p38MAPK与血管再狭窄

p38mitogen activatedproteinkinase(p38MAPK)是丝裂素激活蛋白激酶超家族的新成员 ,参与多种细胞的胞内信号传递。p38MAPK调节着细胞的许多应激反应[1,2 ] 。近年的研究表明 ,p38MAPK参与多种生物反应 ,特别是在肌细胞分化中起着至关重要的作用[3 4] 。本文就其在血管再狭窄中对血管平滑肌和内皮细胞增殖的影响作一综述。1　p38MAPK的结构和功能哺乳动物 p38MAPK与酵母HOG1MAPK同源 ,犬p38MAPK氨基酸序列 99%与人一样 ,仅有 2个保守序列不一样 ,分子量为 4 1.2kD(≈ 4 .12× 10 -4u) ,等电点 5 .4 1[5] 。新近资料认为[6,7] …     

瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白诱导的血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达

目的 研究瑞舒伐他汀对C反应蛋白诱导的人血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的影响.方法 体外培养人血管内皮细胞,ELISA和RT-PCR检测C反应蛋白对血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达的剂量与时间效应.Western blotting检测信号蛋白p38MAPK的表达水平.结果 C反应蛋白以剂量和时间依赖方式显著增加血管内皮细胞血小板反应蛋白1 mRNA表达,p38MAPK表达增加,其抑制剂SB203580减少p38MAPK的磷酸化及血小板反应蛋白1 mRNA表达水平,瑞舒伐他汀显著抑制p38MAPK表达及血小板反应蛋白1 mRNA和蛋白的表达.结论 C反应蛋白至少通过p38MAPK磷酸化途径直接诱导血管内皮细胞血小板反应蛋白1表达,促进细胞炎症反应,而瑞舒伐他汀抑制C反应蛋白的这种效应.     

什么叫血管内皮细胞切应力，切应力过低的坏处是什么？

问：血流在血管里流动，什么样的力量对血管壁起作用？ 答：血流在血管里流动，对血管壁产生两种压力： 1）环形压力：即对血管壁产生环形张力，也就是血压。过高的环形张力对血管起损害作用； 2）切应力：即血流流动时对血管壁的摩擦力（图1），血流对内皮细胞有一定量切应力，对保持内皮细胞，平滑肌细胞功能很有好处。     

p38信号通路在内皮细胞微粒诱导人脐静脉内皮细胞表达细胞间黏附分子-1中的作用

目的观察p38信号通路（P38MAPK）在内皮细胞微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HU—VECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法将体外培养的HUVECs随机分组：①EMPs不同时点观察组：用EMPs（终浓度105／m1）分别刺激细胞0、3、6、12、24h;②EMPs不同剂量作用组：分别用终浓度为0、10^2、10^3、10^4、10^5／ml的EMPs刺激细胞24h;③EMPs＋p38MAPK特异性抑制剂SB203580组：在EMPs（终浓度10^5／ml）刺激前,与终浓度为5μmol／L的SB203580共同孵育30min。用蛋白免疫印迹法（Western blot）测定p38MAPK磷酸化表达,实时荧光定量PCR测定ICAM—1mRNA的表达。结果EMPs可激活p38MAPK,使磷酸化p38MAPK蛋白表达量及ICAM—1mRNA表达量增加,且呈剂量和时间依赖性。p38MAPK特异性拈抗剂SB203580可显著抑制EMPs的此作用。结论p38信号通路可能部分参与了对EMPs诱导HUVECs表达ICAM-1的调控。     

p38MAPK信号通路与内皮细胞激活

内皮细胞激活是内皮细胞损伤的始动因素,是引起各种不同程度的炎症反应和细胞凋亡的前提条件 ;丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK) 是哺乳动物细胞中重要的信号转导通路,其中 p38MAPK 通路在细胞应激、细胞生长、凋亡和炎症等多种生理和病理过程中起重要作用,越来越引起业界的广泛关注,本文就 p38MAPK 信号通路及其与内皮细胞激活的相关性做一综述,旨在进一步对内皮细胞损伤引发心血管疾病研究提供参考资料。     

血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞凋亡及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响以及p38丝裂素活化蛋白激酶表达的变化.方法 制备血管紧张素ⅡRPMI1640培养液培养人脐静脉内皮细胞,通过吖啶橙荧光染色观察细胞形态学的变化、流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法分析凋亡调控基因Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平,通过特异性磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶抗体采用免疫印迹法检测p38丝裂素活化蛋白激酶活性.结果 血管紧张素Ⅱ能诱导内皮细胞凋亡,荧光显微镜可见明显的细胞凋亡(32.76%±2.98%比2.14%±0.36%,P<0.01);流式细胞仪检测AnnexinV-FITC/PI双染色的血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞中,早中期凋亡细胞明显增加,其细胞凋亡率为37.4%±1.6%(对照组为10.2%±1.8%).与对照组相比,6 h、12 h、18 h及24 h Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),p38丝裂素活化蛋白激酶磷酸化水平于18 h达到最高峰(P<0.01).结论 血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞的凋亡可能与p38丝裂素活化蛋白激酶对Bcl-2 mRNA及蛋白表达影响有关.     

周期性机械牵拉诱导A549细胞p38MAPK的表达

目的 探讨p38蛋白激酶(p38 MAPK)是否参与周期性机械牵拉刺激在人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的信号转导过程.方法 实验分对照组(刺激前)、机械牵拉(刺激后)5、15、30、60 min共5组,每组3皿细胞.建立离体的A549细胞机械牵拉模型:以大小为1000 μstrain的牵拉力刺激细胞,在刺激前和刺激后5、15、30、60 min时间点进行观察.结果 A549细胞经机械牵拉刺激后,磷酸化p38蛋白水平增加,以30 min时间点最为明显.随着机械牵拉时间的延长,在60 min时间点磷酸化p38蛋白水平下降至约基线水平.结论 机械牵拉刺激信号可激活A549细胞p38 MAPK,从而引起继发细胞信号转导及功能改变.     

什么叫血管内皮细胞切应力,切应力过低的坏处是什么?(待续)

问:血流在血管里流动,什么样的力量对血管壁起作用?答:血流在血管里流动,对血管壁产生两种压力:1)环形压力:即对血管壁产生环形张力,也就是血压。过高的环形张力对血管起损害作用;2)切应力:即血流流动时对血管壁的摩擦力(图1),血流对内皮细胞有一定量切应力,对保持     

血管紧张素（1-7）对血管紧张素Ⅱ激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK通路的拮抗作用

目的 探讨血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)] 阻断血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致炎作用的可能机制.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞,取2～5代用于实验.培养细胞随机分两组:Ⅰ组:对照组,AngⅡ组和AngⅡ+不同浓度Ang (1-7)组;Ⅱ组:对照组,AngⅡ组,Ang (1-7)组,AngⅡ+Ang-(1-7)组,AngⅡ+Ang (1-7)+A-779组,A-779组.用免疫印迹法测定细胞p38MAPK磷酸化表达.培养细胞用RT-PCR法测定Ang(1-7)的特异性受体Mas受体的表达.结果 100 nmol/L Ang(1-7)可以拮抗100 nmol/L AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞p38MAPK磷酸化表达,且呈剂量依赖性.随着Ang(1-7)剂量的增加p38MAPK磷酸化表达逐渐减弱,在1000 nmol/L Ang(1-7)时即有明显减弱.Ang(1-7)受体特异性拮抗剂A-779可显著抑制Ang(1-7)的此作用.结论 Ang(1-7)呈剂量依赖性拮抗AngⅡ激活人脐静脉内皮细胞p38MAPK通路的作用.     

p38MAPK介导PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞MMP-2基因表达

目的　观察血小板源性生长因子BB（PDGF-BB）是否可以诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）基质金属蛋白酶2（MMP-2）基因表达及VSMC的迁移,探讨p38信号通路在这一过程中的作用,为血管重建性疾病的研究提供实验依据。方法　PDGF-BB不同浓度和不同时间刺激体外培养的大鼠VSMC,用放线菌素D、SB202190（MAPK/p38特异性抑制剂）处理PDGF-BB诱导的VSMC。细胞划痕实验检测细胞迁移,运用Real-time　RT-PCR检测MMP-2基因表达水平,Western　blot　检测p38的活性变化。结果　PDGF-BB可促进VSMC迁移,SB202190可抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移。不同浓度PDGF-BB（10　μg/L～50　μg/L）作用VSMC　0.5　h,MMP-2基因表达明显增加,其中以20　μg/L较显著;用20　μg/L　PDGF-BB作用VSMC　0.5　h～4　h,可显著上调MMP-2基因表达,以0.5　h较显著。用放线菌素D和SB202190预处理后MMP-2基因表达降低。PDGF-BB可激活VSMC中磷酸化p38水平,SB202190可抑制　p38的磷酸化以及相应的MMP-2基因表达。结论　p38参与了PDGF-BB诱导的VSMC迁移及MMP-2基因表达。     

Reactive oxygen species-sensitive p38 MAPK controls thrombin-induced migration of vascular smooth muscle cells

Thrombin has been implicated in the development of atherosclerosis and restenosis, in which migration of vascular smooth muscle cells (VSMC) is a crucial event. Thrombin-stimulated VSMC migration is associated with increased generation of reactive oxygen species (ROS), activation of mitogen-activated protein kinases (MAPKs), and production of growth factors and chemoattractants. In this study, we examined the interrelation of these signals to determine the pathway controlling thrombin-directed migration of human VSMC. Our results show that thrombin stimulated the production of ROS and activation of p38 MAPK. ROS were required for thrombin-induced VSMC migration since both generation of ROS and cell migration were significantly attenuated by inhibitors of NAD(P)H oxidase, diphenyleneiodonium (DPI) and apocynin (Apo.), and by the hydrogen peroxide scavenger, catalase (Cat.). Activation of p38 MAPK by thrombin was inhibited by DPI, Apo. and Cat., indicating ROS are used as messengers for activating this kinase. p38 MAPK is an important step since SB 203580, a selective inhibitor of p38 MAPK, suppressed the cell migration induced by thrombin. Furthermore, thrombin increased the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), a chemoattractant for VSMC, and this expression was inhibited by DPI, Apo., Cat. and SB 203580. Addition of anti-VEGF antibody significantly attenuated thrombin-induced migration. Collectively, the data presented here show that thrombin has stimulated VSMC migration and VEGF expression through an ROS-sensitive p38 MAPK pathway. VEGF synthesized and released by the cell served as a secondary mediator in thrombin-directed migration.     

补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1通过激活p38信号通路增加内皮细胞黏附

目的探讨补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附分子表达及黏附功能的影响及其分子机制。方法体外实验采用培养HUVEC和人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞。(1)采用不同浓度rCTRP1(10、100、1 000μg/L)刺激HUVEC 24 h,用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1) m RNA和蛋白表达水平;(2)不同浓度rCTRP1(10、100、1 000μg/L)或TNF-α(10μg/L)分别刺激HUVEC 24 h,通过共孵育HUVEC和THP-1在倒置荧光显微镜下观察单个核细胞-内皮细胞黏附情况;(3)对照组:生理盐水和BSA(10μg)为阴性对照,TNF-α(3μg)为阳性对照;实验组:rCTRP1(3、10μg)分别腹腔注射小鼠,倒置显微镜下实时观察小鼠肠系膜上动脉中白细胞的滚动及黏附情况;(4) 1 000μg/L rCTRP1刺激HUVEC(15、30、60 min),采用Western blot检测p38、ERK、JNK、p65的磷酸化水平,应用SB203580抑制p38MAPK信号通路后,Western blot检测黏附分子VCAM-1、ICAM-1的蛋白表达。结果 (1)rCTRP1刺激HUVEC后,黏附分子VCAM-1和ICAM-1的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05),呈剂量依赖性,尤以ICAM-1明显;(2)体外实验:随着CTRP1刺激剂量增加,单个核细胞-内皮细胞黏附数显著增加,差异有统计学意义(P0.05);体内实验:小鼠腹腔注射rCTRP1后,血管内白细胞滚动速度显著下降,黏附在内皮的细胞数目显著增加,差异均有统计学意义(P0.05);(3) rCTRP1刺激HUVEC后p38和p65磷酸化水平显著增加,ERK、JNK磷酸化水平无明显变化,SB203580抑制p38MAPK信号通路后,rCTRP1诱导的VCAM-1和ICAM-1蛋白表达显著下降(P0.05)。结论 CTRP1诱导内皮细胞分泌VCAM-1和ICAM-1,增加内皮细胞黏附能力,其机制可能是通过激活p38MAPK信号通路。     

扰动剪切流场对血管内皮细胞小窝蛋白再分布和表达量的影响

目的 利用能模拟动脉粥样硬化好发部位模型的流动腔来探讨扰动剪切力对内皮细胞膜信号传导中介--小窝蛋白分布和表达量的影响.方法 将细胞接种到流动腔,取加载作用6、12、24和48 h后的细胞与静止态的细胞进行活细胞染色,利用激光共聚焦显微镜扫描,分析内皮小窝蛋白的分布情况,并在相同时间点取加载作用的细胞与静止态的细胞进行Real Time PCR,检测内皮小窝蛋白相对表达量的变化.结果 扰动剪切作用下,小窝蛋白发生明显的再分布,向细胞边缘聚集,并没有出现单边极化的现象.内皮细胞小窝蛋白-1相对表达量随着加载时间的延长逐渐减少,在扰动剪切力作用下48 h后内皮细胞小窝蛋白-1相对表达量减少了约40%.结论 扰动流影响了小窝蛋白在细胞中的再分布和相对表达量,可能进一步通过力一化学信号的耦合形式,最终对细胞的生物学行为产生影响.     

p38MAPK信号途径与血管损伤后平滑肌细胞增殖关系的研究

目的检测大鼠颈动脉球囊损伤后平滑肌细胞增殖及p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)的表达,探讨血管损伤后平滑肌细胞增殖的信号途径.方法雄性Sprague-dawley大鼠30只,体重250～300 g.随机分为假手术组、手术后7 d组、手术后14d组,每组10只大鼠,进行球囊血管损伤术,术后7、14 d分别取15 mm颈动脉作为实验标本.血管组织行苏木精-伊红染色、免疫组化和免疫印迹,检测血管壁增生、增殖细胞核抗原(PCNA)和p38MAPK表达情况.结果术后7、14d组有动脉壁增厚、新生内膜形成和中膜平滑肌胶原化,PCNA细胞阳性率分别是(39.5±7.9)%和(44.8±9.9)%,与假手术组[(1.3±0.4)%]相比明显增加(P＜0.01);p38MAPK表达明显高于假手术组(P＜0.05).p38MAPK表达与血管平滑肌细胞增殖率呈正相关(r=0.714,P＜0.05).结论球囊损伤血管能促进血管平滑肌细胞增殖和血管内膜增生;血管损伤后p38MAPK表达明显增强,与平滑肌细胞增殖呈正相关;p38MAPK信号途径参与了血管平滑肌细胞的增殖.     

骨骼肌卫星细胞移植后心肌梗死区血管内皮因子表达及血管新生作用

目的:研究骨骼肌卫星细胞移植后心肌梗死(MI)区血管内皮因子(VEGF)表达及血管新生作用。方法:成年Louis近交系大鼠,结扎前降支建立急性MI模型,将骨骼肌卫星细胞移植到梗死区,2W后应用免疫组化方法鉴定梗死区VEGF的表达及新生血管密度。结果:骨骼肌卫星细胞在梗死区增殖、分化良好,梗死区VEGF表达移植组明显高于对照组(P<0.05),新生血管密度移植组也高于对照组(P<0.05)。结论:移植区卫星细胞可以分泌生长因子,促进血管形成,改善梗死区细胞的生存环境。     

丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1和p38在内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化过程中的表达变化

目的:观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和p38MAPK及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的动态变化。方法:分别用免疫组化、免疫印迹(Westernblot)和逆转录-聚合酶链反应方法检测假损伤组(S组)和损伤组损伤后不同时间点血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)、p38蛋白和MKP-1mRNA及蛋白表达的变化。结果:①S组中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性表达;中膜于损伤后1~14d,新生内膜(NI)于5~14d阳性细胞率逐渐增加,28d后开始逐渐减少,NI阳性率高于中膜。②S组中膜SMα-actin表达为阳性,内皮为阴性;中膜阳性表达于损伤后1d开始减少,3d最为明显,5d后开始逐渐增加,NI阳性表达弱于中膜。③S组中膜p38呈阴性或弱阳性;损伤后1~35d呈持续高表达,NI阳性表达强于中膜。p38与PCNA表达变化呈正相关。④S组中膜MKP-1呈弱阳性或阳性表达;损伤后1d即开始下降,14~28d稍有回升,至35d仍未回到S组水平,NI阳性表达稍弱于中膜。MKP-1与PCNA表达变化呈负相关。结论:VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,p38MAPK和MKP-1参与了损伤后VSMC表型转化的信号转导及其调节。     

Platelet endothelial cell adhesion molecule-1 and mechanotransduction in vascular endothelial cells

Endothelial cells are known to respond to mechanical forces such as fluid shear stress and cyclic stretch, but elucidating the mechanism for mechanosensing has been difficult. Experimental data indicate that there are probably several sensing mechanisms. We have recently proposed a novel mechanoresponse mechanism that involves platelet endothelial cell adhesion molecule-1 (PECAM-1). When endothelial cells are stimulated by fluid shear stress, PECAM-1 is tyrosine phosphorylated and activates the extracellular signal-regulated kinase 1 and 2 (ERK1/2) signalling cascade. The same signalling events occurred when we applied pulling force directly on PECAM-1 on the endothelial cell surface using magnetic beads coated with antibodies against the external domain of PECAM-1. These results appear to indicate that PECAM-1 is a mechanotransduction molecule. To our knowledge, this is the first mammalian molecule that is shown to respond to mechanical force directly exerted to it.