石菖蒲抑制脂多糖诱导的神经胶质细胞炎性反应及其机制

目的 观察石菖蒲对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠原代神经胶质细胞炎性反应的抑制作用并探讨其可能机制.方法 分离提取大鼠原代神经胶质细胞,用LPS刺激2h后分别加入不同浓度的石菖蒲含药血清,采用硝酸还原酶法检测石菖蒲对一氧化氮的影响,运用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中IL-1 β、IL-8、TNF-α水平,通过实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达.结果 LPS能够激活神经胶质细胞,不同浓度的石菖蒲含药大鼠血清在不影响细胞存活率的情况下,可以显著降低细胞培养上清液中NO、IL-1β、IL-8、TNF-α水平,抑制细胞内iNOS mRNA表达(P＜0.05).结论 石菖蒲的神经保护机制可能与抑制胶质细胞炎症反应有关.     

抑制星形胶质细胞Cx43可保护LPS诱导的多巴胺神经元损伤

目的探讨星形胶质细胞缝隙连接蛋白Cx43在脂多糖(LPS)诱导的多巴胺神经元退变中的作用。方法体外培养SD大鼠原代中脑神经元-胶质细胞和原代混合胶质细胞,随机分为对照组、LPS(10 ng/ml)组、Cx43抑制剂~(43)Gap27(200μg/ml)组、LPS+~(43)Gap27组、半通道阻滞剂18β-GA(10μmol/L)组和LPS+18β-GA组。通过免疫组化检测络氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的数目与形态;检测细胞外液中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、谷氨酸浓度表征胶质细胞的半通道功能,检测一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量以及活性氧簇(ROS)表征神经免疫反应的强度。RT-qPCR、Western blot与免疫荧光检测星形胶质细胞Cx43的mRNA和蛋白表达。结果 LPS处理导致多巴胺神经元渐进性死亡;在此过程中,细胞外液中的ATP与谷氨酸水平升高,差异有统计学意义(P0.05),此升高与胶质细胞半通道活性紧密联系;同时发现星形胶质细胞上的Cx43在LPS诱导的神经免疫中表达下降,且变化有统计学意义(P0.05);而预处理Cx43抑制剂~(43)Gap27或者半通道阻滞剂18β-GA后,LPS引发的胶质细胞外的ATP和谷氨酸释放明显减少,该变化有统计学意义(P0.05);同时,LPS引发的多巴胺神经元的损伤也几乎被完全抑制,多巴胺神经元数目从对照组的49%上升为114%与117%,该变化有统计学意义(P0.05);同时LPS引起的免疫反应也部分被抑制,细胞上清中的TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论星形胶质细胞缝隙连接蛋白Cx43在LPS引发的多巴胺神经元退变中扮演重要角色,其半通道的开放可能是促进神经免疫反应、诱发神经毒性的重要原因,表明Cx43可能是帕金森病(PD)的一个潜在病理靶点。     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

绿原酸抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤研究

摘要：目的:探究绿原酸（CGA）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞神经炎症损伤及核因子κB（NF-κB）/Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）炎性体通路的影响。方法:培养小胶质细胞BV2,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测不同浓度(0,1,2,4,8 mmol·L-1)CGA对BV2细胞活力的影响;再次培养BV2细胞,依次分为对照（Control）组、LPS组、脂多糖和药物溶剂对照[LPS+二甲亚砜（DMSO）]、脂多糖和阳性药物对照（LPS+Positive）组以及脂多糖和绿原酸处理（LPS+CGA）组。免疫荧光法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-1β表达情况;ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）含量;免疫印迹分析NF-κB/NLRP3炎性体通路和凋亡相关蛋白水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与CGA 0 mmol·L-1比较,CGA 1,2,4 mmol·L-1对BV2细胞增殖活力的影响无统计学意义（P>0.05）,CGA 8 mmol·L-1显著降低BV2细胞增殖活力（P<0.05）。LPS诱导后细胞凋亡率升高,细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和iNOS分泌量增多,IL-10分泌量减少,细胞中NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）、NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）蛋白水平上调,细胞中Bcl-2蛋白水平下调（P<0.05）。添加CGA可明显改善LPS对BV2细胞的影响（P<0.05）。结论:CGA通过抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导的BV2细胞神经炎症损伤。     

阿魏酸对脂多糖损伤的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的探讨阿魏酸(FA)对脂多糖(LPS)诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外实验:FA 2.5~40μmol·L-1与PC12细胞预处理12 h,加入LPS 0.15 g·L-1继续培养8 h,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的释放;激光共聚焦显微镜检测细胞骨架蛋白F肌动蛋白的表达。体内实验:FA 25,50和100 mg·kg-1ip给予SD大鼠,每天1次,连续35 d。给药第29天时ip给予LPS 0.2 mg·kg-1,每天1次,连续7 d,运用免疫组织化学法观察大鼠海马神经元磷酸二酯酶4B(PDE4B)蛋白表达的变化;Western蛋白质印迹法检测c AMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达。结果体内实验:与LPS组细胞比较,FA 10,20和40μmol·L-1预处理组细胞活力明显升高(P<0.05),炎性因子TNF-α和IL-1β的释放显著减少(P<0.05),细胞骨架蛋白F肌动蛋白的分布和结构明显改善。体内实验:HE染色结果显示,预先给予FA 50和100 mg·kg-1可以减轻LPS诱导的大鼠海马神经元损伤;免疫组织化学实验结果显示,FA 50和100 mg·kg-1能够显著降低LPS诱导的大鼠海马神经元PDE4B蛋白表达水平的升高(P<0.05);Western蛋白印迹实验结果表明,FA 50和100 mg·kg-1可逆转LPS对CREB和p-CREB蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论 FA对LPS诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元细胞损伤有保护作用,FA抗神经炎症的作用可能与抑制PDE4表达、激活c AMP/CREB信号通路相关。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

吡格列酮对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性细胞因子释放的影响

目的研究吡格列酮对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症介质释放的抑制作用及其信号传导通路。方法神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞纯度。ELISA方法检测IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量的变化。Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定,其阳性率可达95%以上。LPS组能明显增加星形胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α及NO。吡格列酮能明显抑制LPS引起的这些作用,并呈一定浓度依赖性。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662能明显对抗吡格列酮对LPS引起的IL-1β、IL-6、TNF-α及NO增加的抑制作用。与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125(5μmol·L-1)亦能有效对抗LPS诱导星形胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α及NO分泌的增加;特异性iNOS抑制剂SMT可明显抑制LPS引起的NO分泌增加。结论吡格列酮能明显改善LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞的损伤,这种作用可能与激活PPARγ、抑制JNK信号传导通路有关。     

丙泊酚对BV-2小胶质细胞活化的影响

目的探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制。方法体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS 1μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组)。采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-αmRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P<0.05或P<0.01)。与A组相比,C组IL-1β和TNF-αmRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P<0.05)。结论丙泊酚30μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关。     

新型倍半萜Souliene A抑制小胶质细胞活化作用及机制

目的研究Souliene A对LPS与IFN-γ介导的小胶质细胞激活的抑制作用与机制及其对小胶质细胞激活引起的神经元损伤的保护作用。方法分别用LPS与IFN-γ刺激小鼠小胶质细胞BV2,Griess法测定NO。Western blotting和半定量RT-PCR法检测iNOS,COX-2,IL-6,IL-1β,TNF-α的表达及其相关信号通路。ELISA法检测PGE2和IL-6,IL-1β,TNF-α的表达。用流式细胞术检测小胶质细胞内ROS生成。用MTT法检测神经元细胞的存活率。结果 SoulieneA能明显抑制NO和PGE2的生成,减少炎症介质IL-6,IL-1β,TNF-α的表达,抑制小胶质细胞内ROS的产生。SoulieneA还能抑制NF-κB的活化与Akt的磷酸化并能有效的抑制小胶质细胞条件培养液引起的神经元损伤。     

双环醇对脂多糖诱导巨噬细胞iNOS蛋白的表达和NF-κB活化的抑制作用

目的炎症是肝炎病毒或其它因素所致的肝损伤的一个共同特征,该文目的系研究抗肝炎新药双环醇对与炎症反应相关分子的调节作用。方法以无毒性浓度双环醇预先与巨噬细胞株RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞温孵1h后,加入一定量脂多糖(LPS)共同培养适当时间以诱导上述细胞的活化,培养上清中NO2-的含量和TNF-α的水平分别用Griess试剂及L929细胞株生物法测定,用Westernblot方法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结果双环醇在0.1～0.5mmol.L-1剂量依赖性降低1mg.L-1LPS引起的RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放以及TNF-α的分泌,双环醇0.5mmol.L-1能够明显抑制1mg.L-1LPS引起的iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结论双环醇对与炎症相关的调控因子iNOS蛋白的表达和NF-     

Nimodipine protects dopaminergic neurons against inflammation-mediated degeneration through inhibition of microglial activation

Nimodipine, a calcium channel blocker, has been used mainly in the therapy of cardiovascular diseases. Recently, its indications have been extended experimentally to a wider range of disorders especially some central nervous system (CNS) disorders. In this study, we investigated whether nimodipine is neuroprotective to inflammation-mediated neurodegenerative diseases. Pretreatment with nimodipine reduced the degeneration of dopaminergic (DA) neurons induced by LPS in mesencephalic neuron-glia cultures in a dose-dependent manner. The neuroprotective effect of nimodipine was attributed to the inhibition of microglial activation, since nimodipine significantly inhibited the production of nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β) and prostaglandin E₂ (PGE₂) from LPS-stimulated microglia. Moreover, nimodipine was not neuroprotective to 1-methyi-4-phenylpyridinium (MPP⁺)-induced DA neurotoxicity in the absence of microglia. Mechanistic study showed that nimodipine failed to protect the degeneration of neurons in neuron-glia cultures from mice lacking functional NADPH oxidase (PHOX), a key enzyme for extracellular superoxide production in immune cells. Taken together these results suggest that nimodipine is protective to DA neurodegeneration via inhibiting the microglial-mediated oxidative stress and inflammatory response. Thus, nimodipine may be a potential therapeutic agent for the treatment of inflammation-related neurodegenerative disorders such as Parkinson's disease.     

吗啡抑制人外周血TNF-α和IL-6的表达的研究

目的：研究吗啡对人外周血中肿瘤坏死因子－α（TNF-α）和白细胞介素－6（IL－6）含量的影响，探讨其对免疫炎症反应的可能机制。方法：全血收集在试管内，分装在EP管中，每管取100μl全血。实验分为吗啡200mg.L^-1组（A1组）、吗啡2mg.L^-1组（A2组）、吗啡200mg.L^-1＋脂多糖（LPS）（B1组）、吗啡2mg.L^-1组＋LPS（B2组）、对照组（C1组）和LPS组（C2组）共6组（n=7）。各组加入上述试剂，用PBS补齐体积后，在37℃下孵育6h。用ELISA检测血清中TNF－α和IL－6含量。结果：单独药物组（A1和A2组）TNF－α的浓度分别为240和251ng.L^-1与空白对照组（C1组，TNF－α的浓度为279ng.L^-1）比较，无显的统计学意义（P＞0．05）；IL－6的浓度分别为444、490和561ng.L^-1，亦无统计学意义（P＞0．05），激活组（B1和B2组）和LPS组（C2组）分别为490、534和1226ng.L^-1（TNF－α）；1177、1310和1563ng.L^-1（IL－6）。且B1组低于B2组。结论：吗啡对静息状态下TNF－α的表达无影响，但可抑制LPS诱导的TNF－α表达，且高剂量的吗啡对LPS诱导的TNF－α的抑制作用大于低剂量吗啡的作用。     

黄芩素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的 影响及机制研究

目的 探讨黄芩素（BAI）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠的防治作用及其对中枢神经系统小胶 质细胞（MG）极化和炎性因子的影响。方法 将50只雌性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为空白对照组,EAE模 型组及BAI低、中、高剂量组,每组10只。空白对照组不做处理,其余各组建立EAE模型。BAI低、中、高剂量组每日 分别给予BAI 75、150、300 mg/kg灌胃,空白对照组及EAE模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续14 d。观察小鼠的 神经功能缺损和脊髓组织炎性脱髓鞘情况。采用免疫荧光双重染色法检测小鼠脊髓组织离子钙接头蛋白1（Iba-1） 阳性MG中M1型MG标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、M2型MG标志物精氨酸酶1（Arg1）的表达情况及分歧指数 （RI）变化,实时荧光定量PCR法检测小鼠脊髓组织中iNOS、Arg1及炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介 素-10（IL-10）mRNA的表达情况。结果 空白对照组小鼠未见发病,其余各组均不同程度发病。与EAE模型组比 较,BAI各剂量组小鼠发病潜伏期及达高峰期时间延长,神经功能障碍评分降低（均P＜0.05）,脊髓组织脱髓鞘程度 减轻（均P＜0.05）,Iba-1阳性MG中iNOS表达降低,Arg1表达升高,RI值减小（均P＜0.05）,MG的形态倾向于M2型 极化,脊髓组织中iNOS、TNF-α mRNA表达降低,Arg1、IL-10 mRNA表达升高（均P＜0.05）,且BAI剂量越大,变化越 明显。结论 BAI对EAE小鼠发病具有防治作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与纠正M1/M2型MG失衡及调节炎 性因子TNF-α、IL-10表达有关。     

左卡尼汀对儿童病毒性心肌炎TNF-α与SOD的影响

摘要目的探讨左卡尼汀对病毒性心肌炎患儿血清肿瘤坏死因子 α（TNF α）及超氧化物歧化酶（SOD）的影响。方法将60例病毒性心肌炎患儿随机分为两组各30例,治疗组给予左卡尼汀50～100 mg·kg－1·d－1,静脉滴注;对照组给予辅酶A 100 U·d－1＋三磷腺苷40 mg·d－1,静脉滴注。疗程均为14 d。采用放射免疫分析法检测患儿治疗前后血清TNF α、SOD水平。结果对照组和治疗组TNF α治疗前分别为（629.2±30.8）,（628.6±30.4） ng·L－1,治疗后分别为（604.6±28.9）,（346.5±19.7） ng·L－1（P＜0.01）;SOD水平治疗前分别为（74.9±7.6）,（72.5±6.8） U·mL－1,治疗后分别为（78.3±7.8）,（150.3±13.1） U·mL－1（P＜0.01）。结论左卡尼汀可降低血清TNF α水平,增加SOD水平,对病毒性心肌炎有良好的治疗作用。     

Effects of baicalin and geniposide on polarization of BV2 microglia

OBJECTIVE To investigate the effects of baicalin(BC), geniposide(GP) and 7∶3 combination(BC/GP) on polarization of BV2 microglia. METHODS LPS(50 μg·L~(-1)) and IL-4(20 μg·L~(-1)) were polarized to M1 and M2. The optimal concentrations of BC, GP and BC/GP were detected by CCK-8, and then each group was divided into high, middle and low dose group in the optimal concentration range. The Griess method was used to detect the NO content in the supernatant of each group. The contents of IL-10, TGF-β1, IL-1β and TNF-α in the supernatant of each group were detected by ELISA. The cells in each group were labeled with fluorescent dye-labeled CD86 and CD206 antibodies and the fluorescence expression of M1 and M2 was observed by fluorescence microscope. RESULTS CCK-8 results showed that BC, GP and BC/GP had no significant effect on cell status from 32 to 125 μmol·L~(-1). The content of NO in LPS group was significantly higher than that in blank group(P<0.01), but there was no significant difference in IL-4 group compared with blank group, and each drug group was significantly lower than that in LPS group(P<0.01). Compared with LPS group, the contents of IL-10 and TGF-β1 were increased(P<0.05), and the contents of TNF-α and IL-1β were decreased in each drug group and IL-4 group(P<0.05). Fluorescence microscopy showed the fluorescence intensity of surface markers of M1 and M2 microglia CD86 and CD206. It was found that the expression of CD86 was weaker and the expression of CD206 was enhanced in each of the administration group and IL-4 group. CONCLUSION A certain concentration of LPS and IL-4 can polarize BV2 microglia into M1 and M2 type, BC, GP and their 7∶3 combination can reduce inflammatory factors, promote the release of anti-inflammatory factors and drive microglia to M2 polarization and have a protective effect on nerve damage after cerebral ischemia.     

万胜化风丹、雄黄和朱砂的急性肝肾毒性作用

目的研究万胜化风丹中雄黄和朱砂的肝肾毒性作用,探讨目前对其毒性评价指标的合理性。方法 成年昆明种小鼠分别一次性ig给予万胜化风丹(原方药)3g.kg-1、雄黄和朱砂减量的万胜化风丹(减量方药)3g.kg-1、不含雄黄和朱砂的万胜化风丹(减方药)3g.kg-1、雄黄0.3g.kg-1、朱砂0.3g.kg-1、亚砷酸钠36mg.kg-1和氯化汞0.07g.kg-1,8h后检测肝及肾组织中砷和汞的含量,检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)含量;RT-PCR方法检测肝和肾中金属硫蛋白基因(MT-1)的表达。结果亚砷酸钠、原方药及减量方药组肝和肾组织中砷的蓄积量明显增加(P<0.05),且亚砷酸钠>原方药>减量方药。亚砷酸钠组ALT显著升高,其他各组略有升高,但与正常对照组无显著差异。氯化汞和朱砂组肝肾组织中汞的蓄积量明显增加(P<0.05),且氯化汞组>朱砂,氯化汞组同时伴Cre、BUN显著升高(P<0.05)。亚砷酸钠组、氯化汞组肝肾病理损伤明显,MT-1mRNA在肝肾组织的高表达。结论万胜化风丹、雄黄和朱砂的急性肝肾毒性远低于亚砷酸钠和氯化汞。     

LPS诱导小胶质细胞活化模型的建立及评价

目的探讨不同浓度脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)对小胶质细胞活化作用,建立小胶质细胞活化的模型。方法不同浓度LPS(0.01,0.1,1,10,100mg·L-1)刺激原代纯化的小胶质细胞及BV2细胞株,采用MTT法检测细胞活力;采用细胞免疫化学法观察细胞形态变化。结果 LPS(1mg·L-1)可以明显激活原代小胶质细胞,但不影响细胞活力,OX-42染色显示小胶质细胞胞体变大,轴突变短变多,形似"阿米巴状";LPS(10mg·L-1)可以激活BV2细胞,且不降低细胞活力,镜下观察发现BV2细胞胞体明显增大。结论采用LPS(1mg·L-1)刺激原代小胶质细胞,LPS(10mg·L-1)刺激BV2细胞株,可以建立稳定的小胶质细胞活化模型。     

Noble dendrobium polysaccharides protects neuron against LPS-induced neurotoxicity in primary rat neuron/microglia culture

OBJECTIVE To investigate the protective effect of Noble dendrobium polysaccharides(NDP) on inflammatory factors,which are produced and released by 1ipopolysaecharide(LPS)-activated rat cerebral microglia,and to explore the protective mechanisms of NDP against LPS-induced neuron damage.METHODS The whole brains of 1 or 2-day-old mice was dissected,and microglia were isolated and cultured.Before exposure to LPS neurotoxicity,cells were treated with NDP(24 h),and the microglia-conditioned medium(MCM) collected.Primary neuronal cultures were supplemented with the 24 h MCM.The morphology and density of neuronal synapses were observed by immunofluorescence;the production of NO was detected with the Griess reagent;the level of tumor necrosis factor-α(TNF-α) was assessed by ELISA;the degree of neuronal apoptosis was examined with Hoechst 33258.RESULTS The hippocampal neurons were apparently damaged by the supernatant of activated MCM,and the morphology of the neurons changed significantly.Compared to control group,the level of NO was elevated and the expression level of TNF-α protein was significantly increased,and the apoptosis was induced in neurons.NDP improved synaptic morphology and increase synapses density,depress the high-level of NO,inhibited the up-expression of TNF-α protein by LPS,and decreased neuronal apoptosis.CONCLUSION NDP may significantly inhibit the activation of microglia induced by LPS and reduce the release of inflammatory factors.These results showed that NDP exert neuroprotection through depressing the actived microglia.     

安宫牛黄丸通过诱导细胞凋亡和降低线粒体膜电位抑制肿瘤细胞增殖

目的 观察安宫牛黄丸的抗肿瘤作用,并探索其可能的作用机制。方法 安宫牛黄丸9,30,90,300和900 mg·L^-1分别与人胃癌MGC-803和人肝癌BEL-7402细胞孵育24,48和72 h。采用噻唑蓝(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(3-羧基甲基苯基)-2-(4-磺酸苯基)-2H-四氮唑)细胞毒实验MTS法和克隆实验观察安宫牛黄丸对MGC-803和BEL-7402细胞增殖的影响;应用Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测线粒体膜电位。结果 安宫牛黄丸具有浓度依赖性地抑制肿瘤细胞增殖的作用。MTS法测定结果表明,安宫牛黄丸作用48和72 h对MGC-803细胞增殖具有抑制作用,浓度-效应相关系数分别为0.996(P=0.002)和0.756(P=0.024);与BEL-7402细胞作用48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.732(P=0.030)和0.702(P=0.037)。细胞克隆实验结果表明,安宫牛黄丸作用24 h可浓度依赖性地抑制MGC-803细胞(r=0.914,P=0.011)和BEL-7402细胞(r=0.871,P=0.024)克隆形成。Hoechst 33258/PI染色和流式细胞仪检测结果表明,安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用24 h可诱导MGC-803和BEL-7402细胞凋亡,细胞凋亡百分率分别达27.2%和19.7%。安宫牛黄丸900 mg·L^-1作用后连续检测3 min,MGC-803和BEL-7402细胞的线粒体膜电位比对照组分别下降15.9%和15.0%。结论 安宫牛黄丸具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡和降低肿瘤细胞线粒体膜电位有关。