抗乙型肝炎表面抗原决定簇“d”单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其抗体的应用

单克隆抗体已逐步应用于多种传染病的诊断和病原的检定,近年来已相继有杂交瘤技术制备乙型肝炎表面抗原(HBsAg)亚型决定簇“a”“d”“r”单克隆抗体的报告。抗HBsAg单克隆抗体的应用,对乙型肝炎病毒感染的诊断,HBsAg的结构和抗原亚型的检测,诊断试剂的改进,都具有重要意义,我们于1983年1月开展淋巴细胞杂交瘤技术的研究,现已获得稳定分泌抗HBsAg单克隆抗体的细胞株8株,并将提纯的单克隆抗体应用于血清样品的检测,取得了良好效果,现将试验方法和结果报告如下。方法与结果①细胞融一合、杂交瘤细胞     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。     

单克隆和多克隆抗体对肺癌患者血清循环免疫复合物抗原组份的检测和分析

用五株单克隆抗体(McAb)和一株多克隆抗体(PcAb)以本实验中建立的酶联免疫吸附(ELISA)夹心法检测分析肺癌,肺部良性疾病及正常人血清循环免疫复合物(CIC)的抗原组份。研究结果表明:针对肺癌亚类相关抗原CIC的五个McAb其癌抗原阳性率可分别自20％至32％不等。而PcAb与肺癌及肺部良性疾病血清CIC均可起反应,抗原阳性率分别为45.7％和41.4％。采用多株McAb组合应用可显著提高整个肺癌CIC抗原检出率(49％)。提示多株McAb并用在检测特异性肺癌相关抗原CIC方面优于PcAb。用McAb检测CIC抗原可说明宿主的肿瘤免疫反应状态,并为预后判断提供帮助。     

乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体杂交癌细胞系的建立及抗体的鉴定

对乙肝病毒(HBV)各抗原成分的单克隆抗体(McAb)已经研制和应用,其中以对表面抗原(HBsAg)特异的McAb建株较多。单克隆抗HBs是对HBsAg复杂的抗原性进行精细分析的有力工具,并有助于对HBsAg的免疫检测。     

2858名企业工人HBV血清学检测结果分析

为贯彻执行《劳动法》和《江苏省劳动安全卫生条例》,控制乙型肝炎(下称乙肝)的传播,我们对企业工人进行了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测。并对HBsAg阳性加测了乙肝其余四项标志物(抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)。现将结果报告如下。     

检测人LDL不同表位McAb的方法改进

对单克隆抗体识别大分子抗原上不同表位的检测,较好的方法是1983年Frigue所创建的ELISA叠加试验(ELISA addi-tivity test)。由于单克隆抗体与其抗原在通常条件下不发生沉淀反应,故多数学者都未应用免疫沉淀反应来检测单克隆抗体的结合位点,只有抗人Ig单克隆抗体(McAb)可以与其抗原发生免疫沉淀反应。1985年Marcovina报道,用双向免疫扩散试验检测小鼠抗人低密度脂蛋白(LDL)McAb,单个McAb不出现沉淀线,至少要用二种McAb加合在一起才有沉淀线。我们对实验     

孕产妇乙型肝炎病毒检测的临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)检测对孕产妇的临床意义.方法:采用酶联免疫吸附试验对352例住院孕产妇检测HBV血清标志物.结果:乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率占总人数8.81％,表面抗体(抗-HBs)阳性率最高,占总人数52.84％;其次乙肝5项全阴占总人数37.50％;HBsAg阳性感染中以HBsAg,e-抗体(抗-HBe)和核心抗体(抗-HBc)三者均阳性(下称小三阳)为主模式,占35.48％;其次HBsAg,e抗原(HBeAg)和抗-HBc三者均阳性(下称大三阳)占25.81％.结论:加强孕产妇HBV检测,对感染HBV的孕产妇乙肝表面抗原需及时进行医学监测.     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。     

乙肝血清标志物与HBV-DNA定量和肝脏酶相互关系的探讨

目的 :探讨乙肝血清标志物各模式组与HBV -DNA含量和肝脏酶的相互关系。方法 :ELISA法检测乙肝血清标志物五项 (即“两对半”) ,FQ—PCR检测HBVDNA ,自动生化分析仪检测肝脏酶三项 (即ALT、GGT、AKP)。结果 :检测 5 19例乙肝血清标本 ,有 12种血清标志物模式组 ,对主要阳性模式组分析 ,“HBsAg ,HBeAg ,抗 -HBc”和“HBsAg ,HBeAg”模式组的HBV -DNA阳性率高 ,分别为 97.6 2 % (16 4/ 16 8)和 10 0 % (2 0 / 2 0 ) ,HBV -DNA定量值高 (copy/ml,对数值 ) ,分别为 χ7.92± 1.37和 χ8.73± 0 .5 8。在“抗 -HBs”和“全阴性”模式组亦检出HBV -DNA ,阳性率分别为 5 .2 6 % (1/ 19)和 5 .88% (1/ 17)。“HBsAg ,HBeAg ,抗 -HBc”与“HBsAg ,抗 -HBe ,抗 -HBc”和“HBsAg ,抗 -HBc”模式中HBV -DNA阳性率统计对比P <0 .0 1,有非常显著差异。HBV-DNA定量值和肝脏酶 (ALT、GGT、AKP)结果直线相关性检验 ,“HBsAg ,HBeAg ,抗 -HBc”模式的AKP ,“HBsAg ,抗 -HBe ,抗 -HBc”模式的ALT、GGT、AKP ,均呈正相关。结论 :乙肝血清标志物 ,HBV -DNA定量和肝脏酶学检测是全面了解乙肝患者的重要指标。     

分泌抗人聚白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其应用

作者成功地获得了持续稳定分泌抗人聚白蛋白(PHSA)的单克隆抗体(McAb)细胞株。用~(125)I标记该McAb,采用敏感性高的RIA法对HBsAg阳性和阴性血清中老化的白蛋白分子进行了探测。结果发现PHSA主要存在于HBsAg阳性血清中。此工作为乙型肝炎病毒(HBV)与循环中PHSA结合的可能性提供了实验依据。     

载脂蛋白B单克隆抗体透射免疫比浊测定法的探讨

应用本室制备的载脂蛋白(apo)B单克隆抗体(McAb)经纯化后建立了透射免疫比浊法,并对实验中的各项条件和影响因素进行了探讨,经与多克隆抗体(PcAb)免疫比浊法比较.相关系数γ=0.911.     

抗人IgE单克隆抗体的反向被动血凝法测定人血清总IgE

反向被动血凝法(RPHA)具有快速、简便、敏感等优点,国内已建立抗人IgE PcAb-RPHA测定人血清总IgE,并制成试剂供临床应用。但因多克隆抗体(PcAb)是用纯化的人IgE骨髓瘤蛋白免疫动物获得,其亲和力、特异性及抗原结合谱等随抗原纯度、不同免疫动物个体和采血次数多寡而变化,使试剂难于标准化。单克隆抗体(McAb)具有特异性高、均一、亲和力恒定及容易纯化等优点,故近年来McAb在许多免疫测定系统中得到应用。Francisco SM等用3个抗IgE McAb,采     

血清冻存13年后乙肝病毒表面抗原检测结果的评价

目的 :评价血清常规冻存 13年后HBsAg的检测结果。方法 :采用酶免疫测定法 (EIA)对保留血清 2 5 5份作HB sAg检测 ,并与原用单克隆抗HBsAg诊断血细胞 (McAb -RPHA)检测的结果作一致性检验 (Kappa分析 )。结果 :以EIA为标准 ,与原McAb -RPHA检测的结果比较 ,McAb -RPHA检测的假阳性率为 12 .5 0 % (1/ 8) ,假阴性率为 0 81% (2 /2 4 7)。McAb -RPHA与EIA两种方法之间 ,即同一批血清 13年前后两次检验的符合率为 98 82 % ,k =0 8175。结论 :在 - 2 0℃环境下经 13年冻存后 ,血清HBsAg检测不受影响。     

单克隆抗体定位检测HBsAg亚型中的应用

对HBsAg亚型的检测,以往都采用血清学方法。作者应用3种国产的HBsAg单克隆抗体(McAb),在肝病组织石蜡切片上进行4步PAP法免组化染色。结果:肝细胞型肝癌的阳性检出率为65％(56/86),肝硬化为90％,肝炎为3/7,而对照组为33％(10/30)。其亚型检测结果为:adr 114例,adw 2例,ayw 7例,ayr 1例。染色强度不同,抗HBs/a>抗HBs/>抗HBsb/d,与多效价抗体比较,McAb染色的特异性亮,背影清晰,非特异性染色弱,HBsAg存     

抗HBsAg鼠/人嵌合抗体基因的构建、表达及鉴定

用抗体工程法构建抗乙肝表面抗原(HBsAg)鼠/人嵌合抗体的嵌合基因,并在哺乳动物细胞中成功地表达。分离鼠McAb 2H1(抗HBsAg)轻、重链可变区基因,并连接到含有人轻链(Kappa)及重链(Gamma 1)恒定区基因的哺乳动物细胞表达载体中;用电穿孔法将嵌合基因导入小鼠SP2/0细胞,得到高效表达。2H1嵌合抗体能特异性地与HBsAg结合,并能有效地与亲代McAb竞争;与血源性多克隆乙肝免疫球蛋白(HBIG)比较,其具有特异性好、节约血源、价廉、质纯、无其他病毒,如HIV等污染制品的可能等优点,可用于阻断乙肝母婴传播及在意外感染时被动免疫。     

单克隆鼠PAP制备及其有关特性的研究

采用自制抗辣根过氧化酶单克隆抗体(抗HRP McAb)进行了鼠单克隆PAP(PAPm)研制。并对其染色特性进行观察。以抗HRP McAb AP_4制备PAPm、酶与抗体克分子比值以1:3为佳;腹水与上清制备的PAPm免疫组化染色效果相似,ELISA显色前者低于后者;用于肝组织HBsAg定位检测,本室AP_4、AP_2、AP_5三种抗HRP腹水制备PAPm的染色效价,显色强度及本底显色相当,均接近或达到Sigma公司同类制品的效果。为采用McAb进行临床免疫组化研究提供了可靠的试剂保证。     

再灌注对冠状血管的损伤——早期形态学变化及其与反应性改变的关系

对HBsAg亚型的检测，以往都采用血清学方法。作者应用3种国产的HBsAg单克隆抗体(McAb)，在肝病组织石蜡切片上进行4步PAP法免组化染色。     

乙型肝炎诊断试剂盒通过鉴定

我院微生物教研室戴金副教授研制的“乙型肝炎试剂诊断试剂盒”,由省卫生厅组织于1989年8月16日通过省级鉴定。该试剂盒使用特制的梳状硝酸纤维素滤膜为固相载体点样包被,用双抗体夹心法测定乙肝表面抗原(HBsAg),用间接,ELISA法检测抗核心抗体(抗HBcIgM、IgG、IgA)。与会专家一致认为本试剂盒技术先进、特异性高、敏感性及重复性好。经临床使用,证实其具有快速、简便、微量等特点,已达到国内先进水平。     

抗ICAM-5单克隆抗体的制备及实验研究

目的 制备抗细胞间黏附分子5 (intercellular adhesion molecule-5,ICAM-5)单克隆抗体(McAb)并进行实验研究.方法 采用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性单克隆抗体.采用ELISA法测定腹水ICAM-5 McAb的效价,通过免疫荧光技术及Western blotting检测McAb的抗体特异性.结果 获得3株分泌ICAM-5 McAb的杂交瘤细胞株.ELISA检测效价可达1:(4×105),免疫荧光与Western blotting显示3株McAb与ICAM-5分子具有良好的结合活性.结论 成功制备了抗ICAM-5的McAb,为其进一步研究和应用奠定了基础.     

乙肝血清标志物“两对半”310例献血者检测结果分析

乙肝“两对半”是指乙肝病毒的五种血清结构。通常包括：表面抗原（HBsAg）、表面抗体（抗-HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗体（抗-HBe）和核心抗体（抗-HBc）。检测乙肝“两对半”是判断乙肝的重要依据。我们对来站献血者均进行乙肝“两对半”检测。现将2007—2008年310例献血者乙肝“两对半”的检测结果报告如下。