河南省急性呼吸道感染病例人副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶基因特征分析

目的了解河南省急性呼吸道感染(ARI)病例中人副流感病毒3型(HPIV3)血凝素-神经氨酸酶(HN)的基因特征。方法对河南省漯河市采集的严重急性呼吸道感染(SARI)病例标本和郑州市采集的流感样病例(ILI)标本进行人副流感病毒(HPIVs)核酸检测, HPIV3检测阳性标本使用RT-PCR法进行HN基因扩增并测序, 使用CExpress以及MEGA7.0软件进行序列编辑、进化树构建和基因特征分析。结果漯河市和郑州市共采集ARI咽拭子标本374份, 其中HPIV3核酸检测阳性标本20份(5.3%), 对阳性标本进行靶基因扩增后获得18条序列, 经分析全部为C3亚群, 其中有16条序列为C3f基因型, 有2条序列为C3a基因型。18株HPIV3的HN基因序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%～100.0%和99.3%～100.0%, 与原株型Wash/47885/57相比差异较大, 发生了12处共同的氨基酸突变, 其中H295Y、I391V、D556N和I53T是功能相关突变位点。与流行株China/BCH4210A/2014相比同源性较高, 未发生共同的氨基酸突变, 未发现新的功能...     

江苏省2019—2022年乙型流感病毒Victoria系HA基因特征分析

目的分析江苏省2019—2022年乙型流感病毒Victoria系流行特征, 了解其基因变异情况, 监测江苏省流感活动水平和流行趋势。方法通过"中国流感监测信息系统"收集的江苏省2019—2022年流感样病例监测数据, 选取16株乙型流感病毒Victoria系毒株进行全基因组测序, 利用MEGA 7软件构建进化树并进行HA基因序列特征分析。结果江苏省2019—2022年监测到的流感病毒中乙型流感病毒Victoria系占绝对优势。16株标本株中2019—2020年度的毒株在V1A.3早期分支, 而2021—2022年度的毒株则聚类在3a.2亚型分支。与疫苗株相比, 2019—2020及2020—2021年度的毒株发生了1个氨基酸位点的改变并增加了1个糖基化位点, 而2021—2022年度的毒株则存在多个位点变异, 其中H122Q、A127T、R133G、P144L、N150K、S194D及K200R位于抗原决定簇上。结论江苏省乙型流感病毒Victoria系在多处基因位点发生了变异, 提示对该亚型变异的持续监测至关重要, 可为疫苗的更新提供重要依据。     

2016—2022年杭州流感病毒流行特征及儿童流感重症感染特征分析

目的了解儿童流感流行特征及流感重症的感染特征。方法收集2016年1月—2022年9月严重急性呼吸道感染住院病例样本1 600份, 门诊流感样病例监测样本7 660份。实时荧光PCR法检测流感病毒。并对流感住院重症病例样本及部分流感门诊病例样本进行其他呼吸道病毒的检测, 分析其临床感染特征和合并感染特征。结果 1 600份严重急性呼吸道感染住院病例样本中, 流感病毒阳性率为6.63%(106例), 甲型H1N1、H3N2、B Victoria(BV)、B Yanagata(BY)的占比分别为49.06%(52/106)、17.92%(19/106)、29.25%(31/106)和3.77%(4/106)。7 660份门诊病例中, 流感阳性率为15.01%(1 150例), 甲型H1N1、H3N2、BV、BY的占比分别为22.17%(255/1 150)、30.96%(356/1 150)、41.39%(476/1 150)和5.48%(63/1 150)。甲型H1N1流感病毒更容易引起儿童流感重症, 差异具有统计学意义(χ2=37.978, P<0.001), 而季节性H3N2和B...     

2021—2022年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒血凝素基因特性和抗原性分析

目的分析2021—2022年流感监测季北京市乙型Victoria系流感病毒(BV)的血凝素(hemagglutinin, HA)基因特性、抗原性及与流感疫苗组分株的匹配性。方法采集2021—2022年流感监测季流感样病例(influenza like-illness, ILI)咽拭子样本经MDCK和鸡胚培养分离流感病毒, 提取病毒核酸后测序。应用MEGA5.0进行病毒HA基因的核苷酸和氨基酸变异, 采用maximum likelihood方法构建HA基因的遗传进化树, 在线预测N-糖基化位点。SWISS-MODEL同源建模, 建立BV毒株HA的蛋白质三维空间模拟图。通过血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)试验, 进行毒株的抗原性分析。结果共收集402株BV毒株, 选取58株测序获得HA基因全长序列, 与本年度的疫苗组分BV株(B/Washington/02/2019)HA基因相比较显示, 有27个氨基酸位点发生变异, 其中11个变异位点位于4个不同的抗原决定簇。遗传进化树分析显示:3个进化分支的毒株共同流行, 其中54株(54/58, 93.10%...     

河北省2010—2020年甲型H3N2流感病毒HA基因抗原漂移分析

目的分析河北省甲型H3N2流感病毒HA基因进化分支分布及抗原位点变异特征。方法依据不同流行年度不同地区分布选取46株河北省H3N2毒株, MEGA建立HA基因进化树, BioEdit比对核苷酸和氨基酸序列在抗原决定簇及潜在糖基化位点变异情况, 对2019—2020年流行3C.2a1b+T135K和3C.2a1b+T131K亚组同源建模, 分析突变位点构象差异。结果河北省甲型H3N2流感病毒经历1和5簇(2010—2011), 自2012年春季步入3C簇, 3C-2012/13、3C.3和3C.3a分支在2013—2014年迭代流行, 2014—2017年3C.3a分支均有覆盖, 2015—2016流行年度的3C.2a1分化出2017—2020年优势流行株3C.2a1b+T131K和3C.2a1b+T135K。病毒HA蛋白抗原决定簇A、B、C、D和E均有氨基酸突变, 突变类型包括稳定保留、多样突变和特征突变, 通过建模分析比较3C.2a1b+T135K和3C.2a1b+T131K两个亚组HA蛋白抗原表位空间构象, 50、128、131、135、138和193位点空间结构差异可能导致病毒抗...     

慢性乙型肝炎病毒感染与细胞免疫

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)的持续感染是机体未能有效建立HBV特异性免疫的结果, 这种情形也可称为机体对HBV的免疫耐受。成人急性感染HBV时, 绝大多数可以发生正常的特异性免疫应答, 因而得以自愈。围产期感染HBV, 绝大多数导致慢性化, 提示存在HBV特异性免疫应答异常。典型的特异性免疫应答包括4个过程:抗原提呈、特异性CD4+T和CD8+T细胞激活以及B细胞激活。慢性HBV感染时, 机体的免疫应答异常必然涉及这4个过程的部分或者全部。本文主要讨论了慢性HBV感染与细胞免疫的关系, 希望为进一步思考HBV特异性免疫重建路径与策略提供参考。     

重组流感血凝素三聚体蛋白疫苗的制备及免疫原性评价

目的制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析, 研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株, 通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组, 并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价, 以评价免疫原性。结果构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环, 蛋白质粒径大小约为18.79 nm, 具有10个N-糖基化位点, 包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型;HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后, 3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义(P=0.431 2, U=36), 配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组, 其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高, 为1 280。结论成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白, 其...     

2019—2021年西安市手足口病的病原学特征分析

目的分析2019—2021年西安市手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)的病原构成及其流行病学特征, 为防控HFMD提供科学依据。方法收集临床诊断为HFMD的肛拭子或粪便标本, RT-PCR法检测肠道病毒(enterovirus, EV), 鉴别出肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16, CVA16)、柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)。使用Excel 2007和SPSS18.0软件进行数据收集和统计学分析, 对HFMD进行描述性流行病学分析和病原学特征分析。下载CVA6各基因型代表株的VP1区序列, 用MEGA X软件构建基因进化树, 分析其基因特征。结果共收集到1 531例HFMD病例, EV的阳性率为89.16%(1 365/1 531), EV71、CVA16、CVA6、CVA10和其他EV的检出率分别为1.31%(20/1 531)、32.46%(497/1 531)、38.47%(589/1 531)、5.09%(78/1...     

基于结构的流感疫苗设计进展

流感病毒在人类中的传播已有百余年的历史, 然而由于其高度可变的抗原结构, 常规疫苗难以构建持久的保护作用, 开发具备跨亚型保护能力的疫苗成为研究人员面临的挑战。而近十余年发展形成的基于结构的疫苗设计策略有着不同的设计思路, 它注重抗原表位的作用, 将蛋白质结构信息用于抗原设计, 以得到稳定、高效且具有跨亚型保护作用的重组抗原, 为流感疫苗的开发提供了新的突破口。本综述汇总现阶段流感病毒中常见抗原的结构特点与表位特征, 主要针对流感病毒的3种表面蛋白血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)和基质蛋白2(M2), 分别讨论结构疫苗学在这些抗原设计中的应用与进展。     

靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶抗体的制备及鉴定

目的制备1株靶向甲型流感病毒N1亚型神经氨酸酶(neuraminidase, NA)的功能性抗体FNA1, 并对其进行鉴定。方法依据单链抗体(single-chain antibody fragment, scFv)序列信息, 合成FNA1重链以及轻链可变区序列, 连入抗体哺乳细胞表达载体pFRT-IgG1κ, 构建重组表达质粒pFRT-IgG1κ-FNA1。利用瞬时高效表达系统ExpiCHO以及亲和纯化技术获取抗体蛋白FNA1。ELISA检测FNA1与甲型流感病毒N1亚型NA抗原的结合, 流式细胞术分析FNA1与细胞膜表面表达N1亚型NA抗原的结合。通过抗体抑制NA蛋白活性试验检测抗体FNA1的体外功能活性。结果蛋白质电泳结果显示制备获取了高纯度FNA1。FNA1特异性识别结合N1亚型的NA抗原, 且呈浓度依赖效应。FNA1能通过结合细胞膜表面表达的N1亚型NA蛋白, 有效阻断细胞膜表面的NA活性, 从而抑制包装的假病毒从细胞表面释放, 继而抑制进一步的靶细胞感染。结论获得1株具有体外功能活性的靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体FNA1。     

2016—2019年深圳市盐田区甲型H1N1流感病毒NA基因特征研究

目的分析深圳市盐田区2016—2019监测年度甲型H1N1流感病毒NA基因特征。方法选取35株盐田区分离的甲型H1N1流感病毒毒株进行NA基因序列分析、进化分析、抗原决定簇位点、耐药位点和糖基化改变的变异分析。结果进化树分析表明, 本研究所分析毒株分布在6B分支, 2016年上半年毒株分布在6B.2簇;2016年下半年及2017年度毒株分布在6B.1簇;2018—2019年度毒株分布在6B.1A簇。2016年核苷酸同源性为97.87%～98.09%, 氨基酸同源性为96.85%～96.89%, 2016年毒株与同年度疫苗株位于不同分支, 同源性较低。2017年核苷酸同源性为98.62%～99.35%, 氨基酸同源性为99.57%～99.78%;2018年核苷酸同源性为99.35%～99.86%, 氨基酸同源性为99.05%～99.12%;2019年核苷酸同源性为99.20%～99.86%, 氨基酸同源性为99.19%～99.78%。2017—2019年毒株与当年度疫苗株位于同一分支, 同源性较高。与各年度疫苗株相比, 盐田区流感毒株NA蛋白存在29个氨基酸位点变异。抗原决定簇区域:与疫...     

乙型肝炎病毒重点号导读

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是全球范围内最常见的一种感染性疾病, 呈世界性流行。HBV感染可导致慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌等疾病, 有效控制HBV感染是预防HBV相关肝癌的关键。目前, 抗病毒药物只能抑制HBV复制, 但不能完全清除HBV。为进一步了解特异性免疫在清除HBV中的作用, 探讨新型HBV防控策略, 在2023年7月28日世界卫生组织确定的第13个世界肝炎日到来之际, 本期推出乙型肝炎病毒重点号, 特邀请北京地坛医院成军教授和重庆医科大学唐霓教授担任执行编委。     

不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液, 并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液, 透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量, 计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性, 并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果 Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05), 但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,...     

甲型流感病毒血凝素头部蛋白结构域的原核表达及血清学分析

目的在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中, 通过IPTG诱导, 在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白, 验证表达的准确性, Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白, 多剂次免疫家兔, 获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时, 重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 评价其免疫原性。结果 rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体, 可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体, 可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原, 在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体, 可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。     

2021年安徽蚌埠秋冬季肺炎患者鼻病毒检测及基因特征分析

目的了解人鼻病毒(human rhinovirus, HRV)在成人住院肺炎患者中的检出率及基因特征。方法采集2021年9～12月安徽蚌埠某医院住院肺炎患者咽拭子, 以实时荧光定量PCR方法进行14种常见呼吸道病原体检测。巢式PCR法扩增HRV阳性样本的VP4/VP2编码区基因, 扩增产物测序。使用MEGA7.0软件构建HRV-VP4/VP2基因序列系统发育树。结果共采集住院肺炎患者咽拭子146份, 其中检出阳性样本52份, 检出率为35.62%(52/146), HRV、腺病毒、冠状病毒OC43和乙型流感病毒检出率位居前四位。HRV共检出23例, 占检出病毒样本的44.23%(23/52), 其中HRV混合感染有9例(39.13%, 9/23);结合临床数据分析, HRV混合感染组白细胞、中性粒细胞计数、合并高血压、糖尿病、辅助通气比例以及不良预后比例均高于单一感染组(P<0.05)。系统发育树结果显示本研究的HRV感染主要以A组与B组为主。结论 HRV是2021年安徽蚌埠秋冬季成人肺炎患者中最常见的病原体, 其中HRV-A与HRV-B为优势株。HRV与其他呼吸道病毒混合感染易...     

难治性癫痫患儿的基因变异特征分析

目的分析不同年龄段难治性癫痫(RE)患儿的基因变异特征, 为精准诊疗提供一定的数据支撑。方法选取2018年1月1日至2019年11月21日于浙江大学医学院附属金华医院就诊的117例RE患儿为研究对象, 根据发病年龄分为<1岁、1～<3岁、3～<12岁和≥12岁4组。回顾性分析患儿的临床资料、全外显子组测序数据、携带基因变异患儿的父母测序结果等资料。结果本研究纳入RE患者共117例, 其中男性67例, 女性50例。发病年龄范围为4日龄～14岁。117例RE患儿中, 33例携带致病性或可能致病性变异, 检出率为28.21%(33/117)。<1岁组、1～<3岁组和≥3岁组的检出率分别为53.85%(21/39)、12.00%(3/25)和16.98%(9/53), 差异有统计学意义(χ2=19.202, P<0.001)。有、无共患病患儿的检出率分别为33.33%(12/36)和25.93%(21/81), 差异无统计学意义(χ2=0.359, P=0.549)。33例携带基因变异患儿中, 27例为单核苷酸多态性变异(SNV)或插入缺失(InDel)变异...     

2013—2020年吉安市手足口病病原学流行病学特征分析

目的分析江西省吉安市2013—2020年手足口病的病原学流行特征, 为吉安市手足口病防控措施的制定提供依据。方法收集手足口病患者粪便等临床标本共5 089份, 采用荧光定量PCR方法进行肠道病毒核酸检测分型, 使用SAS统计软件从标本类型、时间、患者年龄和性别、地区分布等进行病原学流行特征分析。结果 5 089份标本中共检出肠道病毒(enterovirus, EV)阳性标本3 062份, 总阳性率为60.17%, EV71、柯萨奇病毒A组16型和其他肠道病毒构成比分别为15.15%、16.36%和68.49%, 以其他肠道病毒感染为主;2013—2020年的肠道病毒阳性检出率总体呈下降变化趋势, 不同年份阳性检出率差异有统计学意义(χ2=118.47, P<0.05);8年间, EV71型手足口病感染率总体呈下降趋势。手足口病例数主要集中在4～11月份, 5月和9月左右为最高峰。男女性别阳性检出率差异无统计学意义(χ2=3.44, P>0.05), 粪便、肛拭子、疱疹液标本的阳性率高于咽拭子标本, 不同样本阳性检出率差异有统计学意义(χ2=78.76, P<0.05)...     

楚雄州2017—2022年流感病原学监测结果分析

目的分析楚雄州2017—2022年流感病原学监测结果, 掌握流感病毒流行特点, 为流感防控提供科学依据。方法采用real-time PCR检测技术和MDCK细胞培养法对2017—2022年哨点医院流感样病例(influenza-like cases , ILI)标本和暴发流感疫情病例标本进行流感病毒核酸检测和分离培养。结果 2017—2022年, 共检测7 302份病例标本, 阳性1 079份, 阳性率为14.78%, 2017—2022年年度的阳性率依次为14.71%、15.44%、20.11%、5.04%、10.90%和21.08%, 其中2020年阳性率最低;阳性率甲型高于乙型, 冬春季高于夏秋季, 检出H9N2人感染禽流感病毒1份。暴发疫情以B型流感为主, 甲型H3N2次之, 学生为易感人群。流感样病例以0～5岁组占比最高(64.16%), ≥60岁组占比最低(0.05%)。结论 2017—2022年楚雄州以甲型流感流行为主, 冬春季高发, 流感毒株呈现多样性, 各型别毒株交替流行。实施新冠防控措施可有效的降低流感病毒感染率。此外, 州内存在人感染禽流感病例, 应加强和继续完善...     

新型冠状病毒Omicron变异株突变位点研究进展

新型冠状病毒Omicron(B.1.1.529)株于2021年11月在南非首次被发现, 随后逐渐成为全球范围内主流毒株, 并于11月26日被世界卫生组织定义为第5种关切变异株(variants of concern, VOCs)。本文从新型冠状病毒基因组和蛋白质结构、核酸位点突变和氨基酸位点突变等方面总结了Omicron株的突变趋势, 从Omicron株与其他VOCs的序列比较、Omicron株各子代分支序列比较两方面阐述了Omicron株的突变位点特点, 并进一步从免疫逃逸、毒力和传播能力等方面阐述了Omicron株位点突变后的影响, 最后对小分子抗病毒药物、抗体和疫苗的研发方向进行综述, 以期对接下来的相关研究提供参考。     

复杂平衡易位1例

男, 47岁, 汉族, 2022年8月因原发不育就诊于四川大学华西第二医院。院外精液检查提示无精, 前妻已结婚生子, 现任妻子曾与前夫生育1子, 外观无明显异常。夫妻系非近亲结婚, 否认家族遗传病史。患者为初中文化, 智力正常, 长期久坐, 身高为170 cm, 体质量为74 kg, 身体质量指数为25.61 kg/cm2。外生殖器发育PH4G4, 左侧睾丸约为12 mL, 右侧睾丸约为10 mL, 均质地中等, 未扪及明显异常。患者父母系非近亲结婚, 拒绝做染色体核型分析。妹妹外观无异常, 已结婚生子, 无不良孕产史。染色体G显带分析示患者核型为46, XY, t(1;18)(q31;q12.2), t(10;21;14)(q21.2;q21;p13)(图1)。染色体高通量测序分析未检测到有临床意义的缺失及重复。本研究通过了四川大学华西第二医院伦理委员会的审查(2019-077), 患者签署了临床研究知情同意书。