混合胸腺裸小鼠移植模型的建立及重建T细胞功能的体外研究

目的　建立混合胸腺移植模型 ,并在体外观察重建T细胞的功能状况。方法　首先建立混合胸腺裸小鼠左肾包膜下移植模型 ,流式细胞仪检测受体动物外周血中T细胞的重建情况 ,并利用刀豆素A(concanavalinA ,ConA)增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果　混合胸腺移植 3个月后 ,移植的胸腺组织在裸小鼠肾包膜下能够正常发育 ,并有效重建了受体外周血中的CD4 T和CD8 T细胞。体外功能检测显示 ,受体的脾细胞对ConA的刺激有良好的反应性 ,并对供体胸腺来源的F3Q44大鼠抗原刺激表现为特异性的低反应。结论　混合胸腺移植不仅在数量上可重建受体裸小鼠外周血中CD4 T和CD8 T细胞 ,而且受体中重建的T细胞还可发挥正常的免疫功能     

建立肝细胞皮下移植模型用以研究异种移植免疫反应

目的：建立异种肝细胞皮下移植模型，并探讨用以研究异种移植细胞性排斥反应的可能性。方法：用原位肝脏胶原酶循环灌注法分离大鼠肝细胞，分离出的肝细胞存活率达95％以上，分别注射于皮下及脾脏，于移植后不同时间点取材进行组织形态及功能观察，HE染色为主，结合G－6P、SDH等组织化学方法观察移植肝细胞的存活状态。结果：在术后3－28天期间，脾脏组与皮下组存活率无显著性差异（P＞0．05），仅在60天时相点脾脏组存活率（75％）大于皮下组（37．5％）；且术后4－7天开始发生细胞性排斥反应。结论：认为肝细胞皮下移植可作为研究异种移植细胞性排斥反应的模型。     

异种胸腺移植与艾滋病治疗

虽然高活性抗逆转录病毒疗法(highly active antiretroviraltherapy,HAART)在人类免疫缺陷病毒感染(HIV-1)及艾滋病患者治疗中已取得了一定疗效,但患者长期存在的免疫缺陷,是该类疾病死亡率升高及无病生存率降低的主要原因,因而突出了免疫重建在其中的重要性,增强患者免疫重建的能力将有助于改善疾病的预后。近期研究发现胸腺仍存在活化T细胞的合成和输出初始型T细胞的功能[1],这个发现使通过增强胸腺功能来重建免疫系统成为可能。     

急性血管性异种排斥反应中心肌的病理变化与T细胞的免疫组织化学研究

目的用仓鼠对小鼠心脏移植模型 ,探讨T细胞在异种急性血管性排斥反应中的作用。方法建立仓鼠对小鼠颈部异位心脏移植模型。分三组 :仓鼠—Balb/c小鼠 ,仓鼠—Balb/c裸小鼠 ,仓鼠—裸小鼠 (移植术后第 1 0 0日自小鼠尾静脉输 3× 1 0 7Balb/c脾细胞 )。观察移植物的平均存活时间及病理学变化 ,移植心组织内CD4+及CD8+T细胞的浸润。结果各组移植心的平均存活时间分别为 3 .3 8± 0 .5 2、>1 0 0、8.3 3± 2 .1 4日 ;排斥的移植心病检提示为典型的异种急性血管性排斥反应 ,可见CD4+T细胞浸润 ;而移植于裸鼠的长期存活移植心结构完整 ,未见细胞浸润。结论排斥反应依赖于T细胞的存在 ,CD4+T细胞在介导该排斥反应中起重要作用     

异种移植中的超急排斥反应

<正> 随着免疫移植理论和移植外科技术的发展,器官移植广泛应用于临床,然而,全世界都存在着供体器官远远不能满足受者需要的问题。异种移植有可能解决这一矛盾,但异种移植最大的障碍就是在几分钟至几小时内发生的超急排斥反应(hyperacute rejection,HAR)。供、受体间种源关系越远,越易发生超排反应,与人种源关系最近的灵长类却因数量少,生长缓慢,不易饲养,易将某些可感染人的病毒传递给受者以及伦理方面的原因而不能满足需要,与人种源关系较远的物种中,猪可能是较为合适的一种,猪可在6个月内成熟,其脏器大小与人相似,特别是它的多乳头肾与人肾有相似的肾小球滤过率,总肾血流量和浓缩能     

流式细胞仪检测重组合异种骨移植患者外周血T淋巴细胞亚群？…

观察重组合异种骨移植患者外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化。方法：患者空腹采血，与莹光抗体反应，上流式细胞仪检测Ｔ淋巴细胞亚群。结果；ＲＢＸ移植患者术后７ｄ１４ｄ和２８ｄ淋巴细胞亚群。结果；ＲＢＸ移植患者术后７ｄ，１４ｄ和２８ｄＴ淋巴细胞亚群与术前相比无明显变化。     

异种移植胎肠细胞介导排斥反应的免疫学机制

目的:用大鼠游离胎肠移植于小鼠模型研究细胞介导排斥反应(CMXR)的免疫学机理.方法:观察同种和异种胎肠游离移植各组移植物的病理改变和浸润细胞的表型,并用原位杂交方法检测移植物内Th细胞因子mRNA表达.结果:(1)移植胎肠的存活率同种移植组高于异种移植组(P＜0.01);(2)异种移植胎肠主要发生细胞介导的排斥反应;(3)异种移植物内浸润细胞主要为CD4 T细胞和ED2 MФ,其IL-4、IL-5和IL-10mRNA阳性细胞均明显高于IFN-γmRNA阳性细胞(P＜0.01).结论:CMXR与同种移植急性排斥反应存在本质差异,其特点是排斥程度强烈,异种移植胎肠内以CD4 T细胞和ED2 MФ浸润为主,且Th2细胞功能增强.大鼠至小鼠游离胎肠移植模型是研究CMXR的较为理想的动物模型.     

《异种移植》出版

本书是以参加国家自然基金重大项目“异种移植的基础研究”的专家为主撰写的，主编为上海交通人学医学院周光炎教授和中国科学院遗传与发育研究所分子发育开放实验室主任孙方臻。主要介绍异种移植的基础理论、面临的问题以及解决这些问题的思路与方法，包括异种移植物排斥反应的机制与防治对策、供动物的基因改造与选育、人畜共患病的防御、异种皮肤和胰岛细胞移植、异种移植的实验研究方法与临床研究状况等。对从事移植临床工作、移植和免疫学研究、分子和细胞生物学研究、核称植及干细胞生物工程研究、畜牧兽医学研究的科技工作人员及相关领域的大专院校师生来说，本书是一本不可多得的参考书。     

T细胞疫苗诱导异种胰岛移植免疫耐受的实验研究

目的体外制备供体特异性T细胞疫苗（T cell vaccine）,探讨T细胞疫苗免疫（T cell vaccination）诱导异种胰岛细胞移植免疫耐受的作用。方法腹腔注射链脲佐菌素诱导建立Balb／c小鼠Ⅰ型糖尿病模型,用酶消化法和密度梯度离心法无菌分离纯化Wistar大鼠胰岛细胞。制备Balb／c小鼠针对Wistar大鼠的T细胞疫苗：实验随机分为三组,G1：糖尿病小鼠对照组;G2：胰岛细胞移植组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞移植＋1640培养液（对照组）;G3：胰岛细胞移植加T细胞疫苗免疫组,糖尿病小鼠＋胰岛细胞＋T细胞疫苗（实验组）,于d1,d7,d14,d21实验组Balb／c小鼠接种TCV（1×107／mL）,对照组用1640替代。接种前和每次接种后第5d分别进行混合淋巴细胞反应。胰岛细胞移植：将Wistar大鼠的胰岛按1200。1500IEQ／kg经肝门静脉导入小鼠体内,移植后观测血糖和体重变化。结果异种胰岛细胞移植可以诱导I型糖尿病小鼠血糖降至正常水平且维持一段时间,对照组小鼠移植后（5．12±1．36）d即发生排斥,实验组移植物存活时间达（20．25±3．45）d。结论TCV能够有效延长异种胰岛移植物的存活时间,是一种潜在诱导异种胰岛移植免疫耐受的方法。     

异种小肠移植模型的建立及排斥反应初步观察

目的：了解仓鼠消化道解剖特点,建立稳定的仓鼠－大鼠异种小肠移植模型并初步观察其排斥反应的特点,为进一步研究异种移植免疫特点奠定基础。方法：在解剖１０只仓鼠了解其消化道及血供特点并建立稳定的仓鼠至大鼠异位小肠移植模型后分别行仓鼠－仓鼠和仓鼠－大鼠腹部异位小肠移植２５例及３５例,通过对移植肠活力及系膜淋巴结观察并结合组织病理检查,了解供肠存活时间和病理变化特点。结果：发现仓鼠小肠较短,平均１５（１５±２）ｃｍ,其系膜也较短小;移植术后３天供肠系膜淋巴结明显肿大,第４天供肠色泽略暗边缘动脉搏动减弱,绒毛间质明显充血水肿并有淋巴细胞浸润,部分绒毛脱落。第５天移植肠颜色发暗,动脉搏动消失,对剌激无反应,淋巴结极度肿大。血管内血栓广泛形成及组织间隙出血水肿,绒毛大面积脱落,淋巴结严重出血水肿。结论：仓鼠－大鼠小肠移植后供肠存活时间为４．５（４．５±１．０）天,其病变特点为广泛的血栓形成、肠间隙出血水肿和大片绒毛坏死脱落     

异基因造血干细胞移植合并胸腺移植及CD4--DLI后T细胞重建情况

目的 评价异基因造血干细胞(allo-HSCT)联合胸腺移植(TT)时给予去除CD4+T细胞供体淋巴细胞输注(CD4--DLI)对T细胞重建及向外周T细胞储存库输出能力的影响.方法 分为两组,对照组allo-HSCT时联合TT,处理组allo-HSCT时联合TT及CD4--DLI,移植5个月后提取小鼠脾脏T细胞的基因组DNA,以实时定量PCR检测小鼠脾脏T细胞中信号结合T细胞受体重排删除环(sjTRECs)水平,PCR扩增目的基因与RAG2片段,建立PCR标准曲线并比较对照组和处理组脾脏T细胞sjTRECs含量.结果 对照组和处理组的脾脏T细胞sjTRECs水平差异有统计学意义,处理组显著高于对照组(P＜0.01).结论 allo-HSCT+TT时给予CD4--DLI能够显著加快移植后T细胞重建及向外周T细胞储存库输出能力的恢复.     

混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受的实验研究

目的通过建立混合胸腺移植模型,对混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受及其机制进行初步研究.方法混合胎胸腺移植3个月后,进行异基因皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4 CD25 T细胞的百分率,利用免疫组化观察宿主骨髓源细胞在胸腺移植物内的分布情况.利用脾细胞过继转移,观察对异种供体抗原已产生耐受的受者脾细胞,能否将耐受状态过继转移至正常BALB/c小鼠.结果混合胸腺移植3个月后,受体外周血白细胞中CD4 CD25 T细胞的百分率为(2.83±0.20)% ,与正常BALB/c小鼠相比,相差不显著.免疫组化染色显示,在移植胸腺内宿主源MHC-Ⅱ分子阳性细胞主要位于髓质,并具有典型树突样外观.将对F344大鼠皮肤已产生耐受的脾细胞,过继转移至免疫健全的BALB/c小鼠,可特异延长胸腺供体来源的F344大鼠皮肤移植物的平均存活时间.结论通过胸腺移植诱导的免疫耐受,主要是以胸腺内的中枢排除机制以及调节性T细胞的免疫抑制作用为主,而且此种耐受具有一定的"可转传性".     

NK细胞对小鼠H-2单倍体相合骨髓移植后GVHD及造血重建的影响

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在单倍体相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)及造血重建的影响. 方法: 以近交系Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代小鼠(H-2d/b)为供鼠、Balb/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行半相合骨髓移植,根据临床表现、病理检查及外周血白细胞(WBC)数,比较不同移植组GVHD发生及造血重建情况. 结果: 骨髓 T细胞组中90%的小鼠出现GVHD,外周血WBC平均在移植后4 wk恢复正常;而骨髓 T 低浓度NK细胞组中20%小鼠出现GVHD, 外周血WBC平均在移植后3 wk恢复正常;骨髓 T 高浓度NK细胞组中仅10%出现GVHD,外周血WBC也平均在移植后3 wk恢复正常. 后两组较骨髓 T细胞组GVHD发生率显著下降(P＜0.01),外周血WBC恢复时间显著提前(P＜0.01). 结论:在小鼠单倍体相合骨髓移植中,同种反应性NK细胞可降低GVHD发生率,促进造血重建.     

造血干细胞移植后的早期免疫重建

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allogenic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT）和自体造血干细胞移植（autologous HSCT,auto-HSCT）患者早期免疫重建的异同。方法：收集2011年12月至2014年8月在北京大学第三医院血液科进行HSCT的恶性血液病患者31例,其中15例allo-HSCT,16例auto-HSCT;留取20名健康人外周血标本作为健康对照。采用四色流式细胞术检测两组患者移植后1年内外周血中淋巴细胞亚群的动态变化,并通过检测T细胞受体重排删除环（T cell receptor rearrangement excision circle,TREC）水平判断初始 T细胞功能。结果：移植后12个月内allo-HSCT组和auto-HSCT组患者CD4+T细胞、CD8初始T细胞、效应记忆性T细胞、CD4中枢记忆性T细胞、中期活化性T细胞以及DC重建与健康对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）,但两组患者间差异无统计学意义（P>0.05）,CD8+T细胞和NK细胞迅速恢复正常水平。移植后前3个月内B细胞重建在两组患者间差异无统计学意义（P>0.05）,均显著低于健康对照组（P<0.01）,但从第6个月起auto HSCT组显著快于allo-HSCT组患者（P<0.05）;移植后第6个月起allo-HSCT组晚期活化性T细胞表达显著高于auto-HSCT组（P<0.05）,而auto-HSCT组CD4初始T细胞和CD8中枢记忆性T细胞的表达高于allo-HSCT组（P<0.05）。移植后12个月内allo-HSCT和auto-HSCT组患者外周血CD3+T细胞中TREC水平显著低于年龄相近的健康对照组（P<0.05）,allo-HSCT组患者外周血CD3+T细胞中的TREC水平稍高于auto HSCT组患者,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：allo-HSCT和auto-HSCT患者早期免疫重建的速度和特点很相似,移植患者免疫重建主要不是由异源性移植物所决定,可能与胸腺功能受损后T细胞分化缓慢密切相关。     

自体外周血造血干细胞移植术后免疫重建及免疫治疗的临床研究

目的观察自体外周血造血干细胞移植术后免疫重建和免疫治疗情况.方法选择56例2001年3月～2003年5月自体外周血干细胞移植患者,分别以血常规中淋巴细胞百分比、绝对计数,血清球蛋白含量,CD3 、CD4 、CD8 细胞百分比及CD4 /CD8 为观察指标,监测移植后淋巴细胞数量和功能的恢复情况.以大剂量IL-2作为移植后免疫治疗药物,观察治疗后感染和本病复发情况.结果移植前血清球蛋白含量、淋巴细胞百分比和计数与移植后1个月存在显著性差异,而与移植后3个月的统计结果无显著性差异.移植后1个月CD8 淋巴细胞比例即恢复正常,但CD4 细胞明显低于正常,CD4 /CD8 明显低于移植前.56例患者中12例死于感染和疾病复发,其余患者已无病存活5～30个月,其中6例患者出现带状疱疹感染,经抗病毒治疗后痊愈.结论造血干细胞移植后,患者淋巴细胞计数及功能均较移植前明显减低.以IL-2为主的免疫治疗,作用较肯定,且无严重毒副作用,适于临床广泛应用.     

供者调控T细胞对异基因造血干细胞移植后造血与免疫重建、移植物抗宿主病发生及生存的影响

目的 研接受不同数量供者CD4 CD25 调控T细胞(TReg)移植对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植物抗宿主病(GVHD)的发生和造血与免疫重建的影响.方法 对30例接受allo-HSCT患者采用流式细胞仪测定移植物中的TReg值和移植后患者不同时间点外周血T淋巴细胞亚群及TReg.按移植供者TReg绝对数是否大于或等于10.0×10/kg为标准分为高TReg移植组和低TReg移植组,比较两组患者移植后造血与免疫重建、TReg重建、GVHD发生及无病生存率有无差异.结果 高TReg组的白细胞(WBC)和血小板(PLT)重建时间分别为 (8.62±2.29)d和 (12.69±5.74)d,低TReg组分别为 (8.88±2.71)d和 (15.18±6.71)d(P值分别为0.778和0.613),两组间WBC和PLT重建时间无显著性差异.高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD3 ,CD45RO CD4 T细胞重建, 30dCD3 、CD4 CD3 T细胞重建明显快于低TReg组患者(P值分别为0.039、0.024、0.014、0.020).高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD25 TReg重建, 180 d与低TReg组相比明显加快(P值分别为0.013、0.005).高TReg组和低TReg组患者急性GVHD发生率分别为61.54%(8/13)和94.12%(16/17),两组统计有显著性差异(P=0.027),移植的供者TReg数与急性GVHD的发生程度呈负相关(rs=0.393,P=0.032).高与低TReg组无病生存率分别为(60.40±16.10)%和(72.00±2.00)%,无显著性差异(P=0.818).结论 供者TReg能促进allo-HSCT后免疫重建及CD4 CD25 TReg重建,降低移植后急性GVHD的发生率.     

小鼠非清髓性半相合骨髓移植造血的重建

目的：探讨在非清髓性预处理条件下,纯化的供鼠NK细胞对MHC半相合小鼠骨髓移植（BMT）造血重建的影响。 方法：以CB6F₁^H-2d/b（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）小鼠为受者,C57BL／6^H-2b小鼠为供者。60只受者小鼠根据不同照射剂量及不同NK细胞输注量随机分为10组,每组6只,经9.0、7.0、6.0 Gy 3个剂量⁶⁰Co照射。经9.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅰ）、半相合BMT组（Ⅱ）。经7.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅲ）、半相合BMT组（Ⅳ）、NK细胞移植1组（Ⅴ）和NK细胞移植2组（Ⅵ）。经6.0 Gy照射后分为单纯照射组（Ⅶ）、半相合BMT组（Ⅷ）、NK细胞移植1组（Ⅸ）和NK细胞移植2组（X）。在照射后4 h移植供鼠骨髓细胞,其中NK细胞移植1组（Ⅴ、Ⅸ）每只受鼠移植前输注纯化供鼠NK细胞1×106,NK细胞移植2组（Ⅵ、X）每只受鼠移植前输注供鼠NK细胞5×10⁵。以血常规、体重、生存期等变化为指标,观察60 d。 结果：①生存期：Ⅰ组为（5.83±0.98）d,其他组小鼠生存期均大于60 d。②移植后第10天时白细胞及血小板计数：Ⅴ、Ⅵ组WBC和PLT分别为（1.05±0.30）×10⁹•L^-1、（53.50±12.11）×10⁹•L^-1及（0.95±0.26）×10⁹•L^-1、（47.17±11.82）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅲ、Ⅳ组（P<0.01）;Ⅸ、X组WBC和PLT分别为（0.98±0.34）×10⁹•L^-1、（50.67±12.58）×10⁹•L^-1及（0.88±0.29）×10⁹•L^-1、（45.33±14.36）×10⁹•L^-1,明显高于Ⅶ、Ⅷ组（P<0.05）。 结论：MHC半相合BMT小鼠移植前输注纯化的供鼠NK细胞促进其造血重建。     

巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

细胞因子及胸腺微环境影响Treg细胞增殖机制研究

目的通过体外培养体系添加细胞因子和在体细胞因子胸腺注射的方法,探索扩增低比例低增殖活性的Treg细胞的有效体内外方法.方法采用不同浓度细胞因子IL-10和TGF-β1作为诱导剂,分析二因子体外诱导Treg细胞增殖的有效性及最适浓度,同时以二因子胸腺注射的方法,分析在成年鼠体内诱导Treg细胞增殖的可能性.结果 150 ng/ml IL-10浓度能够明显诱导Treg细胞增殖,经48、96、144 h诱导后,其增殖比例分别达到10%、18%和20%,而TGF-β1的使用浓度需达到300 ng/ml;IL-10胸腺注射后同样可提高Treg细胞的比例[第7天(5.50±1.38)%,P<0.05;第10天(6.65±2.54)%,P<0.01];TGF-β1诱导后第5天的比例为(5.19±1.69)%,较对照组也有明显升高(P<0.05).结论体外培养体系添加诱导因子增殖的方法是扩增低比例低增殖活性Treg细胞的首选方法,IL-10体内外诱导Treg细胞增殖的效能均强于TGF-β1.