NF-κB和诱导型一氧化氮合酶在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

目的探讨NF-κB、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病机制中的作用。方法采用两次气管内注入脂多糖（LPS）和反复烟熏的方法制作COPD大鼠模型;采用免疫组织化学法检测NF-κB、iNOS在COPD大鼠支气管肺组织中的表达。结果大鼠模型的病理及病理生理学改变符合人类COPD的特点,模型组肺平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN）与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,模型组NF-κB、iNOS表达强度明显高于对照组（P〈0.05）。结论NF-κB、iNOS的过量表达引起气道炎症和肺部损伤,导致COPD的发生;同时NF-κB促进炎症细胞合成多种炎症因子,产生大量的iNOS,在COPD气道炎症和肺部损伤的持续和放大中起着重要作用。     

特发性肺纤维化患者支气管/肺泡上皮细胞凋亡和Fas/FasL基因表达

目的：检测细胞凋亡、Fas/FasL mRNA及其蛋白在特发性肺纤维化患者肺泡/支气管上皮细胞的表达,探讨细胞凋亡和促凋亡信号在此疾病中的意义。方法：应用末端原位杂交（TUNEL）、原位杂交、免疫组化技术,对12例特发性肺纤维化患者的肺活检组织（IPF组）及10例正常肺组织（对照组）检测了细胞凋亡、Fas/FasL mRNA及其蛋白表达的变化。结果：特发性肺纤维化组肺泡/支气管上皮细胞凋亡指数上调,明显高于对照组（P〈0.01）;IPF组肺泡/支气管上皮细胞中Fas/FasL mRNA及其蛋白表达上调,高于对照组（P〈0.01）;IPF组肺泡/支气管上皮细胞凋亡指数与其Fas/FasL mRNA及蛋白表达之间均无明显相关（P〉0.05）。结论：肺纤维化时肺泡/支气管上皮细胞凋亡上调,Fas/FasL mRNA及其蛋白表达增强,在肺纤维化发生、发展中起重要作用。     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。     

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用

目的 探讨NF-κB(核因子-κB)与PUMA(P53正向凋亡调节因子)表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤(SAP-ALI)的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的影响.方法 SD大鼠随机(随机数字法)分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠(1 mL/kg)诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC(15 mg/kg),各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果 成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.     

Janus激酶/信号转导和转录激活因子3对重症急性胰腺炎大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的体外作用研究

目的 探讨Janus激酶/信号转导和转录激活因子3(JAK/STAT3)信号转导通路在重症急性胰腺炎(SAP)肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用.方法 用牛磺胆酸钠建立SAP大鼠模型,取血清备用.将经原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分组,对照组加入不含SAP大鼠血清的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)培养液;SAP组加入含SAP大鼠血清的DMEM培养液;SAP+AG490组用JAK激酶抑制剂AG490预处理细胞,加入含SAP大鼠血清的DMEM培养液.用电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测STAT3活化状态;逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA表达;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测蛋白水平;流式细胞技术检测肺泡表面活性物质相关蛋白C(SP-C)表达和肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡.结果 与对照组比较,SAP组STAT3活性增强,STAT3 mRNA和蛋白表达均增强,SP-C蛋白表达下降(2 h SP-C荧光指数0.69±0.02比1.02±0.03,P＜0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡增加[(11.55±1.10)%比(5.30±0.36)%,P＜0.053;与SAP组比较,SAP+AG490组STAT3活性减弱,STAT3 mRNA和蛋白表达减弱,SP-C蛋白表达下降(2 h SP-C荧光指数0.48±0.10比0.69±0.02,P＜0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡增加[(13.92±0.82)%比(11.55±1.10)%,P＜0.053.结论 提示JAK/STAT3信号转导通路参与了SAP肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的病理生理过程.     

运动和高脂膳食对代谢综合征大鼠心肌细胞氧化应激反应的影响

摘要 目的：对代谢综合征（metabolism syndrome,MS）大鼠实施有氧运动和饮食干预,观察运动和高脂膳食对MS大鼠氧化应激反应（oxidative stress ,OS）的影响,探讨运动和饮食对MS大鼠心血管氧化应激作用的可能机制。 方法：70只雄性清洁级SD大鼠,随机抽取6只作为基础对照组（C）,其余高脂高盐高糖饲养18周建立MS大鼠模型。MS模型大鼠随机分为普食安静（RC）、高脂安静（HC）、普食运动（RE）、高脂运动（HE）4组,每组6只。HE组和RE组行运动干预,HC组和HE组继续高脂饲料饲养,12周后同期处死。检测血清巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、粘附因子纤溶酶原激活物抑制剂I（PAI-1）、氧化应激型氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）水平;检测心肌组织MCP-1、PAI-1、ox-LDL、eNOS及过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）mRNA表达量。 结果：血清指标中,与C组比,HC与RC组ox-LDL、除RE组外MCP-1、HC组PAI-1、RC与RE组eNOS均显著升高（P＜0.01）;与HC组相比,HE与RE组ox-LDL和MCP-1、PAI-1所有组均显著降低（P＜0.05,P＜0.01）、eNOS RC与RE组显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;与RC组相比,HE与RE组MCP-1均显著降低（P＜0.05,P＜0.01）;与HE组相比,RE组MCP-1显著降低（P＜0.01）,eNOS显著升高（P＜0.01）。心肌组织中,与C组比,HC与RC组MCP-1、PAI-1显著升高,PPARα显著降低,RC、HE与RE组eNOS显著升高（P＜0.01）;与HC组相比,HE与RE组MCP-1、PAI-1及RC组PAI-1显著降低,HE与RE组eNOS、PPARα及RC组eNOS显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;与RC组相比,RE组MCP-1、PAI-1显著降低,eNOS、PPARα显著升高（P＜0.05,P＜0.01）;与HE组相比,RE组MCP-1显著降低（P＜0.01）,eNOS显著升高（P＜0.05）;PPARα与MCP-1和PAI-1呈负直线相关（P＜0.01）。 结论：MS大鼠氧化应激反应增强。运动和饮食干预均能降低MS大鼠心肌氧化应激反应。运动能提高氧化应激调节因子PPARα mRNA表达而饮食控制作用不大,PPARα mRNA表达增加进而调控MCP-1,PAI-1,eNOS mRNA的表达,可能是有氧运动抗氧化应激的机制。     

苦参碱对高脂-脂肪肝模型大鼠肝脏COX-2、iNOS表达的影响

目的 研究苦参碱对高脂-脂肪肝模型大鼠的治疗作用及对肝脏环氧化物酶2（COX-2）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响.方法 选用4周龄Wistar大鼠30只,体重为113～ 138 g,平均（125.6±7.0）g.随机分为3组：正常对照组（C组,n=10）、高脂模型组（M组,n=10）、苦参碱治疗组（Ma组,n=10）,雌雄各半.正常对照组投喂普通颗粒饲料,其他组以高脂饲料替代普通饲料投喂.动物造模3周后,C组和M组给生理盐水,Ma组苦参碱36mg·kg-1 ·d-1灌胃治疗,共30 d.所有实验动物末次给药后麻醉,腹主动脉采血,分离血清,取肝脏.测定肝指数,肝中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）的含量,血清TG、TC、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量,HE组织病理学分析,荧光定量PCR和免疫组化检测肝脏COX-2、iNOS mRNA转录和蛋白表达水平.结果 高脂饮食能够引起大鼠脂肪代谢紊乱,肝指数升高,肝组织中TG、TC和血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C升高（P＜0.05）,肝细胞变性坏死和肝组织炎症损伤（P＜0.05）,肝脏COX-2、iNOS mRNA转录和蛋白表达量增高（P＜0.01）;与模型组比较,苦参碱能够降低肝指数、肝组织中TG、TC和血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C含量（P＜0.05）,阻止肝细胞变性坏死,抑制炎症损伤（P＜0.01）,降低肝脏COX-2、iNOS mRNA转录和蛋白表达水平（P＜0.01）.结论 苦参碱对高脂-脂肪肝大鼠疗效明显,其作用机制可能与抑制COX-2、iNOS mRNA转录和蛋白表达,阻止炎症发生和抗氧化有关.     

人参皂苷 Rg1对大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的保护作用

目的研究人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）对低氧-无血清培养诱导的大鼠骨髓间充质干细胞（ rBMSC）凋亡的保护作用及机制。方法 rBMSC在1％O2及无血清培养基条件下培养24 h，培养液中加或不加入人参皂苷Rg1，分析Rg1的作用。 Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡率、罗丹明123染色检测线粒体膜电位、比色法检测Caspase-3酶活性，实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bad、Bax 基因的表达水平。结果与正常培养组（ C1组）比较，低氧-无血清培养基组（ C2组）细胞凋亡率是C1组的3.24倍， P＜0.01；线粒体膜电位明显下降；Caspase-3活性高5.17倍，P＜0.01；促凋亡基因Bad和Bax的mRNA表达分别增加1.16倍和0.5倍，P＜0.01和P＜0.05。人参皂苷Rg110μg/L（ Rg1-L组）、100μg/L（ Rg1-M组）和500μg/L （ Rg1-H组）细胞凋亡率分别较C2组下降19.4％、35.1％和65.5％，均P＜0.05。 Caspase-3活性在Rg1-L组与C2组之间无明显差异，但Rg1-M组和H组较C2组分别降低20％和21％，均P＜0.05。 Bad mRNA表达， Rg1-L组、Rg1-M组和Rg1-H组较C2组分别减少36.4％、50.3％和45.5％，P＜0.05或P＜0.01；Bax mRNA表达分别减少10.5％、56.7％和50.1％，P＜0.05或P＜0.01。 Bcl-2 mRNA表达，Rg1-M组和Rg1-H组较C2组分别增加53.4％和66.1％，均P＜0.05。 Bcl-xl mRNA表达水平组间比较差异无统计学意义。结论人参皂苷对低氧-无血清培养诱导的rBMSC凋亡有保护作用。     

七氟醚对肾脏缺血再灌注损伤大鼠肾功能及内皮型一氧化氮合酶的影响

目的 探讨七氟醚(Sev)对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)大鼠肾功能、肾小管坏死率及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响.方法 将45只健康大鼠随机分为MB组(假手术组)、YB组(IRI模型组)、ZL组(Sev+ IRI),每组15只.比较3组大鼠血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Cr)水平,肾脏组织形态学表现,肾小管坏死率评分,eNOS、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)阳性表达以及肾小管上皮细胞凋亡率.结果 与MB组大鼠相比,YB组、ZL组大鼠4、12、24 h的BUN、Cr水平均升高,且YB组大鼠12、24 h的BUN、Cr水平均高于ZL组,差异有统计学意义(P＜0.05).MB组大鼠肾脏组织细胞排列整齐、细胞间距均匀;YB组大鼠肾小管有扩张表现,组织排列混乱,细胞扁平且多坏死,病变处为片状,间质充血明显,出现中粒细胞侵润;ZL组上述病灶范围、充血等病理均有一定改善.YB组、ZL组大鼠4、12、24 h肾小管Paller评分均高于MB组,且YB组大鼠4、12、24 h肾小管Paller评分均高于ZL组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与MB组相比,YB组大鼠肾组织eNOS强阳性表达降低,iNOS强阳性表达增强,差异有统计学意义(P＜0.05);与YB组相比,ZL组大鼠肾组织eNOS强阳性表达增强,iNOS强阳性表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).YB组、ZL组大鼠肾组织中肾小管上皮细胞凋亡率高于MB组,且YB组大鼠肾组织中肾小管上皮细胞凋亡率高于ZL组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Sev干预可改善肾脏IRI大鼠的肾功能,降低肾小管坏死率,对肾脏起保护作用,其机制可能与上调eNOS表达有关.     

辛伐他汀纳米粒通过调节诱导型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶系统对小鼠脓毒症相关急性肺损伤的影响

目的探讨辛伐他汀纳米粒对脓毒症相关急性肺损伤小鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/内皮型一氧化氮合酶（eNOS）平衡的调节以及对脓毒症小鼠预后的影响。 方法将90只C57 / BL6小鼠分为假手术组、脓毒症组、灌胃组、静脉制剂组及纳米粒组,每组各18只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症小鼠模型;灌胃组小鼠通过灌胃针,给予辛伐他汀口服制剂灌胃治疗后进行CLP术;静脉制剂组及纳米粒制剂组小鼠CLP术后,立即分别通过尾静脉注射预配置好的辛伐他汀静脉制剂和辛伐他汀纳米粒制剂。其中每组12只小鼠用于7 d生存评估,另外6只用于24 h时间点标本采集。每24小时观察小鼠的生存情况,然后记算各组小鼠每日生存情况。采用苏木素-伊红（HE）染色观察5组小鼠病理变化并计算肺损伤病理评分,免疫组织化学法检测5组小鼠肺组织iNOS、eNOS表达水平。 结果Kaplan-Meier生存曲线结果显示,5组小鼠7 d生存情况比较,差异有统计学意义（χ² = 3.780,P < 0.001）。进一步两两比较发现,脓毒症组及灌胃组小鼠的7 d生存情况均较假手术组明显下降（P均< 0.001）,而纳米粒组小鼠的7 d生存情况显著优于脓毒症组（P = 0.001）。HE染色结果显示,假手术组小鼠肺组织未见明显病理征象;脓毒症组小鼠肺组织弥漫性中性粒细胞浸润、肺泡腔变小、肺泡间中隔增厚、肺间质弥漫性水肿、细胞排列紊乱、部分肺组织完整性遭破坏;灌胃组小鼠病理所示与脓毒症组相似;静脉制剂组及纳米粒组小鼠中性粒细胞渗出均较脓毒症组损伤减少、肺泡完整性较好、损伤程度较轻。5组小鼠肺损伤病理评分、iNOS及eNOS表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 889.200、9.633、6.918,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,脓毒症组小鼠的肺损伤病理评分、iNOS及eNOS表达水平与假手术组比较,差异均有统计学意义（P均< 0.05）;静脉制剂组及纳米粒组小鼠病理评分、iNOS及eNOS表达水平与脓毒症组比较,差异均有统计学意义（P均< 0.05）,且纳米粒组小鼠的肺损伤病理评分较静脉制剂组显著降低（P < 0.05）。 结论不同的辛伐他汀制剂具有不同的效应,其中纳米粒制剂对于脓毒症相关的肺损伤最具保护价值,建立eNOS与iNOS之间的平衡,可以成为具有保护效应的重要处理位点。     

辛伐他汀对脂多糖诱导肺损伤大鼠的一氧化氮合酶的影响

目的 探讨辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠的一氧化氮合酶(NOS)的影响.方法 30只SD大鼠随机分为对照组、LPS组和辛伐他汀治疗组,治疗组又分1 h、3 d和7 d组,每组6只.治疗组大鼠在实验前经胃管分别给予辛伐他汀10 mg/kg(4 ml/kg)治疗1 d,3 d,7 d,每天1次;对照组和LPS组则给予蒸馏水(4 ml/kg),每天1次,连续7 d.在最后一次给药1 h后,LPS组和治疗组大鼠从尾静脉注射LPS 5 mg/kg(2.5 ml/kg),对照组则予注射无菌生理盐水(2.5 ml/kg).观察6 h,处死大鼠,取样,比色法测定血清和肺匀浆诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、构成型一氧化氮合酶(cNOS)和一氧化氮(NO)水平,免疫组化法检测肺组织iNOS和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 LPS组血清和肺匀浆NO均高于对照组(p<0.001),治疗组则低于LPS组(P<0.05);LPS组血清和肺匀浆iNOS活力均高于对照组而cNOS活力则降低(P<0.05),治疗组肺匀浆iNOS活力显著低于LPS组而eNOS显著升高(P<0.001);免疫组化显示:LPS组肺组织iNOS表达强于对照组,而eNOS表达则显著减弱,治疗组的iNOS表达弱于LPS组,eNOS表达则显著增强,与其减轻肺损伤相关.结论 辛伐他汀可逆转LPS诱导的肺组织iNOS活性的升高和eNOS活性的下降,减轻内毒素性肺损伤.     

辛伐他汀对糖尿病大鼠血脂和血小板膜糖蛋白表达水平的影响

目的：探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A （HMG-CoA）还原酶抑制剂辛伐他汀对2型糖尿病大鼠血脂和血小板膜糖蛋白表达的影响。方法雌性Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病模型,造模成功后将其随机分为糖尿病组、辛伐他汀组[辛伐他汀混悬液灌胃,20 mg/（kg ＆#183;d）,共用12周]各10只,另取10只健康大鼠设为对照组,12周后测定及比较各组血脂及血小板膜糖蛋白CD62p、CD63、CD61、CD41的表达。结果糖尿病组总胆固醇、甘油三酯和LDL水平高于对照组,而HDL的水平低于对照组（P＜0.01）;辛伐他汀组总胆固醇、甘油三酯和LDL水平低于糖尿病组,而HDL水平高于糖尿病组（P＜0.01）;糖尿病组血小板膜糖蛋白CD62p和CD63水平较对照组高（P＜0.01）,辛伐他汀组的CD62p和CD63水平较糖尿病组低（P＜0.01）;3组血小板膜糖蛋白CD61、CD41水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论辛伐他汀能调节糖尿病大鼠的血脂水平,能降低血小板膜糖蛋白CD62p和CD63的水平,抑制血小板的聚集。     

Caspase-3蛋白在喉鳞癌组织中表达及与喉癌细胞凋亡的对比研究

目的探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白在喉鳞癌组织中的表达以及与喉癌细胞凋亡的对比关系。方法应用免疫组化SP法分别检测31例喉鳞癌组织和15例声带息肉组织中Caspase-3蛋白表达,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素末端标记法(TUNEL)检测喉鳞癌细胞凋亡率,计算凋亡指数(AI)值并与Caspase-3喉癌组织中表达阳性率结果对比。结果 Caspase-3在喉鳞癌组织中的表达低于声带息肉组织(P<0.01)。Caspase-3的表达在喉癌组织分化程度、有无淋巴结转移及临床分期的差异具有统计学意义(P<0.05),在临床分型、有无吸烟、性别及年龄方面的差异无统计学意义(P>0.05)。喉癌组中凋亡的表达凋亡指数明显低于癌旁组,在统计学上有显著性差异(P<0.05)。喉鳞癌组织中Caspase-3的表达与TUNEL阳性细胞(凋亡细胞)数呈显著正相关,差异具有统计学意义(r=0.790,P<0.0)。结论 Caspase-3蛋白在喉鳞癌中低表达可促进喉鳞癌的发生、发展,其蛋白检测可作为判断喉癌分化、浸润转移及临床分期的重要指标。     

血管生成素样蛋白2对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及雷公藤甲素干预研究

目的：通过观察血管生成素样蛋白2（ANGPTL2）在2型糖尿病大鼠肾脏中的表达,探讨其对足细胞损伤的影响及雷公藤甲素的干预机制。方法50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（NC,10只）和实验组（40只）,实验组予高糖高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素（STZ 30 mg/kg）建立2型糖尿病大鼠模型,成功建立模型（32只）再随机分为2组：糖尿病对照组（DM,16只）及雷公藤甲素组（DT,16只）。雷公藤甲素干预8周后,测体重、血压、肾重、血糖、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,24 h尿蛋白（UAL）的排泄量;镜下观察肾组织病理改变;免疫组化染色技术、实时定量PCR及Western blot法检测肾组织ANGPTL2、Nephrin及Podocin mRNA及蛋白表达的变化。结果 DM组24 h UAL排泄量明显高于NC组（9.07±0.13,0.73±0.03,P＜0.01）,同时ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量明显升高（P均＜0.01）, Nephrin及Podocin 的mRNA及蛋白表达量明显降低（P＜0.01）,DT组较DM组24 h UAL排泄量降低（5.51±0.07,9.07±0.13,P＜0.01）,足细胞损伤改善,ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量降低（P＜0.01）, Nephrin及Podocin的mRNA及蛋白表达量升高（P＜0.01）,且ANGPTL2 mRNA及蛋白表达量与尿白蛋白呈正相关（r＝0.768,r＝0.989,P＜0.01）,其与 Nephrin及 Podocin的 mRNA及蛋白表达量呈负相关（r＝-0.711,r＝-0.700;＝-0.983,r＝-0.945;P均＜0.01）。结论 ANGPTL2可能通过下调Nephrin及Podocin表达参与足细胞损伤机制,雷公藤甲素可下调ANGPTL2在肾脏的表达,保护足细胞。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对卵巢癌裸鼠移植瘤SKOV3细胞的促凋亡研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对SKOV3移植瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法 建立雌性裸小鼠SKOV3移植瘤24只,随机分为4组,每组6只.TRAIL组单用重组人TRAIL蛋白(10μg/kg),顺铂(DDP)组单用DDP(3 mg/...     

辛伐他汀抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡

背景：他汀类药物对血管内皮细胞的凋亡是否有影响目前尚不明确。目的：探讨辛伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：用DMEM细胞培养液培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分成空白对照组、高糖组和高糖＋辛伐他汀组,用四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞的存活率,流式细胞仪和Westernblot分别检测细胞早期凋亡率及P53蛋白表达。结果与结论：高糖组及高糖＋辛伐他汀组细胞增殖率较空白对照组明显降低（P〈0.01）,而高糖组细胞增殖率较高糖＋辛伐他汀组亦降低（P〈0.01）;高糖组P53蛋白表达量及凋亡率较空白对照组及高糖＋辛伐他汀组明显增加（P〈0.01）,高糖＋辛伐他汀组P53蛋白表达及凋亡率亦明显高于空白对照组（P〈0.01）。表明高糖可通过促进促凋亡蛋白P53的表达进而促进人脐静脉内皮细胞的凋亡,而辛伐他汀可抑制此作用。     

辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ刺激人单核细胞分泌白细胞介素6的影响

目的观察辛伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的人单核细胞分泌白细胞介素6（IL-6）的影响,探讨辛伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）可能的机制。方法培养人单核细胞型淋巴瘤（THP-1）细胞株,设空白对照组、AngⅡ刺激组、辛伐他汀低、中、高3个浓度组。辛伐他汀3组分别为辛伐他汀0．1、1、10μmol／L及对照组加入AngⅡ1μmol／L后孵育24小时,用免疫荧光法观察核因子KB（NF-κB）活化情况,SYBR Gteen I染料法实时荧光定量采用2^-△△Ct相对值观察IL-6基因表达水平。结果辛伐他汀3组均能够抑制核因子亚基p65由胞质转移至核内,辛伐他汀组均降低IL-6的表达,各组IL-6表达值为：空白组1．00±0．02,AngⅡ刺激组1．71±0．06,辛伐他汀高浓度组0．43±0．01,辛伐他汀中浓度组0．56±0．01。辛伐他汀低浓度组0．64±0．02,与空白组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。结论实时荧光定量检测结果显示辛伐他汀可减少AngⅡ引起的IL-6表达,辛伐他汀通过影响NF-κB的表达来影响IL-6的分泌,可能是辛伐他汀抗AS的机制。     

辛伐他汀对炎症状态下人腹膜间皮细胞促纤维化细胞生长因子TGF-β1和CTGF表达的影响

目的探讨辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞在肿瘤坏死因子-a（tumor necrosis factor-a,TNF-a）诱导后转化细胞因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）表达的影响。方法胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞进行原代培养并传代,分为五组（每组设3个样本）：空白对照组（完全培养液）、单纯TNF-a（1000ng/L）诱导组和TNF-a（1000ng/L）诱导加低、中、高剂量辛伐他汀（2.5、5和10μmol/L）组。采用MTT（单四唑）检测各组间皮细胞的活性;半定量RT-PCR检测细胞内TGF-β1和CTGFmRNA表达;ELISA检测细胞上清液中TGF-β1和CTGF的蛋白质水平,细胞沉淀用BCA蛋白检测方法测定细胞蛋白质含量,用以校正ELISA结果。结果辛伐他汀能显著改善TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞的活性（P〈0.05）,并能显著降低TNF-a诱导后人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达（P〈0.05）,两者在蛋白质和基因水平均呈剂量依赖关系。结论辛伐他汀能抑制炎症状态下人腹膜间皮细胞TGF-β1和CTGF的表达。     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景：青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道。目的：探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系。方法：用1,10,100mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞。采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3的mRNA的表达。结果与结论：青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加（P〈0.05或P〈0.01）,Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达显著高于对照组（P〈0.05）。结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用。