荧光标记mRNA差异显示技术在分离食管癌相关基因片段中的应用

目的：以荧光标记的mRNA差异显示技术分离食管癌及其正常食管粘膜组织相关的差异基因片段。方法：结合Genbomyx LR^TM DNA测序／差异显示系统及Genomyx SC^TM荧光图像扫描系统,以及配套的FluoroDD和HIEROGLYPH mRNA Profile Kit,采用荧光标记的mRNA差异显示技术进行检测。结果：从人食管癌及正常食管粘膜组织间,同时直接分离出了相关的癌基因或抑癌基因片段74条。结论：该技术方便、快捷,值得推广应用。     

荧光标记mRNA差异显示技术分离肝纤维化相关基因

肝纤维化是各种慢性肝病共同的病理基础,是发展至肝硬化的关键环节。多种原因,如酒精、药物、某些化学物质和病毒,都可引起肝纤维化。目前研究发现,多种基因都参与肝纤维化的发生,随着研究的不断深入,参与肝纤维化发生的新基因在不断发现。本研究应用荧光mRNA差异显示技术查找肝纤维化发生的相关基因,从基因水平上阐明肝纤维化的发生机制。     

用mRNA差异显示PCR技术筛查慢性砷中毒相关基因片段

目的：对慢性砷中毒组织的表达差异基因进行分析。方法：采用mRNA差异显示PCR技术(mRNA differential display PCR)，以慢性砷中毒病人具有皮损表现的手掌部皮肤组织为标本，正常人体手掌部皮肤组织为对照，提取组织mRNA，对砷中毒组织的表达差异基因进行分析，选择高表达和低表达的基因片段各一条进行了克隆和序列分析，经RNA印迹法确证，并在基因数据库中进行了同源性比较。结果：获得25条差异表达明显的cDNA片段，分别在砷中毒病人组织中呈高表达和低表达，已测序的两个序列均为未知基因序列。结论：慢性砷中毒病人病变皮肤组织与正常人体皮肤组织相比在mRNA水平有基因表达差异，差异表达的片段可能为砷中毒相关基因片段。     

用mRNA差异显示技术初步筛选食管癌相关基因

用ｍＲＮＡ差异显示技术初步筛选食管癌相关基因王尧河１）张云汉１）高冬玲１）付淑莉１）王宏２）夏贞彪２）李春海２）罗庆良２）１）河南医科大学第一附属医院病理科，河南省肿瘤病理学重点实验室郑州４５００５２２）军事医学科学院北京１００８５０关键词食管肿瘤...     

mRNA差异显示法在分离肿瘤转移相关基因中的初步应用

用mRNA差异显示技术（mRNAdifferentialdisplay）对分别用200U／ml重组人IFN－a和IFN－Υ处理的MA891肿瘤细胞系总mRNA进行分析，分离出10个差异表达的片段，并进行了克隆。因IFN－a抑制MA891细胞系的肺转移能力，而IFN－Υ则增强其肺转移能力，故认为该10个片段所代表的基因中可能有某个或几个基因与肿瘤转移有关。     

应用mRNA差异显示技术进行肝癌相关基因的筛选

目的采用mRNA差异显示技术寻找肝癌及非肝癌组织的差异表达基因，筛选肝癌相关基因，为进一步研究创造条件。方法提取手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA，逆转录获得eDNA片段，以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因。对所获得的差异表达基因进行序列分析，并通过CenBank／BLAST数据库进行序列的同源性比较，并以Northern杂交方法对有意义片段予以来源确认。结果自720余条扩增条带中选出28条差异条带，其中“上调”者16条，“下调”者12条。对其中5条差异最为明显的片段进一步分析，其中2条为可能的新基因片段，其中一条经Northern印迹杂交证实确来自源标本组织，且在肝癌组织中有明显高表达趋势。结论mRNA差异显示技术是一种快速、灵敏、高效的差异表达基因的克隆技术，已采用这种技术获得了1条可能的肝癌相关新基因片段，有必要进一步研究。     

应用mRNA差异显示技术筛选卵巢癌耐药相关基因

目的 筛选卵巢癌泰素耐药相关基因。方法 采用间歇诱导法建立了卵巢癌泰素耐药细胞株Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｌ－２５;采用ｍＲＮＡ ＤＤ比较Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５对泰素耐药增加４４倍,同时对顺铂也产生了耐药。比较Ｓｋｏｖ３和Ｓｋｏｖ３／Ｔａｘｏｌ－２５的ｍＲＮＡ,获得２２个差异条带。对其中５个差异条带进行了ＤＮＡ序列测定,有３个与已知的基因高度同源,分别为ｔＰＡ、Ｋｉａａ０３７２和ＬＤＬＣ。２个为未知     

mRNA差异显示筛选卵巢癌相关基因

目的：利用ｍＲＮＡ差异显示技术研究正常卵巢上皮和卵巢上皮癌之间的基因表达差异状况,筛选和克隆卵巢上皮癌相关基因。方法：通过ＤＤ－ＰＣＲ分析正常卵巢上皮和卵巢上皮癌总ＲＮＡ将差异片段分离并显示出来,将其回收,利用基因克隆技术将其筛选和克隆出来作为探针进行斑点杂交鉴定、ＤＮＡ序列测定、通过国际互联网络检索ＧｅｎＢａｎｋ进行同源性分析。结果：共筛选克隆鉴定６个差异显示片段。其中４个为未知基因片段,已收录     

分离丁酸钠诱导人大肠癌新分化相关基因的mRNA差异显示技术的一些改进

目的 :探讨应用 m RNA差异显示技术分离丁酸钠诱导的人大肠癌分化相关基因的改进方法。方法 :实验过程中针对某些关键因素如引物设计及 PCR参数的优化、PCR扩增产物显示方法、差异片段的鉴定及再证实等方面进行摸索和改进 ,总结出较为行之有效的改进方法。结果 :获得的差异片段经克隆测序并与 Gene Bank比较 ,其中的一个可能是新的基因 ,另一个与鼠 SOCS家族同源。结论 :经改进的方法 ,具有工作量小、实验周期短、操作简单、重复性好、成本低的优点。     

人食管癌相关基因cDNA片段的克隆、筛选与初步鉴定

目的 :筛选和鉴定人原发性食管癌组织的相关基因 ,揭示食管癌的癌变机理。方法 :用高效、灵敏的荧光mRNA差异显示技术 ,以食管癌及相应的正常食管粘膜组织为对照 ,通过对其基因表达的比较 ,找出差异条带 ,利用ReverseNorthernDotBlot、DNA序列分析和NorthernBlot,并结合mRNA原位杂交技术对被筛片段进行鉴定。结果 :①在实验中分离、鉴定了 74条差异片段 ,其中包括正常组织表达而癌组织中不表达的差异片段 5 4个 ,癌组织中表达而正常组织不表达的差异片段 2 0个。②其中 1个片段C5 7(337bp)在GenBank数据库中没有发现同源的已知基因或片段 ,推测其可能为食管癌相关基因。③经NorthernBlot检测C5 7在癌组织中有表达信号。④原位杂交技术检测C5 7在癌组织中具有较高的阳性表达率 (74% )。结论 :食管癌组织中C5 7可能是新的食管癌相关的候选癌基因 ,它与食管癌的发生发展可能有关     

应用mRNA差异显示技术克隆人成骨肉瘤转移相关基因

目的：筛选与成骨肉瘤转移抑制相关的基因,探讨成骨肉瘤转移的分子机制。方法：应用改良的mＲＮＡ差异显示,比较成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及其高转移亚系统ＳＯＳＰ－Ｍ的mＲＮＡ表达差异。克隆差异片断,进行测序。根据测序结果设计牧民性引物,ＲＴ－ＰＣＲ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证实其表达特异性。结果：从低转移细胞ＳＯＳＰ－９６０７中分离出２条特异性表达的片断ＭＳＰ２和ＭＳＰ３,经ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒ     

应用差异显示法对小细胞肺癌转移相关基因的筛选

目的：筛选与人小细胞肺癌转移相关基因,揭示肺癌的转移机制。方法：采用激光俘获显微切割（LCM）及mRNA差异显示技术（DD）对手术切除的小细胞肺癌、癌转移淋巴结进行筛选并克隆与转移相关的基因片段,测定其序列后在基因库（GenBank）中进行BLAST检索分析其同源性。结果：小细胞肺癌原发灶与癌转移淋巴结的基因表达具有明显差异,共获得差异片段（EST,表达序列标签）24个,选择差异明显的3个片段克隆测序后,发现3片段均位于肿瘤高度相关的3q、7q和10q,均为未知序列,未发现同源基因,可能为新的基因片段。用RT-PCR对位于抑癌基因盯EN上游的L1片段进行验证的结果证实了该片段在小细胞肺癌的高表达率,具有统计学意义（P〈0．05）。结论：人小细胞肺癌原发灶与癌转移淋巴结的基因表达存在差异,所测序的3个基因片段均为未知基因序列,这些片段可能为小细胞肺癌的转移相关候选基因,其序列和功能值得进一步深入研究。应用DDRT-PCR技术有望找到调控肿瘤转移的基因,为肿瘤的诊断和治疗提供新的线索。     

Screening for glutamate-induced and dexamethasone-downregulated epilepsy-related genes in rats by mRNA differential display

Background It is known that excessive release of glutamate can induce excitotoxicity in neurons and lead to seizure. Dexamethasone has anti-seizure function. The aim of this study was to investigate glutamatedexamethasone interaction in the pathogenesis of epilepsy, identify differentially expressed genes in the hippocampus of glutamate-induced epileptic rats by mRNA differential display, and observe the effects of dexamethasone on these genes expression. Methods Seizure models were established by injecting 5μl （250 μg/μl） monosodium glutamate （MSG） into the lateral cerebral ventricle in rats. Dexamethasone （5 mg/kg） was injected intraperitoneally at 30 minutes after MSG inducing convulsion. The rats＇ behavior and electroencephalogram （EEG） were then recorded for 1 hour. The effects of dexamethasone on gene expression were observed in MSG-induced epileptic rats at 1 hour and 6 hours after the onset of seizure by mRNA differential display. The differentially expressed genes were confirmed by Dot blot. Results EEG and behaviors showed that MSG did induce seizure, and dexamethasone could clearly alleviate the symptom, mRNA differential display showed that MSG increased the expression of some genes in epileptic rats and dexamethasone could downregulate their expression. From more than 10 differentially expressed eDNA fragments, we identified a 226 bp eDNA fragment that was expressed higher in the hippocampus of epileptic rats than that in the control group. Its expression was reduced after the administration of dexamethasone. Sequence analysis and protein alignment showed that the predicted amino acid sequence of this cDNA fragment kept 43% identity to agmatinase, a member of the ureohydrolase superfamily. Conclusions The results of the current study suggest that the product of the 226 bp eDNA has a function similar to agmatinase. Dexamethasone might relax alleviate seizure by inhibiting expression of the gene.     

银染mRNA差异显示法克隆肝癌相关基因

目的 建立银染mRNA差异显示方法,筛选并克隆肝癌相关基因,方法 以建系的人肝癌细胞HepG2和正常的肝细胞L02的总RNA为模板,用5′-dT11G锚定引物和8条随机引物（AP1-AP8）组合进行RT-PCR扩增,PCR产物经60g.L^-1尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,凝胶银盐染色显示差异的DNA片段。结果 建立了快速敏感的银染mRNA差异显示方法,分离并克隆了一些肝癌相关基因,结论 建立的银染mRNA差异显示法简单、有效,在差异表达基因的筛选中有较高的实用价值。     

改良差示PCR技术分离入成骨肉瘤转移基因片段

目的：建立优化的差示ＰＣＲ体系,通过对转移潜能不同的人成骨肉瘤细胞系进行差示比较,获得人成骨肉瘤转移相关基因片段。方法：Ｃ 低转移性人成骨肉瘤细胞系ＳＯＳＰ－９６０７及由此筛选 出的高转移亚系ＳＯＳＰ－Ｍ为研究对象,利用优化的差示ＰＣＲ技术获得两细胞系mＲＮＡ的表达差异,选取差异明显、片段较长的条带回收并克隆后,经点杂 交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交排队假阳性,并进行测序和同源性分析。结果：获得满意的差示     

食管癌中高表达的钙结合蛋白1基因的序列分析及意义

目的:筛选食管癌中差异表达的基因,为进一步了解食管癌发生的分子机制奠定基础.方法: 利用荧光差异显示技术(DD-PCR)获得差异片段,对这些片段进行克隆和序列分析.通过在GenBank中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因.利用定量PCR检测验证该基因表达的差异性,并对该基因的结构进行预测和分析.结果:通过DD-PCR得到差异片段中的一个片段对应于人类钙结合蛋白1基因(Cabin1).荧光定量PCR技术检测结果表明钙结合蛋白1基因在食管癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织,在食管癌细胞株TE1中的表达量高于其他被测试的5种肿瘤细胞株.生物软件分析表明:该基因的读码框长6 663bp,编码2 220个氨基酸,至少有4种剪切方式.结论:Cabin1在食管癌组织及食管癌细胞中异常表达,可能在食管癌发生过程中起着重要的作用.     

用差别显示法寻找细胞凋亡的相关基因

目的 寻找参与细胞凋亡的相关基因。方法 天花粉蛋白诱导Ｕ９３７细胞凋亡后,用锚定引物和随机引物进行差别显示ＰＣＲ,回收差异条带,进行ＲＮＡ点杂交。用细胞凋亡时高表达的差异片段筛选胎肝ｃＤＮＡ库,阳性克隆测序,并与凋亡细胞ＲＮＡ行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交。结果 用细胞凋亡时高表达的差异片段筛选胎肝ｃＤＮＡ文库,获得一个１．４ｋｂ的ｃＤＮＡ克隆,该ｃＤＮＡ序列中部分碱基与人Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶高度同源。     

mRNA差异显示技术的应用与改进

目的：克隆和研究高低分化胆管癌间差异表达基因。方法：对ｍＲＮＡ差异显示ＰＣＲ（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）的一系列条件进行了探索和改进,建立了有效的ＤＤＲＴ－ＰＣＲ法。结果;在高,低分化胆管癌差异分化基因的研究方面获得了满意的结果,共获得９个有显著差异的ｃＤＮＡ片段,测序后进行同源序列比较,有一个与层粘连蛋白受体基因高度同源,还有一个可能是一个新基因的部分序列。结论：通过对传统方法的改进,大大提高了工作效率