MIF介导ox-LDL对内皮细胞功能的影响及作用机制

目的 探讨巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）介导氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对血管内皮细胞功能的影响及其作用机制。方法 人脐静脉内皮细胞（HUVECS），给予ox-LDL(100 nmol/L)处理，蛋白免疫电泳检测相关蛋白的表达及功能；实时定量PCR监测炎症相关因子的表达；药物阻断和基因干预关键分子观察对下游基因的表达的影响；Griess反应检测在干预措施下内皮细胞一氧化氮（NO）的产生情况；体外用乙酰胆碱诱导的血管舒张反应作为评估内皮依赖性血管舒张功能的指标检测内皮细胞功能。结果 ox-LDL能增加内皮细胞胆固醇调节元件结合蛋白（SREBP2）和MIF的表达，应用药物特异性阻断以及siRNA抑制MIF的表达均可显著降低SREBP2的表达和激活（P<0.05）；离体实验证实MIF通过SREBP2抑制血管内皮细胞功能（P<0.05）。结论 ox-LDL等氧化应激刺激能通过MIF增加SREBP2介导的炎症小体（inflammasome）的表达和炎症相关内皮细胞表面黏附分子的表达，从而破坏内皮细胞功能，这可能是动脉粥样硬化（AS）发生发展的重要机制之一。     

氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子及抑制剂的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对胎盘生长因子1(PLGF-1)作用人脐静脉内皮细胞(ECV-304)释放炎性因子和内皮细胞黏附分子的影响,及PLGF-1拮抗剂2’-氨基-3’-甲氧黄酮(PD98059)对其抑制程度。方法应用不同浓度的PLGF-1(20、40、80μg/L)孵育ECV-304,分为对照组和PLGF-1干预组(20、40、80 μg/L)。再应用PD98059(100μmol/L)和PLGF 1(80 μg/L)刺激ECV 304,分为空白对照组、ox-LDL组、PLGF-1+ox-LDL组和PLGF-1+ox-LDL+PD98059(拮抗组)。应用ELISA法检测炎性因子和内皮细胞黏附分子的表达。结果 (1)PLGF-1诱导炎性因子和内皮细胞黏附分子的表达呈时间依赖关系,6 h达最理想的分泌量。随着PLGF-1浓度的加大呈上升趋势。(2)与空白对照组比较,ox-LDL组、PLGF-1+ox-LDL组和拮抗组白细胞介素6、基质金属蛋白酶2、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管细胞黏附分子1的表达显著增加(P<0.01),拮抗组较PLGF-1+ox-LDL组的表达显著减少(P<0.01)。结论 PLGF-1可促使内皮细胞产生大量炎性因子,参与诱导内皮活化;抑制PLGF-1的生物活性可控制炎性的反应。     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症反应的影响

目的探讨川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法体外培养的人冠状动脉内皮细胞,随机分为正常对照组(无干预)、ox-LDL组(50mg/Lox-LDL)、川芎嗪组(1、10、100μmol/L川芎嗪+50mg/Lox-LDL),观察川芎嗪对细胞间黏附分子1(ICAM-1)和环氧酶2基因和蛋白表达的影响;进一步检测与其耦联的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路活化的影响。结果与ox-LDL组比较,川芎嗪(10、100μmol/L)降低ICAM-1的基因表达(1.49±0.26、1.81±0.05比2.36±0.34,P<0.01),抑制环氧酶2的蛋白表达(0.21±0.03、0.13±0.04比0.48±0.01,P<0.05);川芎嗪(1、10μmol/L)降低ICAM-1的蛋白表达(0.16±0.03、0.14±0.02比0.87±0.05),抑制上述黏附分子和炎症因子耦联的信号分子p38MAPK的磷酸化激活(0.30±0.10、0.12±0.06比0.66±0.15),抑制信号分子NF-κB蛋白(0.32±0.08、0.20±0.11比0.62±0.10)表达水平的升高(均P<0.01)。结论川芎嗪具有对抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症和黏附反应,并抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活。     

瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1/S1P/NF-κB信号通路的影响

目的探讨经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激后,人脐静脉内皮细胞鞘氨醇激酶(Sphk)1、1-磷酸鞘氨醇(S1P)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、核转录因子(NF)-κB p65表达的变化及瑞舒伐他汀(Rt)对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1-S1P信号通路的影响。方法实验分为空白对照组,ox-LDL(50μg/ml)处理组,Rt(0.1、1、10μg/ml)干预组,RT-PCR检测细胞Sphk1、S1P、MMP-3因子水平;Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达;观察药物干预后细胞Sphk1、S1P、MMP-3、NF-κB p65因子的变化。MTT检测细胞增殖活性。结果 ox-LDL处理组细胞Sphk1、S1P、NF-κB p65、MMP-3的表达均显著高于空白对照组(P<0.05),Rt各干预组较ox-LDL处理组降低(P<0.05)。ox-LDL处理组细胞增殖明显受抑制,Rt各干预组细胞增殖率均较ox-LDL处理组显著上升(P<0.001)。结论 Sphk1-S1P信号传导通路的激活,导致下游炎症因子NF-κB p65、MMP-3的高表达,参与ox-LDL诱导的内皮细胞损伤过程,Rt可能通过抑制Sphk1/S1P信号传导通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。     

MiR-197-3p/STAMP2对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及炎症应激的影响

目的 探究miR-197-3p/前列腺六次跨膜蛋白（Six transmembrane protein of prostate,STAMP）2对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡和炎症应答。 方法 用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型;RT-PCR检测miR-197-3p和STAMP2表达;ELISA检测细胞凋亡;Western blot用于检测STAMP2,Bax和Bcl-2的蛋白水平;ELISA检测HUVECs中细胞间黏附分子（ICAM）-1,血管内皮细胞黏附分子（VCAM）-1和E选择素（E-selectin）的表达水平;生物信息学预测miR-197-3p的靶基因;并采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot验证miR-197-3p与STAMP2的靶向调控关系。 结果 ox-LDL能明显上调miR-197-3p的表达（P<0.05）,同时降低STAMP2的表达（P<0.05）,且呈时间依赖性;下调miR-197-3p能够显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡（P<0.05）,同时降低促凋亡蛋白Bax并增加抑凋亡蛋白Bcl-2（P<0.05）;抑制miR-197-3p明显降低ox-LDL诱导的炎症因子的表达（P<0.05）;此外,生物信息学预测提示STAMP2是miR-197-3p的靶基因,而且qRT-PCR及Western blot结果显示抑制miR-197-3p明显上调STAMP2 mRNA和蛋白水平（P<0.05）,从而证实miR-197-3p能够靶向调控STAMP2。 结论 MiR-197-3p可以通过靶向调控STAMP2从而调节ox-LDL诱导的HUVECs凋亡及炎症应答,为动脉粥样硬化的靶向治疗提供理论基础。     

替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1、核因子κB表达及细胞黏附的影响

目的观察替米沙坦对同型半胱氨酸诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)表达及与单核细胞黏附的影响。方法胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞;RT-PCR检测VCAM-1 mRMA的表达;Western blot检测VCAM-1、NF-κB蛋白的表达;ROSE BENGAL染色法检测单核细胞-血管内皮细胞黏附功能。结果与空白对照组相比,同型半胱氨酸增强了人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白的表达水平及与单核细胞黏附能力。替米沙坦(1000 nmol/L组)明显降低了同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白及与单核细胞的黏附水平(P<0.01)。与同型半胱氨酸组比,PDTC(NF-κB抑制剂)组NF-κB p65蛋白、VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白表达水平均明显降低,内皮细胞与单核细胞的黏附水平也明显降低(P<0.01)。结论替米沙坦抑制了VCAM-1 mRMA和蛋白的表达及内皮与单核细胞的黏附水平,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应及内皮损伤。     

TGF-β1/Smad3参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达

目的探讨转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)信号通路参与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加入ox-LDL(0.1 g/L)刺激细胞,用Western blot检测TGF-β1、Smad3磷酸化、VCAM-1和ICAM-1的表达。结果 ox-LDL明显增加人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达(P<0.05)。ox-LDL激活人脐静脉内皮细胞TGF-β1/Smad信号通路,TGF-β1表达明显增加,Smad3磷酸化明显增强。细胞核提取物分析表明,磷酸化的Smad3在细胞核表达增加。特异性Smad3磷酸化抑制剂SIS3以浓度依赖方式抑制ox-LDL刺激的Smad3磷酸化(P<0.05),且VCAM-1和ICAM-1的表达增加(P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达,抑制Smad3磷酸化反而增加炎症蛋白表达,提示TGF-β1/Smad3通道活化具有抑制ox-LDL刺激的内皮细胞炎症蛋白表达的影响。     

阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2的影响

目的观察阿托伐他汀对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2[Lp-PLA(2)]的影响。方法入选2013年3月—2013年12月ACS患者38例,分离培养ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞,分为4组:空白对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、阿托伐他汀低浓度组和阿托伐他汀高浓度组。分别给予不同处理,收集培养细胞上清液及巨噬细胞,实时定量RT-PCR法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA表达,Western-blot法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液Lp-PLA(2)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平。结果 ox-LDL刺激可以明显增加ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA与蛋白的表达,而阿托伐他汀可以显著降低其诱导的Lp-PLA(2)表达增加及炎症因子分泌,且该反应呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀抑制ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)的表达,从而起到调节炎症反应,稳定斑块作用。     

罗格列酮抑制高糖诱导的内皮细胞黏附作用

目的 研究罗格列酮对高糖诱导的内皮细胞黏附作用的影响.方法 应用不同浓度葡萄糖处理内皮细胞后,加入不同浓度罗格列酮,用免疫细胞化学法和逆转录聚合酶链反应分别检测血管细胞黏附分子1蛋白及mRNA的表达.同时各处理组行内皮细胞-单核细胞黏附试验.结果 葡萄糖可诱导血管细胞黏附分子蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05),在16.7 mmol/L时作用最显著;应用罗格列酮后,血管细胞黏附分子1蛋白和mRNA的表达明显降低(P<0.05).葡萄糖可诱导内皮细胞-单核细胞黏附增加,且与葡萄糖浓度呈正相关;罗格列酮可抑制内皮细胞-单核细胞黏附(P<0.05).结论 在一定葡萄糖浓度范围内,罗格列酮可能通过抑制葡萄糖诱导的内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达来抑制内皮细胞-单核细胞的黏附作用,这可能是罗格列酮抗糖尿病相关的动脉粥样硬化作用之一.     

羟基红花黄色素A对香烟提取物诱导A549细胞炎症因子表达作用的研究

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导的A549肺泡上皮细胞炎症介质表达升高的作用。方法:用CSE刺激A549肺泡上皮细胞建立损伤模型,细胞分七组:单纯HSYA组、Sham组、CSE组、CSE+HSYA低剂量组(1μmol/L)、CSE+HSYA中剂量组(4μmol/L)、CSE+HSYA高剂量组(16μmol/L)和CSE+阳性对照药红霉素(5μg/mL)组。以RT-qPCR技术检测白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞培养液中IL-6、IL-1β及TNF-α的蛋白水平表达;蛋白质印迹法(western blot)检测细胞p38MAPK磷酸化的水平。结果:与Sham组相比,CSE组IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平均明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组相比,CSE组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后CSE所诱发的炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组比较,CSE组的p38 MAPK的磷酸化水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后细胞p38 MAPK的磷酸化水平升高受到抑制,红霉素组也可见明显的抑制。结论:HSYA可抑制CSE诱导A549细胞的炎症因子的表达升高。     

2011年ASA/ACCF/AHA/AANN/AANS/ACR/ASNR/CNS/SAIP/SCAI/SIR/SNIS/SVM/SVS颅外颈动脉和椎动脉疾病患者处理指南

导言医疗专业人员在对与疾病检测、处理或预防中使用的药物、装置和操作相关的证据的严格评价中扮演的核心角色是十分必要的。对涉及这些疗法和操作的绝对和相对益处和风险的现有资料进行适当和严格的专业分析,可通过将资源集中于最有效的治疗策略,从而改善治疗效果、优化患者转归和合理控制成本。这些资料的一种重要应用是制定临床实践指南,后者进而能为其他各种应用,如绩效评价、合理应用标准、临床决策支持工具和质量改进工具提供依据。     

2011年ASA／ACCF／AHA／AANN／AANS／ACR／ASNR／CNS／SAIP／SCAI/SIR/SNIS／SVM/SVS颅外颈动脉和椎动脉疾病患者处理指南（续前）

7血运重建术 7．1关于颈动脉血运重建术患者选择的推荐意见 I级推荐 1对于在6个月内有过非致残性缺血性卒中或TIA症状（包括半球事件或一过性黑噱）且手术风险中等或较低的患者,     

Development of a monoclonal antibody capable of differentiating platelet PLA1/PLA1, PLA1/PLA2 and PLA2/PLA2 genotypes

A monoclonal antibody, LK-4, has been developed which distinguishes platelet PLA1/PLA1, PLA1/PLA2 and PLA2/PLA2 genotypes on platelet glycoprotein GPIIIa of Triton-solubilized platelet extracts. An ELISA assay has been developed which traps GPIIIa with Concanavalin A, enriching the platelet extract for the PLA antigens. A second monoclonal antibody, DEK-10, which reacts equally with GPIIIa of PLA1/PLA1 and PLA2/PLA2 platelet extracts is employed as an internal standard to correct for individual differences in GPIIIa content, GPIIIa extracted by Triton X-100 and GPIIIa trapped with Concanavalin A. This ELISA assay clearly differentiated 11 different PLA1/PLA1 subjects from eight PLA2/PLA2 women with a history of neonatal alloimmune thrombocytopenia as well as six unrelated obligate heterozygotes and should be useful in evaluating the PLA genotype of pregnant women and their families.