胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像的比较

目的探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度(202.54±11.06)明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度(62.64±10.23),P<0.01。结论C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现,C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

中药金叶败毒制剂抗人巨细胞病毒感染作用机理的实验研究

目的探讨中药金叶败毒制剂拮抗HCMV感染的机理。方法采用体外实验的方法建立HCMV感染细胞膜型,给予金叶败毒制剂干预后,FQ-PCR法检测细胞内、维持液HCMV DNA拷贝数,放射免疫法测定TNF-α、IL-6蛋白含量,同时观察致细胞病变作用(CPE)的产生及传播,设立病毒对照组和更昔洛韦(GCV)药物对照组。结果分别于感染后24h、48h,实验组细胞内及维持液HCMV DNA拷贝数(5.35±0.581gGE/106HEL,2.78±0.32lgGE/106HEL)明显低于病毒组(6.12±0.65lgGE/106HEL,3.31±0.381gGE/106 HEL,P<0.05),持续至感染晚期,与药物对照组比较,感染晚期实验组细胞内病毒负荷量(7.97±0.81lgGE/106HEL)高于药物对照组(7.05±0.71lgGE/106HEL,P<0.05),但两者维持液内病毒量无明显差异(P>0.05)。分别于感染后12h、24h,实验组维持液TNF-α、IL-6蛋白含量(0.63±0.06pg/ml,38.26±4.19pg/ml)明显高于病毒组(0.55±0.04pg/ml,31.12±4.53pg/ml,P<0.05)和药物对照组(0.56±0.05pg/ml,32.40±4.97pg/ml,P<0.05),在感染后24～36h达高峰(P<0.01)。实验组和药物对照组CPE出现(感染后96h)均晚于病毒组(感染后48h),且发展缓慢,感染后168h仅为++,而病毒组则达到++++。结论金叶败毒制剂可有效抑制感染细胞内HCMV DNA复制及病毒自受染细胞内释放,并能促进     

芦荟大黄素对肺炎链球菌侵袭A549细胞的抑制作用

目的通过体外实验,研究芦荟大黄素(aloe-emdion,AE)是否能阻断肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)触发人肺Ⅱ型上皮细胞A549微丝肌动蛋白(filamentousactin,F-actin)细胞骨架重排。方法采用F-actin特异性荧光染料观察S.pn作用A549细胞前后的F-actin细胞骨架重排情况并用AE预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排关系。结果用AE预处理A549后S.pn侵袭数为(22±4)CFU/孔,而没有用AE预处理的A549S.pn侵袭数为(138±21)CFU/孔,经两样本均数t检验,有显著差异(P<0.01)。结论AE对S.pn侵袭人肺Ⅱ型上皮细胞A549F-actin细胞骨架的重排有抑制作用。     

表皮生长因子受体参与屋尘螨诱导的气道上皮屏障破坏的机制

目的 探讨屋尘螨(HDM)对肌动蛋白应力纤维(F-actin)重新排布的影响及表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路在其中的作用.方法 选取正常人支气管上皮细胞系16HBE细胞为研究对象,以HDM刺激细胞,予EGFR抑制剂AG-1478进行预处理,实验分为4组:Control组,AG-1478组,HDM组,AG-1478+HDM组,应用Western blotting检测HDM对磷酸化(p-)EGFR、F-actin及粘附连接蛋白E-cadherin和β-catenin表达的影响,应用免疫荧光技术观察F-actin、E-cadherin及β-catenin的分布变化,并测量16HBE细胞层的跨上皮电阻(TER)值和右旋糖苷(FITC-DX)的透过率.结果 HDM刺激细胞10 min时,p-EGFR表达明显增多(P<0.05),E-cadherin(P>0.05)及β-catenin(P>0.05)蛋白表达无明显改变,免疫荧光示HDM刺激后E-cadherin及β-catenin均发生分布异常,由胞膜向胞浆弥散.HDM组TER值(70.00±4.33)%显著下降,FITC-DX透过率(115.98±4.34)%明显增加,加入EGFR抑制剂后E-cadherin和β-catenin的分布异常及TER值(90.00±3.75)%、FITC-DX(101.10±2.10)%透过率均明显改善.HDM刺激后促进F-actin表达增多并出现重新排布,而EGFR抑制剂可明显抑制这一过程(P<0.05).结论 表皮生长因子受体相关信号通路参与了屋尘螨介导肌动蛋白应力纤维的重新排布,并导致气道上皮屏障破坏.     

胶质瘤细胞与星形胶质细胞骨架荧光成像比较分析

目的 探讨C6胶质瘤细胞与侵袭性相关的骨架构筑特点。方法 利用免疫荧光技术对C6胶质瘤细胞及星形胶质细胞的骨架成分进行成像及比较分析,流式细胞仪检测两种细胞F-actin的荧光强度。结果 C6胶质瘤细胞的三种骨架成分呈网架结构,以核为中心向外周放射,边界不齐、毛糙,此外,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构。星形胶质细胞三种骨架成分呈网架结构,但细胞边界整齐,微丝稀疏,中间丝发达密集,呈栏栅状排列。C6胶质瘤细胞内F-actin的荧光强度明显强于星形胶质细胞内F-actin的荧光强度,p＜0.01。结论 C6胶质瘤细胞骨架呈网架结构,边界不齐、毛糙,微丝发达密集,中间丝呈高度网络结构,可能均与侵袭性相关的特征结构表现, C6胶质瘤细胞含有丰富的F-actin与侵袭性有关。     

MAO-A通过激活ROS/JNK通路加重心肌细胞脂质沉积

目的 观察单胺氧化酶A(monoamine oxidase A,MAO-A)对与3T3-L1脂肪细胞共培养的原代新生大鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocyte,NRCM)脂质沉积的影响及机制。方法 选取40只出生1~3天的SD大鼠心肌细胞与3T3-L1脂肪细胞构建NRCM/3T3-L1共培养体系,并加入棕榈酸(palmitic acid,PA),模拟肥胖时心肌细胞所处的内环境。将细胞分为对照组、PA组、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)组、过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)组、NE+CLG组、氯吉兰(clorgyline,CLG)组。采用α横纹肌肌动蛋白评估心肌细胞的纯度和面积,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定心肌细胞内心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)的mRNA水平,免疫荧光染色测定心肌细胞内活性氧簇水平(reactive oxygen species,ROS),油红O染色评估心肌细胞内脂质沉积,Western blot法测定心肌细胞内MAO-A、JNK的蛋白及磷酸化水平。结果 与对照组比较,PA组心肌细胞面积(14.681±0.481μm² vs 19.932±0.220μm², P<0.01)增大,ANP的相对mRNA水平(1.006±0.017 vs 1.914±0.152, P<0.01)、MAO-A的相对蛋白水平(0.117±0.022 vs 0.430±0.092, P<0.01)、ROS水平(0.001±0.001 vs 0.004±0.002,P<0.01)、脂滴面积比(0.001±0.001 vs 0.054±0.002,P<0.01)及p-JNK的相对蛋白水平 (0.032±0.007 vs 0.263±0.119, P<0.05)均增加。与PA组比较,NE明显增加心肌细胞内MAO-A的相对蛋白水平(0.430±0.092 vs 1.114±0.091, P<0.01)和ROS水平(0.004±0.002 vs 0.013±0.001, P<0.01)。另外,NE和H₂O₂均能增加心肌细胞脂滴面积比(0.054±0.002 vs 0.106±0.005, P<0.05;0.054±0.002 vs 0.092±0.002, P<0.01)和p-JNK的相对蛋白水平(0.263±0.119 vs 0.969±0.082, P<0.05;0.263±0.119 vs 0.640±0.101, P<0.05)。CLG可明显改善NE诱导的异常。结论 MAO-A相对蛋白水平增加会加重与3T3-L1脂肪细胞共培养的心肌细胞内的氧化应激和脂质沉积,其机制可能与ROS/JNK信号级联反应激活有关。     

肾移植受者外周血白细胞CMV抗原阳性细胞数及意义

【目的】探讨肾移植受者外周血白细胞巨细胞病毒(CMV)PP-65抗原阳性细胞数的变化及意义。【方法】用免疫细胞化学法检测外周血白细胞CMV-PP65抗原,术后头3个月每周1次。【结果】273例肾移植受者中124例术后检出CMV-PP65抗原阳性,初次检出CMV-PP65抗原的平均时间为(24.1±11.3)d,每5万白细胞中CMV抗原阳性细胞数均值为7.1±5.8,其中5例CMV抗原阳性细胞数超过10/5万白细胞。无症状性和症状性CMV感染受者初次检出CMV抗原阳性细胞数分别为(6.7±5.6)/5万白细胞、(10.1±9.3)/5万白细胞(P>0.05);峰值水平为(8.1±4.2)/5万白细胞、(26.3±5.7)/5万白细胞(P<0.05);分别有17例(15%)、12例(100%)患者其峰值超过10/5万白细胞(P<0.05)。抗病毒治疗中90例(72.6%)患者CMV抗原阳性细胞数进一步升高。【结论】肾移植受者在CMV感染早期病毒复制能力强,CMV抗原阳性细胞数峰值有助于预测症状性CMV感染。     

RNA干扰HSP27基因表达对膀胱逼尿肌细胞收缩特性的影响

目的 探讨热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)低表达对体外培养人膀胱逼尿肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)肌动蛋白骨架结构及其收缩功能的影响.方法 构建HSP27基因干扰慢病毒载体作用于BSMCs后,Western blot检测其抑制HSP27表达水平和干扰效率;通过鬼笔环肽荧光染色、Western blot检测BSMCs内F/G-actin比值检测等方法观察,干扰HSP27表达对BSMCs肌动蛋白骨架形态结构和聚合状态的影响;构建离体BSMCs三维培养模型,检测HSP27低表达对膀胱逼尿肌细胞收缩力的影响.结果 成功构建HSP27干扰质粒pGreenPuro-sh-HSP27,慢病毒载体高效感染BSMCs;与正常对照组比较,HSP27干扰组BSMCs细胞内肌动蛋白骨架结构紊乱和皱缩,检测F/G-actin比值(0.116 ±0.001)亦较正常BSMCs (8.717 ±0.500)明显下降(P＜0.05);正常BSMCs三维培养模型在80 mmol/L KCl刺激下可检测到的最大收缩力为(8.4 ±0.6)mg显著大于HSP27干扰组[(3.8±0.2)mg,P＜0.05].结论 HSP27低表达状态可导致BSMCs肌动蛋白结构变化并导致其收缩功能受损.     

模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 研究模拟失重对肺微血管内皮细胞屏障功能的影响,为防御失重所导致的不良影响寻找新的治疗靶点.方法 采用回转器模拟失重效应干预肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC),回转培养72h,同时设1g对照静置培养组.之后用免疫荧光染色标记细胞骨架肌动蛋白F-actin,并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的改变;光镜下观察单核细胞(THP-1) 与PMVEC 的黏附作用,并计算黏附率;绿色荧光标记的腺病毒感染细胞,荧光显微镜下观察,并在流式细胞仪检测感染效率.结果 回转72h PMVEC 胞质内F-actin 的表达减少,微丝的拉丝感和方向感明显弱化,排列松散,细胞伸展不好,体积变小;模拟失重抑制PMVEC 对单核细胞的黏附,导致黏附率(37.69%±6.5% vs 51.25%±8.2%,P<0.05) 下降;模拟失重组的腺病毒感染率更高(84.55%±5.31% vs 66.32%±5.74%,P<0.05),更容易受到腺病毒感染.结论 模拟失重可以损伤PMVECs 的屏障功能.     

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的：探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法：采用OSBPL2基因敲除（Osbpl2-KO）HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果：Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白（F-actin）的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内...     

褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901黏附和迁移的影响

目的 :研究褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901黏附和迁移能力的影响及探索可能的分子机制。方法 :用不同浓度的褪黑素孵育人胃癌细胞SGC-7901 24 h,通过免疫印迹方法检测F-actin和G-actin蛋白表达水平,通过免疫荧光法检测细胞骨架结构的改变,通过细胞黏附实验观察胃癌细胞对血管内皮细胞黏附能力的变化,通过划痕实验检测褪黑素对细胞迁移能力的影响。结果:褪黑素使人胃癌细胞SGC-7901 F-actin量明显降低,同时细胞骨架结构发生重组,应力纤维出现断裂;褪黑素可抑制胃癌细胞的迁移及对血管内皮细胞的黏附能力。结论:褪黑素可能通过破坏细胞内应力纤维结构的稳定,最终导致了胃癌细胞的黏附和迁移能力的降低。     

汽化吸入全氟化碳对急性肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的通过对肺灌洗造成小猪肺损伤模型行全氟化碳（PFC）汽化吸入,了解其对肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法将健康小猪18只随机分为3组,VMV组（PFC汽化吸入）,CMV组（常规机械通气）和假手术组。取各组小肠,TUNEL法检测细胞凋亡指数,免疫组织化学法及半定量RT-PCR法测定凋亡基因BAX,bcl-2。结果小肠的阳性细胞主要分布在小肠绒毛,CMV组细胞凋亡率为70．6％±3．4％,VMV组为22．9％±2．3％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。VMV组小肠BAX蛋白表达低于CMV组（P〈0．05）,VMV组小肠bcl-2蛋白表达高于CMV组（P〈0．05）。BAX mRNA、bcl-2 mRNA结果与其蛋白表达结果一致（P〈0．05）。假手术组细胞凋亡数极少,BAX、bcl-2表达均很低。结论汽化吸入PFC可减少急性肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡,其作用机制可能与抑制BAX基因的蛋白表达及升高bcl-2基因表达有关。     

特异性溶瘤重组腺病毒KH901的体外特异性抗肿瘤作用研究

目的 研究特异性溶瘤重组腺病毒KH901在体外培养的人肿瘤细胞中的选择性复制和杀伤作用.方法 以感染复数(MOI)=2 PPC的KH901和野生型腺病毒(Ad5)感染人肿瘤和正常细胞,72 h后采用病毒滴定法测定病毒滴度;以MOI＝10 PPC和1 PPC的KH901感染人肿瘤和正常细胞,24 h后通过ELISA法和TF-1依赖细胞株/MTT比色法测定粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的免疫活性和生物活性;以MOI分别为0、0.1、1、10、100、1000 PPC的KH901和野生型Ad5感染人肿瘤和正常细胞,采用MTT法测定各细胞活力,计算半数药物有效浓度(EC50).结果 野生型Ad5在正常细胞和肿瘤细胞中均大量复制,均表现出明显的杀伤作用;KH901在肿瘤细胞中大量复制[(2526.4±136.8)～(2796.6±104.6) TCID50/cell],表达大量的人GM-CSF[(1177.793±6.62)～(3924.497±17.79) IU/(106细胞·24 h)],并显示出明显的杀伤作用[EC50为(0.31±0.06)～(0.19±0.01) pfu/cell],在正常细胞中KH901复制较差[(56.8±9.2)～(90.1±14.4) TCID50/cell],只有少量的GM-CSF产生[(13.397±0.82) IU/(106细胞·24 h)],杀伤作用轻微[EC50为(92.33±9.12)～(121.20±19.94) pfu/cell],两者间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 KH901具有肿瘤选择性复制和杀伤作用,并能表达具有生物活性的GM-CSF,显示出治疗实质性肿瘤的潜力.     

柿叶黄酮对晚期糖基化终产物诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

OBJECTIVE: To observe the effects of flavone from the leaves of Diospyros kaki on proliferation of adventitial fibroblasts induced by advanced glycation end-products (AGEs) in vitro. METHODS: NIH/3T3 cells cultured in vitro were treated with both AGEs and flavone from the leaves of Diospyros Kaki for observation in comparison with the cells that received treatments with either AGEs or flavone, or neither. The ratio of cell proliferation was determined by non-radioactive MTS/PES assay. RESULTS: The ratio of cell proliferation was 0.840+/-0.061 in the untreated control group, and was 1.330+/-0.055, 1.210+/-0.119, 1.029+/-0.076 and 0.792+/-0.060 in AGEs groups corresponding to AGE concentrations of 100, 50, 10 and 1 microg/ml respectively. AGEs significantly induced fibroblast proliferation in a dose-dependent manner when the concentration was above 10 microg/ml (P<0.05), as compared with the untreated control group. (P<0.05). The ratio of cell proliferation was 0.829+/-0.056 in cells treated with flavone at the concentration of 50 microg/ml, which alone failed to affect fibroblast proliferation (P>0.05). With AGEs stimulation, however, flavone from the leaves of Diospyros kaki significantly inhibited the proliferation of the fibroblasts (P<0.05). CONCLUSION: Flavone from the leaves of Diospyros kaki can significantly inhibit the proliferation of adventitial fibroblasts stimulated by AGEs in vitro.     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞骨架微丝影响的激光共聚焦显微观察

目的：观察低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs）骨架微丝的影响。方法：采用胶原酶Ⅰ消化法原代培养PASMCs,免疫荧光法进行平滑肌α肌动蛋白（α-SM actin）鉴定。然后分别低氧（5%O2,5%CO2）培养2、6、12、24 h后,用鬼笔环肽标记细胞骨架F-actin,用激光共聚焦显微镜观察F-actin的变化。结果：免疫荧光鉴定结果表明培养细胞为PASMCs,低氧状态和常氧条件下培养的PASMCs形态上有明显区别,低氧组细胞骨架蛋白F-actin发生重排,微丝排列混乱,存在时间依赖性。结论：低氧能造成PASMCs形态的改变和细胞骨架微丝的重排。     

Human cytomegalovirus protects multiple myeloma cell line KM3 cells from apoptosis induced by growth factor withdrawal

Background There is a higher rate of cytomegalovirus (CMV) reactivation in patients with multiple myeloma after an autologous stem cell transplantation, but no attention has been given thus far to a possible pathogenetic interplay between CMV and multiple myeloma. CMV can infect many kinds of cells, and CMV infection has been shown to inhibit apoptotic responses in several cell systems. In this study the authors investigated the alterations in apoptosis in the multiple myeloma cell line KM3 after infection with CMV and DroDosed a Possible mechanism.Methods KM3 cells were infected with 100, 10, or 1 TCID50 of CMV and then cultured in serum-free RPMI 1640. An RT-PCR-based assay was used to detect mRNA expression of CMV-IE,glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), and IL-6 in CMV-infected and mock-infected cells. Flow cytometry was used to detect apoptotic cells. CMV particles and apoptotic cells were also examined with an electron microscope.Results CMV-infected KM3 cells clearly expressed immediate early (IE) antigen mRNA when compared to uninfected cells, and there were fewer apoptotic cells among cells treated with 100 or 10 TCID50 of CMV after culturing in serum-free RPMI 1640. CMV particles were observable in infected cells under an electron microscope. Expression of IL-6 mRNA increased after infection.Conclusion CMV can infect the multiple myeloma cell line KM3, inhibit the apoptotic response in these cells after apoptosis induction in serum-free culture, and increase the expression of IL-6 mRNA.     

感染性心内膜炎患者体外循环手术中ACT的监测

目的:探讨感染性心内膜炎(infective endocarditis,IE)患者外科治疗时肝素及鱼精蛋白的合理用量.方法:IE患者与风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)患者各30例,在体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)期间测定激活全血凝固时间(activated clotting time,ACT),CPB终止后,测ACT拮抗值.结果:转流前IE组肝素用量[(407.2±51.3)U/kg]明显高于RHD组[(350±25)U/kg(P＜0.05)],鱼精蛋白用量IE组[(3.00±0.25)mg/kg]亦明显高于RHD组[(2.51±0.26)mg/kg(P＜0.05)],鱼精蛋白与肝素之比IE组为0.76±0.23,RHD组为0.74±0.12,二组间无统计学差异(P＞0.05).结论:IE病人转流前肝素用量大于400 U/kg,鱼精蛋白用量需增加至3 mg/kg,而鱼精蛋白与肝素之比无明显变化.     

小鼠睾丸巨细胞病毒感染对精子顶体反应与膜功能的影响

目的探讨小鼠睾丸巨细胞病毒(MCMV)感染对附睾尾部精子顶体反应与膜功能的影响。方法随机选择无MCMV感染史的BALB/c雄性小鼠48只作为实验组,睾丸直接接种MCMV,分别于感染后第1、2、4、6、9、14天处死小鼠,用地高辛标记的MCMVM83mRNA寡核苷酸探针对睾丸组织进行原位杂交,检测睾丸MCMV感染情况,同时取附睾尾部成熟精子进行精子顶体反应与精子膜低渗肿胀功能检测。另设平行对照组雄性小鼠30只(同法随机选择),睾丸接种不含MCMV的细胞培养液,其他处理方法同实验组。结果实验组48只雄性小鼠睾丸组织间质及(或)生精细胞中均出现原位杂交阳性信号。实验组精子顶体反应与膜功能在接种病毒后的第2天、第4天,精子顶体反应率(58%±9%、56%±9%)低于平行对照组(71%±6%、70%±7%)(P均<0.05),精子膜尾部低渗肿胀率(48%±9%、38%±8%)低于平行对照组(60%±7%、50%±4%)(P均<0.05)。结论小鼠睾丸MCMV感染模型成功建立。小鼠睾丸MCMV急性感染可导致精子顶体反应与膜功能的显著下降。     

溶血磷脂酸对体外血脑屏障模型通透性的影响

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)对血脑屏障通透性影响及其可能机制.方法 将体外建立的血脑屏障模型随机分为空白对照组、LPA组和蛋白激酶C抑制剂(Ro31-8220)+LPA组.γ计数仪检测模型对125I-BSA的通过率;流式细胞仪检测PKC-α表达阳性的微血管内皮细胞(BMEC)比例;类鬼笔环肽染色观察BMEC的F-肌动蛋白变化;电子显微镜观察血脑屏障-紧密连接(BBB-TJ)改变;Western印迹法检测BBB-TJ内闭合蛋白5表达.结果 LPA组125I-BSA通过率(364 cmp±15cmp)和PKC-α阳性细胞率(77%±7%)均高于空白对照组和Ro31-8220+LPA组(184 cmp±10 cmp、223 cmp±9 cmp,42%±4%、52%±3%,均P＜0.01);闭合蛋白5表达则低于空白对照组和Ro31-8220+LPA组(0.353±0.04、1.00±0.03、0.574±0.07,均P＜0.01),同时LPA使BBB-TJ开放、F-肌动蛋白重组.结论 LPA可促使BBB-TJ开放,增加血脑屏障通透性,其机制可能与PKC-α信号途径激活进而促使闭合蛋白5表达下调以及F-肌动蛋白重组有关.