冬凌草甲素诱导肝癌细胞凋亡中Bcl-2及端粒酶变化的研究

目的：探讨冬凌草甲素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2表达及端粒酶活性的变化。方法：以8,16,24,32 μmol·L^-1不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法。Western blot 观察Bcl-2 ,Bax 表达变化。应用PCR-ELISA及RT-PCR法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及端粒酶hTERT mRNA表达水平的变化。结果：冬凌草甲素可诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡, 具有明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60 h后,在Hoechst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和 Bax蛋白上调,同时端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性均明显降低。结论：冬凌草甲素在诱导肝癌细胞BEL-7402发生细胞凋亡过程中,能降低端粒酶hTERT mRNA的表达水平和端粒酶活性,同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达的降低和促凋亡蛋白 Bax上调。     

冬凌草甲素可抑制肝癌细胞增殖

中山大学第三附属医院研究人员以人肝癌细胞株BEL-7402细胞为研究对象，观察了不同浓度的冬凌草甲素对BEL-7402细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。结果发现，冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系：冬凌草甲素作用48～60h后，在BEL-7402细胞荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征：同时，端粒酶hTERT mRNA的表达水平及端粒酶活性明显降低。研究人员介绍，端粒酶是一种特殊的核糖蛋白多聚酶，大量的临床资料表明，肝脏肿瘤细胞普遍表现出端粒酶活性，端粒酶活性的高低对于判断肝癌的疗效、     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素对白血病HL-60细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的HL-60细胞,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA及FCM法检测细胞凋亡前后端粒酶活性及P53蛋白表达水平的变化.结果:8 umol/L以上的冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,并呈现出明显的量-效与时-效关系.药物作用48小时后细胞的凋亡率达高峰,在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变.在细胞凋亡过程中,端粒酶活性下降,同时P53蛋白的表达水平显著升高.结论:冬凌草甲素对HL-60细胞具有显著的诱导凋亡及增殖抑制作用,升高P53蛋白的表达水平及降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一;这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供了有力的试验依据.     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对急性白血病 NB4细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的 NB4细胞, MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡, TRAP- PCR- ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.结果冬凌草甲素可显著降低 NB4细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,有明显的量-效与时-效关系.结论 冬凌草甲素能抑制 NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的生长抑制作用

目的：探讨冬凌草甲素对急性白血病NB4细胞的生长抑制作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的NB4细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用Hoechst 33258荧光染色法观察药物作用后细胞形态学的变化。结果：冬凌草甲素可显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系，在Hoechst染色图片上可见细胞核染色质浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变：结论：冬凌草甲素能抑制NB4细胞的生长及诱导细胞凋亡，具有显著的体外抗白血病作用，这为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗白血病提供了有力的试验依据。     

冬凌草甲素对肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡、细胞周期及Hippo信号通路的影响

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞增殖、凋亡和细胞周期及Hippo信号通路的影响。方法:采用不同浓度的冬凌草甲素作用于人肝癌BEL-7402/5-FU细胞,细胞计数法(CCK-8)检测细胞增殖抑制率,CCK-8法测定细胞耐药逆转指数,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,实时荧光定量PCR法检测各组细胞Yes相关蛋白(YAP)、转录共激活因子(TAZ)的mRNA表达水平,Western Blot法检测各组细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、结缔组织生长因子(CTGF)、生存素(Survivin)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的蛋白表达水平。结果:不同浓度冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402/5-FU细胞具有不同程度增殖抑制作用,确定最适逆转浓度,即4μmol/L冬凌草甲素用于后续实验。冬凌草甲素能够阻滞细胞周期至G₂期,诱导细胞发生凋亡,抑制YAP、TAZ mRNA表达以及Survivin、Bcl-2蛋白表达。结论:冬凌草甲素能阻碍BEL-7402/5-FU细胞周期进程,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与干预Hippo信号通路有关。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡

目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性。27μmol.L^-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化。ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化。细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-X_L表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用。结论:冬凌草甲素(27μmol.L^-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-X_L的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡。     

吴茱萸碱通过Hippo-YAP通路诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的影响并阐明其发挥作用的可能机制。方法 CCK-8法检测吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡现象的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡和周期的影响;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting实验检测Hippo-YAP通路中哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST2、大肿瘤抑制因子1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在正常人肝细胞株HL-7702与BEL-7402细胞中的表达差异及吴茱萸碱对BEL-7402细胞这些关键基因表达水平的影响;免疫荧光实验观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞中YAP表达水平的影响。结果吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖活力具有明显的抑制作用(P0.05),呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色显示吴茱萸碱能够引起BEL-7402细胞出现核固缩、核边集等凋亡的典型形态学改变。流式细胞术结果提示吴茱萸碱能够诱导BEL-7402细胞出现凋亡数目增多和G2/M期阻滞(P0.01);q RT-PCR和Western blotting检测结果提示,与HL-7702细胞相比,MST2和LATS1在BEL-7402细胞中的表达明显下调(P0.05),YAP则明显升高(P0.05);吴茱萸碱能够激活Hippo信号通路,分别上调MST2、LATS1和抑制YAP在BEL-7402细胞中的表达水平(P0.05)。免疫荧光结果显示吴茱萸碱能够显著抑制BEL-7402细胞中过表达的YAP荧光强度(P0.01)。结论吴茱萸碱能诱导BEL-7402细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,进而抑制下游关键基因YAP的表达。     

大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

 目的 观察大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞 BEL-7402 的诱导分化和凋亡作用。 方法 用不同浓度的 3( 3- 吡啶 )-4-[ （ 4- 甲氧基 - 苯亚甲基）氨基 ]-5- 甲硫基 -1 , 2 , 4- 三唑（ LH-38 ）与 BEL-7402 细胞体外培养。 四甲基偶氮唑蓝（ MTT ）法检测细胞增殖和 LH-38 对细胞增殖的抑制作用。用 Hoechst 33258 荧光染色细胞形态学和 Annexin V/PI 双标记技术观察细胞凋亡变化。 放射免疫法检测 BEL-7402 细胞甲胎蛋白（ α-FP ）和白蛋白（ Alb ）的分泌量,以了解细胞分化状态。 蛋白质免疫印迹（ Western blotting ）半定量分析 Caspase-3 和 p53 的表达。可见光法测定超氧化物歧化酶（ SOD ）和过氧化氢酶（ CAT ）活力 。 结果 LH-38 在 0.1~10 μmol?L^-1 的浓度范围能抑制细胞增殖,且抑制率随浓度和时间的增加而增高。 10 和 1.0 μmol?L^-1 的 LH-38 使细胞 Alb 、 Caspase-3 和 p53 的蛋白表达明显增加, α-FP 含量下降。 SOD 活性升高 ( P<0.01) ,而 CAT 活性降低,差异有显著性 ( P<0.01, P<0.05) 。药物浓度在 10 μmol?L^-1 作用 48 h , BEL-7402 细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率显著高于对照组 ( P<0.05) 。 结论 大茴香醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌 BEL-7402 细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用,作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。     

单链抗体与力达霉素基因工程强化融合蛋白Fv-LDP-AE的抗肿瘤作用

 目的 研究抗Ⅳ型胶原酶单链抗体（Fv）和力达霉素辅基蛋白（LDP）在大肠杆菌表达的融合蛋白（Fv-LDP）与力达霉素（LDM）的活性发色团AE形成的基因工程强化融合蛋白Fv-LDP-AE的生物学活性及体外抗肿瘤作用。方法 采用酶联免疫吸附剂测定、免疫荧光细胞化学染色和明胶酶谱分析Fv-LDP-AE生物学活性;通过MTT法、Hoechst 33342和碘化丙啶共染、DNA ladder和侵袭实验探讨其抗肿瘤作用。结果 Fv-LDP-AE对人肝癌BEL-7402和人结肠癌HT-29细胞的免疫反应呈阳性,可与BEL-7402细胞特异结合,并呈剂量依赖性抑制人高转移性巨细胞肺癌PG细胞内Ⅳ型胶原酶分泌。Fv-LDP-AE对BEL-7402和PG细胞的增殖抑制作用比力达霉素强,可诱导BEL-7402细胞裂亡、凋亡,抑制BEL-7402细胞侵袭。结论 Fv-LDP-AE是一种以Ⅳ型胶原酶为靶点的、具有高效抗肿瘤活性的抗体药物。
     

蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL7402生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :探讨蒺藜皂苷 (STT)对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法 :应用MTT与SRB法检测蒺藜皂苷对人肝癌细胞BEL-7402的抑制作用 ,采用形态学观察以及流式细胞术 (FCM)检测了STT诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡的效应 ,采用流式细胞术检测BEL-7402细胞Bcl-2蛋白表达。结果 :①STT能够剂量依赖地抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖 ;②细胞显现典型的凋亡形态学改变 ,FCM出现凋亡峰 ;③STT能降低BEL-7402细胞的Bcl-2蛋白表达。结论 :STT在体外能抑制BEL-7402细胞的增殖并能诱导细胞凋亡 ,其诱导凋亡作用的途径之一是下调Bcl-2蛋白表达。