双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

目的 比较双色银染原位杂交(DSISH)与荧光原位杂交(FISH)两种技术在胃癌HER2检测中的优缺点,评价DSISH用于胃癌患者HER2基因扩增状态检测的可行性.方法 收集2009年1月至3月在四川大学华西医院行根治性手术的原发性胃或胃食管交界处腺癌80例,行全自动免疫组织化学(IHC)染色检测HER2蛋白表达,所有标本行FISH和全自动DSISH检测HER2基因状态,比较不同检测方法之间的符合率.结果 DSISH和FISH初检均有5例失败,经重复检测后结果满意.IHC检测3+的13例中DSISH检测12例、FISH检测11例为HEB2基因扩增;IHC检测2+的6例中DSISH、FISH检测均有1例为基因扩增;IHC检测1+的18例中DSISH、FISH检测均有2例为基因扩增;IHC检测为0的43例中DSISH、FISH检测均无基因扩增.80例原位杂交病例中,仅1例检测结果不一致(DSISH有基因扩增而FISH无基因扩增),两种方法的总体符合率为98.8%(79/80,κ=0.958,P＜0.01).结论 DSISH技术用于胃癌HER2基因检测结果与FISH符合率高.DSISH与FISH检测各有优缺点,DSISH更具有可行性和实际应用价值.

Abstract：

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

双色银染原位杂交与荧光原位杂交检测胃癌患者HER2基因状态

Objective To investigate the advantages and disadvantages of dual-color silverenhanced in-situ hybridization(DSISH)and fluorescence in-situ hybridization(FISH)for determination of HER2 gene status in gastric carcinoma and to evaluate tlle feasibility of DSISH.Methods Eighty cases of primary gastric or gastroesophageal junction adenecarcinomag diagnosed and treated surgically from January to March.2009 at the West China Hospital were enrolled in the study.Automated immunohistochemistry (IHC)staining,FISH and automated DSISH were carried out to detect the HER2 status,respectively,and the concordance ofthe three techniques was then evaluated.Results DSISH and FISH failed initially,but repeated detection Was successful in 5 eases.Gene amplification was detected in 12/13 IHC 3+ cases in DSISH and in 11/13 IHC 3+ cases in FISH.In 6 IHC 2+cages, the amplification rate was both 1/6;in 18 IHC 1+cases.the amplifieation rate was both 2/18.No amplification Was observed in 43 IHC 0 cases.Only one of the 80 cases showed discrepancy.and tIlerefore the overall concordance between FISH and DSISH Wag 98.8%(κ=0.958,P＜0.01).Conclusions DSISH represents a novel approach for the determination of HER2 status in gastric carcinoma, and the overall concordance between DSISH and FISH is excellent.Despite their advantages and disadvantages.DSISH is more feasible and practical for routine application in surgical pathology.     

荧光原位杂交检测HER2的一些优点

2006年,美国临床肿瘤学会(ASCO)和美国病理学医师学院(CAP)联合发布了乳腺痛HEB2临床榆测指南(以下简称ASCO/CAP指南)[1],对HER2检测所涉及的相关问题进行了定义和规范.该指南中指出目前没有评价HER2水平的金标准,对免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)两种检测方法尤意推荐哪一种更好.     

1170例女性乳腺癌HER2基因状态的荧光原位杂交结果分析

目的 以大样本量准确地检测乳腺浸润性导管癌的HER2基因各种异常类型及其频率.方法 采用PathVysionTM探针试剂盒,以荧光原位杂交(FISH)方法,分析1170例拟采用曲妥珠单抗治疗或相关化疗的女性乳腺癌患者石蜡切片标本的HER2基因拷贝状态.结果 直接用FISH分析的1170例标本中,408例(34.87%)阴性,762例(65.13%)阳性,其中信号成簇扩增者87例,占全部阳性病例的11.42%;其余675例中,低度扩增159例(23.56%),中度扩增422例(62.52%),高度扩增94例(13.93%).1170例中,FISH结果为临界值(结果不确定)的14例(1.20%),其中比值为1.8-2.0的HER2阴性临界者1.23%(5/408),比值为2.0-2.2的HER2阳性临界者1.18%(9/762);17号染色体非整体性发生率为73.00%(854/1170),其中亚二体性为22.65%(265/1170),低多体性为38.38%(449/1170),高多体性为11.97%(140/1170);17号染色体多体性50.34%.阳性762例中,二体性182例(23.88%),亚二体性184例(24.15%),低多体性300例(393.37%),高多体性96例(12.60%);17号染色体多体性51.97%.阴性408例中,二体性134例(32.84%),亚二体性81例(19.85%),低多体性149例(36.52%),高多体性44例(10.78%).17号染色体多体性47.30%.HER2基因单等位基因缺失者占1170例之2.39%,17号染色体单体性在FISH阳性病例中占5.00%(38/762),在FISH阴性病例中占4.41%(18/408);HER2比值<1.5者占1170例之32.30%,占FISH阴性408例之92.65%;比值介于1.5-2.2之间的占9.23%(108/1170).结论 经临床筛选出拟进行生物靶向及相关治疗的中国内地女性乳腺癌患者FISH检测HER2扩增率高,其中以HER2基因中度扩增为常见类型;17号染色体非整体性,尤其是17号染色体多体性十分常见,其意义值得关注.     

荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态

目的 探讨荧光原位杂交（FISH）,与免疫组织化学（IHC）染色（3＋）和（2＋）检测HER2基因状态的结果的一致性、导致两者差异的可能原因及FISH检测HER2基因状态的必要性和可行性。方法 采用PathVysion^TM探针试剂盒,以FISH方法,对28例IHC EnVision法染色分别为（3＋）、（2＋）、（1＋）和阴性（-）的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。结果 HER2表达（3＋）的12例标本中,10例HER2基L大1扩增,其中2例为17号染色体多体,另2例无扩增的病例均为多体;IHC为（2＋）的10例标本中,7例为HER2基因扩增,其中1例为多体,另3例无扩增病例中2例为多体;IHC为（1＋）的3例标本均无HER2基因扩增,其中1例为多体;IHC（-）的3例标本均无基因扩增,其中1例为多体。结论 IHC是初步筛查HER2状态的首选方法;因IHC（2＋）与FISH检测结果差异较大,所以这类患者应做FISH确诊;IHC（3＋）存在假阳性,主要原因可能是由于17号染色体非整倍体,必要时这类患者也应做FISH。     

应用微机处理聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色图像结果

聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)是核酸研究中的重要实验技术。以 PAGE为基础的聚合酶链反应结合单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)技术已成为筛查基因突变的基本方法〔1 - 3〕,特别是以硝酸银染色显示结果的非同位素 PCR-SSCP技术受到国内科研工作者的喜爱〔4,5〕。银染色使凝胶中的 DNA条带肉眼可见 ,因此银染凝胶片是重要的原始资料 ,常用吸水纸〔4〕将凝胶制成干胶片后保存 ,拍照记录结果 ,但较为麻烦。最近我们在采用银染色 PCR- SSCP技术筛检胃癌组织 p5 3基因突变时 ,直接应用微机对 PAGE银染色图象结果进行处理和保存 ,简便…     

原位杂交染色的经验

近年来 ,分子生物学技术正以惊人的速度渗入医学和生物学的各个领域 ,原位杂交技术被广泛应用于医学科研中 ,但在具体实验过程中常常会遇到脱片、背景颜色深 ,着色不理想等问题 ,本实验组在实验过程中总结了一些经验 ,以供参考。1　材料与方法玻片处理 :将玻片洁净后用锡纸包好     

显色原位杂交检测乳腺癌HER2基因扩增的应用价值

目的评估显色原位杂交（CISH）技术在检测乳腺癌标本中HER2基因扩增的应用价值。方法分别采用免疫组织化学（IHC）EnVision和CISH两种方法,检测165例乳腺癌中HER2蛋白表达及HER2基因扩增的情况。结果（1）IHC检测HER2蛋白表达阴性者107例,表达阳性1＋者24例,CISH均未检测到HER2基因扩增;（2）IHC检测HER2表达3＋者22例,CISH检测中21例呈现HER2基因的高倍扩增,仅1例呈低倍扩增,HER2基因高倍扩增及其蛋白表达之间的符合率为95．5％;（3）IHC检测HER2表达2＋者12例,CISH检测有3例HER2基因呈高倍扩增,6例呈低倍扩增,3例无扩增。结论CISH在检测HER2基因扩增与IHC检测的结果具有较高的一致性和敏感性,可以作为一种检测乳腺癌HER2基因状况的方法。     

双探针显色原位杂交技术检测HER2基因的应用

HER2是调节细胞生长过程中起关键作用的跨膜蛋白,编码基因定位于17q21.乳腺癌患者中,约20%～30%存在HER2基因或蛋白的过表达,导致肿瘤细胞过度增殖,使肿瘤的恶性程度远高于HER2未过度表达的患者.近年来,HER2的状态被公认为是判断乳腺癌预后风险和决策靶向治疗的重要指标.     

乳腺癌HER2与TOP2A的表达及其相关性

目的 探讨乳腺癌患者HER2与TOP2A基因及蛋白的表达情况及其表达的相关性。 方法 采用免疫组织化学方法与荧光原位杂交（FISH）方法,检测58例乳腺癌中HER2及TOP2A的基因及蛋白表达情况,并分析其相关性。 结果 58例乳腺癌患者,HER2评分：0分11例（11/58,19.0%）,1⁺19例（19/58,32.8%）,2⁺13例（13/58,22.4%）,3⁺15例（15/58,25.8%）;TopoⅡα评分：0分28例（28/58,48.3%）,1⁺22例（22/58,37.9%）,2⁺8例（8/58,13.8%）。HER2基因扩增19例（19/58,32.8%）,HER2基因无扩增39例（39/58,67.2%）;TOP2A基因扩增11例（11/58,19.0%）,TOP2A基因无扩增47例（47/58,81.0%）。免疫组织化学方法检测HER2与FISH检测HER2的结果明显相关,其相关系数r_s=0.80（P<0.05）;免疫组织化学方法检测TopoⅡα与FISH检测TOP2A结果相关,其相关系数r_s=0.50（P<0.05）;FISH检测HER2与TOP2A的结果明显相关,相关系数r_s=0.69(P<0.05)。 结论 HER2和TOP2A在乳腺癌中的扩增具有高度一致性,TOP2A的扩增及表达可能依赖于HER2的扩增及表达。     

HER2状态与脑膜瘤分级及复发的相关性

目的 探讨HER2、细胞增殖指标Ki-67、胸苷激酶1(TK1)与脑膜瘤分级和良性脑膜瘤复发的相关性.方法 按2007年WHO神经系统肿瘤分类分级标准选取良性未复发的脑膜瘤、不典型脑膜瘤及恶性脑膜瘤石蜡标本各20例,并选取间期良性复发的脑膜瘤石蜡标本20例,将实验对象分为4组:良性非复发组、良性复发组、不典型组及恶性组.采用免疫组织化学MaxVision法对4组石蜡切片进行HER2、Ki-67、TK1蛋白的检测;并运用双色荧光原位杂交(FISH)法检测HER2蛋白表达阳性样本的HER2基因扩增情况.结果 免疫组织化学:(1)良性非复发组、良性复发组、不典型组和恶性组脑膜瘤的HER2阳性的例数分别为3例(15%)、6例(30%)、7例(35%)和10例(50%),随恶性程度增加,HER2蛋白阳性率升高(P<0.05);良性复发组HER2阳性率高于良性非复发组(P<0.05);(2)良性非复发组Ki-67和TK1的标记指数(U)均分别低于不典型组和恶性组(P<0.05);不典型组低于恶性组(P<0.05),随着恶性程度增高,Ki-67、TK1 LI升高;且良性复发组高于良性非复发组(P<0.05);(3)HER2与Ki-67、TK1均呈正相关(均P<0.01),Ki-67与TK1呈正相关(P<0.05).FISH法:(1)在26例HER2蛋白阳性表达的脑膜瘤组织中HER2/neu基因的扩增率为26.9%(7/26);HER2蛋白表达3+、2+者HER2/neu基因扩增比例分别为3,/4和4/6,均多于1+者(均P<0.01),3+者与2+者比较差异无统计学意义(P>0.05).(2)26例HER2蛋白阳性表达的脑膜瘤组织中9例存在17号染色体的非整倍性(34.6%),但HER2蛋白表达1+、2+、3+者间17号染色体的非整倍性出现率差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 HER2阳性且Ki-67或TK1 LI高提示脑膜瘤恶性程度较高或复发可能性较大.脑膜瘤组织中存在HER2/neu基因的扩增.HER2、Ki-67和TK1蛋白可能可以作为临床判断脑膜瘤生物学行为的参考指标.     

亮视野原位杂交技术在乳腺癌HER2检测中的应用

随着乳腺癌分子发病机制的快速发展,乳腺癌的治疗策略发生了极大变化.个体化治疗,尤其是分子靶向治疗的快速发展使得组织分子靶点的检测成为关键环节.分子检测需求量的增加使得多种原位杂交技术应用于临床实验室.亮视野原位杂交在这方面有很多优势,检测乳腺癌HER2基因状态已成为亮视野原位杂交技术发展的主要推动力.     

亮视野原位杂交技术在乳腺癌HER2检测中的应用

随着乳腺癌分子发病机制的快速发展,乳腺癌的治疗策略发生了极大变化.个体化治疗,尤其是分子靶向治疗的快速发展使得组织分子靶点的检测成为关键环节.分子检测需求量的增加使得多种原位杂交技术应用于临床实验室.亮视野原位杂交在这方面有很多优势,检测乳腺癌HER2基因状态已成为亮视野原位杂交技术发展的主要推动力.     

免疫金—银染色和S—P染色结果分析

免疫金－银染色和Ｓ－Ｐ染色结果分析李莲花林建树免疫金－银染色（ＩＧＳＳ）和链菌素亲生物蛋白－过氧化酶连结法（Ｓ－Ｐ）系近年来发展起来的两种新的免疫组化方法，两者均可用于石蜡切片、冰冻切片和细胞涂片等，文献报道其敏感性优于ＰＡＰ和ＡＢＣ等其它免疫组化方...     

乳癌组织HER－2／neu原位杂交与c－erbB－2蛋白表达

乳癌组织ＨＥＲ－２／ｎｅｕ原位杂交与ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达皋岚湘，丁华野，邓永江，吴霞研究发现乳癌组织存在ｎｅｕ原癌基因，且与患者预后差有关￣［１～７］。国内用ｃ－ｅｒｂＢ－２单克隆抗体检测乳癌ｎｅｕ基因已陆续见报道，但尚未见到有关分子方面的研究。...     

2种嗜银染色改进法的应用

在以往的嗜银染色中由于染色时间长、操作较为复杂,制约了这种技术的广泛应用。我们经复习文献发现２种改进法既可保证染色结果又能缩短染色时间。为了更好地了解和掌握这２种方法,我们作了应用染色实验,并根据条件对原方法稍作修改,现报道如下。１　材料和方法１１　材料　选择已确诊的１０例肿瘤,其中肺类癌３例,甲状腺髓样癌４例,嗜铬细胞瘤３例。标本经常规处理后切片,厚４μｍ。切片经Ｇｒｉｍｅｌｉｕｓ方法证实有嗜银细胞存在,然后应用下列方法进行实验。１２　方法１２１　Ｓｔａｐｌｅｓ煮沸法　用煮沸的双蒸馏水…     

HER2与血管新生

受体酪氨酸激酶HER2是癌基因Her2的编码产物 ,激活后可通过MAPK ,AKT等途径促进癌细胞的生长、增殖 ;通过上调VEGF等促血管新生因子和下调TSP 1等抑制血管新生因子的表达 ,促进血管新生。HER2的单克隆抗体—赫赛汀 (Herceptin)的抗血管新生、抗肿瘤生长疗效显著 ,有良好的临床应用前景     

双色银染原位杂交法检测乳腺癌HER-2基因扩增

正目前,HER-2基因扩增检测的主要方法是荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法。FISH可作为检测HER-2基因扩增的"金标准",但其存在荧光淬灭快,且需要在暗室荧光显微镜下观察以及染色切片保存周期较短,不能用于回顾性研究等问题。针对这些问题,现介绍一种新的观察乳腺癌HER-2基因扩增的方法即双色银染原位杂交法(dual-color silver-enhanced in-situ hybridization,DSISH)。