CpG-ODN2216刺激健康人外周血淋巴细胞TH1/TH2细胞因子的表达

目的 观察CpG-ODN2216对健康人外周血单个核细胞（PBMC）中TH1/TH2淋巴细胞的极化作用,以及培养上清液中TH1/TH2型细胞因子的水平.方法 取健康献血员外周血用淋巴细胞分离液分离PBMC,与CpG-ODN2216共培养24 h,流式细胞仪检测PBMC中TH1/TH2淋巴细胞的改变,ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的释放水平.结果 CpG-ODN2216能刺激淋巴细胞向TH1、Tc1转化,对TH2无明显的刺激作用.培养上清液中IFN-γ的表达水平显著增高（P＜0.01）,IL-2、IL-4和IL-10无明显改变（P＞0.05）.结论 CpG-ODN2216可以促进外周血淋巴细胞向TH1、Tc1极化,并诱导PBMC产生高水平的TH1型细胞因子IFN-γ,介导TH1型免疫应答.     

脂多糖对间充质干细胞Toll样受体4基因的表达水平及活性的影响

目的 探讨脂多糖(LPS)对骨髓间充质干细胞(MSC)Toll样受体4(TLR-4)基因的表达及其功能的影响.方法 采用贴壁培养和密度梯度离心法从大鼠骨髓分离MSC,通过细胞形态、成骨分化潜能及流式细胞术检测表型以鉴定其纯度;半定量RT-PCR和流式细胞术分别检测MSC在不同浓度(1、10、100 μg/ml)LPS存在条件下培养24 h的TLR-4 mRNA相对表达量和共刺激分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达水平;ELISA法定量检测TNF-α的分泌水平.结果 骨髓MSC低表达TLR-4mRNA(相对表达量0.61±0.10),同时表达CD80[(9.56±0.69)%]、CD86[(22.03±2.03)%]、MHC-Ⅱ[(2.51±0.97)%],少量分泌TNF-α[(4.97±2.98)pg/ml].MSC经LPS处理后,其TLR-4mRNA、共刺激分子表达和TNF-oα分泌水平均升高,其中10 μg/ml LPS培养组升高显著,TLR-4 mRNA相对表达水平为1.55±0.02;CD80、CD86、MHC-Ⅱ阳性细胞率分别为(41.70±2.92)%、(59.72±2.00)%、(24.56±2.19)%;TNF-α分泌水平为(213.12±69.08)pg/ml,与对照组比较,P值均＜0.01.100μg/ml LPS处理组与10 μg/mlLPS处理组相比,各项检测指标均降低,但MHC-Ⅱ和TNF-α的降低水平无统计学意义(P＞0.05).结论 骨髓MSC低表达TLR-4,体外LPS可促进骨髓MSCTLR-4的表达,且与浓度相关.伴随TLR-4表达水平的升高,CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达水平及TNF-α水平同时升高.     

干扰素-α治疗慢性乙型肝炎过程中IL-10的动态观察

目的 动态观察干扰素-α(IFN-α)治疗慢性乙型肝炎过程中患者外周血单个核细胞(PBMC)产生的IL-10水平。以其预测乙肝患者对IFN—α的治疗反应。方法 用ELISA分别检测50例慢性乙型肝炎患者在IFN-α 2b治疗前、治疗3个月、治疗6个月时PBMC在植物血凝素(PHA,100μg/ml)诱导下培养48h后培养上清液IL-10的水平,20例健康人做对照。结果 23例干扰素应答患者PBMC IL-10水平在治疗3个月、6个月时较治疗前显著降低。27例无应答患者治疗3个月、6个月与治疗前相比,PBMC产生IL-10的水平无显著变化。结论 用IFN-α治疗后,高水平IL-10持续不降低,提示慢性乙肝患者对IFN-α无应答。     

吲哚胺2,3-双加氧酶在急性髓系白血病细胞株的表达及其活性调节的实验研究

目的:研究吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在急性髓系白血病细胞株(AML)的表达及其活性调节。方法:采用RT-PCR检测经γ-干扰素(IFN-γ)、胸腺肽α1(Tα1)、IFN-γ+Tα1及氯喹等药物作用前后HL-60细胞株及K562细胞株IDO mRNA及Toll样受体9(TLR9)mRNA表达变化;采用考马斯亮蓝染色法及改良比色法检测经IFN-γ、Tα1、IFN-γ+Tα1作用前后两细胞株IDO酶活性变化。结果:两细胞株均表达IDO mRNA及TLR9 mRNA;细胞经IFN-γ作用后,IDO mRNA表达及酶活性增加并呈浓度依赖性;经Tα1作用后,IDO mRNA表达及酶活性降低并呈浓度依赖性;经IFN-γ+Tα1共同作用后,Tα1明显削弱IFN-γ对IDO mRNA表达及酶活性的上调作用(P0.01);经氯喹作用后,两细胞株IDO mRNA表达无明显变化;经IFN-γ、Tα1、IFN-γ+Tα1及氯喹等药物作用后,两细胞株TLR9 mRNA表达无明显变化。结论:AML细胞表达IDO mRNA且具有酶活性,IDO可能在AML细胞诱导机体产生免疫耐受过程中起关键作用,可作为判断白血病预后的新指标;Tα1下调IDO表达及酶活性,并可削弱IFN-γ对IDO的诱导作用,提示Tα1作为免疫调节剂可能成为AML免疫治疗的新手段。     

肝素对脂多糖诱导内皮细胞损伤中基质金属蛋白酶及其组织抑制剂基因表达的影响

目的 探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)在脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤中的表达,并观察肝素对其水平的影响.方法 LPS 10μg/ml刺激人肺微血管内皮细胞(HPMEC)诱导损伤,肝素预处理组分别于LPS刺激前15 min加入0.1 U/ml及1 U/ml普通肝素,对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS).分别在刺激2、6、12h收集细胞提取RNA,应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞中MMP-9及TIMP-1的mRNA表达.结果 与对照组比较,LPS刺激2h组MMP-9和TIMP-1的mRNA表达明显增高,12h达高峰(MMP-9 mRNA:4.26±0.81比1.00±0.46,TIMP-1 mRNA:4.93 ±0.08比1.00±0.13,均P＜0.05),以TIMP-1增高明显.预防性应用肝素可明显降低MMP-9和TIMP-1的mRNA表达(0.1 U/ml组:MMP-9 mRNA 2.74±0.30,TIMP-1 mRNA 2.96±0.13;1 U/ml组:MMP-9 mRNA 3.08±0.48,TIMP-1 mRNA 2.93±0.27,均P＜0.05).不同剂量肝素组间基因表达水平差异无统计学意义.结论 LPS诱导内皮细胞损伤时MMP-9、TIMP-1表达增加,肝素可能通过调节MMP-9、TIMP-1表达水平发挥其保护作用.     

干扰素-γ与间充质干细胞在免疫抑制中的协同作用及机制研究

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)对正常人骨髓间充质干细胞(MSC)免疫活性的影响,阐明IFN-γ与MSC在免疫抑制中的协同作用.方法 ①ELISA法检测IFN-γ(终浓度100 ng/ml)对正常人骨髓来源MSC前列腺素E2(PGE2)、肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平的影响.②RT-PCR法检测100 ng/ml IFN-γ作用下MSC内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)基因表达水平变化.③体外刺激正常人外周血T细胞增殖,并与正常人骨髓来源MSC共培养,检测T细胞增殖水平;在共培养体系中分别加入重组人IFN-γ(100 ng/ml)及鼠抗人IFN-γ单克隆抗体(单抗,5μg/ml),检测T细胞增殖水平变化.结果 ①MSC单独培养24 ～ 48 h可检测到PGE2、HGF、TGF-β1三种细胞因子表达;IFN-γ可促进MSC上述细胞因子的表达[实验组及对照组PGE2、HGF、TGF-β1表达水平分别为(1715.5 ±628.6) pg/ml对(1344.5±709.4) pg/ml;(4031.8±1496.8) pg/ml对(2452.4±1375.3)pg/ml;(1753.5±413.8) pg/ml对(1026.6±450.5) pg/ml,P值分别为0.001、0.011及＜0.001].②MSC单独培养48 h后,RT-PCR法未检测到IDO基因表达.与IFN-γ共培养后,IDO基因呈高水平表达.③在体外MSC可以显著抑制T细胞增殖,外源性IFN-γ不影响MSC对T细胞增殖的抑制作用[T细胞增殖抑制率分别为(40.4±10.9)％和(36.7±7.4)％,P=0.272];在反应体系中加入抗IFN-γ单抗后,MSC抑制T细胞增殖作用显著减弱[T细胞增殖抑制率分别为(40.4±10.9)％和(23.9±7.6)％,P =0.002].结论 MSC组成性表达PGE2、HGF及TGF-β1等免疫抑制性细胞因子,在一定水平IFN-γ作用下,MSC分泌上述3种细胞因子水平明显上调,IDO mRNA表达水平显著增高,MSC免疫活性增强.骨髓MSC在体外可以显著抑制T淋巴细胞增殖,IFN-γ与MSC在免疫抑制中具有协同效应.     

杀菌通透性增加蛋白体外抑制革兰阴性细菌脂多糖激活血小板的作用

本研究旨在探索杀菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein,BPI)能否抑制G-细菌脂多糖(LPS)激活血小板的作用。取10例健康体检者全血制备富含血小板血浆(PRP,1×108/ml)。实验分为4组:正常血小板组:不作任何处理;LPS组:LPS(10μg/ml)刺激6 h;BPI组:BPI(100μg/ml)处理1 h;BPI+LPS组:BPI(100μg/ml)预孵育1 h后,再接受LPS(10μg/ml)刺激6 h。应用流式细胞术(FCM)检测各组血小板膜Toll样受体-4(TLR-4)的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定PRP上清中细胞因子释放水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)。结果表明,与正常血小板组相比,LPS刺激血小板后血小板膜TLR-4表达及上清中TNF-α和IL-6浓度均明显增高(P<0.001)。在接受BPI预处理后,LPS刺激血小板表达TLR-4及TNF-α和IL-6的作用明显下降,但仍高于正常血小板组。BPI单独刺激血小板不引起血小板TLR-4表达增高及细胞因子水平改变。结论:BPI能够抑制LPS诱导的血小板活化。     

羟氯喹对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨羟氯喹(hydroxychloroquine, HCQ)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-1表达的调控作用及分子机制。方法对数生长期MH7A细胞分为空白组(细胞正常培养)、TNF-α组(细胞培养基中加入10μg/L TNF-α)、HCQ联合A组(细胞培养基中加入2.5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合B组(细胞培养基中加入5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合C组(细胞培养基中加入10μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)。5组细胞培养24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液MMP-1水平,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白相对表达量。将MH7A细胞分为对照组和茴香霉素组,对照组细胞按HCQ联合C组培养方法培养24 h;茴香霉素组细胞培养基中先加入10μg/L茴香霉素培养2 h后,再按HCQ联合C组的培养方法继续培养至24 h;采用实时荧光定量PCR法检测2组MMP-1 mRNA相对表达量。结果 TNF-α组[(791.32±175.40)ng/L、6.89±1.20]、HCQ联合A组[(366.71±224.44)ng/L、4.12±0.71]、HCQ联合B组[(283.22±154.86)ng/L、2.99±0.18]、HCQ联合C组[(173.44±36.25)ng/L、2.01±0.80]、空白组[(133.13±62.19)ng/L、1.00±0.00]细胞MMP-1水平和MMP-1 mRNA相对表达量均依次降低(P0.05);TNF-α组(2.02±0.07)、HCQ联合A组(1.31±0.09)、HCQ联合B组(0.86±0.09)、HCQ联合C组(0.56±0.05)、空白组(0.43±0.03)细胞p-JNK蛋白相对表达量依次降低(P0.05),而TNF-α组(2.30±0.16)、HCQ联合A组(2.16±0.13)、HCQ联合B组(2.03±0.05)、HCQ联合C组(2.16±0.16)、空白组(2.23±0.11)JNK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);茴香霉素组细胞MMP-1 mRNA相对表达量(5.13±1.43)高于对照组(2.01±0.80)(P0.05)。结论 HCQ能通过JNK信号通路调控MH7A细胞MMP-1的表达。     

甘草酸二铵对百草枯诱导肺泡上皮Ⅱ型细胞高迁移率族蛋白1的影响

目的了解甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)诱导肺泡上皮Ⅱ型细胞(alveolar epithelial cellⅡ,AECⅡ)中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)的影响。方法 AECⅡ用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基,并加入青霉素100 U/ml、链霉素100μg/L,置于37℃含5%CO2的培养箱中培养。将培养后的细胞分为3组,空白对照组(NS组)不采用任何药物干预培养24 h;模型组(PQ组):以1000μmol/L PQ培养24 h;DG预治疗组(DG组):先以0.6 mg/ml DG培养2 h,再以0.6 mg/ml DG+1000μmol/L PQ培养24 h。采用MTT法测定DG对PQ诱导下AECⅡ的增殖作用;采用酶联免疫吸附法检测3组细胞中的HMGB1、Toll样受体4(TLR-4)、髓样分化因子88(My D88)、细胞核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定3组细胞中HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65 mRNA表达。结果在1000μmol/L PQ诱导下,AECⅡ以0.6 mg/ml DG干预24 h时生存率最高,以0 mg/ml DG干预生存率最低。与NS组比较,PQ、DG组HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65、TNF-α水平均明显升高,且DG组升高程度低于PQ组,差异均有统计学意义(P0.01);与NS组比较,PQ组、DG组HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB P65 mRNA表达均升高,且DG组升高程度低于PQ组,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 DG可降低HMGB1、TLR-4、My D88、NF-κB、TNF-α水平,减轻PQ诱导的AECⅡ损伤。     

缺氧诱导因子-1α和基质蛋白酶-9在鼻息肉嗜酸性粒细胞浸润过程中的作用

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在鼻息肉组织中的表达及其与嗜酸性粒细胞（EOS ）浸润的关系。方法于2010年10月至2012年12月,以31例经鼻内窥镜手术治疗的鼻息肉患者作为实验组,以11例行下鼻甲部分切除术治疗的慢性肥厚性鼻炎患者作为对照组,分别采集鼻息肉组织和下鼻甲黏膜组织,检测并分析组织中 HIF-1α、MMP-9 mRNA表达水平,以及 HIF-1α和MMP-9阳性细胞数、阳性血管数和EOS浸润数。结果观察组HIF-1α和MMP-9 mRNA表达水平明显高于对照组（P＜0．05）。观察组HIF-1α和MMP-9阳性细胞数、阳性血管数和EOS浸润数均高于对照组（P＜0．05）。观察组 HIF-1α和MMP-9阳性细胞数与EOS浸润数均呈正相关（相关系数分别为0．56、0．88,P＜0．05）。结论 HIF-1α和MMP-9在鼻息肉组织中呈高水平表达,二者可能在鼻息肉在发病机制中具有重要作用。     

大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜患者浆细胞样树突状细胞功能及Toll样受体9 mRNA表达的影响

本研究探讨大剂量地塞米松对免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血浆细胞样树突状细胞(pDC)功能及Toll样受体9(TLR9)表达的影响。15例初诊的ITP患者给予地塞米松40 mg/d,连用4 d,采用免疫磁珠分离法体外分离15例正常对照及13例治疗有效患者治疗前后外周血中pDC;用CpG-ODN 2216刺激外周血pDC并与之共培养24 h,采用ELISA方法检测上清中IFN-α、IL-6、TNF-α的含量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测pDC的TLR9 mRNA表达量。结果表明,①治疗前pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平〔(960.83±164.65)pg/ml,(156.15±39.89)pg/ml,(137.31±35.44)pg/ml)〕明显高于正常对照组〔(616.67±105.98)pg/ml,(89.13±21.48)pg/ml,(88.53±25.81)pg/ml,P<0.05〕;治疗后pDC产生IFN-α、IL-6、TNF-α水平分别降至(678.46±128.88)pg/ml,(97.77±26.31)pg/ml,(103.08±26.42)pg/ml,与治疗前比较差异有统计学意(P<0.05),与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);②治疗前pDC的TLR9 mRNA的表达水平高于正常对照组(P<0.05);治疗后pDC的TLR9 mRNA的表达水平低于治疗前(P<0.05),与正常对照组比较差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:pDC分泌的细胞因子及其表达的TLR9在ITP发病中起重要作用;地塞米松可能通过下调TLR9的表达,抑制pDC分泌细胞因子的功能,而对ITP起到治疗作用。     

HBV核心蛋白拮抗α干扰素抗病毒活性的初步研究

目的 探讨HBV核心蛋白（HBc）对α干扰素（IFN-α）抗病毒活性可能存在的拮抗机制。 方法 以表达抗黏液病毒A蛋白(MxA)的重组质粒pcDNA3.1-Flag-MxA （野生型）转染肝胚瘤细胞株HepG2.2.15细胞,用ELISA和real-time PCR法分别检测转染后HepG2.2.15细胞上清HBsAg、HBeAg和细胞外HBV DNA。HBc核心蛋白表达质粒（pHBc-EGFP）转染HepG2细胞后,RT-PCR法分析IFN-α抗病毒蛋白MxA、双链RNA激活的蛋白激酶（PKR）和2′,5′-寡腺苷酸合成酶（2′,5′-OAS）等mRNA水平。结果 转染MxA重组质粒的HepG2.2.15细胞能够表达MxA,转染48 h时HBsAg、HBeAg比空白对照组显著减少（P＜0.05）,HBV DNA无显著性差异。转染pHBc-EGFP的HepG2细胞,经1 000 IU/ml IFN-α处理后,抗病毒蛋白PKR和2′,5′-OAS mRNA水平未见明显改变,而MxA-mRNA水平显著降低（P＜0.05）。 结论 HBV核心蛋白可能通过抑制抗病毒蛋白MxA的表达,而发挥对IFN-α的拮抗作用。     

儿童原发性肾病综合征外周血GRβ及TNF-α的变化及意义

目的 探讨原发性肾病综合征（PNS）患儿外周血单个核细胞（PBMC）上糖皮质激素受体β（GRβ）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）与糖皮质激素治疗效应之间的关系.方法 以30例PNS患儿作为观察组,根据随访结果分成激素耐药型（SRNS）和激素敏感型（SSNS）2 组,各15例.10名健康儿童作为正常对照组.应用RT-PCR 检测各组PBMC上GRβmRNA的表达;采用ELISA方法检测各组血浆中TNF-α的含量;并分析以上指标与肾脏病理及相关实验室指标的关系.结果 （1）SSNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达及血浆TNF-α水平均高于对照组（P＜0.05）.（2）SRNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达及血浆TNF-α水平均高于SSNS组（P＜0.01）.（3）15例SRNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达与肾脏病理分级成等级正相关（r=0.496,P＜0.05）;与24小时尿蛋白定量（24hUTP）成等级正相关（r=0.458,P＜0.05）.（4）15例SSNS组患儿PBMC GRβmRNA的表达与24hUTP无相关性（P＞0.05）.（5）30例PNS患儿PBMC GRβmRNA的表达与血浆TNF-α水平成等级正相关（r=0.450,P＜0.05）.结论 GRβ可以作为监测PNS患儿病情以及预后的指标之一.TNF-α升高可能导致GRβmRNA的表达升高,在SRNS形成与发展中起到重要作用.     

超抗原葡萄球菌肠毒素B对人外周血单个核细胞的抑制作用

目的探讨葡萄球菌肠毒素B(SEB)初次和再次刺激对人外周血单个核细胞(PBMC)的影响。方法以不同浓度100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml、0.0001μg/ml的葡萄球菌肠毒素B刺激人外周血单个核细胞,同时设阴性对照及阳性对照植物血凝素(PHA)组,培养48 h后MTT比色法检测单个核细胞的增殖情况。10μg/ml葡萄球菌肠毒素B间隔48 h重复刺激两次后,同时设阴性对照及PHA组,于第二次刺激后培养48 h,MTT比色法检测单个核细胞的增殖情况。结果不同浓度组葡萄球菌肠毒素B初次刺激人外周血单个核细胞,10μg/ml组PBMC增殖最强,与PHA组间无显著性差异,刺激增殖率分别达23.1%和24.3%。间隔48 h再次刺激后,PHA组可继续促进PBMC增殖,而10μg/ml SEB组可抑制PBMC增殖,抑制率达19.7%。结论 SEB初次刺激人PBMC可引起其增殖,反复刺激可抑制其增殖。     

异甘草酸镁对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞 TLR3信号途径的影响

目的：研究异甘草酸镁对慢性乙型肝炎患者外周血单个核淋巴细胞TLR3信号途径的影响。方法分离外周血单个核细胞（ PBMC ）,检测异甘草酸镁对细胞生长的影响。 PolyI：C和异甘草酸镁加入PBMC培养液,半定量PCR检测TLR3信号途径中的TLR3、TRIF（ Toll样受体接头分子）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、干扰素β1（IFNβ1）的表达。结果异甘草酸镁对单个核细胞的生长抑制作用呈剂量依赖型,800、400、200、100、50、25、12.5和6.25μg/ml八组的抑制率分别为58％,52％,40％,30％,23％,17％,8％,6％,除12.5和6.25μg/ml两组间比较无统计学差异（ P＞0.05）外,其余各组间比较均有统计学差异（ P＜0.01）。RT-PCR结果显示IFNβ1在200μg/ml异甘草酸镁组和空白对照组表达分别为14.6±2.43,9.79±3.02,P＝0.0003;TNFα在200μg/ml组、100μg/ml组、空白对照组分别为10.59±1.67,13.3±2.07,15.7±1.59,各组间比较差异均有统计学意义（ P＜0.05）。 TLR3和TRIF在各组间的表达无显著差异。结论异甘草酸镁可能促进单个核细胞产生干扰素,同时又能抑制炎症因子TNFα的转录,这可能是该药的抗炎、免疫调节机制之一。     

维生素D及其受体在强直性脊柱炎患者中的表达及其临床意义

目的：研究As患者PBMC维生素D受体（VDR）mRNA的表达及血清25-羟维生素D,和1,25-二羟维生素D3的水平,探讨其与AS疾病活动性（BASDAI、CRP、ESR）的相关性。方法：选取26例AS患者（As组）和年龄、性别与之相匹配的13名健康志愿者（健康对照组）。采用SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测两组受检者PBMC的VDRmRNA表达水平,应用ELISA法检测两组受检者血清25-羟维生素D3和1,25-二羟维生素D3水平,分析VDRmRNA表达水平、血清25-羟维生素D3和1,25-二羟维生素D3水平与临床相关指标（BASDAI、CRP、ESR）的关系。结果：As患者PBMC的VDRmRNA表达水平明显高于健康对照组（P〈0．01）,VDRmRNA表达水平与临床相关指标（BASDAI、CRP、ESR）无关（P〉0．05）。AS患者血清25．羟维生素D3、1,25-二羟维生素D3水平分别为（5．3±2．6）μg／L、（12．8±6．0）ng／L,明显低于健康对照组（14．7±3．5）μg/L、（32．6±18．5）ng／L（P均〈0．01）。AS患者血清1,25-二羟维生素D3的水平与BASDAI（r=-0．481,P〈0．05）、ESR（r=-0．535,P〈0．01）、CRP（r=-0．674,P〈0．01）均呈负相关。血清25-羟维生素D,水平与BASDAI、CRP、ESR无关（P〉0．05）。结论：As患者VDRmRNA表达水平升高,但与As的疾病活动无关。As患者血清1,25-二羟维生素D3水平下降,与疾病活动呈负相关,可作为AS疾病活动的指标之一。AS患者PBMC的VDR活化可能与1,25-二羟维生素D,的作用无关。     

糖尿病患者树突细胞中NF-κB活性改变及检测TNF-α意义

目的探讨糖尿病患者血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平及外周血树突细胞（DC）中NF-κB活性变化的意义。方法无偿献血员10例为正常对照组（N组）,糖尿病患者20例分为IDM组和ODN组各10名。外周血分离单核细胞（PBMC）,加入IL-4、GM-CSF对DC进行诱导培养,同时向ODN组中加入NF-κB特异性低脱氧核苷酸（ODN）培养细胞,采用ELISA法测定血液及培养上清中TNF-α的含量。免疫印迹分析检测DC中NF-κB p65的磷酸化水平,β-actin作为内参。结果糖尿病组患者的血清TNF-α水平显著高于正常对照组（P〈0.001）;培养物上清液TNF-α水平的测定结果为：N组和ODN组显著低于IDM组（P〈0.05）;N组和ODN组水平无显著差异（P〉0.05）;在N组和ODN组DC中NF-κB p65的磷酸化的表达水平显著地低于IDM组（P〈0.05）;N组和ODN组无显著差异（P〉0.05）。结论提示炎症因子TNF-α及NF-κB可能参与糖尿病的病理生理过程。糖尿病患者外周血树突细胞中NF-κB p65的磷酸化水平可以被ODN抑制。     

白细胞介素-25与支气管哮喘小鼠发病的关系

目的探讨IL-25与支气管哮喘发病的关系。方法将30只健康雌性Balb/c小鼠随机分为3组：分别为卵白蛋白（OVA）致敏并激发的哮喘模型组（A组）,OVA）致敏、激发并予糖皮质激素治疗组（B组）及正常对照组（C组）,每组10只。于末次激发后24h后各组小鼠摘眼球取血,ELISA法检测其血清IL-25、IFN-γ及IL-4水平。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行嗜酸性粒细胞（EOS）计数,HE染色观察各组肺组织病理改变。RT-PCR法检测各组肺组织IL-25mRNA和IL-4mRNA表达。结果 1、B组多数小鼠未见明显行为学异常反应,肺组织病理损害较A组明显减轻,BALF中EOS计数（126.2±10.8）×103/L亦显著低于A组（324.7±13.6）×103/L（P〈0.01）。2、A组小鼠血清IL-25、IL-4水平[（80.66±3.06）pg/ml,（124.7±4.13）pg/m]均高于C组[（46.25±1.90）pg/ml,（32.73±2.20）pg/ml],IFN-γ水平[（45.25±5.34）pg/ml]低于C组[（80.56±2.49）pg/ml]其差异均有统计学意义（P〈0.01）。3、A组小鼠肺组织IL-25mRNA和IL-4mRNA表达均高于C组（P〈0.01）,B组小鼠肺组织IL-25mRNA和IL-4mRNA表达均低于A组（P〈0.01）。A组小鼠肺组织IL-25mRNA表达量与BALF中EOS计数呈正相关（r=0.901,P〈0.01）。结论 IL-25参与了哮喘小鼠的发病,在哮喘的发病中起促炎作用,其促进哮喘发病的作用可以被激素抑制。     

慢性HCV感染者外周血单个核细胞IL-18和IFNAR1检测的临床意义

目的 分析慢性丙肝（CHC）患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素18（IL-18）mRNA的诱导表达及α干扰素受体1（IFN-α receptor1，IFNAAR1）表达，评价慢性丙肝患者PBMC细胞免疫功能。方法 脂多糖（LPS）体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染组病人PBMC，RT-PCR检测干扰素治疗前后PBMC IL-18mRNA水平的变化。同时RT-PCR检测不同组PBMC IFNAR1mRNA水平的差异。结果 治疗前干扰素应答组病人（n=12）和无应答组病人（n=26）PBMC IL-18mRNA诱导表达水平显著低于正常对照组（P〈0．01；P〈0．01）；治疗后，应答组病人IL-18mRNA水平随治疗时间延长而升高，1个月时显著高于无应答组病人（P〈0．01），无应答组病人IL18mR-NA水平始终较低。IFN-α2b治疗期间，干扰素应答组病人PBMCIFNAR1mRNA水平从治疗前的高表达而逐渐减少，正常对照和干扰素无应答组病人PBMCIFNAR1mRNA的表达始终较低（治疗前与应答组相比P〈0．01）。结论 慢性HCV感染病人的细胞免疫功能受损，不能正常表达IL-18和IFNAR1，但应答组病人经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。慢性丙肝患者PBMCIL18mRNA和IFNAR1mRNA水平检测也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

TGF-β1诱导体外培养人肾小管上皮细胞的表型转化

目的观察TGF-β1诱导体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2细胞的表型转化。方法免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测TGF-β1诱导培养HK-2细胞,其上皮细胞标记物和间充质细胞标记物表达的改变。结果在TGF-β1浓度分别为1μg/L、5μg/L和10μg/L条件下,诱导培养HK-2细胞48h,免疫细胞化学染色显示各诱导组细胞均出现了间充质细胞标记物α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的可疑阳性表达;继续诱导72h,细胞α-SMA阳性表达明确;同时上皮细胞标记物E-钙粘连蛋白表达明显降低甚至消失,广谱角蛋白阳性表达未见明显改变。在TGF-β1浓度为5μg/L诱导组,α-SMA阳性表达为最强。RT-PCR结果也显示TGF-β1诱导42h,HK-2细胞出现了间质细胞标记物α-SMA和波形蛋白mRNA表达的增高,间充质细胞标记物mRNA表达的增高也是以5μg/L TGF-β1组为最明显,上皮细胞标记物细胞角蛋白-19mRNA的阳性表达未见明显改变。结论 TGF-β1可诱导体外培养HK-2细胞出现上皮向间充质细胞的表型转化,表型转化能力与TGF-β1剂量相关。