益智防呆方对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的 研究益智防呆方缓解Aβ细胞毒性的作用与机制.方法 益智防呆方含药血清干预Aβ处理的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),运用MTT法检测细胞存活率,免疫印迹法检测Hsp70、Grp78及Caspase-3蛋白表达.结果 益智防呆方含药血清可提高经Aβ处理后的细胞存活率,降低凋亡相关蛋白Caspase-3表达,促进Hsp70蛋白表达增加,激活内质网应激反应.结论 益智防呆方可有效缓解Aβ细胞毒性,可能与Hsp70的过表达和激活内质网应激有关.     

Aβ诱导海马神经元调亡的机制及补肾方的调控作用

目的 探讨Aβ诱导海马神经元凋亡的机制及补肾方的药效。方法 原代培养的大鼠海马神经元经Aβ1-42处理后,FDA与PI双染判断神经元存活率,Hoechst33258染色、TUNEL检测神经元凋亡,免疫细胞化学观察Caspase-3表达,Northern Blot、RT-PCR研究凋亡相关基因怕表达。结果 神经元经Aβ1-42处理后,活细胞数减少,染色质浓缩、核碎裂,TUNEL染色阳性神经元增多,Caspase-3表达增加,bcl-2的mRNA表达减少,而bax与c-jun表达增加、c-fos的表达变化不明显。补肾方可明显改善上述变化。结论 Aβ通过对凋亡相关基因表达的调控并经Caspase-3途径引起神经元凋亡。补肾方可抑制Aβ诱导调亡。     

补肾益智方对实验性阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆水平的影响

目的探讨补肾益智方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆功能的影响。方法实验大鼠分为五组,包括补肾益智方低、高剂量组(LD、HD)、Hup-A组(石杉碱甲对照组)、模型对照组(MC)、和正常老年对照组(SC)。除SC外,各组均接受腹腔注射D-半乳糖和双侧Meynert基底核注射Ibotenic acid造模。然后,通过Morris水迷宫测试补肾益智方高、低剂量对AD模型大鼠学习记忆的影响。结果两组补肾益智方对AD模型具有一定的影响。特别是LD组逃避潜伏期明显优于MC组和和HU组;HD也有所改善,但较LD组差,和HU群大致相当。结论补肾益智方能够改善的AD模型大鼠的学习和记忆功能障碍,其作用程度与补肾益智方剂量有关。     

大鼠海马认知障碍对糖脂代谢的影响及其与海马神经元凋亡的关系

目的探讨大鼠海马认知障碍对糖脂代谢的影响及其与海马神经元凋亡的关系。方法采用Aβ1~42海马注射构建认知障碍大鼠模型,利用全自动生化分析仪检测大鼠血糖血脂水平,TUNEL法检测大鼠海马神经元凋亡。结果 1实验组大鼠FPG为(7.83±0.31)mmol/L、TG为(2.30±0.14)mmol/L、TC为(4.55±0.15)mmol/L、LDL为(2.39±0.08)mmol/L,均明显高于假手术组和对照组(P0.05)。2实验组大鼠海马神经元凋亡指数为71.37%±3.15%,假手术组和对照组分别为18.66%±3.20%、15.36%±4.25%,组间比较有显著性差异(P0.05)。结论海马认知障碍可引起血糖血脂水平升高,其机制可能与海马神经元凋亡有关。     

NGF对Aβ1-40诱导海马神经元周期素A、B1异常表达的影响

目的 研究NGF对Aβ1-40诱导海马神经元周期素(Cyclin)A、B1异常表达的影响.方法 原代培养新生大鼠海马神经元7 d后,分别在Aβ1-40作用前后加入神经生长因子(NGF),采用免疫组化法、免疫荧光法检测胆碱乙酰化转移酶(ChAT)活性和周期蛋白表达变化.结果 ①Cyclin A、B1免疫荧光检测Aβ1-40组、NGF1组、NGF2组海马神经元内均出现蓝色颗粒(Cyclin A)和红色颗粒(Cyclin B1),但Aβ1-40组最多,NGF2组较NGF1组明显;对照组未出现上述颗粒.Cyclin A、B1免疫荧光阳性信号IA值Aβ1-40组较对照组显著增高(P＜0.01),NGF1组较Aβ1-40组明显降低(P＜0.05),NGF2组与Aβ1-40组比较无明显降低.②ChAT免疫组化染色Aβ1-40组仅见少量海马神经元内有棕褐色颗粒,而NGF1组、NGF2组及对照组可见较多含棕褐色颗粒的ChAT免疫阳性细胞,但对照组较NGF1组明显,NGF1组较NGF2组明显.ChAT免疫阳性信号IA值邮1β1-40组较对照组显著降低(P＜0.01),NGF1组较Aβ1-40组明显增高(P＜0.05);NGF2组与Aβ1-40组比较无明显增高.结论 NGF能有效阻止Aβ1-40诱导海马神经元损伤,对Aβ引起大鼠海马神经元内异常表达细胞周期蛋白有一定的逆转作用,为阿尔茨海默病(AD)的防治提供了一定的实验依据.     

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF—kB、par-4基因表达的影响

目的探讨阿魏酸钠（sodium ferulate，SF）对一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-KBP65、par-4基因表达的影响。方法采用sD大鼠海马神经元原代培养，经终浓度分别为10、20、40、80、120、160μmol／L的sF预处理后，用50μmol／L的SNP处理24h，采用MTr法检测细胞存活率，Hochest33258荧光染色检测凋亡，Western blot及RT—PCR检测NF．KBP65、par-4基因表达。结果不同剂量sF（10～160μmol／L）预处理6h可显著提高神经元的存活率，减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象；降低NF—KBP65、par-4mRNA及蛋白的表达。结论sF抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡，其机制可能与降低促凋亡基因NF—KBP65、par-4表达有关。     

卵巢移植对去势大鼠海马神经元的抗凋亡作用

目的评价卵巢移植的海马神经保护效果。方法将(200±20)g的SD大鼠在动情间期去除其双侧卵巢,7 d后一组在其肾被膜下移植出生3 d内的SD乳鼠卵巢;一组给予隔天腹腔注射己烯雌酚1 mg/kg。分别于干预后的4 d、7 d、14 d和28 d,免疫组化检测海马神经元Bax、Bcl-2表达。结果卵巢移植组除移植4 d后,Bax的阳性表达有所下降,降幅虽不及同期己烯雌酚腹腔注射组,但BCL-2的阳性表达同时提高,Bcl-2/Bax比值随移植时间的延长,增高明显,尤其移植28 d后明显高于同期给药组(P<0.05)。结论卵巢移植不仅通过降低Bax阳性表达及提高BCL-2的阳性表达抑制去势大鼠海马神经元的凋亡;己烯雌酚腹腔注射组仅通过降低Bax阳性表达抑制去势大鼠海马神经元的凋亡,卵巢移植对去势大鼠海马神经元的抗凋亡效果优于单纯己烯雌酚替代组。     

益肾化浊方及拆方对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响

目的 观察益肾化浊方及拆方对7月龄SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响.方法 将40只7月龄SAMP8小鼠随机分成SAMP8(P8)组、益肾化浊方(YSHZ)组,益肾(YS)组和化浊(HZ)组,每组10只,选择10只抗快速老化小鼠(SAMR1)作为对照(R1)组;益肾化浊方、益肾方与化浊方分别按照6.24、4.68、1....     

血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡与乙酰胆碱含量变化

目的 探讨血管性痴呆(VD)大鼠海马神经元凋亡和乙酰胆碱(ACh)含量变化在VD发病过程中的作用.方法 将90只大鼠随机分为模型组、假手术组和正常组,每组30只.再将各组的30只大鼠根据造模后断头取脑时间随机分为3小组,即7、14、21 d组,每组10只大鼠.采用反复大鼠双侧颈动脉缺血再灌注,加剪尾放血法制备VD大鼠模型;用TUNEL法检测海马组织的凋亡细胞,用生化法检测ACh含量.结果 模型组大鼠海马组织在第7、14、21天均有大量凋亡神经元,且ACh含量持续降低,与假手术组及正常组相比差异显著(P<0.01).结论 脑海马组织神经元的大量凋亡和ACh含量持续降低可能在VD发病过程中起重要作用.     

补肾益智方对阿尔茨海默病模型大鼠脑内p75水平的影响

目的探讨补肾益智方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠SM-DB区域中p75水平的影响。方法通过D-半乳糖催老和无名质区损毁的方法制备AD大鼠模型,并设立石杉碱甲对照组和老年正常组进行对比研究。通过免疫组化对SM-DB区域(包括SM、v DB和h DB三个分区)中的p75阳性细胞进行分析。结果补肾益智方高、低剂量组对SM-DB区域中的p75阳性细胞数目、平均截面积和平均灰度值均有十分明显的改善作用,其中低剂量组作用最大,高剂量组次之,两者的作用均较石杉碱甲组为优,低剂量组在三个区域的阳性细胞数、h DB区的阳性细胞平均截面积以及SM区内阳性细胞的灰度值与石杉碱甲组均有显著性差异。结论补肾益智方可以明显提高该模型脑内的p75水平,其作用优于石杉碱甲,且作用大小与用药剂量有较明显的关系。     

Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂对大鼠海马神经元凋亡的影响。方法 SD大鼠24只随机分为假手术组、痴呆组和阻断剂组,每组8只。大鼠脑室注射凝聚肽Aβ_(25-35)5建立痴呆大鼠模型,阻断剂组1周后行阻断剂脑室注射,另2组等量注射人工脑脊液4周行Morris水迷宫测试;测试1周后取材行病理观察,采用TUNEL法检测海马CA1区锥体细胞凋亡情况。结果与假手术组比较,痴呆组大鼠平均潜伏期明显延长,平台象限滞留时间明显缩短(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠上述指标明显提高(P0.05)。与假手术组比较,痴呆组大鼠海马CA1区可见大量的凋亡锥体细胞,阳性锥体细胞数、总面积、平均吸光度(A)值明显升高(P0.05);与痴呆组比较,阻断剂组大鼠海马CA1区可见明显的阳性细胞和核固缩,但其阳性染色锥体细胞数、总面积、平均A值明显降低(P0.05)。结论Ⅱ组代谢型谷氨酸受体阻断剂可明显抑制痴呆引起的海马CA1区锥体细胞的凋亡,提示其可能通过影响细胞凋亡,参与痴呆的发病过程。     

阿尔茨海默病淀粉样β蛋白诱导神经元凋亡的研究进展

阿尔茨海默病是一种发病率高、危害极大的中枢神经系统退行性疾病，主要临床症状是智力进行性减退，特征性病理学改变是老年斑，神经元纤维缠结，以海马、皮层区域为主的神经元数目减少。淀粉样β蛋白是老年斑的主要成分。病人尸检报告提示阿尔茨海默病病人脑中一些神经元是通过凋亡机制蜕变的，故阿尔茨海默病神经元丢失的机制可能是凋亡。Yuan等。认为细胞凋亡是引起阿尔茨海默病病人脑组织中神经元数目减少的重要原因之一。     

阿魏酸钠对SNP诱导的凋亡海马神经元NF-кB、par-4基因表达的影响

目的 探讨阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)对一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡及NF-кB P65、par-4基因表达的影响.方法 采用SD大鼠海马神经元原代培养,经终浓度分别为10、20、40、80、120、160 ìmol/L的SF预处理后,用50 ìmol/L的SNP处理24 h,采用MTT法检测细胞存活率,Hochest 33258荧光染色检测凋亡,Western blot及RT-PCR检测NF-кB P65、par-4基因表达.结果 不同剂量SF (10～160 ìmol/L)预处理6 h可显著提高神经元的存活率,减少SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象;降低NF-кB P65、par-4 mRNA及蛋白的表达.结论 SF 抑制NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡,其机制可能与降低促凋亡基因NF-кB P65、par-4表达有关.     

(-)黄皮酰胺对硝普钠诱导的海马神经元凋亡的影响

目的 探讨黄皮叶分离物（-）黄皮酰胺对硝普钠诱导的体外培养大鼠海马神经元凋亡的影响及其可能机制。方法 在硝普钠诱导体外培养的海马神经元凋亡模型的基础上，采用MTT比色分析检测细胞存活率，Western blot及RT-PCR等方法检测捌．2和bax基因表达。结果不同剂量（-）黄皮酰胺预处理6h可提高神经元的存活率，增加bcl-2的表达，降低bax的表达。结论 （-）黄皮酰胺可剂量依赖性地对抗硝普钠的神经毒性作用，其机制可能与增加抗凋亡基因bcl-2的表达，降低促凋亡基因bax表达，增高Bcl-2／Bax的比值有关。     

血糖波动对糖尿病大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察糖尿病(DM)大鼠在血糖波动状态下海马神经元凋亡及Caspase-3的异常表达,探讨血糖波动对大鼠海马神经元凋亡的影响。方法用链脲佐菌素(STZ)诱导,间断短效胰岛素应用制备DM血糖波动模型。12 w后,用TUNEL法检测海马神经元的凋亡,用免疫组化法检测海马神经元凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果 DM组大鼠海马可见少数阳性凋亡细胞表达,与对照组(NC组)相比明显增多(P<0.01);血糖波动组(RDM组)凋亡阳性细胞较DM组增多更加明显(P<0.01)。DM组大鼠海马神经元Caspase-3表达较NC组明显增强(P<0.05),RDM组Caspase-3的表达较DM组进一步增强(P<0.05)。结论 DM大鼠血糖波动可明显加速海马神经元的凋亡,Caspase-3介导的细胞凋亡机制可能参与DM大鼠海马神经元的损伤。     

高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制

目的探讨高原低氧应激诱导大鼠海马CA1区神经元凋亡及其机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为低海拔组和高海拔组各24只,分别于海拔400m和4300m喂养30d后处死大鼠取海马组织：6只行硫堇染色及电镜观察CA1区神经细胞形态变化;6只行流式细胞仪检测神经元凋亡率;6只予比色法测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;6只采用免疫组织化学方法观察CA1区COX-2表达。结果硫堇染色示两组CA1区神经细胞形态基本一致;电镜显示高海拔组CA1区神经细胞形态、胞质内细胞器有明显损伤;高海拔组神经元凋亡率、MDA水平及COX-2表达均明显高于低海拔组（P均〈0.05）,SOD活性两组间相比无显著差异。结论高原低氧应激可诱导海马神经元凋亡,其机制可能为上调海马CA1区COX-2表达。     

地黄益智方对Aβ1～40所致老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响

目的观察地黄益智方对Aβ1～40所致老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力的影响。方法 120只SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,地黄益智方小、中、大剂量组,采用大鼠双侧海马CA1区注射Aβ1～40复制老年性痴呆模型,造模24 h后开始给药,连续4 w。分别在给药1、3 w后用Morris水迷宫法连续5 d进行定位航行实验,第6天进行空间探索实验,检测各组大鼠学习记忆能力;2、4 w用生化法检测各组大鼠大脑皮层ChAT、AChE的活性变化。结果模型组大鼠明显存在学习记忆功能障碍,其中1 w后第2、4、5、6天与空白组相比有差异(P=0.016、0.000、0.003、0.001),3 w后第1、4、5、6天与空白组相比有差异(P=0.023、0.006、0.005、0.007),地黄益智方各剂量组行为障碍明显轻于模型组。模型组ChAT活性明显降低,2、4 w时与空白组相比有差异(P=0.011、0.024);模型组AChE活性明显增高,2、4 w时与空白组相比有差异(P=0.003、0.010);地黄益智方各剂量组乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性改变明显轻于模型组。结论地黄益智方能改善Aβ1～40所致老年性痴呆模型大鼠学习记忆能力,可能与其调节中枢神经递质ChAT、AChE活性有关。     

葛根素对去卵巢大鼠认知功能及海马神经元超微结构的影响

目的 观察不同浓度葛根素对去卵巢大鼠认知功能及海马CA1区、CA3区神经元电镜下形态的影响.方法 SD大鼠72只,随机分为葛根素高、中、低剂量组、阳性对照组(倍美力组)、模型组、假手术组,每组12只,除假手术组外,均摘除大鼠卵巢造成去势模型.灌胃30 d后,用Morris水迷宫检测大鼠认知功能的变化,用透射电镜观察海马CA1区、CA3区神经元形态变化.结果 在训练第6天,Morris水迷宫试验测试大鼠第一次经过平台的时间(潜伏期)与模型组比较,假手术组、阳性对照组和葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.05);大鼠在120 s内经过平台的次数与模型组比较,假手术组、阳性对照组和葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.01);与低剂量组比较,葛根素高剂量组有统计学意义(P＜0.05).透射电镜结果表明,葛根素在不同浓度(30～ 120 mg/kg)范围内,随着浓度的增大,抑制海马神经元细胞凋亡的作用越强,并有一定的剂量依赖关系.结论 葛根素可以促进去卵巢大鼠学习、记忆功能的恢复,减轻因雌激素缺乏而引起的大鼠海马神经元凋亡作用.     

氯离子通道阻断剂对大鼠离体海马神经元凋亡的影响

目的 通过观察氯离子(Cl-)通道阻断剂对一氧化氮(NO)供体3-吗啉斯德酮胺(SIN-1)诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的效应,探讨Cl-通道在缺血性脑损伤中的作用.方法 离体培养12 d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、SIN-1处理组、SIN-1处理后和Cl-通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率.结果 SIN-1能明显诱导神经元凋亡(P<0.05),SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,提高神经元的存活率,与SIN-1组相比差异显著(P<0.05).结论 Cl-通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用.     

寿尔智胶囊对海马神经元细胞内游离钙水平的影响

目的研究寿尔智胶囊对海马神经元细胞内游离钙水平的影响,从而探讨中药防治阿尔茨海默病(Alzheimer's dementia,AD)的机制.方法运用血清药理学方法,以Fura-2为荧光探剂,观察寿尔智胶囊含药血清对体外培养新生Wistar鼠海马神经元细胞内游离钙的影响.结果寿尔智胶囊含药血清可以降低培养的海马神经元细胞内游离钙含量,从而调节海马神经元细胞凋亡,对海马神经元起保护作用而达到防治阿尔茨海默病的目的.结论寿尔智胶囊有助于老年痴呆的防治,可发挥延缓衰老的作用.