铜绿假单胞菌耐药性及氟喹诺酮类耐药相关基因的研究

目的 了解医院临床分离的铜绿假单胞菌耐药情况及氟喹诺酮类相关耐药基因存在状况.方法 用BD Phoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验,用聚合酶链反应（PCR）检测parC、gyrA两种氟喹诺酮类耐药相关基因.结果 70株铜绿假单胞菌呈现多重耐药,对环丙沙星、左旋氧氟沙星的耐药率分别为51.4%、50.0%,其余11种的耐药率在10.0%～100.0%.在70株铜绿假单胞菌中,39（55.7%）株分离菌检出parC基因,18（25.7%）株分离菌检出gyrA基因.结论 临床分离的铜绿假单胞菌多重耐药严重,携带parC和gyrA基因是本组试验菌株对氟喹诺酮类抗生素耐药的重要机制.     

喹诺酮类耐药福氏志贺菌的相关耐药基因研究

目的了解2010—2014年上海市各区县医院139株福氏志贺菌的耐药性,探讨福氏志贺菌对喹诺酮类药物的耐药机制。方法用纸片扩散法测定菌株对14种抗菌药物的敏感性,用环丙沙星E试验条测定其最低抑菌浓度;采用PCR法检测DNA旋转酶A亚单位(gyrA)、拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因的喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR),同时对质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因qnrA、qnrB、qnrS和氨基糖苷乙酰转移酶变异基因aac(6')-Ib-cr进行筛选。扩增产物进行DNA测序。结果福氏志贺菌对氨苄西林、链霉素、四环素、萘啶酸的耐药率都达到了90%以上,对环丙沙星的耐药率达到了40.3%,同时有30.2%菌株对头孢吡肟产生了耐药。gyrA和parC基因的突变率分别为98.6%和97.8%。gyrA基因存在Ser83、Asp87和His211 3个位点的突变,parC基因只检测到Ser80 1个位点的突变;共检测到9株qnrS和6株aac(6')-Ib-cr喹诺酮耐药质粒。结论上海地区福氏志贺菌耐药情况严重。QRDR相关基因突变率高,Asp87的突变对喹诺酮类抗菌药物的耐药起着主导作用,而耐药质粒起着重要的辅助作用。     

淋病奈瑟菌的耐药性及氟喹诺酮耐药基因突变的分析

目的 了解本地区淋病奈瑟菌(NG)流行株对5种抗生素的敏感性,分析NG的耐药性特点,为淋病的治疗提供实验依据。方法 纸片扩散法检测108株NG对5种抗生素的敏感性,用产色头孢硝噻吩法检测β-内酰胺酶,用聚合酶链反应(PCR)扩增NG gyrA和parC基因的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关序列并作测序分析。结果 108株NG中检出84株对青霉素耐药(77．8％),由质粒介导的产青霉素酶NG(PPNG)为60株(55．6％);四环素耐药率为61．1％,其中质粒介导高度耐四环素NG(TRNG)为28株,占25．9％;环丙沙星耐药率为83．3％;未发现对大观霉素和头孢曲松的耐药菌株。耐氟喹诺酮的22株NG均发生gyrA基因的91、95氨基酸位点突变,原91位氨基酸全部由丝氨酸转变为苯丙氨酸,parC基因的氨基酸突变位点分别为86、87和91。结论 青霉素、四环素以及氟喹诺酮类药物已不宜作为本地区治疗淋病的常规药物;大观霉素、头孢曲松可作为治疗淋病的首选药物,基因检测分析证明了NG gyrA和parC基因突变与氟喹诺酮耐药性有关。     

淋病奈瑟菌的耐药性及氟喹诺酮耐药基因突变的分析

目的了解本地区淋病奈瑟菌(NG)流行株对5种抗生素的敏感性,分析NG的耐药性特点,为淋病的治疗提供实验依据。方法纸片扩散法检测108株NG对5种抗生素的敏感性,用产色头孢硝噻吩法检测β内酰胺酶,用聚合酶链反应(PCR)扩增NGgyrA和parC基因的氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关序列并作测序分析。结果108株NG中检出84株对青霉素耐药(77.8%),由质粒介导的产青霉素酶NG(PPNG)为60株(55.6%);四环素耐药率为61.1%,其中质粒介导高度耐四环素NG(TRNG)为28株,占25.9%;环丙沙星耐药率为83.3%;未发现对大观霉素和头孢曲松的耐药菌株。耐氟喹诺酮的22株NG均发生gyrA基因的91、95氨基酸位点突变,原91位氨基酸全部由丝氨酸转变为苯丙氨酸,parC基因的氨基酸突变位点分别为86、87和91。结论青霉素、四环素以及氟喹诺酮类药物已不宜作为本地区治疗淋病的常规药物;大观霉素、头孢曲松可作为治疗淋病的首选药物,基因检测分析证明了NGgyrA和parC基因突变与氟喹诺酮耐药性有关。     

致尿路感染的大肠埃希菌耐喹诺酮类抗菌药的相关耐药基因及耐药机制

目的:调查分析致尿路感染的大肠埃希菌喹诺酮类抗菌药相关耐药基因的流行状况,并探讨其耐药机制.方法:收集丽水市中心医院2008年3月至2010年3月从临床分离的导致尿路感染的大肠埃希菌无重复菌株52株,K-B法检测其耐药性,利用PCR扩增法检测并分析大肠埃希菌质粒介导喹诺酮耐药相关的qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR、qnrS、aac(6’)-Ib基因以及DNA解旋酶GyrA与拓扑异构酶Ⅳ基因的喹诺酮决定区域ParC,扩增产物测序后经GenBank比对确认.结果:未检测到qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR及qnrS基因,aac(6')-Ib检出率为26.9％(14/52),经比对未发现aac(6')-Ib-cr阳性菌株;耐药菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区氨基酸序列存在两个位点突变;36株耐药菌拓扑异构酶ⅣParC基因测序与敏感菌相比相似性89％～ 95％.结论:致尿路感染大肠埃希菌中未检测到qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrR、qnrS基因及aac(6')-Ib-cr阳性株,DNA解旋酶gyrA和ParC基因变异可能是导致我院尿路感染大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药耐药的主要原因.     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,VITEK 2全自动微生物鉴定及药敏系统对其进行重新鉴定,聚合酶链反应（PCR）扩增oprD2、金属酶基因、氨基糖苷类酶修饰基因。结果 40株铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素：厄它培南,亚胺培南（IPM）、头孢他啶（CAZ）、美罗培南、头孢吡肟（PEP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、环丙沙星、氨曲南（ATM）、庆大霉素（GEN）、妥布霉素、阿米卡星、多粘菌素耐药率分别为100%、96.2%、92.0%、90.1%、84.8%、83.9%、83.1%、73.7%、65.1%、60.6%、58.0%、0%。PCR结果显示oprD2缺失率65.0%,整合子阳性率22.5%,发现金属酶基因IMP-1株,氨基糖苷类修饰酶基因ant3Ⅰ、aac6Ⅱ、aac6Ⅰ、ant2Ⅰ基因阳性率分别为36.0%、35.1%、26.2%,20.1%,同时携带2种或2种以上耐药基因占55.0%,携带2种以上氨基糖苷类修饰基因的有40.0%。结论多重耐药铜绿假单胞菌耐药性高,携带多种氨基糖苷类修饰酶基因,外膜孔蛋白oprD2缺失在多药耐药铜绿假单胞很常见,另外携带多种耐药基因盒的整合子的存在也是细菌耐药的常见原因,应引起高度重视。     

泛耐药鲍氏不动杆菌喹诺酮类耐药基因研究

据我国卫生部Mohnarin所属89所三等甲级医院2008年度报告,鲍氏不动杆菌在ICU的临床标本分离率居第一位［1］。2010年中国美罗培南敏感性监测系统（CMSS）对革兰阴性杆菌耐药性监测报告中鲍氏不动杆菌耐药率高出铜绿假单胞菌1倍［2］。为了解泛耐药鲍氏不动杆菌（PDR-ABA）喹诺酮类耐药的遗传学背景,作者对20株分离自本院ICU的PDR-ABA进行喹诺酮类耐药相关基因检测。结果报告如下。     

新生儿耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药性及耐药基因研究

目的研究临床分离自新生儿的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药性及碳青霉烯酶耐药基因类型。方法收集2013年12月至2015年12月南宁市2家妇幼保健院住院新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌8株。使用生物梅里埃公司的VITEK-2Compact全自动细菌鉴定仪对细菌进行鉴定以及菌株最低抑菌浓度(MIC)检测。改良Hodge试验筛选碳青霉烯酶阳性菌株,乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效试验筛选产金属酶菌株。PCR扩增碳青霉烯酶基因(KPC、GES、SME、NMC、IMI、IMP、NDM-1、VIM、SIM),并对PCR阳性产物测序鉴定,测序结果与GenBank数据库进行比对。结果药敏结果显示,8株耐药菌株对大部分临床常用抗菌药物高度耐药,对氟喹诺酮类抗菌药物和氨基糖苷类抗菌药物有较高的敏感性。表型确认试验显示,6株改良Hodge试验阳性,7株EDTA协同试验阳性。8株碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌均携带IMP-4碳青霉烯酶基因,未检出KPC、GES、SME、NMC、IMI、NDM-1、VIM、SIM型碳青霉烯酶基因。结论本地区新生儿碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率较高,新生儿临床分离碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌主要耐药机制是产B类碳青霉烯酶,IMP-4是其主要酶型。     

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌（福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株）进行耐药性检测,聚合酶链反应（PCR）检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%（9/100）,福氏志贺菌为4%（2/50）,宋内志贺菌为14%（7/50）;qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率（11.1%）高于阴性菌株（5.5%）,但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的质粒介导耐药机制研究

目的了解近年来发现的质粒介导耐药机制在临床分离大肠埃希菌中对氟喹诺酮类耐药所起的作用。方法用MIC琼脂稀释法筛选耐左氧氟沙星大肠埃希菌;采用聚合酶链反应对qnrA、qnrS、qnrB、aac(6′)-Ib基因进行扩增,并进行PCR扩增产物直接双向测序。用接合实验了解是否存在水平传播的氟喹诺酮耐药性传播机制。结果 90株耐氟喹诺酮类大肠埃希菌中7株检出aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrA、qnrS、qnrB基因。78株符合供体菌标准的大肠埃希菌中有2株接合成功,接合率2.6%。结论该地区存在质粒介导的氟喹诺酮类耐药性的水平传播。     

鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类耐药机制研究与基因分型

目的 检测鼠伤寒沙门菌（STM）对喹诺酮类药物的耐药性及耐药机制分析。方法 收集2004年7月1日至10月31日武汉地区4所医院门诊腹泻患者的可疑稀便分离培养出STM33株；琼脂稀释法测其对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（MIC）；抽提细菌基因组DNA，聚合酶链反应（PCR）检测喹诺酮类抗菌药物作用于STM的靶位点；REP-PCR对33株STM进行基因分型。结果 33株STM中有24株对环丙沙星产生较高耐药性（MIC4～16μg/ml），24株耐药株中gyrA位点全都发生突变点，且双重突变占92％，parC位点发生突变率为91．6％；5株STM耐药株（MIC≥8μ/ml）parE和gyrB位点发现有碱基插入；基因分型达9种。结论 武汉地区社区内STM对喹诺酮类药物的耐药性严重，其主要机制是喹诺酮类耐药决定区（QRDR）的基因突变，特别是多个位点同时突变导致高水平耐药；提示有社区流行趋势。     

结核分枝杆菌喹诺酮类耐药基因研究进展

日益增多的耐喹诺酮类结核分枝杆菌给结核病疫情的控制带来了巨大挑战,深入研究结核分枝杆菌喹诺酮类耐受机制便成为应对挑战的关键.药物靶基因突变是导致结核分枝杆菌喹诺酮类耐受的主要因素,近年来该方面的研究逐步受到重视并取得了一些进展,本文特对此进行述评.     

临床分离铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的 了解铜绿假单胞菌(PAE)临床感染分布及其对不同类型抗菌药物的耐药及相关耐药基因的携带现状,以指导临床合理用药.方法 采用法国生物梅里埃公司ATBExpression细菌分析系统,用ATBPSE-5药敏试条进行13种抗生素药敏试验;PCR检测16种耐药基因(TEM,SHV,CTX-M,DHA-1,OXA,CARB,VEB-1,PER-1,GES-2,AmpC,VIM-1,VIM-2,IMP-1,SPM,OprD和IntI)并进行DNA测序确认.结果 临床分离的119株PAE在呼吸道的分离率为88.24%,对亚胺培南和美洛培南耐药率为24.37%和23.53%;哌拉西林/他唑巴坦(72.27%)和阿米卡星(78.15%)、多黏菌素E(96.64%)的敏感率较高,其中多重耐药PAE占19.33%;耐药基因TEM阳性103株(86.6%),SHV阳性2株(1.7%),CARB阳性14株(11.8%),OXA阳性2株(1.7%),DHA-1阳性1株(0.8%),AmpC阳性77株(64.7%),VIM-2阳性19株(16.0%),I型整合子阳性54株(45.4%),OprD缺失54例(45.4%),其余基因均阴性.结论 铜绿假单胞菌TEM,AmpC,IntI,VIM-2耐药基因的携带率及OprD缺失均较高,多重耐药现象及对碳青霉烯类耐药严重,应根据药敏实验和患者的个体情况合理联合应用抗菌药物.     

产气肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因研究

产气肠杆菌广泛存在于自然界和健康人肠道中,是医院感染的重要病原菌,可引起泌尿道、呼吸道、伤口及血液等多种感染.喹诺酮类药物由于抗菌谱广、抗菌作用强,广泛用于临床抗感染治疗.     

大肠埃希菌临床菌株对氟喹诺酮类的耐药机制

DNA旋转酶编码基因（gyrA和gyrB）和拓扑异构酶编码基因（parC和parE）的染色体突变、多重药物外排泵AcrAB表达水平升高以及存在质粒介导aCC（6’）-Ib-cr和各种qnr基因等耐药机制均可导致氟喹诺酮类药物对大肠埃希菌的MIC升高。已有报道环丙沙星、加替沙星、左氧氟沙星和诺氟沙星对氟喹诺酮类药物耐药大肠埃希菌临床菌株的MIC高,并有很大差异。作者等对153株流行病学信息已知的菌株中选择78株代表不同氟喹诺酮类药物MIC范围的菌株,进行上述各种喹诺酮类药物耐药基因测序,发现：①所有氟喹诺酮类药物耐药菌株（58株）均存在gyrA突变;     

淋球菌耐药性分析及相关耐药基因检测

目的：了解佛山地区淋球菌对5种抗菌药物的耐药性,并检测相关耐药基因突变情况。方法收集57株淋球菌,药敏试验采用琼脂稀释法。PCR 法扩增相关耐药基因,PCR 产物测序结果在 GenBank 中用 blastn 进行核酸序列同源性搜索。结果淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松、大观霉素的敏感率分别为0．0％、8．8％、7．0％、61．4％、100．0％,产β-内酰胺酶淋球菌和质粒介导的四环素高度耐药淋球菌阳性率分别为35．1％、56．1％。耐药基因突变率均在80％以上。结论头孢曲松、大观霉素可以作为佛山地区治疗淋球菌的首选药物。淋球菌耐药机制较复杂,应加强对相关耐药基因分子流行病学监测。     

住院患者肠道大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类耐药基因研究

大肠埃希菌是肠道内主要定植菌,是耐药基因的重要储存库~([1]),其耐药水平直接关系到临床感染株的耐药水平,另外,肠道正常定植的大肠埃希菌还可将所携带的耐药基因传递给致病性大肠埃希菌、沙门菌及志贺菌等不同菌属~[2].