rhCD40L及阿司匹林对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性表达的影响

目的探讨rhCD40L及阿司匹林对人I型胶原α2(I)链启动子活性的作用。方法体外培养人血管平滑肌细胞(VSMCs),人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链基因启动子重组质粒pCOLH22.4和pCOLH21.6扩增和酶切鉴定后,通过脂质体(Lipofectamin)转染VSMCs,rhCD40L刺激转染后细胞,ELISA检测CAT目的基因表达以及阿司匹林(100μmol/L)的影响。结果rhCD40L使CAT目的基因表达下降;阿司匹林可以增加CAT目的基因表达,并逆转rh-CD40L诱导的CAT目的基因表达下降(P<0.05)。结论阿司匹林上调人I型胶原启动子活性表达,并且逆转rh-CD40L对人I型胶原启动子活性的下调作用,可能是其抗动脉粥样硬化和稳定斑块的机制之一。     

rhCD40L及阿司匹林对人I型胶原α2（I）链启动子活性表达的影响

目的探讨rhCD40L及阿司匹林对人I型胶原α2（I）链启动子活性的作用。方法体外培养人血管平滑肌细胞（VSMCs）,人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）链基因启动子重组质粒pCOLH22.4和pCOLH21.6扩增和酶切鉴定后,通过脂质体（Lipofectamin）转染VSMCs,rhCD40L刺激转染后细胞,ELISA检测CAT目的基因表达以及阿司匹林（100μmol/L）的影响。结果rhCD40L使CAT目的基因表达下降;阿司匹林可以增加CAT目的基因表达,并逆转rh-CD40L诱导的CAT目的基因表达下降（P<0.05）。结论阿司匹林上调人I型胶原启动子活性表达,并且逆转rh-CD40L对人I型胶原启动子活性的下调作用,可能是其抗动脉粥样硬化和稳定斑块的机制之一。     

环氧合酶抑制剂和重组人CD40配体对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性表达的影响

目的探讨重组人CD40配体及环氧合酶抑制剂对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的作用。方法体外培养人血管平滑肌细胞,人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链基因启动子重组质粒pCOLH22.4和pCOLH21.6扩增和酶切鉴定后,通过脂质体转染血管平滑肌细胞,重组人CD40配体刺激转染后细胞,酶联免疫吸附法检测CAT报告基因表达以及阿斯匹林(环氧合酶1抑制剂)和NS-398(环氧合酶2抑制剂)对其的影响。结果重组人CD40配体使CAT报告基因表达下降;阿斯匹林和NS-398均可以增加CAT报告基因表达,并逆转重组人CD40配体诱导的CAT报告基因表达下降,NS-398的作用强于阿斯匹林(P<0.05)。结论重组人CD40配体对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的作用部分与环氧合酶通路有关。     

细胞因子和氯沙坦对人α1Ⅰ型胶原基因启动子活性的调控

目的探讨转化生长因子β1(TGF β1)和血小板源生长因子(PDGF)对人α1 Ⅰ型胶原基因启动子活性的调控作用和氯沙坦药物干预的影响环节.方法将不同长度的人α1 I型胶原基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)"报告基因"组成重组体 pCOLH 1.5和pCOLH 2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的TGF β1、PDGF、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和氯沙坦,ELISA法测定CAT活性.结果 TGF β1表现为剂量依赖性地促进pCOLH 1.5和pCOLH 2.5的活性,与对照组比较差别有非常显著性意义(P＜ 0.01).PDGF(10～25 μg/L)未发现有明显影响(P＞ 0.05),AngⅡ则具有促进其活性作用.氯沙坦不但能抑制两个重组体的CAT表达,和AngⅡ共同作用时,pCOLH 2.5 CAT的升高幅度明显减少(P＜ 0.01).结论在肾小球系膜细胞中,TGF β1具有促进人α1 Ⅰ型胶原基因启动子的转录活性,PDGF则未发现有显著促进或抑制效应.氯沙坦能下调人α1 Ⅰ型胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用.     

细胞因子和氯沙坦对人α1I型胶原基因启动子活性的调控

目的：探讨转化生长因子β1（TGFβ1）和血小板源生长因子（PDGF）对人α1I型胶原基因启动子活性的调控作用和氯沙坦药物干预的影响环节。方法：将不同长度的人α1I型胶原基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）“报告基因”组成重组体pCOLH1.5和pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别加入不同浓度的TGFβ1、PDGF、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和氯沙坦,ELISA法测定CAT活性。结果：TGFβ1表现为剂量依赖性地促进pCOLH1.5和pCOLH2.5的活性,与对照组比较差别有非常显著性意义（P＜0．01）。PDGF（10－25μg/L）未发现有明显影响（P＞0．05）,AngⅡ则具有促进其活性作用。氯沙坦不但能抑制两个重组体的CAT表达,和AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5CAT的升高幅度明显减少（P＜0．01）。结论：在肾小球系膜细胞中,TGFβ1具有促进人α1I型胶原基因启动子的转录活性,PDGF则未发现有显著促进或抑制效应。氯沙坦能下调人α1I型胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用。     

全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用

目的探讨全反式视黄酸(t -RA)对人α1(Ⅰ)前胶原(COL1A1)启动子的调控作用,以及胰岛素样生长因子1(IGF-1)与胰岛素对这一调控作用的影响.方法构建含人C OL1A1启动子序列2483～+42bp片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体pCOLH2.5.用Fugene转染试剂瞬时转染至人皮肤成纤维细胞,加入t-RA或(和)IGF-1及胰岛素,测定CAT活性.结果 2μmol@L1与10μmol@L-1 t-RA使pCOLH2.5的活性降至对照的79%±7%与29%±6%.IGF-1与胰岛素能促进pCOLH2.5的活性.t-RA能降低IGF-1与胰岛素的这一促进作用.结论 t -RA能下调人COL1A1启动子的活性,而IGF-1与胰岛素能上调该启动子的活性.t -RA能降低IGF-1与胰岛素的这一上调作用.     

己酮可可碱对人α1(Ⅰ)前胶原基因启动子活性的影响

目的探讨己酮可可碱（pentoxifylline,PTX）对人α1(Ⅰ)前胶原（COL1A1）基因启动子活性的作用及其机制。方法构建含人COL1A1基因启动子序列-2483～+42bp片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因的重组体pCOLH2.5,将其瞬时转染至人皮肤成纤维细胞,加入PTX或/和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及胰岛素,测定CAT活性。结果0.4mmol/L、2mmol/L和10mmol/L的PTX使pCOLH2.5的活性降至对照的（82±9）%、（58±8）%与（32±13）%。IGF-1与胰岛素能促进pCOLH2.5的活性。PTX能拮抗IGF-1与胰岛素的这一促进作用。结论PTX能下调人COL1A1启动子的活性,而IGF-1与胰岛素能上调该启动子的活性。PTX能拮抗IGF-1与胰岛素的这一上调作用。     

ApoAⅠ/ABCA1通过STAT3/TTP途径调节炎症因子mRNA降解

目的观察ApoAⅠ对脂多糖(LPS)诱导的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响,并从ABCA1介导激活的STAT3/TTP信号途径入手探讨其分子机制。方法采用ELISA检测炎症因子表达;构建含肿瘤坏死因子α(TNF-α)启动子的CAT报告基因,转染THP-1细胞,采用ELISA检测TNF-α启动子活性;定量PCR检测TNF-α等炎症因子mRNA表达;免疫印迹技术检测pSTAT3、TTP和HuR等蛋白表达;RNA-EMSA检测TTP与RNA复合物;构建TTP、STAT3 siRNA,转染细胞。结果用10μg/L LPS和/或10 mg/L ApoAⅠ处理THP-1源性泡沫细胞4 h,结果显示ApoAⅠ明显抑制LPS诱导的TNF-α、IL-1β和IL-6的表达;CAT报告基因显示,ApoAⅠ并不明显影响LPS诱导的TNF-α启动子活性;LPS处理细胞3 h,加入放线菌素D(Act D)终止转录,检测TNF-αmRNA表达量(0、30、60及120 min),结果显示ApoAⅠ明显增加LPS作用下TNF-α的mRNA降解;ApoAⅠ明显促进LPS作用下TTP的表达,而对HuR的表达没有明显影响,TTP ...     

应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术拯救汉滩病毒84FLi株微基因组

目的 建立基于汉滩病毒(HTNV)84FLi株L片段的RNA聚合酶Ⅰ微基因组拯救体系.方法 将含有氯霉素乙酰转移酶(CAT)编码区的cDNA插入含有HTNV 84FLi株L片段5'端和3'端非编码区的质粒内的两个非编码区之间,将此eDNA嵌合体(polⅠ表达盒)克隆人人polⅠ肩动子和终止子之间,分别获得正义和反义方向的RNA polⅠ转录报告质粒.用报告质粒转染293T细胞或等量293T和HTNV感染的Vero混合培养细胞,在HTNV的L蛋白和核衣壳蛋白表达质粒共转染后48 h收获细胞,检测CAT活性.用上清液感染293T细胞,了解CAT活性的传代能力.结果 构建了正义和反义方向的HTNV 84FLi株L片段微基因组RNA聚合酶Ⅰ报告质粒pLvRNA-CAT和pLcRNA-CAT,用此质粒转染细胞后能检测到CAT的表达,且CAT活性能在拯救病毒微基因组中传代.结论 应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术成功拯救了HTNV 84FLi株微基冈组.     

Smad7质粒转染对肝星形细胞α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原基因表达的影响

目的:研究上调Smad7表达对肝星形细胞(HSC)α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原基因转录的作用.方法:应用Fugene6介导Smad7质粒转染体外培养的HSC-T6细胞.继续培养48 h.同时使用实时定量聚合酶链式反应(Real time-PCR),逆转录酶链式反应(RT-PCR)方法检测Smad7质粒组和正常对照组、空载质粒对照组α(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原mRNA水平.结果:与正常对照组和空载质粒对照组相比,Smad7质粒转染HSC-T6细胞48h后,Smad7 mRNA水平显著增高(1.29±0.18 vs 0.11±0.02,0.13±0.02,均P<0.01),α1(Ⅰ)前胶原mRNA表达明显下降(0.10±0.01 vs 1.18±0.15.1.07±0.12,均P<0.01),但α1(Ⅲ)前胶原基因表达无明显改变(0.72±0.00 vs 0.70±0.01,0.75±0.0l,均P>0.05).结论:Smad7能明显抑制HSC细胞α1(Ⅰ)前胶原mRNA转录.     

上调miR-203表达对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察上调mi R-203表达对肝星状细胞增殖活性及胶原合成的影响.方法:利用Lipofectamine?2000将miR-203模拟物(mimics)转染大鼠肝星状细胞(HSC-T6),培养48 h后,收集细胞提取总蛋白和总RNA,分别行Western blot和RT-qP CR,检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达;MTT(噻唑蓝)法检测细胞增殖活性.结果:与阴性对照组相比,mi R-203 mimics组α-SMA蛋白和mRNA表达分别下降75%和80%(均P0.01);Ⅰ型胶原蛋白表达下降56%(P0.01),mRNA表达下降48%(P0.05);Ⅲ型胶原蛋白与mRNA表达分别下降45%和60%(P0.05);HSC-T6细胞增殖活性下降20%±5%(P0.01).结论:上调mi R-203表达能显著抑制肝星状细胞增殖及胶原合成.     

CD40L刺激诱导型环氧合酶表达及普伐他汀的作用

目的探讨重组人CD40配体（rhCD40L）对培养的人单核细胞（U937）表达诱导型环氧合酶（COX-2）的作用和普伐他汀对其影响。方法体外培养U937细胞,以0.05、0.1、0.2μg/m l的rhCD40L分别刺激24 h;0.4μg/m l的rhCD40L分别刺激3、6、12、24 h;终浓度10、1、0.1 mmol/L的普伐他汀与0.4μg/m l的rhCD40L共同刺激U937细胞24 h。RT-PCR检测COX-2 mRNA表达,W estern-b lot检测COX-2蛋白表达,ELISA法检测前列腺素E2（PGE2）的浓度反映COX-2酶活性。结果0.4μg/m l的rhCD40L刺激后3 h可诱导COX-2 mRNA和蛋白表达,随着rh-CD40L浓度和作用时间增加,COX-2 mRNA和蛋白表达显著增加（P<0.01）,且呈时效和量效关系;同样,rhCD40L以时间和剂量依赖的方式增加U937细胞中PGE2的合成。0.4μg/m l的rhCD40L与普伐他汀共同刺激24 h后,COX-2的表达显著被抑制。结论rhCD40L以时间和浓度依赖的方式诱导COX-2的表达,普伐他汀可以抑制此作用。     

表达谱基因芯片技术研究膦甲酸钠上调细胞凋亡蛋白酶激活因子-1基因的表达

目的：了解膦甲酸钠(PFA)与细胞凋亡蛋白酶激活因子-l(APAF-1)基因启动子的关系，为PFA的作用机制提供理论依据。方法：应用基因表达谱芯片技术对于膦甲酸钠刺激Jurkat细胞之后的基因表达谱进行研究。聚合酶链反应(PCR)扩增APAF-1基因启动子，命名为APAF-P。以T-A克隆法，将APAF-P基因片段连入载体pGEM-T。将获得的质粒pT-APAF-P，与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和NheⅠ双酶切后构建APAF-l启动子报告基因表达载体pCAT3-APAF-P，以重组表达质粒pCAT3-APAF-P瞬时转染Jurkat细胞，以转染pCAT3basic的Jurkat细胞为阴性对照，PFA刺激后24小时收获细胞。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果：表达谱基因芯片研究结果表明，PFA可上调APAF-l基因表达水平达2．815倍。构建的报告载体pCAT3-APAF-P经过序列分析和酶切鉴定正确。pCAT3-APAF-P和PFA瞬时转染的Jurkat细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的4．9倍，pCAT3-Weep的2．9倍。结论：PFA可以上调APAF-l启动子的活性，进而上调APAF-l基因的表达。为深入了解PFA的免疫调节作用及其在病毒的清除过程中的作用机制提供新的理论依据。     

乙型肝炎病毒X蛋白上调白细胞介素-18基因的表达

目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)与白细胞介素-18(IL-18)基因表达的关系,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:聚合酶链反应(PCR)扩增人IL-18基因启动子DNA,命名为IL-18P.以T-A克隆法,将IL-18P基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pGEM-T-IL-18P,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和BglⅡ双酶切后构建IL-18启动子报告基因表达载体pCAT3-IL-18P,以重组表达质粒pCAT3-IL-18P和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染HepG2细胞,以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照,48小时后收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解乙型肝炎病毒X蛋白对IL-18基因表达的影响.结果:构建的报告基因表达载体pCAT3-IL-18P经过序列分析和酶切鉴定正确.真核表达载体pcDNA3.1(阴性)-X和pCAT3-IL-18P共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3空载体的6.2倍,是pCAT3-IL-18P的1.17倍.结论:乙型肝炎病毒X蛋白可上调IL-18启动子的转录活性,促进IL-18基因表达.     

肾母细胞瘤过度表达基因对大鼠肝星状细胞生物学行为的影响

目的:构建能表达靶向肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)的小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,研究NOV对大鼠肝星状细胞(HSC)活化、增殖、凋亡、分泌细胞外基质(ECM)的影响方法:以NOV为目的基因,以质粒psiRNA- hHlneo为载体,构建能在真核细胞中表达的靶向NOV的siRNA的重组质粒psiRNA (psiRNA1,2,3)和阴性对照重组质粒pconsiRNA.限制性酶切和测序鉴定构建成功后,脂质体介导重组质粒转染HSC,依据转染质粒的不同将HSC分为psiRNA1组、psiRNA2组、psiRNA3组、阴性对照pconsiRNA组,并以未转染重组质粒的HSC为空白对照组.半定量RT-PCR检测HSC的NOV、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达情况,Western blot检测α-SMA蛋白表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡.结果:限制性酶切和测序鉴定表明成功构建了NOVsiRNA表达质粒:与阴性对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内NOV、α-SMA的mRNA表达水平下降(73.0% vs 23.2%,51.4% vs 15.1%,均P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA表达水平明显下降(59.8% vs 17.0%,37.1% vs 6.6%,P<0.05),α-SMA蛋白表达水平下降.与空白对照组相比,转染外源重组质粒psiRNA2的HSC内HSC增殖活性显著降低(24 h:0.172±0.005 vs 0.318±0.018.P<0.05:48 h:0.296±0.004 vs 0.472±0.029,P<0.05:72 h:0.432±0.024 vs 0.672±0.050,P<0.05).psiRNA1组、psiRNA3组的HSC内NOV mRNA、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达及HSC增殖活性均无明显下降(均P>0.05).结论:NOV可促进HSC增殖、活化及分泌细胞外基质,提示NOV可以作为肝纤维化基因治疗的一个新的靶位点.     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

精氨琥珀酸裂解酶上调乙型肝炎病毒表面抗原启动子Ⅰ的研究

目的了解精氨琥珀酸裂解酶(ASL)与乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原启动子-Ⅰ(SpⅠ)的关系，研究精氨琥珀酸裂解酶与SPⅠ在HBV致病的分子生物学机制中的作用。方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增精氨琥珀酸裂解酶编码基因。以T-A克隆法，将ASL基因片段连人载体pGEM—T。将获得的质粒pGEM-T-ASL，与报告质粒pcDNA3．1(-)分别用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后构建ASL表达载体pcDNA3．1(-)-ASL，将重组表达载体pcDNA3．1(-)-ASL和pCAT3-SpⅠ瞬时转染HepG2细胞，同时转染pCAT3-basic入HepG2细胞，作为阴性对照，48h后收获细胞。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性，以了解ASL对SpⅠ转录活性的调节作用。结果构建的真核表达载体pcDNA3．1(-)-ASL经过酶切鉴定和测序证实正确。在真核表达载体pcDNA3．1(-)-ASL和pCAT3-SpⅠ共转染的HepG2细胞中，CAT表达活性是CAT3空载体的3．3倍，是pCAT3-SpⅠ的1．45倍。结论精氨琥珀酸裂解酶可以上调SpⅠ启动子的活性，促进表面抗原基因的表达。     

血管平滑肌细胞增殖过程中钙调神经磷酸酶对三磷酸肌醇受体Ⅰ型表达的调节

目的研究血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖过程中钙调神经磷酸酶(CaN)对三磷酸肌醇受体Ⅰ型(IP3R Ⅰ) 表达的调节.方法植块法分离培养VSMCs , 比色法 (MTT法) 测定VSMCs 的增殖,荧光染色法测定 VSMCs 的活性,RT-PCR检测IP3R Ⅰ型mRNA转录水平, 免疫印迹法(Western blot)测定IP3RⅠ型蛋白质翻译水平.结果苯肾上腺素(PE)组VSMCs吸光度显著高于对照组(P<0.05),环孢素A (CsA) 组和CsA PE组VSMCs吸光度显著低于对照组(P<0.05).PE组活细胞百分数与对照组无显著差异(P>0.05),CsA 组和CsA PE组活细胞百分数显著低于对照组(P<0.05).PE组IP3R Ⅰ型mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05),CsA组和CsA PE组mRNA水平显著低于对照组(P<0.05).PE组IP3R Ⅰ型蛋白质表达水平显著高于对照组(P<0.05),CsA 组和CsA PE组蛋白质表达水平显著低于对照组(P<0.05).结论 CaN调节VSMCs增殖与活性,并且在转录水平和翻译水平调节IP3R Ⅰ的表达.     

抗纤复方含药血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响

目的：探讨抗纤复方含药血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响。方法：以0．5、2．0、4．0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃，制备大鼠的含药血清，作用HSC-LI90细胞48小时，应用Nonhon印迹杂交的方法，检测Ⅰ型、Ⅳ前胶原、基质金属蛋白酶—2及膜型基质金属蛋白酶基因的表达，并用酶图法检测基质金属蛋白酶—2的活性。结果：抗纤复方含药血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、增加模型基质金属蛋白酶基因表达，对基质金属蛋白酶—2基因表达及活性无影响。结论：抗纤复方能下调Ⅰ型、Ⅳ型胶原的合成，增加模型基质金属蛋白酶基因的表达。     

诱导型环氧合酶-2在CD40配体诱导基质金属蛋白酶表达中的作用

目的: 探讨重组人CD40配体（rhCD40L）诱导U937细胞中基质金属蛋白酶（MMPs）表达的作用及其与诱导型环氧合酶-2(COX-2)途径的关系。方法: 体外培养U937细胞,以不同浓度（0.1、0.2、0.4 mg/L）的rhCD40L和不同浓度（10-5 mol/L、10-4 mol/L、10-3 mol/L）的COX-2特异性抑制剂(NS-398)分别刺激24 h。在加入终浓度为0.4 mg/L rhCD40L的基础上,加入终浓度为10-4 mol/L的NS-398,共同刺激U937细胞24 h后,收集培养上清液,用酶谱法测定MMPs的活性。结果: rhCD40L可使MMP-2和MMP-9的活性明显增加（P<0.01）,且呈剂量依赖性;NS-398可抑制MMP-2和MMP-9的活性,且抑制作用随剂量的增加而增强（P<0.05）。结论: rhCD40L以浓度依赖的方式诱导MMPs表达,rhCD40L对MMPs的诱导作用可能与COX-2途径有关。