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1.
干扰素α-2b对宫颈癌细胞HPV16 E6E7基因抑制作用的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的研究干扰素α-2b对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨干扰素α-2b对宫颈癌细胞SiHa的作用机制。应用RT-PCR半定量检测细胞内HPV16 E6E7 mRNA表达,观察干扰素α-2b对宫颈癌SiHa细胞中HPV16 E6E7 mRNA表达的影响。方法以不同浓度的人重组干扰素α-2b含药培养液作用于感染HPV16的人宫颈癌细胞系——SiHa细胞,并设立无药对照,通过MTT及流式细胞分析技术检测该药对细胞生长及增殖的影响;进行细胞凋亡检测并用RT—PCR法半定量检测对HPV16 E6E7基因表达的影响。结果经含有干扰素α-2b的培养液作用后,细胞数量减少,1000IU/ml的干扰素α-2b对细胞抑制作用最强;细胞周期各时相中,S期细胞所占比例明显减少;均可诱导细胞凋亡;均使细胞中HPV16 E6E7mRNA表达明显减少。结论干扰素α-2b不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过抑制HPV16 E6E7基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤目的。  相似文献   

2.
全酿酒酵母HPV16-E7疫苗的构建及免疫原性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的构建人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E7重组全酿酒酵母疫苗,评价疫苗的免疫效应。方法将HPV16 E7 cDNA亚克隆人酵母表达载体pYES2/NT,重组质粒转化酿酒酵母,经诱导表达、热灭活制备全酵母HPV16-E7疫苗,免疫C57BL/6小鼠。ELISA、MTT、LDH法分别检测疫苗诱导的细胞因子、脾淋巴细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答水平。结果全酵母疫苗能够有效表达HPV16-E7蛋白;疫苗小鼠免疫,能够刺激脾淋巴细胞增殖,并诱导出Th1型细胞因子和特异性CTL杀伤效应;免疫效果优于单纯HPV16-E7蛋白免疫(P〈0.01)。结论全酵母疫苗既能表达HPV16-E7蛋白,又能有效诱导特异性CTL免疫应答。研究结果为进一步进行疫苗抗肿瘤疗效研究,提供了实验基础。  相似文献   

3.
目的:构建HPV16早期基因E6/E7的反义重组质粒,探讨其对SiHa细胞的促凋亡作用。方法:将HPV16E6/E7基因片段反向克隆于真核表达载体pEGFP-C1并转染SiHa细胞,用RT-PCR方法检测转染后SiHa细胞E6、E7基因mRNA的表达,West-ernblot方法检测转染后E6/E7蛋白的表达,流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率。结果:成功构建携带HPV16E6/E7基因反义片段的真核表达载体,转染该质粒后,SiHa细胞E6、E7基因的mRNA和蛋白均明显下调;转染后细胞凋亡率为(59.3±11.3)%,明显高于转染空载体组[(9.4±1.8)%]和未转染组[(2.1±0.4)%](P<0.05)。结论:反义HPV16E6/E7基因可下调宫颈癌细胞中E6/E7癌基因的表达,诱导宫颈癌细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了实验依据。  相似文献   

4.
目的:研究hrHPV E6/E7 mRNA在宫颈癌联合筛查中的准确性,探索其用于宫颈癌联合筛查的临床价值。方法:选取2013年1月至2015年12月在青岛市市立医院和青岛市城阳区人民医院妇科门诊行宫颈癌机会性筛查的女性共6223例。根据宫颈筛查方法分组:宫颈液基薄层细胞学检查(LBC)+HC2组(LBC+HC2组);LBC+HPV分型组;LBC+hrHPV E6/E7 mRNA(LBC+E6E7组)。比较3种HPV+细胞学联检策略和细胞学单独筛查的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、阴道镜转诊率、CIN2+/CIN3+检出率及曲线下面积(AUC)。结果:LBC+E6E7联检CIN2+的灵敏度、特异度、PPV、NPV、阴道镜转诊率、CIN2+/CIN3+检出率分别为91.28%、95.50%、56.07%、99.43%、9.64%和5.40%;CIN3+分别为93.10%、92.06%、19.29%、99.85%、9.64%和1.86%。3种联合筛查策略之间比较,上述指标均无统计学差异(P0.05)。LBC+E6E7联检CIN2+/CIN3+的AUC分别为0.969和0.973,大于LBC单筛,差异有统计学意义(P0.05)。结论:hrHPV E6/E7 mRNA与细胞学联合筛查的准确性与HC2、HPV分型+LBC联检无明显差异,可作为HPV-DNA的替代用于宫颈癌机会性筛查的联检方案。  相似文献   

5.
目的:通过对细胞学检测结果为意义不明确的不典型鳞状细胞(ASCUS)患者进行随访,探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA检测对其分流管理价值。方法:2015年12月至2017年8月在郑州大学第三附属医院行宫颈液基细胞学检查(TCT)的患者共40013例,对其中符合纳入标准的297例ASCUS患者,同时行HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA检测及阴道镜下活检,并对活检病理阴性且符合纳入标准的119例患者随访至少1年,分析HPV E6/E7 mRNA检测对ASCUS患者的分流管理价值。结果:40013例患者经TCT诊断结果为阳性者共1191例,其中ASCUS 734例,其检出率为1.83%。297例ASCUS患者阴道镜下活检病理结果为正常者136例,LSIL 108例,HSIL 50例,宫颈癌3例。HPV E6/E7 mRNA检测ASCUS中HSIL及宫颈癌的敏感性(88.68%)与HPV DNA检测(98.11%)比较,差异无统计学意义(P0.05),而特异性(42.21%)高于HPV DNA检测(17.21%),差异有统计学意义(P0.001)。1年后随访结果:TCT结果正常且高危型HPV阴性者82例,高危型HPV阳性和(或)TCT结果≥正常但经阴道镜检查评估并行子宫颈活检组织病理检查诊断为正常者17例、LSIL 14例、HSIL 6例。HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测相比较,预测1年后HSIL的敏感性均为100%,而特异性分别41.59%、12.39%,差异有统计学意义(χ~2=24.45,P0.001)。HPV E6/E7 mRNA检测诊断病变进展的ROC曲线下面积(AUC)为0.712,高于HPV DNA检测(AUC=0.563)。结论:ASCUS的病理活检结果分布于宫颈炎至宫颈癌的各个阶段,HPV E6/E7 mRNA检测不仅能检出其中的HSIL,而且可预测宫颈病变的进展。  相似文献   

6.
目的评估Aptima HPV E6/E7 mRNA检测技术在宫颈癌筛查人群和临床就诊患者中检出宫颈癌及癌前病变的效果。方法选取我国山西省长治市3个三甲医院参加宫颈癌筛查的21~70岁妇女及门诊病人共557人作为研究对象,采用LBC与HPV E6/E7 mRNA检测技术对宫颈细胞学标本进行检测,以病理学结果作为诊断金标准,评价两种方法检测宫颈癌及癌前病变的临床效果。结果 HPV E6/E7 mRNA阳性率随着细胞学和病理病变级别的升高而升高。在CIN2+/CIN3+中,HPV E6/E7 mRNA检测的灵敏度与特异度均高于LBC检测;HPV E6/E7mRNA检测的ROC曲线下面积均大于LBC检测。结论 HPV E6/E7 mRNA检测出宫颈癌及癌前病变的能力相比于LBC检测更具优越性。  相似文献   

7.
目的:探讨HPV16 E7~(44-62)多肽对脐血DC-CIK细胞分化和功能调节,以及其对宫颈癌CaSki细胞的体外杀伤效应。方法:采集脐血单个核细胞在体外诱导成DC和CIK细胞,HPV16 E7~(44-62)多肽负载DC与CIK细胞以细胞比1∶5共同培养。流式细胞术(FCM)分析细胞表型。RT-qPCR及Western blot法检测T-bet、GATA-3及Foxp3表达水平。ELISA法检测共培养前后CIK细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10水平。CCK-8法检测体外DC-CIK细胞抗宫颈癌Caski细胞的细胞毒杀伤效应。结果:DC及CIK细胞体外诱导成功。共培养6天,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD3+CD56+、CD3+CD8+、CD3+CD4+细胞比例明显高于DC-CIK组及CIK组(P0.05),DC-CIK组较CIK组高(P0.05);HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的CD4+CD25+(Treg)阳性率明显低于DC-CIK组及CIK组(P0.05)。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组的T细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3表达与DC-CIK组及CIK组比较,差异有统计学意义(P0.05),其中T-bet表达最高,而GATA-3和Foxp3表达最低。HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组细胞上清液中IFN-γ、IL-12、IL-10与其余两组比较,差异有统计学意义(P0.05),IFN-γ、IL-12表达最高,IL-10表达最低。在各效靶比下,HPV16 E7~(44-62)-DC-CIK组对宫颈癌CaSki细胞杀伤率最高(P0.05)。结论:负载HPV16 E7~(44-62)多肽的DC可增强同源CIK细胞体外抗宫颈癌的免疫作用,本研究为宫颈癌DC-CIK细胞免疫治疗提供新的致敏方法。  相似文献   

8.
宫颈癌及癌前病变组织中Notch1及HPV16 E6/E7表达的研究   总被引:12,自引:0,他引:12  
目的 探讨Notch1受体和人乳头瘤病毒16感染在宫颈癌前病变和宫颈癌发生发展中的作用。方法 采用免疫组化SP法检测18例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和35例宫颈癌标本中Notch1受体及HPV16E6/E7蛋白的表达,以34例正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作为对照。比较各组间Notch1及HPV16E6/E7表达的差异,并分析Notch1与HPV16E6/E7表达的关系。结果 Notch1蛋白在细胞胞浆、胞核及胞膜中表达,HPV16E6/E7在细胞核中表达。从对照组到CIN组到宫颈癌组,Notch1及HPV16E6/E7的表达均逐渐增强(P〈0.01)。Notch1的阳性表达与宫颈癌不同分期、分化程度、淋巴结是否转移无关(P〉0.05)。在宫颈癌组中Notch1与HPV16E6/E7的表达均呈正相关性(P〈0.01)。结论 Notch1表达与HPV16E6/E7感染可能与CIN及宫颈癌的发生密切相关,两者在宫颈癌的发病机制中可能协同发挥作用。  相似文献   

9.
目的 为了了解人乳头状瘤病毒 (Humanpapillomavirus ,HPV) 1 6型的E6 /E7基因在细胞恶性转化中所起的作用 ,利用腺病毒伴随病毒载体 (AAVHelper -FreeSystem)构建和表达人乳头状瘤病毒 1 6型E6 /E7基因。方法 在pLXSN1 6E6E7质粒中经PCR扩增回收HPV 1 6E6E7基因片段 ,连接于T载体上进行测序 ,将正确的HPV 1 6E6E7插入pAAV -IRES -hrGFP质粒 ,协同pAAV -RC质粒和pHelper质粒共转染HEK 2 93细胞 ,包装表达HPV 1 6E6E7基因的重组腺病毒伴随病毒 ,收获病毒 ,并检测病毒的感染效率。结果 在包装细胞系HEK 2 93细胞中能形成较高感染效率的腺病毒伴随病毒 ,激光共聚焦检测可发现HEK 2 93细胞内有绿色荧光蛋白表达 ,HEK 2 93细胞经PCR可扩增出特异性的HPV 1 6E6E7基因片段 ,经流式细胞仪检测重组病毒的感染效率为71 3%。结论 携带人乳头状瘤病毒 1 6型E6E7基因的腺病毒伴随病毒可感染细胞 ,并在细胞内表达 ,可望用于宫颈癌病因学的研究  相似文献   

10.
目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型检测阴性的子宫颈腺癌中HPV E6/E7mRNA的表达情况,为子宫颈腺癌的早期筛查提供新思路。方法:选择2019年1月至2021年6月于潍坊医学院附属医院和山东大学齐鲁医院就诊的HPV分型检测阴性的15例子宫颈腺癌患者为研究组,同期HPV分型检测阳性的15例子宫颈腺癌患者为对照组。采用高危型HPV E6/E7mRNA原位杂交(RISH)检测两组患者病变组织中HPV E6/E7mRNA的表达情况,同时采用免疫组化法(IHC)检测p16和Ki-67的表达情况。结果:与对照组比较,研究组HPV E6/E7 mRNA的阳性表达(73.3%vs.100.0%)、p16的阳性表达(80.0%vs.100.0%)及Ki-67的阳性表达(86.7%vs.100.0%),差异均无统计学意义(P>0.05)。研究组中HPV E6/E7mRNA表达阴性的4例患者病理类型均属于非HPV相关子宫颈腺癌(胃型腺癌2例,微偏腺癌2例),HPV E6/E7mRNA在HPV相关和非HPV相关中的阳性占比分别为100.0%(26/26)和0(0/4);其中1例普通浸润型腺癌HPV...  相似文献   

11.
徐倩  谭毅  张倩  罗文萍  谭冬梅 《生殖与避孕》2010,30(1):15-20,25
目的:探讨骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法:①采用RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5~8日小鼠子宫中的表达情况;②原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮(P4)、E2和cAMP诱导蜕膜化的同时分别加入1ng/ml、10ng/ml、100ng/mlBMP-7重组腺病毒,Westernblotting检测催乳素(PRL)的表达。结果:①BMP-7mRNA在妊娠第5~8日小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织(P<0.01),且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强(P<0.05)。BMP-7蛋白在妊娠第5日、第6日分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带,第7日、第8日时主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。②在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组的催乳素蛋白表达均显著增加(P<0.01),其中10ng/ml组增加最明显(P<0.01)。结论:BMP-7蛋白具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。  相似文献   

12.
目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者中肾素血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)与胰岛素抵抗(IR)及脂代谢的关系。方法 PCOS患者根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)分为IR组(HOMA-IR≥2.69,n=80)与非IR组(NIR组,HOMA-IR2.69,n=67),另以25例正常月经周期女性作为对照组。采用酶联免疫法(ELISA)测定外周血血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7[Ang-(1-7)]的水平,化学发光法测定血清性激素、空腹胰岛素(FINS)、血脂水平。结果 (1)IR组与NIR组外周血中AngⅡ和Ang-(1-7)水平均高于对照组(P0.05),IR组与NIR组间AngⅡ水平无统计学差异(P0.05),但Ang-(1-7)水平IR组低于NIR组(P0.05);(2)IR组外周血中AngⅡ/Ang-(1-7)比值高于NIR组及对照组(P0.05),NIR组AngⅡ/Ang-(1-7)比值较对照组无统计学差异(P0.05);(3)Pearson相关分析显示,IR组外周血中Ang-(1-7)与FINS、HOMA-IR、体质量指数(BMI)呈负相关,与卵泡刺激素(FSH)呈正相关(P0.05);NIR组外周血中Ang-(1-7)与甘油三酯(TG)呈负相关,与高密度脂蛋白(HDL)呈正相关(P0.05)。结论 PCOS患者外周血存在AngⅡ、Ang-(1-7)亢进现象;AngⅡ/Ang-(1-7)比值失衡与PCOS患者的IR及代谢紊乱有关,Ang-(1-7)水平的提高可能改善IR及代谢紊乱。  相似文献   

13.
目的 探讨宫颈癌中三联脆组(FHIT)蛋白表达与HPV16 E6、E7蛋白表达的相关性.方法 采用免疫组化SP法对四川大学华西第二医院1999年1月至2003年2月的15例正常宫颈、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)以及61例浸润性宫颈鳞癌组织标本进行FHIT蛋白、HPV16E6、HPV16 E7蛋白表达的检测.结果 (1)在正常宫颈上皮、CINI~II、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中,FHIT 蛋白阳性表达率分别为100%(15/15)、71.43%(10/14)、36.36%(4/11)、14.75%(9/61),P<0.05;HPV16E6蛋白阳性表达率分剐为0(0/15)、7.14%(1/14)、36.36%(4/11)、59.02%(36/61),P<0.05;HPV16E7蛋白阳性表达率分别为20.00%(3/15)、42.86%(6/14)、63.64%(7/11)、57.38%(35/61),P>0.05.(2) 宫颈病变组织中FHIT蛋白的阳性表达与HPV16E6蛋白阳性表达呈负相关(P<0.0l,r=-0.449),与HPV16E7蛋白表达无相关性(P>0.05).结论 宫颈癌中FHIT 蛋白的异常表达与HPV16 E6蛋白表达有关,FHIT蛋白和HPV16E6蛋白的联合检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.  相似文献   

14.
目的:探讨输卵管上皮内N-乙酰葡萄糖胺-6-转磺酶(CHST2)和岩藻糖基转移酶7(Fuc T-VII)表达与输卵管妊娠发生的关系。方法:采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR(RTPCR)的方法,检测输卵管妊娠患者的输卵管胚囊着床部位组织(EP-2组,n=23),输卵管胚囊着床旁部位组织(EP-1组,n=23),正常输卵管组织(CT组,n=16)的CHST2和Fuc T-VII的表达情况。结果:免疫组织化学法检测到输卵管妊娠胚囊着床部位CHST2和Fuc T-VII表达明显上调,与正常组相比差异有显著统计学意义(P0.05)。RT-PCR方法检测CHST2 m RNA和Fuc T-VII m RNA在输卵管妊娠胚囊着床部表达水平高于正常组,差异有显著统计学意义(P0.05)。结论:L-选择素与其配体相结合的机制可能参与了输卵管妊娠的发生。  相似文献   

15.
20(S)-人参皂苷Rg3对卵巢癌生长抑制作用的实验研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨过敏性紫癜(HSP)患儿尿表皮生长因子(EGF)质量浓度检测及其对早期肾损害的诊断价值。 方法91例HSP患儿为山东省青岛市妇女儿童医疗保健中心2003 01—2004 12住院确诊患儿,采用双抗体夹心ELISA方法检测HSP患儿和30例正常对照组儿童的尿EGF和尿视黄醇结合蛋白(RBP)质量浓度,同时采用全自动特殊蛋白分析仪测定尿微量白蛋白(MA)质量浓度。 结果(1)HSP患儿尿EGF质量浓度\[(78.59±18.09)ng/mL\]明显高于正常对照组\[(29.30±13.92)ng/mL\],差异有显著性(t值为13.64,P<0.01)。HSP各临床分型间比较发现紫癜肾型尿EGF质量浓度\[(98.31±17.68)ng/mL\]分别高于其它临床型:皮肤型\[(78.76±12.66)ng/mL\]、腹型\[(77.16±11.77)ng/mL\]、关节型\[(76.49±17.45)ng/mL\]、混合型\[(77.71±13.49)ng/mL\],差异均有显著性意义(P均<0.05),而其余各临床分型间比较差异无显著性(P均>0.05)。(2)HSP患儿尿MA质量浓度为(43.21±10.23)mg/L,明显高于正常对照组\[(6.41±2.86)mg/L\],两者比较差异有显著性(t′=25.91,P<0.01)。(3)HSP患儿尿RBP质量浓度为(46.8±20.9)ng/mL,明显高于正常对照组\[(12.8±4.8)ng/mL\],差异有显著性(t′=11.98,P<0.01)。(4)91例急性期受检患儿中尿常规异常者14例(15.38%),尿MA升高者37例(61.67%),尿RBP升高者45例(75%),尿MA和(或)RBP升高者51例(85%),尿EGF升高者84例(92.3%),尿EGF阳性率与文献报道肾活检的相仿。 结论HSP患儿尿EGF、RBP、MA质量浓度均明显增高,EGF在HSP伴有肾损害者早期升高尤为明显,考虑EGF增高可能与HSP病理改变程度有关,因此,EGF增高可作为HSP早期肾损害的敏感指标之一。  相似文献   

16.
采用常规染色体制片和G 分带技术对20例(对)习惯性流产、早产、死产和分娩畸形儿的夫妇进行细胞遗传学检查,其中四例具有染色体异常。例一,夫妇年龄30岁以下,染色体均正常,生一先天愚型女孩,核型为(47,xx,+21)。例二,妻子和妻母均为罗伯逊21/22易位携带者,核型为[45,xx,-21,-22,+t(21q 22q)]/46,xx。例三,丈夫有D 组染色体断裂,生一男性死婴,患先天鱼鳞癣症,具有一条似C 组近中着丝点异常染色体。例四,妻子连续三次早死产,部分细胞具有一条C 组染色体长臂有增加的异常染色体。上述检查结果说明:在遗传咨询中,对有流产、早死产史的夫妇进行染色体检查是必要的。  相似文献   

17.
血管紧张素-(1-7)是肾素-血管紧张素系统(RAS)中具有重要生物学效应的终末活性产物之一,除在心血管和肾脏系统发挥作用外,血管紧张素转化酶2-血管紧张素-(1-7)-MAS受体这一新代谢途径在生殖系统中也占据重要地位。血管紧张素-(1-7)及其受体MAS广泛存在于女性的卵巢、子宫内膜以及妊娠妇女的胎盘、脐带中,并可能在性激素合成、卵泡发育成熟、子宫内膜蜕膜化、胚胎种植和维持妊娠时期血压和血容量正常的过程中发挥重要作用。这一系统与男性生殖功能也有密切的关系。  相似文献   

18.
19.
以醛为原料,在Burton等合成(±)-11-去氧前列腺素F_(1α)方法的基础上,合成了(±)-11-去氧前列腺素F_(1α)的16-苯氧基-和一些ω-苯基衍生物,并用仓鼠作了抗生育活性的研究。以仓鼠子宫重不少于350mg,无着床点和无仔胎为抗生育有效指标。结果显示,11-去氧-16苯氧基-17,18,19,20-4种去甲前列腺素F_(1α)(下面简称PGF_(1α))抗生育活性的半数有效量(ED_(50))与PGF_(2α)相等;-11-去氧-17苯基-18,19,20-3种去甲PGF_(1α)的抗生育活性是PGF_(2α)的1/3,但比相应的16-,18-苯基化合物强。I.C.I作者们发现,除16-苯基化合物  相似文献   

20.
作者曾报道过(±)-11-脱氧16-苯氧 GF_(1α)同类物对子宫兴奋作用的构效关系。本文报道(±)-11-脱氧-16-苯氧 PGE_1类化合物的研究结果。这类化合物都是侧链上有不同的取代基,其中,以带有羧基的化合物和带有伯醇和叔醇的化合物最为重要。作者选用交配过的大鼠和正常小白鼠进行实验。用妊娠7~9天的大鼠,以乌拉坦麻醉之。用Ringer-Locker 氏液灌流子宫,由此产生的波动  相似文献   

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