乳酸对肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖和生物学活性的影响

目的　探讨兔屈趾肌腱腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞增殖、胶原产生和乳酸对细胞的增殖、胶原产生和对TGF β1、b FGF、IL 8分泌的影响。 方法　从兔屈趾肌腱分离腱鞘、腱外膜和腱内膜细胞并培养 ,在使用乳酸培养后 ,细胞的数量 ,胶原产生量和TGF β1、b FGF、IL 8分泌量被测量 ,并与不使用乳酸培养的对照组比较。结果　所有三种细胞均可以产生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原组织 ,乳酸使培养的细胞数量降低 ,但能显著性地增加Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原组织产生 ,TGF β1、b FGF的分泌和减少IL 8的分泌。 结论　乳酸能增加腱鞘成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞的胶原产生量 ,而这种刺激作用可能与增加TGF β1、b FGF和减少IL 8的分泌量有关 ,通过对乳酸的调节可能为预防肌腱损伤修复后的粘连提供新的途径。     

几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用

目的:探讨几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的作用。方法:用组织块法进行瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞的体外培养;MTT比色法和流式细胞仪检测法分别检测不同浓度几丁糖对不同来源成纤维细胞生长增殖和细胞周期的影响。结果:各组成纤维细胞增殖明显受抑制,几丁糖的浓度和细胞OD值改变之间存在剂量-效应关系,各组成纤维细胞G_0 G_1期的细胞百分比增多,S期G_2 M期的细胞百分比减少,减少率各组无显著差异(P>0.05),S期G_2 M期的细胞百分比减少率有显著差异(P<0.05)。结论:几丁糖对正常皮肤及增生性瘢痕和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞的生长增殖均有抑制作用,有望在瘢痕的防治中发挥重要作用。     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗转化生长因子—β1对人α1（I）胶原基因的启动激活

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人α1 ( )胶原基因启动子活性的影响 ,以及与转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )之间的相互作用 ,为防治增生性瘢痕提供依据。　方法　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养。采用 Fu GENE转染试剂 ,分别瞬间转染含人α1 ( )胶原基因 5'端序列 - 2 .5 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体 ph COL2 .5至正常皮肤及瘢痕成纤维细胞。 ELISA法测定 b FGF及 TGF- β1 作用 2 4小时后 ,转染ph COL2 .5的两种成纤维细胞的报告基因 CAT表达量。　结果　b FGF能抑制转染 ph COL2 .5重组体的正常皮肤及瘢痕成纤维细胞 CAT表达量 ,且能拮抗 TGF-β1 对转染 ph COL2 .5重组体的两种成纤维细胞 CAT表达的上调作用。与对照组相比有统计学意义 (P<0 .0 5)。　结论　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中 ,b FGF均能抑制人 α1 ( )胶原基因的启动转录 ,且能拮抗 TGF-β1 对人α1 ( )胶原基因启动活性的上调作用 ,b FGF抗纤维机制有望为增生性瘢痕的防治提供新思路     

抗转化生长因子β_1预防和治疗瘢痕疙瘩的研究

目的　探讨anti-TGF - β1在体外及动物模型实验中对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及意义。方法　用电镜观察anti-TGF - β1作用后体外培养及动物模型成纤维细胞的形态学变化 ,用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法 ,检测anti-TGF - β1对体外培养的成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响 ;用免疫组化技术观测anti-TGF - β1对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响。结果　anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构及抑制其增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1)。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。对动物模型中瘢痕疙瘩Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白有明显的抑制作用 ,胶原高表达率实验组为 33.3% ,对照组为 88.9% (P <0 .0 1)。结论　在体外及动物模型实验中 ,anti-TGF - β1均能中和TGF - β1促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ,提示anti-TGF - β1将来可应用在临床预防治疗过度增生的瘢痕     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.01)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

病理性瘢痕中c-fos原癌基因的表达

目的　病理性瘢痕是创伤过度愈合的结果 ,以成纤维细胞的异常增殖、合成及分泌大量胶原和细胞外基质为特征 ,其形成机理仍不清楚。探讨原癌基因c -fos的表达与病理性瘢痕形成的相关性。方法　应用免疫组化SP法 ,检测c -fos蛋白在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中的表达和分布 ,并用图像定量分析比较其差异。结果　在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的成纤维细胞中c-fos呈强阳性表达 ,两组间无明显差异 ,而与正常皮肤对照组均有显著性差异。结论　增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中c -fos蛋白表达升高 ,存在c -fos癌基因的激活 ,可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控 ,并导致瘢痕增生     

病理性瘢痕中c-fos原癌基因的表达

目的　病理性瘢痕是创伤过度愈合的结果,以成纤维细胞的异常增殖、合成及分泌大量胶原和细胞外基质为特征,其形成机理仍不清楚。探讨原癌基因c-fos的表达与病理性瘢痕形成的相关性。方法　应用免疫组化SP法,检测c-fos蛋白在增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及正常皮肤组织中的表达和分布,并用图像定量分析比较其差异。结果　在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的成纤维细胞中c-fos呈强阳性表达,两组间无明显差异,而与正常皮肤对照组均有显著性差异。结论　增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中c-fos蛋白表达升高,存在c-fos癌基因的激活,可能参与了成纤维细胞的分化增殖、胶原合成与降解以及对细胞因子的调控,并导致瘢痕增生。     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨mi croRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将mi R-200c mi mics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:mi R-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;mi R-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

MicroRNA-200c通过TGF-β/Smad通路抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成

目的:探讨microRNA-200c(miR-200c)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,并阐明其涉及的TGF-β/Smad通路机制。方法:将miR-200c mimics用oligofectami脂质体转染经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞增殖变化;3H-脯氨酸掺入法测胶原蛋白水平的变化。相关蛋白表达变化和TGF-β1分泌表达变化分别用Western blot和ELISA法检测。结果:miR-200c明显抑制经TGF-β1诱导的人瘢痕疙瘩纤维细胞的增殖和胶原合成;miR-200c能明显减低磷酸化Smad2和Smad3的蛋白表达水平及抑制博莱霉素诱导的TGF-β1分泌。结论:miR-200c能明显抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成,其机制可能与抑制TGF-β/Smad通路相关。     

半边旗二萜类化合物5F对人病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的　研究 5F对人病理性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法　将 5F作用于体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞 ,通过3H -脯氨酸掺入法、检测细胞上清液羟脯氨酸含量及人PCⅢ放免试剂盒测定成纤维细胞胶原合成含量。结果　 5F可减少成纤维细胞3H -脯氨酸掺入量、细胞上清液胶原蛋白总量及Ⅲ型前胶原的含量。结论　 5F在体外能明显抑制病理性瘢痕成纤维细胞胶原的合成     

Recombinant human decorin inhibits cell proliferation and downregulates TGF-beta1 production in hypertrophic scar fibroblasts

Hypertrophic scarring remains a major problem for patients who have suffered deep burns. The pathophysiology underlying hypertrophic scar formation may be driven by the biological activity of transforming growth factor beta1 (TGF-beta(1)). Decorin is a human proteoglycan that inactivates the effect of TGF-beta(1) and therefore displays a beneficial effect of antifibrosis in various tissues. Hypertrophic scarring is a fibroproliferative disorder of the dermis that occurs following wounding. This study investigated the effects of decorin on cell proliferation, TGF-beta(1) production, and collagen synthesis in hypertrophic scar fibroblasts. The cell proliferation rates, cell cycle distribution, low-molecular-weight apoptotic DNA and TGF-beta(1) levels, and contents of type I and type III collagen amino-terminal propeptide (PINP, PIIINP) in supernatants were assessed. Fibroblast proliferation was significantly (P<0.05) inhibited by decorin, and this effect was dose-dependent. The fibroblast population became stationary at decorin concentrations of 100 and 200 nM. Decorin inhibited fibroblast proliferation by inducing cell growth arrest but not apoptosis. TGF-beta(1) and PINP levels were significantly (P<0.05) lower in fibroblasts treated with 10, 50, 100, 200 nM of decorin compared with fibroblasts without decorin addition. However, there was no significant difference in PIIINP concentration between the decorin-treated group and the control group. These results suggest that decorin has a down-regulatory effect on cell proliferation, TGF-beta(1) production, and collagen synthesis in hypertrophic scar fibroblasts. Improved understanding of such a regulatory mechanisms may eventually be of therapeutic significance in the control of hypertrophic scarring.     

TGF-β1或IFN-γ影响增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成中PTK的作用

目的探讨蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)在TGF-β1刺激或IFN-γ抑制增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblast,HS-FB)和正常人皮肤成纤维细胞(normal skin fibroblast,NS-FB)增殖和合成胶原中的作用.方法用TGF-β1或IFN-γ处理培养的HS-FB和NS-FB,用32P掺入底物法测定PTK活性,MTT法测定细胞增殖,放射免疫法测定胶原合成.结果TGF-β1不活化PTK但呈时间依赖性刺激HS-FB和NS-FB增殖和胶原合成,5,7,45-三羟(基)异黄酮(异黄酮)不影响TGF-β1的作用.短暂使用IFN-γ增加HS-FB和NS-FB增殖和胶原合成,伴有PTK活化,随后PTK活性恢复,细胞增殖和胶原合成也被抑制;异黄酮可逆转IFN-γ的作用.HS-FB的酶活性、增殖和合成胶原能力稍强于NS-FB,但P＞0.05.结论PTK不介导TGF-β1的信号,但部分介导IFN-γ短期升高FB增殖和胶原合成的效应,而PTK与IFN-γ的长期抑制效应无关.抑制或活化PTK可抑制或刺激FB增殖和合成胶原.     

The antifibrotic effects of relaxin in human renal fibroblasts are mediated in part by inhibition of the Smad2 pathway

BACKGROUND: The peptide hormone relaxin has been demonstrated to exert antifibrotic effects in renal and extrarenal tissues. The aims of this study were to identify potential anti-fibrotic effects of relaxin on human renal fibroblasts in vitro and to analyze their mechanisms. METHODS: All experiments were performed in established renal fibroblast cell lines and in primary cortical fibroblasts. Effects of relaxin were analyzed on cell proliferation, apoptosis, activation of renal fibroblasts, synthesis and secretion of collagen type I and fibronectin, as well as on the secretion of matrix metalloproteinases (MMPs). Effects on transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) receptor binding were analyzed by flow cytometry and on TGF-beta1 signal transduction by immunoblot analyses for Smad4 and 7, translocation from cytosol to nucleus for Smad2 and 3 as well as for phosphorylated and unphosphorylated forms of p38, c-Jun NH2 terminal kinase (JNK) and extracellular-regulated protein kinase (ERK). Finally, specific siRNAs for Smad2 and 3 were applied to assess the signal transduction pathway. RESULTS: After stimulation with relaxin, tyrosine phosphorylation of a 220 kD protein was demonstrated, indicating interaction with the receptor. Relaxin had only modest inhibitory effects on cell proliferation, and no effects on apoptosis. Conversely, relaxin exerted robust effects on TGF-beta1-induced fibroblast to myofibroblast transformation as well as on matrix synthesis and secretion even at the smallest dose tested. The secretion of MMP-2 and MMP-9 was induced noticeably by all investigated relaxin concentrations. TGF-beta1 receptor binding was not influenced by relaxin; however, it prevented Smad2 phosphorylation, translocation to nucleus, and complex formation between Smad2 and 3 indicating a possible interaction with TGF-beta1 signaling. These findings were corroborated by studies using siRNAs to Smad2 and 3 where siRNA to Smad2 but not to Smad3 inhibited the TGF-beta1 induction of fibronectin synthesis. There was no influence of relaxin on intracellular Smad3, Smad4, and Smad7 translocation or phosphorylation of mitogen-activated protein (MAP) kinases. CONCLUSION: Relaxin is a potent inhibitor of TGF-beta1-induced extracellular matrix (ECM) synthesis and secretion as well as fibroblast activation. Furthermore, it induces ECM degradation by induction of MMP-2 and MMP-9. These effects are mediated, at least in part, by inhibition of TGF-beta1 signaling.     

培养的正常和瘢痕角质形成细胞上清液对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 研究培养的正常角质形成细胞、瘢痕角质形成的细胞的上清液对增生性瘢痕成纤维细胞生物活性和胶原合成的影响。方法 采用MTT、^3H-脯氨酸掺入法、Ⅲ型前胶原放免试剂盒测定不同来源、不同浓茺培养的角度形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤细胞增殖和胶原合成的影响。结果 正常角质形成细胞上清液，可抑制瘢痕成纤维细胞增殖，对细胞内胶原合成有一定的促进作用，但却抑制细胞内胶原向细胞外分泌。瘢痕角质形成细胞上清液，对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用不明显，甚至还有促进的趋势，对细胞内外胶原合成、分泌皆有明显的促进作用。结论 正常角质形成细胞与瘢痕角质形成细胞分泌的物质对瘢痕成纤维细胞具有不同作用。     

α—平滑肌肌动蛋白在瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的诱导作用。方法 以5例增生性瘢痕为实验组,3例正常瘢痕为对照组,采用成纤维细胞二维培养和三维培养体系及LSAB免疫组织化学染色技术,观察在不同TGF-β1浓度作用下,来源于实验组和对照组的成纤维细胞表达α-SMA的情况。结果 实验组的成纤维细胞,三维培养体系中α-SMA含量明显低于二维培养体系,不同浓度TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达α-SMA的作用不同,以5ng/ml的TGF-β1作用最有效;与对照组的成纤维细胞相比,实验组的成纤维细胞在表达α-SMA方面,对TGF-β1的反应更为敏感。结论 在体外,TGF-β1诱导α-SMA在瘢痕成纤维细胞中的表达作用存在着浓度差异;实验组与对照组中的成纤维细胞在细胞性状方面存在差异,对TGF-β1敏感性不同;细胞外基质成分可能会降低TGF-β1的诱导作用,使α-SMA的表达减少。     

白细胞介素—1对病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的 探讨细胞因子对瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控。方法 以病理性瘢痕成纤维细胞为研究对象,观察白细胞介素－１（以下简称ＩＬ－１）对共胶原合成、核酸、超微结构的影响。结果 ＩＬ－１可以抑制病理性瘢痕成纤维细胞胶原合成及枋酸的量。结论 ＩＬ－１是瘢痕调控机制中的负性调节因子,在病理性瘢痕的防治中有一定的应用价值。     

角质形成细胞条件培养液对成纤维细胞增殖与胶原分泌影响的研究

目的 探讨正常的角质形成细胞对成纤维细胞生物学行为的影响。方法 组织块法培养成纤维细胞，分别加入12．5％、25％与50％浓度的角质形成细胞条件培养液为实验组，加入不含血清DMEM为对照组，采用MTT、羟脯氨酸比色法测定成纤维细胞增殖、胶原合成；以流式细胞仪测定50％浓度角质形成细胞条件培养液组及对照组成纤维细胞生长周期。结果细胞增殖测定，各实验组吸光度（A）值与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；随浓度增高，A值增加，25％及50％浓度组与12．5％浓度组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；25％及50％浓度组间比较，差异无统计学意义（P〉0．01）。胶原合成测定中，各实验组A值与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．01）；各实验组组间比较，差异无统计学意义（P〉0．01）。细胞周期测定见，50％浓度组可明显促进成纤维细胞通过G1／S及S／G1限制点，S期及G1／M期细胞与对照组相比明显增多，G0／G1期细胞与对照组相比明显减少，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 正常角质形成细胞的上清液可促进成纤维细胞的增殖，但对其胶原分泌影响不明显。