免疫印渍试验在斯氏肺吸虫病血清学诊断中的意义

应用免疫印渍试验（Immunoblottingtest）分析斯氏肺吸虫成虫、幼虫和囊蚴期的虫体可溶性抗原．结果显示感染斯氏肺吸虫的人和动物血清可识别22、24和26KD抗原蛋白带．依据病人血清对上述抗原组仿的识别，用免疫印渍试验诊断24例斯氏肺吸虫病人，皆为阳性，而对照组显阴性．与Dot－ELISA比较试验的敏感性和特异性，两试验的阳性检出事无显著性差异（P＞0．05）．Dot-ELISA的交叉反应率为18．75％（6／32），而免疫印渍试验无交叉反应．表明斯氏肺吸虫的22、24和26KD蛋白带为特异性诊断抗原，免疫印渍试验为斯氏肺吸虫病的高度敏感和特异的血清学诊断方法．     

SDS—PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原

目的：分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原（ES-Ag)的分子生物学特性,有利于提高免疫诊断方法的敏感性和特异性。方法：采用SDS-PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原。结果：斯氏肺吸虫幼虫排泄分泌抗原在24-60KD之间可见4条显色带,其中24KD为主带,成虫排泄分泌抗原在20-60KD之间可见5条显色带,其中20KD和32KD为主带。结论：斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原共有的主要区带为20KD。     

免疫组化技术对斯氏狸殖吸虫成虫免疫诊断相关抗原的初步研究

目的初步分析斯氏狸殖吸虫成虫表膜和肠相关抗原,探讨肺吸虫病的免疫诊断的特异性诊断抗原。方法斯氏狸殖吸虫成虫制备成15μm的冰冻切片,肺吸虫患者血清识别斯氏狸殖吸虫成虫特异性抗原,采用免疫金标记和免疫酶标记检测技术对抗原进行定位,激光共聚焦显微镜技术进行半定量分析以及免疫透射电镜对其细微结构的观察。分实验组和对照组。结果肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原定位于虫体的表膜和肠腔,表膜抗原半定量分析平均灰度值为80.65,肠腔抗原半定量分析平均灰度值为71.26,电镜下可见胶体金附着于肠腔和表膜的双层结构。结论肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原都为表膜相关抗原和肠相关抗原,因此与肺吸虫病免疫诊断相关的诊断抗原为虫体表膜和肠上皮产生的相关蛋白。     

DOT—ELISA对斯氏肺吸虫病的免疫诊断研究

用DOT－ELISA（斑点－酶联免疫吸附试验）对20例斯氏肺吸虫病进行检测，19例阳性反应，阳性检出率为950％，26例对照血清中，12例日本血吸虫病，2例阳性，交叉反应率16．9％．同时，对DOT－ELISA的特异性，敏感性进行研究，32例其他血吸虫病和肺部疾病血清经该法检验，出现交叉反应率为12．5％．24例可疑斯氏肺吸虫血清分别用DOT－ELISA和平板－ELISA检测，阳性总符合率为85．7％．本文认为DOT－ELISA具有较高的特异性、敏感性，成本低,操作简便，观测结果直接，为期氏肺吸虫病免疫诊断的较好方法．     

应用McAb ELISA双抗体法检测肺吸虫病循环抗原

酶联免疫吸附试验(ELISA)应用于肺吸虫病的诊断,国内已有报道,刘纪伯又报道了应用单克隆抗体(McAb)斑点试验检测斯氏肺吸虫循环抗原的研究;但尚未有应用McAb ELISA双抗体法检测卫氏肺吸虫病循环抗原。为此,我们应用McAb ELISA双抗体法检测了38例肺吸虫病人循环抗原,现将结果报道如下。材料和方法一、试验血清分二组第一组:卫氏肺吸虫病患者血清38份,     

卫氏肺吸虫成虫cDNA文库的多抗筛选

目的：从卫氏肺吸虫成虫cDNA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法：采用预吸收成虫抗原免疫兔血清（IRS,多抗）筛选阳性克隆，经PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切，以抗生素平板筛选含重组质粒的阳性菌落。选取插入片段不同的两个克隆测定其DNA序列，用BLAST软件对所得DNA序列进行同源性比较。结果：得到P.w-2,P.w-4两个阳性克隆，长度分别为801bp和1053bp，分别与卫氏肺吸虫原组织蛋白酶L和卫氏肺吸虫半胱氨酸蛋白酶基因同源，同源程度分别为99％、86％。结论：用卫氏肺吸虫成虫多抗筛选成虫cDNA文库，所获P.w-2和P.w-4阳性克隆可能可用于肺吸虫病的免疫诊断和预防。     

斯氏肺吸虫成虫抗原皮内试验实用价值的探讨

目的:为探索检测斯氏肺吸虫病抗体简便易行的方法。方法:以肺吸虫成虫抗原对斯氏肺吸虫病人和其它人群进行皮内试验。结果:斯氏肺吸虫病人阳性检出率为99.7％,健康人群,蛔虫及鞭虫病人,结核病人及其它内科疾病病人均为阴性反应。结论:提示皮内试验用于斯氏肺吸虫病临床诊断和流行病学调查具有敏感性高,特异性强,操作简便易行等优点。     

Dipstick法检测斯氏狸殖吸虫病血清抗体的建立及应用

目的 建立简便的斯氏狸殖吸虫病Dipstick快速诊断法。方法 以纯化的斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD为诊断抗原，胶体金标记的羊抗人IgC为显色剂，建立Dipstick快速诊断方法；检测斯氏狸殖吸虫病患者血清58例，日本血吸虫病患者血清32例。华支睾吸虫病患者血清23例，健康者血清28例。结果 检测58例斯氏狸殖吸虫病患者血清IgG抗体．其阳性率为98、3％（57／58），分别检测健康者血清28例、日本血吸虫病患者血清32倒和华支睾吸虫病患者血清23例，前者均为阴性，后两者的交叉反应率分别为3.1％（1／32）和0％（0／23）。结论 斯氏狸殖吸虫成虫可溶性抗原22kD Dipstick快速诊断法具有较高的敏感性和特异性，简便快捷，勿须特殊仪器设备，是一种检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IcG抗体较好的免疫诊断方法。     

湖南五地卫氏并殖、斯氏狸殖吸虫成虫蛋白质的比较分析

本实验用SDS—浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE),对湖南5地卫氏并殖及斯氏狸殖吸虫成虫进行了蛋白质分析,其结果显示两种肺吸虫蛋白质区带相似率在20%以下;4地斯氏狸殖吸虫蛋白带相似率在85%以上。两种虫的蛋白带有高度显著性差异;4地斯氏狸殖吸虫种内蛋白带无显著性差异。蛋白质主带在两种肺吸虫间完全不同,而在4地斯氏狸殖吸虫种内则完全一致。     

酶免疫转移印渍试验(EITB)分析斯氏狸殖吸虫成虫抗原

本文应用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离斯氏狸殖吸虫成虫抗原,并通过转移电泳至硝酸纤维薄膜(NC)上,然后用酶联免疫试验观察成虫抗原蛋白与感染斯氏狸殖吸虫的病人、犬及大鼠血清的反应,检测和识别特异性虫体抗原蛋白。实验结果呈示;虫体抗原经SDS-PAGE分离、染色后可显示20余条蛋白区带;分子量分别为22、24、26KD的抗原蛋白对人体和动物的斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。     

日本血吸虫不同发育阶段与旋毛虫抗原交叉性的研究

运用ＥＩＴＢ技术分析日本血吸虫（Ｓｊ）尾蚴、肝期童虫及雌雄成虫与旋毛虫（Ｔｓ）肌蚴抗原的交叉性。结果显示：Ｓｊ尾蚴、肝期童虫、成虫各阶段不同程度地被抗－ＴｓＳＡＲＳ，ＴｓＩＲＳ识别，其识别的抗原分子量在１５￣１００（尤５０￣７０）ｋＤ之间，两种抗血清识别的带型基本相同。所识别的各期Ｓｊ抗原中以尾蚴抗原最多，次为肝期童虫。３０天成虫仅雌虫抗原与上述两种抗血清在９７ｋＤ处显出一条弱带。抗－Ｓｊ♂ＡＲＳ     

应用猪囊尾蚴囊液、头节和囊壁抗原斑点ELISA诊断脑囊虫病的比较研究

应用猪囊尾蚴囊液、头节和囊壁抗原斑点ELISA检测脑囊虫病患者血清.当血清稀释度为1:20～1:320时,囊液、头节和囊壁抗原对脑囊虫病患者血清的检出阳性率分别为95:7%～82.9%,95.7%～71.4%和97.1%～30%。3种抗原与正常人、肺吸虫病人、华支睾吸虫病人及脑血管病人血清均无假阳性反应或交叉反应。与细胞粒棘球蚴病人血清的交叉反应率分别是22.5%～47.5%,10%～42.5%和10%～17.5%,以囊壁抗原的交叉反应为最低。     

日本血吸虫成虫67kD抗原模拟表位的筛选及其免疫原性

目的：筛选日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，对其免疫学活性予以鉴定。方法：用粗提日本血吸虫成虫67kD抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库，随机挑取三轮筛选后的噬菌体克隆，Dot-ELISA检测其特异性：用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染后45d剖杀，计数虫荷。结果：经三轮筛选，特异噬菌体得到富集，挑取的11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定均与67kD抗原免疫血清呈阳性反应。混合噬菌体克隆的免疫血清可识别67kD抗原，并具有一定的抗血吸虫的免疫保护效果。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，这些表位具有良好的免疫原性。     

斑点酶联免疫吸附试验检测血吸虫病

用成虫、卵及尾蚴抗原做斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测96份血吸虫患者血清,阳性率分别、为70.8%、91.7%及81.3%。三种抗原 Dot—ELISA 的互补阳性率为93.8%。而对50份献血员及38份肺吸虫患者血清进行检测都是阴性。Dot—ELHSA 的重现性及稳定性好,抗原用量少、简单、出结果快。     

日本血吸虫成虫脲溶42 kD蛋白的分离及其初步诊断应用

目的 :分离日本血吸虫成虫脲溶抗原中有免疫学活性的抗原分子 ,探讨其诊断血吸虫病的效果。方法 :利用SDS PAGE及免疫印迹法分析日本血吸虫成虫脲溶抗原 ,采用电泳层析法分离有免疫活性的 4 2kD蛋白 ,ELISA分析 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性。结果 :电泳层析获得了具有免疫学活性的 4 2kD蛋白 ;分离的 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性分别为 88.0 9%和 97.0 6 %。结论 :日本血吸虫成虫脲溶 4 2kD蛋白是一种日本血吸虫的血清学抗原 ,可用于血吸虫病诊断     

ISOLATION OF SOME ANTIGENS FROM SCHISTOSOMA JAPONICUM AND THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE

Six kinds of antigens from the eggs and adult worms of schistosoma japonicum were isolated. They included adult microsomal antigen (JAMA), aqueous soluble egg antigen (SEA), urea-soluble egg antigen (JEU) and its further fractionated products (JECt-D. They were analyzed by sodium polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), enzyme-linked immuno- electro-transfer blot (EITB) and kinetic-dependent enzyme-linked immunosorbent assay (K-ELISA). They were quantitatively assayed by K-ELISA for specific antigenic activities against sera of 39 patients with schistosomiasis japonica. The sera of patients with diseases other than schistosomiasis and 10 healthy adults were tested simultaneously as control. JEC:} was antigenically more active (A A460/min X 10-j than other antigens. Determinatin of the specific antibody (IgG) levels of S. japonicum by using JEC:i, etc as diagnostic antigens in 30 chronic patients re- vealed that the level of anti-JEC:: antibody was the highest (11.7_0.7A A460/min X 10-j. EITB test showed tbat only JEC:; exhibited no cross reactivity with sera from patients with parago nimiasis and clonorchiasis sinensis, and that all posi- tive bands of JEC; disappeared in patients cured of chronic schistosomiasis. These findings suggest that JEC:; might become a more satisfactory antigen in the serodiagnosis of schistosomiasis japonica.