STAT1反义寡核苷酸雾化吸入对肺纤维化大鼠肺组织STAT1、ICAM-1及PDGF-A表达的影响

目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织STAT1、细胞粘附分子-1(ICAM-1)和血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响.方法:取Wistar大鼠45只,随机分成生理盐水(NS)组、BLM组和ASON组,NS组气管内灌注NS,BLM组和ASON组气管内灌注BLM,随后NS组和BLM组雾化吸入NS,ASON组雾化吸入STAT1 ASON,隔天雾化一次,共4次,分别于雾化后第7天、第14天、第28天处死大鼠各5只,右肺行支气管肺泡灌洗(BAL)进行细胞分类、计数;左肺免疫组化法测定肺组织中STAT1、ICAM-1和PDGF-A蛋白的表达.结果:①与BLM组比较,ASON组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P＜0.05).②与NS组比较,BLM组、ASON组肺组织STAT1、ICAM-1 和PDGF-A表达水平均显著升高(P＜0.01).BLM组第7天STATl、ICAM-1 、PDGF-A在肺组织中表达水平显著升高,随后下降,第28天时仍高于NS组(P＜0.05).与BLM组比较,ASON组各时间点STAT1、ICAM-1 和PDGF-A表达水平降低(P＜0.05).结论:STAT1 ASON雾化吸入能减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与STAT1被抑制后,炎症细胞在肺部浸润减轻,致炎因子和致纤维化因子分泌减少有关.     

ICAM-1和VCAM-1的结构与表达调控

细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)和血管细胞间粘附分子 - 1(VCAM- 1)属于免疫球蛋白超家族 (IGSF)成员。人 ICAM- 1基因定位于染色体 19p13.3～ 13.2区 ,长 15 .5 kb,其受体为淋巴细胞功能相关抗原 - 1(L FA- 1,CD11a/ CD18)和 Mac- 1;VCAM- 1基因定位于染色体 1p31～ 32区 ,长约 2 5 kb,其受体为极迟抗原 - 4 (VL A- 4 )和整合素α4β7。 ICAM- 1和 VCAM- 1的表达受 NF-κB、SP1、GATA、PKC、STAT- 1等相关的机制所调控     

厄贝沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏保护作用及对ICAM-1与VCAM-1表达的影响

目的:从影响细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的角度,探讨厄贝沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法:Wistar大鼠24只,随机分为对照组、模型组、药物组,每组8只。链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,药物组大鼠每日给予厄贝沙坦150mg/kg灌胃,持续8周。8周后抽血测空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr);测定24h尿微量白蛋白(mAlb),计算尿白蛋白排泄率(UAER)。处死Wistar大鼠,取其肾脏,计算肾脏肥大指数,用免疫组化方法检测ICAM-1,蛋白质印迹法(Westernblot)检测VCAM-1蛋白表达水平。结果:模型组和药物组的FBG、HbA1c、BUN、Scr均高于对照组,上述指标在模型组与药物组之间无统计学差异。模型组UAER高于对照组,而药物组则低于模型组。药物组ICAM-1与VCAM-1蛋白表达量低于模型组。结论:厄贝沙坦对实验性糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,其机制可能是通过抑制ICAM-1与VCAM-1在肾脏的表达来实现的。     

香烟提取物和腺病毒E1A基因对肺泡上皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨香烟提取物(CSE)致肺泡上皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的作用及腺病毒E1A基因的影响.方法:通过脂质体转染的方法将腺病毒E1A基因转染A549细胞,获取E1A阳性表达A549细胞,不同浓度的CSE活化,测定细胞ICAM-1的表达.结果:CSE显著增加A549细胞ICAM-1表达,且呈浓度依赖性;与未转染和对照质粒转染A549细胞相比较,CSE活化后E1A阳性表达A549细胞ICAM-1表达显著增加.结论:CSE能够诱导肺泡上皮细胞ICAM-1表达,而腺病毒E1A基因显著增加CSE所致的肺泡上皮细胞ICAM-1表达,提示腺病毒潜伏感染放大吸烟所致的气道炎症反应.     

ICAM—1反义寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞ICAM—1表达的影响

目的：探讨ＩＣＡＭ－１反应寡核苷酸对小鼠肾小管上皮细胞表达ＩＣＡＭ－１的影响，为利用ＩＣＡＭ－１反义核苷酸类药物治疗肾小管间质病变奠定基础。方法：小鼠ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸及其对照物参照文献合成并行全硫代磷酸化修饰。部分ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸在其５‘端作ＦＩＴＣ荧光标记。将ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸单独或脂质体转染试剂ＤＯＴＡＰ混合反转染至培养的肾小管上皮细胞之中，转染成功后加入ＩＬ－１β诱导细     

ICAM-1基因表达的调节

细胞间粘附分子-1(ICAM-1)是免疫球蛋白超家族的成员之一,是存在于多种细胞表面的诱导性细胞粘附糖蛋白.致炎因子、细胞应激、感染等主要通过激活ICAM-1基因的转录,增加ICAM-1的表达.NF-κB在激活ICAM-1启动子中起主要作用,其通过特异性的蛋白-蛋白的相互作用,同其它转录因子和共激活因子一起参与ICAM-1的表达调节.调节ICAM-1表达的主要细胞内信号通路包括PKC,MAPK,JAK/STAT等.     

焦油和尼古丁对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:观察焦油和尼古丁对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在表达的影响.方法:体外分离培养HUVECs,分别与不同浓度焦油(终浓度分别为1mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L和不同浓度尼古丁终浓度分别为(10-9 mol/L、10-7 mol/L、10-5 mol/L、10...     

缺氧和高糖对大鼠肾成纤维细胞ICAM-1mRNA表达的影响

目的:探讨缺氧和高糖对肾成纤维细胞(NRK)细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响。方法:将大鼠NRK分6组进行体外培养:(1)正常浓度葡萄糖组(常糖组):5.6mmol/L葡萄糖;(2)常糖+缺氧组:5.6mmol/L的葡萄糖+100μmol/L的CoCl2;(3)高糖A组:15mmol/L葡萄糖;(4)高糖+缺氧A组:15mmol/L葡萄糖+100μmol/L的CoCl2;(5)高糖B组:30mmol/L葡萄糖;(6)高糖+缺氧B组:30mmol/L葡萄糖+100μmol/L的CoCl2。分别于24h、48h取各组NRK采用RT-PCR检测ICAM-1mRNA表达水平。结果:与常糖组相比,高糖A组,高糖B组ICAM-1mRNA表达量逐渐升高(P<0.01),常糖+缺氧组、高糖+缺氧A、B组ICAM-1mRNA表达量也升高(P<0.01);高糖+缺氧A、B组ICAM-1mRNA表达量分别比高糖A、B组明显升高(P<0.01);高糖A、B组和常糖+缺氧组、高糖+缺氧A、B组48hICAM-1mRNA表达量均高于24h表达量(P<0.01)。结论:高糖和缺氧均可导致ICAM-1mRNA高表达,缺氧可能进一步增加高糖上调ICAM-1的表达。     

硫化氢抑制apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化中ICAM-1的表达

目的　探讨硫化氢(H2S)对apoE基因敲除小鼠(apoE-/-小鼠)动脉粥样硬化中细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)的调节作用。方法　6周龄雄性C57BL/6J和apoE-/-小鼠分为C57BL/6对照组、apoE-/-组、apoE-/-+硫氢化钠(NaHS)组和apoE-/-+炔丙基甘氨酸(PPG)组,每组各8只,普通饮食饲养10周。硫电极法测定血清中H2S的含量;ELISA法测定血清中ICAM-1的含量;荧光实时定量RT-PCR法测定主动脉组织中ICAM-1 mRNA的表达。油红O染色观察小鼠主动脉根部斑块面积的变化。结果 与C57BL/6J小鼠相比,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显下降(P 0.01),血清中ICAM-1的含量和主动脉组织中ICAM-1 mRNA的表达明显升高(P 0.01),主动脉根部出现明显斑块;给予NaHS后,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显升高(P 0.05),血清和主动脉组织中ICAM-1的表达明显降低(P 0.01和P 0.05),动脉粥样斑块明显缩小(P 0.05);给予PPG后,apoE-/-小鼠血清中H2S的含量明显降低(P 0.05),血清和主动脉组织中ICAM-1的表达明显增高(P 0.05和P 0.01),动脉粥样斑块明显增大(P 0.01)。结论　气体信号分子H2S可明显抑制动脉粥样斑块形成过程中ICAM-1的表达与分泌。     

氯沙坦对自发性高血压大鼠主动脉内膜ICAM-1和PAI-1表达的影响

目的 :比较早期雄性自发性高血压大鼠 (SHR)和正常雄性同周龄WistarKyoto大鼠 (WKY)主动脉内膜细胞间粘附分子 1(ICAM 1)和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的表达及氯沙坦对其的影响。方法 :将 2 0只雄性SHR随机分成二组 ,每组 10只 ,其中一组灌喂氯沙坦 2 0mg/kg/天 ,另一对照组给正常饮水 ,共 12周 ,并与WKY 10只比较。采用免疫组织化学方法检测三组大鼠主动脉内膜ICAM 1和PAI 1的表达。结果 :与WKY大鼠比较 ,SHR对照组主动脉内膜ICAM 1和PAI 1表达明显增高 ;经氯沙坦治疗 12周后SHR血压显著降低 ,主动脉内膜ICAM 1和PAI 1表达亦明显下降。结论 :氯沙坦在有效降压的同时也明显抑制SHR主动脉内膜ICAM 1和PAI 1的表达 ,提示氯沙坦作为血管紧张素II受体 1拮抗剂 (AT1 R)在抗高血压并发症发生中起一定的作用     

Keratinocyte growth factor (KGF) decreases ICAM-1 and VCAM-1 cell expression on bronchial epithelial cells

Activation of leucocytes during airway inflammatory reaction involves adhesion to bronchial epithelial cells (BEC), a process implicating specific interactions between glycoproteins with epithelial cell surface proteins, mainly intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1). In this study, the effect of keratinocyte growth factor (KGF), a growth factor involved in pulmonary epithelium repair, was evaluated on adhesion molecule expression with BEAS-2B cells and BEC and granulocyte adherence to BEAS-2B. The modulation by KGF of membrane and mRNA expression of ICAM-1 and VCAM-1 was studied on confluent cells stimulated or not with tumour necrosis factor-alpha (TNF) (200 UI/ml) or TNF and interleukin (IL)-4 (50 UI/ml and 10 ng/ml). Levels of soluble-(s)ICAM-1 and sVCAM-1 were measured by ELISA. Although moderately, KGF significantly decreased membrane ICAM-1 expression in unstimulated BEAS-2B cells (24% inhibition at 100 ng/ml) or in TNF- or TNF + IL-4-stimulated cells (22.5 and 18.7% inhibition, respectively). Treatment with KGF tended to decrease VCAM-1 expression in TNF- and TNF + IL-4-stimulated BEAS-2B (P = n.s. and P < 0.05, 14 and 15% inhibition, respectively). In primary culture of BEC, adhesion molecule expression was also reduced. ICAM-1 and VCAM-1 mRNA expression were also inhibited by KGF. Levels of sICAM-1 and sVCAM-1 were not significantly increased in supernatants from KGF-treated cells (30% and 24% increase at 100 ng/ml, respectively) compared to controls. Moreover, KGF decreased by 31% the adherence of neutrophils to TNF-activated BEAS-2B. In conclusion, KGF decreases ICAM-1 and VCAM-1 expression and neutrophil adherence in BEC. These suggest its involvement in the resolution of the inflammatory reaction.     

MCP—1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM—1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。     

实验性肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的 观察和研究肾小管间质纤维化过程中肾小管上皮细胞发生表型转化的现象及其形态特点。方法 结扎大鼠一侧肾静脉,制作大鼠肾小管间质纤维化模型,连续饲养25d。每5d杀检5只,对肾脏重点检查,未结扎肾静脉的对侧肾作为对照,采用光镜、透射电镜、偏振光显微镜及免疫组织化学方法[链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(sP)法]观察肾组织的病理变化以及肾小管上皮细胞的表型转化情况。结果肾静脉结扎侧肾逐渐出现肾小管萎缩,肾间质淋巴、单核细胞浸润和纤维化等肾小管间质纤维化的典型病变。免疫组织化学观察发现,随着病变的发展,损伤的肾小管上皮细胞角蛋白表达逐渐减弱,而a平滑肌肌动蛋白、波形蛋白、转化生长因子β1和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达逐渐增强,肾间质中也出现角蛋白阳性的间质细胞。透射电镜下可见肾小管上皮细胞内线粒体减少,内质网和微丝增多,并可见肾小管上皮细胞突破基底膜游离到肾间质中。天狼星红染色偏振光显微镜观察显示早期肾间质中Ⅲ型胶原增生为主,后期以Ⅰ型胶原为主。结论 在大鼠肾小管间质纤维化病变的发生和发展中,肾小管上皮细胞可转化为间质成纤维细胞,是成纤维细胞的来源之一。     

反义RNA对培养的肾小管上皮

目的:探讨骨调素(OPN)反义RNA对培养的肾小管上皮细胞骨调素表达的影响。方法:脂质体介导将表达OPN反义RNA的逆转录病毒重组载体转染大鼠肾小管上皮细胞系NRK52E细胞,建立稳定表达OPN反义RNA的肾小管上皮细胞克隆,以转染了表达OPN顺义RNA和空白逆转录病毒载体的肾小管上皮细胞克隆为对照,以表皮生长因子(EGF)为刺激剂,通过核酸酶保护分析(RPA),WesternBlot,ELISA和OPN生物活性分析检测上述克隆细胞的OPN表达。结果:OPN反义RNA仅被反义克隆细胞表达,反义克隆、顺义克隆和空白克隆细胞均有OPNmRNA的表达,EGF能增加它们OPNmRNA的表达水平,但不增加反义RNA或顺义RNA的表达水平;加或不加EGF的反义克隆细胞和不加EGF的空白克隆细胞无OPN蛋白的表达,加或不加EGF的顺义克隆细胞和加EGF的空白克隆细胞有OPN蛋白的表达。结论:OPN反义RNA能抑制肾小管上皮细胞OPNmRNA的翻译而抑制OPN蛋白的表达,但不抑制OPNmRNA的转录。     

单核巨噬细胞对肾小管上皮细胞的活化作用及其机制初探

目的:观察外周血单核巨噬细胞(MO/MAC)条件培养基(M-CM)对肾小管上皮细胞(RTEC)直接作用的生物学效应并探讨可能的作用机制。方法:应用正常人外周血M-CM刺激人近端肾小管上皮细胞(HK-2),以[³H]-TdR掺入法检测HK-2细胞DNA合成、Westernblot法检测骨桥蛋白(OPN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达、间接抑制ELISA法检测纤连蛋白(FN)分泌。进一步采用白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β₁(TGF-β₁)中和抗体进行拮抗。结果:①M-CM可促进HK-2细胞DNA合成、α-SMA表达及FN分泌。②TGF-β₁中和抗体(5mg/L)与M-CM同时作用于HK-2细胞,其α-SMA表达和FN分泌均明显低于M-CM单独作用组。③IL-10(20μg/L)与M-CM同时作用组的HK-2细胞,α-SMA表达和FN分泌亦明显低于M-CM组;IL-10预孵育MO/MAC组,HK-2细胞α-SMA表达也明显低于M-CM组。结论:单核巨噬细胞可直接诱导肾小管上皮细胞增殖、表型转化以及分泌细胞外基质增加;其分泌的TGF-β₁及炎性细胞因子可能参与介导上述效应。     

WT1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的抑制作用

目的观察WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,应用ASODN技术,将WT1-ASODN转染到SKOV3细胞中,利用MTT法检测WT1寡核苷酸的最适作用浓度和作用时间及WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的影响。结果脂质体介导的WT1反义寡核苷酸在体外能够明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论 WT1反义寡核苷酸能诱导卵巢癌细胞凋亡,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,可望成为一种卵巢癌临床有效的治疗方法。     

Use of ICAM-1 antibodies and antisense oligonucleotides to inhibit transmigration of neutrophils

Objective: The increase in adhesion molecule expression during the initial phase of inflammation leads to transmigration of neutrophils. Inhibition of this transmigration could decrease inflammatory response and tissue damage.Materials and methods: Uptake of fluorescein-labelled oligonucleotides, expression of ICAM-1 and neutrophil migration were studied using the bilayer of epithelial (H292) and endothelial (ECV-304) cell lines and neutrophils from peripheral blood of healthy volunteers.Results: The inhibition of ICAM-1 expression was time dependent for both cell lines, with inhibition of more than 50% after 48 h. Antisense oligos inhibited transmigration already after 4 h of incubation (6.6 ± 2.5% versus 18.6 ± 2.5% inhibition, p < 0.01). Antisense was more effective in preventing fMLP-induced neutrophil migration than ICAM-1 antibodies (88 ± 3.8% versus 67 ± 7% inhibition, p = 0.02).Conclusions: Antisense oligos cause a decrease in ICAM-1 expression and inhibit transmigration of neutrophils. However the effectiveness of antisense is higher than monoclonal antibodies, neither of them is able to block the migration completely. This suggests the existence of ICAM-1 independent mechanisms that are responsible for migration.Received 12 June 2003; returned for revision 9 Ocotober 2003; accepted by I. Ahnfelt-Rønne 14 November 2003     

反义寡核苷酸抑制缺氧/再给氧时内皮细胞细胞间粘附分子-1的表达

目的:探讨反义寡核苷酸(AS-ODN)对缺氧/再给氧(H/R)时内皮细胞细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:流式细胞仪测定肾小球血管内皮细胞在缺氧、再给氧及加入AS-ODN后ICAM-1表达的阳性百分率。结果:缺氧10h,肾小球血管内皮细胞ICAM-1的表达与对照组无显著性差异,再给氧6hICAM-1的表达明显高于正常,加入AS-ODN后,ICAM-1阳性细胞的百分率下降40.6%。结论:AS-ODN可以降低H/R时内皮细胞ICAM-1的表达。