLGA-地塞米松可减轻高温高湿环境下创伤性脑水肿的生成,能减少脑水肿周围AQP4及mRNA的表达,影响AQP4表达,从而改变创伤区周围水的转运,使脑创伤后脑组织水肿减轻.     

重型脑损伤后AQP4表达与脑水肿的关系

目的观察重型脑损伤后水通道蛋白-4（AQP4）表达变化，及其与脑损伤后脑水肿之间的关系。方法健康成年Wistar大鼠，随机分成创伤性脑损伤（TBI）组和各假手术（SO）组。自由落体硬膜外撞击方法致重度脑创伤模型。于伤后4h、8h、12h、1d、3d、5d、7d取出大鼠脑组织，免疫组化（IHC）和原位杂交（ISH）检测AQP4的表达变化，干湿重法计算脑组织含水量。结果IHC和ISH显示，脑损伤后AQP4在脑组织中的表达上调，1d达高峰，持续至3d后下降，7d接近SO组水平。与SO组相比，除7d亚组外，TBI其余各亚组中AQP4表达水平均明显增高（P〈0、05）。脑损伤后4h脑组织含水量即比SO组增加（P〈0、05），随时间延长，脑组织含水量亦逐渐增加，伤后1-3d达高峰。AQP4表达和脑组织含水量呈正相关，r=0．978，P〈0，01。结论脑损伤后，随着脑水肿加重，AQP4表达上调。提示脑损伤后AQP4的表达变化与脑水肿的形成密切相关，AQP4在损伤后脑水肿的形成中发挥着重要作用。     

急性肝性脑病大鼠脑水肿与脑水通道蛋白-4的相关性

目的 探讨水通道蛋白-4(AQP4)在急性肝衰竭肝性脑病与脑水肿的相关性。方法 采用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备急性肝衰竭肝性脑病大鼠模型。将健康雄性SD大鼠随机分为对照组8只和模型组24只,其中模型组根据造模后处死大鼠时间不同,分为24、48、60h组。观察大鼠一般情况,评估HE等级,测定血浆丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、总胆红素和血氨,观察肝组织病理学,检测脑含水量和脑组织AQP4（包括蛋白和mRNA）表达水平。结果 模型组大鼠表现出典型肝性脑病症状,随着造模后观察时间延长,HE等级进行性升高,肝脏生化和血氨水平较对照组显著升高(P＜0.05),肝组织病理变化与对照组差异有统计学意义。脑含水量和AQP4表达水平（包括蛋白和mRNA）明显高于对照组(P＜0.05),并且AQP4蛋白和mRNA表达水平分别与脑含水量呈正相关(r =0.536,P＜0.01;r=0.566,P=0.01)。结论 急性肝衰竭肝性脑病大鼠脑水通道蛋白-4(AQP4)表达与脑水肿密切相关,因此AQP4是急性肝衰竭肝性脑病脑水肿发生发展的重要分子机制之一。     

AQP4在幼年大鼠感染性脑水肿中的作用机制

目的观察内毒素致幼年大鼠感染性脑水肿后水通道蛋白4（AQP4）的表达变化。方法将50只幼鼠随机分为内毒素组（40只）和对照组（10只）。建立内毒素致大鼠感染性脑水肿模型,于术后6h、12h、24h和48h处死动物,分别行脑组织含水量、血脑屏障通透率的测定,以伊文思兰含量判定血脑屏障通透率,并应用免疫组织化和RT--PCR,技术检测脑组织内AQP4蛋白和mRNA的表达水平。结果内毒素组脑组织含水量和伊文思兰含量明显高于对照组。在内毒素注射后6h时,脑组织中AQP4的表达明显增加,12h时达高峰,各时间点与对照组比较均有显著性差异（P〈0．01）。结论感染性脑水肿后脑组织中AQP4的表达增加,且与脑组织含水量和BBB的破坏呈正相关。