自噬在骨关节炎软骨细胞退变中的表达变化

目的：探讨自噬在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达及意义。方法收集临床 OA 及正常骨关节软骨标本各6例,分为 OA 组和对照组。免疫组化法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和 Beclin-1在软骨组织中表达情况。分离关节软骨细胞并在低氧环境下培养,采用瞬时转染绿色荧光蛋白 LC3(GFP-LC3)在激光共聚焦显微镜下观察各组软骨细胞自噬变化,并用 Western blot 法检测软骨细胞中 LC3蛋白表达情况。结果 OA 组软骨组织中 LC3蛋白和Beclin-1蛋白的表达显著高于对照组(P <0．05);在 OA 组发现大量自噬颗粒形成,OA 组 GFP-LC3细胞阳性率显著高于对照组;OA 组软骨细胞中 LC3蛋白从 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转换表达显著高于对照组。结论自噬在 OA 软骨细胞退变的过程中起着重要作用,为 OA 发病机制的研究提供新的方向。     

骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能与细胞凋亡的相关性研究

目的:研究骨关节炎(OA)大鼠模型软骨组织中脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路功能与细胞凋亡的相关性。方法:选择清洁级雄性Wistar大鼠作为实验动物,并随机分为OA模型组和对照组;采用木瓜蛋白酶溶液与L-半胱氨酸关节腔内注射的方式建立OA模型。造模后第4周和第8周时,测定关节软骨中PI3K/AKT信号分子、炎症介质、细胞凋亡标志分子、细胞自噬标志分子的表达量。结果:OA组大鼠关节软骨组织中p-PI3K、pAKT的表达量显著低于对照组;OA组大鼠关节软骨组织中白介素(IL)-1β、IL-6、IL-17、IL-18、eIF4E、Bax、Caspase-3、mTOR、Beclin1、Atg5、Atg7的表达量显著高于对照组,且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈负相关,Bcl-2的表达量显著低于对照组且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈正相关。结论:骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能的抑制能够促进软骨细胞的凋亡和自噬。     

徐长卿丹皮酚对兔膝关节软骨细胞凋亡及相关基因的影响

目的观察徐长卿丹皮酚对兔膝关节软骨细胞凋亡及其调控基因P53、Bcl-2表达作用的影响。方法将40只大耳白兔随机分为正常组、模型组、生理盐水组、曲安奈德组、徐长卿丹皮酚组。采用内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎模型,造模成功后,给药组关节腔注射相应药物,给药5周后取材。两步法免疫组化染色观察关节软骨形态变化,原位末端标记检测关节软骨细胞凋亡率,免疫荧光检测软骨组织P53、Bcl-2蛋白表达。结果模型组Mankin评分、软骨细胞凋亡率明显升高(P0.01)。而徐长卿丹皮酚组和曲安奈德组软骨组织Mankin评分、软骨细胞凋亡率相比模型组降低(P0.05),但仍高于正常组(P0.01)。模型组软骨组织中P53、Bcl-2表达率均升高(P0.05,P0.01)。徐长卿丹皮酚组和曲安奈德组软骨组织中Bcl-2表达升高,而P53表达率降低(P0.05),其中徐长卿丹皮酚组升高Bcl-2的效果更显著(P0.01)。结论徐长卿丹皮酚能在一定程度上抑制骨性关节炎软骨细胞的过度凋亡,其对损伤关节软骨的修复作用可能与调节P53和Bcl-2的表达有关。     

骨关节炎软骨破坏与凋亡相关蛋白survivin、caspase-3和bcl-xl的表达的相关性研究

目的 研究骨关节炎(OA)患者关节软骨细胞凋亡和软骨破坏的关系,为用药物控制凋亡作为治疗OA的潜在治疗策略提供理论依据.方法 应用原位凋亡方法(TUNEL)检测OA患者(n=20)以及以股骨颈骨折患者为对照组(n=8)的关节软骨细胞的凋亡情况,并通过凋亡软骨细胞的分布来半定量地评估软骨的破坏程度;应用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白survivin(SVV)、caspase-3和bcl-xl的表达,研究OA软骨破坏与凋亡蛋白表达的相关性.结果 在软骨破坏的相对早期即可以检测凋亡软骨细胞,而且与软骨破坏的程度显著相关(r=0.476,P=0.007),正常对照组组织则含有较少凋亡细胞(P=0.000).SVV表达在有降解损害的软骨细胞和软骨表层细胞中,与正常对照组之间差异有统计学意义(r=0.413,P=0.008),而且与TUNEL染色阳性凋亡细胞的数量有一定的相关性.与SVV相比,caspase-3表达范围较广,在相对正常的软骨区域也可检测到.软骨组织中未见明确的bcl-xl蛋白表达.结论 OA软骨细胞凋亡的程度与软骨破坏程度密切相关,在软骨的降解损害过程中,SVV和caspase-3蛋白的表达对OA软骨细胞的凋亡过程起到一定的作用.     

p53在大鼠骨关节炎中的表达

目的:检测大鼠实验性骨关节炎(OA)关节软骨中的p53蛋白和mRNA在不同时期的表达,明确其在OA中的作用.方法:采用经典的Hulth法构建大鼠膝关节实验性OA的动物模型.免疫组化方法检测p53蛋白的表达.RT-PCR技术检测p53 mRNA的表达.结果:OA关节软骨逐渐变为淡黄白色,粗糙.HE染色见OA软骨细胞变得稀疏,集聚成簇.免疫组化表明OA模型侧关节软骨p53蛋白高表达.RT-PCR表明OA侧p53 mRNA高表达,而且随时间增加而表达持续上调.结论:本研究表明在OA关节软骨的p53蛋白和mRNA的高表达与OA进程密切相关,可能是OA的发病机制之一.     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在晚期骨关节炎(OA)患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎(KOA)接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组(磨损较重的股骨内髁)和KOA相对非负重区组(磨损较轻的股骨外髁);另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为(12.36±0.84),显著高于KOA相对非负重区组的(7.23±0.32)和对照组的(0.88±0.15)(P＜0.05).免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组(分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45)(P＜0.05).结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

关节软骨细胞线粒体功能障碍与软骨退变的关系

目的:探求骨关节炎患者软骨细胞中线粒体功能状况及线粒体功能与软骨退变的关系.方法:收集2012年4月至10月在北京大学第一医院因骨关节炎(osteoarthritis,OA)行膝关节置换术患者的关节软骨10例.根据Outerbridge分级对所取软骨组织进行透射电子显微镜观察.获取正常及OA软骨细胞,用透射电子显微镜观察2组软骨细胞线粒体形态.定量检测正常及OA软骨细胞线粒体呼吸链复合体酶1,2,2+3,4及ATP合酶活力,用JC-1法检测2组软骨细胞线粒体膜电位.获取10例正常软骨细胞并将其分为正常对照组和鱼藤酮处理组,比较2组细胞线粒体超微结构、线粒体膜电位、细胞凋亡及Ⅱ型胶原含量.结果:软骨组织块及软骨细胞电子显微镜均发现病变的软骨细胞线粒体发生肿胀,外膜破裂,嵴破坏、消失.OA软骨细胞线粒体膜电位下降,红绿荧光比为1.50,较正常细胞(2.58)低.OA软骨细胞呼吸链复合酶1,2,2+3,4及ATPase活力都较正常组低,但差异无统计学意义(P =0.109,0.197,0.098,0.169,0.145).鱼藤酮处理的细胞线粒体出现类似于OA软骨细胞的形态变化.JC-1法示正常软骨细胞红绿荧光比为2.58;鱼藤酮组细胞为1.78.细胞凋亡检测示正常软骨细胞凋亡率为4.38％,鱼藤酮组细胞为7.53％.正常软骨细胞Ⅱ型胶原含量为(72.9±24.3) μg/L,鱼藤酮组为(44.63±7.11)μg/L,较正常组低(P =0.044).结论:OA软骨细胞中存在线粒体功能障碍,破坏软骨细胞线粒体功能会导致软骨细胞凋亡率增加,分泌Ⅱ型胶原的能力下降,从而促进软骨退变.     

lncRNA-H19通过靶向miR-106a-5p在骨关节炎软骨基质降解和钙化中的调控作用

目的:探讨长链非编码RNA H19通过靶向microRNA(miR)-106a-5p对骨关节炎(OA)软骨基质降解和钙化的调控作用.方法:收集临床骨关节炎软骨组织和健康软骨组织,采用实时荧光定量PCR检测软骨组织中lncRNA-H19、miR-106a-5p mRNA表达水平;将人软骨细胞系(HC-A)分为H19干扰组(si-H19)、阴性转染组(si-Control)、miR-106a-5p mimic组(miR-106a-5p)、mimic阴性对照组(miR-106a-5p-NC)、miR-106a-5p抑制剂组(inhibitor)、阴性抑制剂对照组(inhibitor-NC)组、inhibitor+si-H19和inhibitor-NC+si-H19组,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和骨涎蛋白(BSP)mRNA表达水平;Western blot检测软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-13和II型α1胶原纤维(COL2A1)的水平;CCK-8检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:OA软骨组织中lncRNA-H19 mRNA表达上调(P<0.05),miR-106a-5p mRNA表达下调(P<0.05);沉默lncRNA-H19可明显抑制软骨细胞凋亡,促进软骨细胞增殖(P<0.05),并下调MMP-1和MMP-13的表达水平(P<0.05),上调COL2A1的表达(P<0.05).沉默lncRNA-H19可抑制软骨细胞ALP、OCN、BSP mRNA水平和ALP活性(P<0.05).沉默miR-106a-5p逆转了沉默lncRNA-H19对软骨细胞基质降解和钙化标志物的抑制作用(P<0.05).结论:lncRNA-H19可通过抑制miR-106a-5p表达,促进细胞外软骨基质的降解和钙化,从而参与OA的进展.     

黄芪甲苷通过激活自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡

目的研究黄芪甲苷通过激活细胞自噬抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导PC12细胞凋亡的作用。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为7组:正常对照组、模型组、溶媒组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组、自噬激活剂组。除正常对照组外,其余各组剥夺氧、糖3h后再复氧、复糖12 h,并于复氧、复糖的同时给予相应药物处理。用透射电镜观察自噬小体的变化,Western blot检测LC3-II、Beclin1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达,流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡。结果与正常对照组相比,模型组出现典型的自噬小体,LC3-II、Beclin1表达均增多(P0.05),同时Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数也升高(P0.05)。与模型组相比,黄芪甲苷组、自噬激活剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均增多(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均下降(P0.05);而自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数升高(P0.05);溶媒组与模型组之间无显著差异(P0.05)。与黄芪甲苷组相比,黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组自噬小体数量、LC3-II和Beclin1表达均减少(P0.05),Caspase3表达、细胞凋亡率和凋亡指数均升高(P0.05)。结论黄芪甲苷可通过激活细胞自噬而抑制缺氧缺糖/复氧复糖诱导的PC12细胞凋亡,从而发挥神经保护作用。     

马兜铃酸致大鼠肝脏损伤及对自噬因素的影响

目的:观察马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)致大鼠肝脏损伤的情况,并探讨其对自噬相关因素的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常组、自噬抑制剂组、AAⅠ低剂量(20 mg/kg)组、AAⅠ高剂量(40 mg/kg)组、自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组、自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组,每组5只。自噬抑制剂干预组大鼠预先腹腔注射3-甲基腺嘌呤(3-MA,20 mg/kg);抑制剂干预1 h后,AAⅠ干预组腹腔注射给予相应剂量的AAⅠ。药物干预连续9 d。末次给药后,取血、分离肝脏。生化分化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,并计算比值;光镜和透射电镜下观察肝组织形态学变化。PCR检测肝组织Beclin 1、LC3、p53的mRNA表达水平;免疫组化检测Beclin 1、LC3、p53的蛋白表达水平。结果:(1)与正常组相比,AAⅠ低剂量组大鼠血清AST水平显著升高(P0.05),AAⅠ高、低剂量组AST/ALT比值明显升高(P0.05,P0.01);与自噬抑制剂组相比,自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组与自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组AST/ALT比值均明显升高(P0.01)。(2)HE染色观察显示,AAⅠ高、低剂量组可见肝细胞肿胀,且AAⅠ高剂量组的损伤程度更为显著;自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组出现肝细胞出血性坏死,损伤程度较AAⅠ高剂量组明显加重。透射电镜观察显示,AAⅠ高、低剂量组线粒体肿胀,AAⅠ高剂量组亦出现脂肪变性;自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组线粒体肿胀;自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组可见内质网肿胀,隐见自噬小体。(3)与正常组相比,AAⅠ高、低剂量组p53 mRNA表达量显著上调(P0.05);与自噬抑制剂组相比,自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组LC3 mRNA表达量明显下调(P0.05),自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组Beclin 1和LC3的mRNA表达量显著降低(P0.01);自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组Beclin 1、LC3、p53的mRNA表达量明显低于自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组(P0.05,P0.01)。(4)与正常组相比,AAⅠ高、低剂量组Beclin 1、LC3、p53蛋白表达均明显上调(P0.01),且AAⅠ高剂量组3种蛋白表达明显高于AAⅠ低剂量组(P0.05,P0.01);与自噬抑制剂组相比,自噬抑制剂与不同剂量AAⅠ协同作用后3种蛋白表达均明显上调(P0.01);与自噬抑制剂+AAⅠ低剂量组相比,自噬抑制剂+AAⅠ高剂量组Beclin 1、LC3蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01),p53蛋白表达明显升高(P0.01)。结论:AAⅠ能够诱导大鼠肝脏损伤,且自噬因素可促进AAⅠ肝损伤,其作用机制可能与调节p53蛋白表达、诱导自噬相关。     

沉默信息调节因子2在人骨关节炎软骨组织及细胞中的表达

目的 检测沉默信息调节因子2(SIRT2)在人软骨中的表达,探讨其在骨关节炎(OA)与正常软骨组织及细胞中表达的差异性.方法 选取临床20例骨关节炎关节软骨,为OA组;另取10例正常关节软骨,为对照组.免疫荧光染色法检测SIRT2在两组软骨组织的表达分布及表达情况.分离软骨细胞并进行细胞传代培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定,Western blot法检测软骨组织及细胞中SIRT2的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示SIRT2表达于软骨组织中,分布在细胞核与细胞质中,OA组SIRT2阳性细胞率较对照组明显降低(P<0.01);Western blot结果显示OA组软骨组织中SIRT2表达显著低于对照组(P<0.01),软骨细胞中SIRT2的表达亦显著低于对照组(P<0.01).结论 SIRT2在人类软骨组织中有表达,具体表达在细胞核与细胞质中,SIRT2表达降低可能导致骨关节炎的发生及进展.     

氧化应激相关细胞衰老指标与骨关节炎的相关性探讨

目的 通过检测软骨细胞衰老相关指标,探讨软骨细胞衰老与骨关节炎(OA)发病的相关性。方法 选取2018年1月—2020年12月南京鼓楼医院骨科需手术住院的OA患者及非OA患者各6例,分离培养膝关节软骨细胞,分为正常软骨细胞组(对照组)、OA软骨细胞组(OA组),选P2代细胞分别进行β-半乳糖苷酶染色检测,收集细胞行流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位,定量PCR(qPCR)检测细胞P21、P53基因mRNA表达,采用Western blotting检测软骨细胞中P21、P53蛋白水平。结果 OA组软骨细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高,OA组ROS水平[(24.72±2.40)%]较对照组[(4.96±0.14)%]明显升高(P<0.01),OA组JC-1染色绿色荧光强度[(21.87±3.03)%]即细胞线粒体膜电位下降明显高于对照组[(3.13±0.25)%,P<0.01];OA组P21、P53基因mRNA表达量(2.72±0.21、2.90±0.23),较对照组表达量(1.00±0.03、1.00±0.06)显著增加(均P<0.05)。OA组周...     

姜黄素对骨关节炎软骨细胞增殖及分泌MMP-13、IL-6的影响

目的 探讨姜黄素对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法 选取2018年1～6月在我院骨科接受关节置换的10例骨关节炎患者的关节软骨,设为炎症软骨细胞组(OA组),按是否加入姜黄素分为单纯培养基组(OAa组)与加入姜黄素组(OAb组);另选取因外伤致截肢的4例患者膝关节软骨为对照,设为正常软骨细胞组(N组),按是否加入姜黄素分为单纯培养基组(Na组)与加入姜黄素组(Nb组)。进行软骨细胞培养,配制姜黄素溶液,加入姜黄素溶液(80μmol/L)刺激软骨细胞,采用MTT法检测软骨细胞增殖,测定上清液MMP-13、IL-6水平。结果 OAb组吸光度值明显低于OAa组(P0.05),Nb组吸光度值较Na组下降,但差异无统计学意义(P0.05)。OAb组上清液MMP-13、IL-6水平均低于OAa组(P0.05),OA组MMP-13、IL-6水平均高于N组(P0.05)。结论 姜黄素对OA软骨细胞增殖及释放MMP-13、IL-6均有明显抑制作用,可保护关节软骨细胞,减轻炎症反应。     

右归饮对骨性关节炎模型大鼠膝关节滑膜细胞自噬和凋亡相关蛋白及血清炎症因子的影响

目的观察右归饮对骨关节炎(OA)模型大鼠膝关节滑膜细胞自噬和凋亡相关蛋白及血清炎症因子的影响。方法将30只SD大鼠随机分为右归饮组、模型组和空白对照组,各10只。右归饮组、模型组大鼠采用Hulth法进行膝骨关节炎造模。4周后三组大鼠分别予右归饮(每毫升含生药0.69g,剂量10g/体质量)、生理盐水进行灌胃治疗。造模后第8周处死所有大鼠,采集大鼠血清、膝关节及膝关节滑膜,采用ELISA、免疫印迹、HE染色及Mankin’s评分法检测,观察自噬蛋白Beclin-1、m TOR和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax表达,血清白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)水平,以及关节软骨损伤情况。结果右归饮组大鼠血清IL-1β、TNF-α和i Nos水平显著低于模型组[IL-1β:(20.27±1.41)pg/m L比(26.76±1.93)pg/m L,P0.01;TNF-α:(162.63±10.76)pg/m L比(221.34±19.38)pg/m L,P0.01;i Nos:(7.32±0.48)U/m L比(10.13±0.96)U/m L,P0.01];右归饮组自噬蛋白表达量高于模型组[Beclin-1:(0.94±0.11)比(0.54±0.08),P0.01;m TOR:(0.61±0.18)比(0.16±0.09),P0.01];凋亡蛋白表达量低于模型组[Caspase-3:(0.25±0.07)比(0.60±0.12),P0.01;Bax:(0.48±0.14)比(0.79±0.11),P0.01];模型组大鼠膝关节软骨细胞排列紊乱,软骨面大面积缺损,潮线大量破坏;右归饮组大鼠膝关节软骨表面毛糙,部分潮线破坏,软骨细胞排列尚均匀。右归饮组大鼠Mankin’s评分显著低于模型组[(5.20±0.84)分比(8.20±0.84)分,P0.01]。结论右归饮可能通过上调自噬蛋白表达,下调凋亡蛋白表达,降低血清炎性因子含量,缓解OA模型大鼠膝关节炎性浸润,减轻软骨细胞的破坏。     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在晚期骨关节炎（OA）患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎（KOA）接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组（磨损较重的股骨内髁）和KOA相对非负重区组（磨损较轻的股骨外髁）;另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为（12.36±0.84）,显著高于KOA相对非负重区组的（7.23±0.32）和对照组的（0.88±0.15）（P＜0.05）.免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组（分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45）（P＜0.05）.结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

苗药皮部熏洗对骨关节炎大鼠软骨中p53、bcl-2表达的影响

目的:探讨苗药皮部熏洗法治疗骨关节炎的部分机理。方法:取42只健康清洁级大鼠,随机选取8只不造模作为正常对照组,其余34只采用4%木瓜蛋白酶关节腔注射建立大鼠OA模型,1周后随机选取2只检测模型成功与否,将造模成功的32只大鼠随机分为模型组、熏组、洗组和熏洗组,治疗4周后处死动物,切取关节,免疫组化染色法测定p53、bcl-2的表达。结果:正常组大多数标本未见p53与bcl-2表达,造模后见到散在的p53与bcl-2表达,熏洗后bcl-2的表达有逐渐增强、p53的表达有逐渐减弱的趋势。结论 (:1)通过苗药皮部熏洗防治的干预,对OA模型大鼠的痛行为及膝关节活动有明显的改善作用。(2)苗药皮部熏洗通过上调软骨bcl-2的表达和下调p53的表达,来延缓软骨细胞的凋亡。(3)熏洗法治疗大鼠OA比单独运用熏法、洗法效果更明显。     

桃红四物汤对骨性关节炎模型大鼠软骨细胞自噬的影响

目的探讨桃红四物汤对碘乙酸诱导的OA模型大鼠软骨细胞自噬的影响。方法将24只SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组,每组8只。通过双侧关节腔注射碘乙酸(3mg/50μL)建立OA模型,对照组大鼠注射等量生理盐水;造模后,治疗组大鼠使用桃红四物汤灌胃干预,模型组及对照组大鼠用等量生理盐水灌胃,持续8周。末次灌胃后检测各组大鼠机械痛、热痛阈值,取膝关节制作病理切片进行SO染色,Western blot检测软骨组织内自噬相关蛋白的表达改变情况。结果与对照组比较,模型组机械痛、热痛阈值下降[(267.5±60.2)g比(402.1±87.3)g,(5.3±1.1)s比(9.1±1.8)s,P<0.01],Mankin评分升高[(7.2±0.7)分比(2.1±0.4)分,P<0.01],自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达水平下降[(0.19±0.02)比(0.79±0.02),(0.51±0.08)比(1.18±0.05),P均<0.01],p62表达水平提高[(1.05±0.07)比(0.37±0.04),P<0.01]。与模型组比较,治疗组机械痛及热痛阈值提高[(359.9±66.7)g比(267.5±60.2)g,(7.2±1.5)s比(5.3±1.1)s,P均<0.01],Mankin评分下降[(4.2±0.8)分比(7.2±0.7)分,P<0.01],自噬相关蛋白LC3、Beclin 1表达升高[(0.39±0.07)比(0.19±0.02),(0.72±0.05)比(0.51±0.08),P均<0.01],p62表达下降[(0.74±0.06)比(1.05±0.07),P<0.01]。结论桃红四物汤可通过激活软骨细胞自噬治疗碘乙酸诱导的OA。     

上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1与P53的表达及相关性研究

目的检测自噬相关基因ATG5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达情况,探讨其与卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法应用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测25例正常卵巢、25例良性卵巢肿瘤及34例上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1、P53蛋白及mRNA的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果 1ATG5、Beclin1的表达主要在细胞质内,P53主要表达在胞核内。ATG5、Beclin1在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达阳性率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。P53在卵巢癌组织中的表达阳性率与良性卵巢组织、正常卵巢组织相比,差异有统计学意义(P<0.01),而良性卵巢组织与正常卵巢组织表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。不同临床分期、病理分期的卵巢癌组织中ATG5、Beclin1及P53的表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,上皮性卵巢癌组织中ATG5与Beclin1蛋白表达呈正相关,ATG5与P53、Beclin1与P53蛋白表达均呈负相关(P<0.05)。2经RT-PCR检测,上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1的表达低于良性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织,良性卵巢组织低于正常卵巢组织,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上皮性卵巢癌组织中P53的表达高于良性卵巢组织及正常组织(P<0.05),但良性卵巢组织与正常卵巢组织相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论上皮性卵巢癌的发病、进展可能与自噬相关基因Beclin1和ATG5自噬活性的抑制有关;自噬相关基因ATG5、Beclin1与凋亡相关基因P53在上皮性卵巢癌的发生发展中起拮抗作用,对其联合检测有利于了解和判断上皮性卵巢癌的进展程度、预后情况及指导治疗。     

激活自噬对关节腔内注射糖皮质激素大鼠骨关节炎进展的影响

目的：观察激活自噬对关节腔内注射糖皮质激素大鼠骨关节炎进展的影响。方法：将50只雄性SD大鼠随机均分为假手术组（Sham组）、造模组（OA组）、糖皮质激素组（OA+GS组）、雷帕霉素组（OA+RAPA组）、糖皮质激素+雷帕霉素组（OA+GS+RAPA组）。建立大鼠骨关节炎模型并分别进行干预。10周后取大鼠膝关节组织进行S-O染色,评估OARSI评分、滑膜评分,免疫组化检测关节软骨P62 表达情况。结果：OA组大鼠关节软骨部分区域出现缺损,OARSI评分、滑膜评分均较Sham组显著升高（P ＜0.05）;OA+GS组大鼠软骨缺损依旧比较严重,OARSI评分与OA组比较差异无统计学意义（P ＞0.05）,滑膜评分与OA组比较有所降低（P ＜0.05）;OA+RAPA组大鼠软骨表面侵蚀明显好转,OARSI评分、滑膜评分与OA组比较均降低（P ＜0.01）;OA+GS+RAPA组大鼠关节软骨侵蚀现象进一步好转,OARSI评分、滑膜评分与OA+RAPA组比明显较低（P ＜0.05）。免疫组化结果显示,OA组关节软骨表面P62表达明显增加,在使用雷帕霉素后,关节软骨表面P62表达降低（P ＜0.05）。结论：在大鼠骨关节炎模型上,激活自噬可以在一定程度上进一步延缓关节腔内注射糖皮质激素大鼠骨关节炎的进展。     

TGF-β1在骨性关节炎中的表达及与关节软骨和滑膜细胞凋亡的关系

目的研究TGF-β1在骨性关节炎（OA）患者软骨和滑膜中的表达及与关节软骨和滑膜细胞凋亡的关系。方法对30例患者（OA组）及10例正常膝关节组织（对照组）,用免疫组化、原位末端标记技术（TUNEL）等方法检测TGF-β1在膝关节软骨和滑膜中的表达及软骨和滑膜细胞凋亡情况。结果TGF-β1蛋白在OA组阳性表达的积分光密度（IOD）值显著高于正常对照组（P〈0.01）,OA组凋亡指数（AI）与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）,OA组软骨和滑膜细胞凋亡程度与TGF-β1的表达均呈负性相关（r=-0.457,P〈0.05）。结论OA中TGF-β1的高表达有可能负性调节软骨和滑膜区域细胞凋亡的发生,延缓骨性关节炎的发生发展。