基质细胞衍生因子1对阿尔茨海默病小鼠脑内Aβ的清除作用

目的观察基质细胞衍生因子1（SDF-1）对阿尔茨海默病小鼠脑内β淀粉样蛋白（Aβ）的清除作用,并研究其作用机制。 方法将12只APP/PS转基因小鼠按随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组给予侧脑室SDF-1注射,对照组给予侧脑室磷酸缓冲盐溶液（PBS）注射,每周1次,连续注射8周。治疗8周后,采用免疫荧光组织化学方法观察并比较2组注射后小鼠脑内Aβ斑块的数量和面积,以及小胶质细胞分布及斑块相关的小胶质细胞的数量。 结果治疗8周后,治疗组小鼠海马区域Aβ斑块的相对面积和数量为（0.4527±0.0711）%和（0.004837±0.001074）%,与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗组小鼠皮质区域Aβ斑块的相对面积和数量与对照组比较,差异亦均有统计学意义（P<0.05）。治疗8周后,治疗组海马和皮质区域斑块相关的小胶质细胞的数量与对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论SDF-1α侧脑室注射可能减少APP/PS1小鼠脑内Aβ的斑块,其作用机制可能是SDF-1增加了小胶质细胞向Aβ斑块的趋化作用,从而促进Aβ斑块的吞噬清除。     

pEGFP/A_2M(FP_6)转染神经干细胞海马移植治疗APP/PS1双转基因AD小鼠的实验观察

目的:携带pEGFP/A2M(FP6)的神经干细胞(NSCs)定向移植到APP/PS1双转基因AD小鼠海马内,观察移植细胞的分化、迁移,脑内Aβ沉积的变化,以及对AD小鼠学习记忆功能的影响。方法:APP/PS1转基因AD小鼠分为假手术(SO)组、人工脑脊液(ACSF)组、转染pEGFP的NSCs(pEGFP-NSCs)组及转染pEGFP/A2M(FP6)的NSCs(pEGFP/A2M(FP6)-NSCs)组,移植物小鼠海马CA1区定位注射,水迷宫实验检测小鼠认知功能,免疫组化观察小鼠脑内移植细胞的分化、迁移及Aβ病理变化。结果:pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较SO组及ACSF组显著缩短(P<0.05);pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠逃避潜伏期较pEGFP-NSCs组缩短(P<0.05)。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组和pEGFP-NSCs组转基因小鼠海马及皮质内,部分Aβ染色阳性斑块周围可见表达EGFP的移植细胞。pEGFP/A2M(FP6)-NSCs组转基因小鼠额叶、海马区域,Aβ染色阳性斑块数量和平均面积均较其他3组显著减少(P<0.05)。移植的NSCs,部分细胞Nestin染色呈阳性,部分细胞GFAP染色呈阳性,少数细胞MAP-2染色呈阳性。结论:移植pEGFP/A2M(FP6)NSCs到APP/PS1双转基因AD小鼠海马,可减少AD小鼠脑内Aβ斑块沉积,部分移植的NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,小鼠的学习记忆功能显著改善。     

APP/PS1转基因AD小鼠脑内淀粉样斑块与铁沉积的磁敏感成像研究

目的 应用三维增强磁敏感成像(3D-enhanced susceptibility weighted angiography,ESWAN)技术检测APPswe/PSEN1de9基因突变型小鼠(购自美国Jackson Laboratory,简称为APP/PS1转基因小鼠)脑不同部位的平均相位值(mean phase value,MPV),并探讨其与铁蛋白及淀粉样斑块分布的相关性。材料与方法 APP/PS1转基因小鼠及野生型对照组小鼠行T1WI、T2WI和ESWAN序列扫描,测量小鼠脑皮质区、海马区及丘脑区MPV。对鼠脑组织进行铁蛋白和Aβ蛋白的免疫组化染色,并分别计数感兴趣区内染色斑块数量和面积所占百分比。对感兴趣区MPV与斑块数量、斑块面积百分比采用Pearson检验进行相关分析。结果 APP/PS1转基因小鼠与对照组小鼠皮质区(t=-2.201,P=0.045)和海马区(t=-2.524,P=0.024)的MPV值差异均具有统计学意义。APP/PS1转基因小鼠与对照组小鼠丘脑区的MPV差异不具有统计学意义(t=-2.094,P=0.055)。APP/PS1转基因小鼠每组中的MPV与铁蛋白斑块数量与范围分别具有显著相关性(P0.05);淀粉样斑块与铁蛋白的数量与范围分别具有相关性(P0.05)。结论 APP/PS1转基因小鼠脑内MPV与脑内铁沉积具有显著相关性。APP/PS1转基因小鼠脑内皮质区、海马区及丘脑区的铁沉积持续进行,并且与淀粉样斑块的形成具有相关性。     

参乌胶囊对APP转基因小鼠学习记忆能力及脑β-淀粉样肽含量的影响

目的观察中药参乌胶囊对APP转基因小鼠学习记忆能力的影响及其作用机制.方法将APP 695V717I转基因小鼠随机分为模型组、参乌小剂量(0.4g/kgg/kg·d)组和大剂量(1.2·d)组,同月龄同背景C57BL/6J小鼠为对照组.各组老鼠从4月龄至10月龄灌胃给药或水,然后应用Morris水迷宫和物体识别实验检测小鼠的学习记忆能力;用放射免疫法检测小鼠脑皮层匀浆中β-淀粉样肽(Aβ)的含量;用刚果红染色检测皮层淀粉样斑块的数目.结果模型小鼠在Morris水迷宫实验中的游泳时间和游泳距离较对照组明显延长(P<0.01),对新物体的探索相对时间缩短,皮层可溶性Aβ含量升高(P<0.05),脑内淀粉样斑块明显增多(P<0.01).与模型组比较,参乌胶囊大剂量组游泳时间缩短(P<0.05),对新物体的探索相对时间延长(P<0.05);大、小剂量组小鼠脑内可溶性Aβ含量和脑内淀粉样斑块均明显减少(P<0.01).结论参乌胶囊可明显改善APP转基因小鼠学习记忆能力,其作用机制是通过抑制脑内Aβ的产生而实现的.     

APP/PS1小鼠不同时期灰质体积变化与Aβ沉积和学习记忆功能的相关性分析

目的:分析阿尔兹海默病(AD)双转基因APP/PS1模型小鼠大脑灰质体积变化与其学习记忆能力和相关脑区β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的相关性,以期为探明AD动物模型的病理特征提供可靠的行为学和影像学依据。方法:共纳入野生组(WT)和APP/PS1组2组小鼠,每组36只。WT组小鼠选用C57-BL/6小鼠,APP/PS1组选用APP/PS1双转基因小鼠,2组均分别由2、6、12不同月龄小鼠组成,每组每个月龄小鼠12只。通过Morris水迷宫测试(定位航行实验和空间探索实验)检测2组小鼠空间记忆学习能力和空间记忆提取能力;采用磁共振T2加权成像(MRI T2WI)扫描检测小鼠大脑双侧内嗅皮质和海马的灰质体积变化情况;分离和制备2组不同月龄小鼠大脑石蜡切片,采用Thioflavine-s(Th-s)荧光染色检测2组小鼠大脑双侧内嗅皮质和海马的Aβ沉积情况;采用Pearson相关分析法分析2组小鼠不同时期的灰质体积变化与其学习记忆能力和对应脑区Aβ沉积的相关性。结果:①Morris水迷宫测试结果:与WT组比较,APP/PS1组2月龄小鼠行为学结果无明显区别,差异无统计学意义(P0.05);APP/PS1组6、12月龄小鼠逃避潜伏期明显增加、穿越平台次数明显减少,差异具有统计学意义(P0.05)。②MRI T2WI扫描结果:与WT组比较,APP/PS1组2月龄小鼠灰质体积无明显变化,差异无统计学意义(P0.05);APP/PS1组6月龄小鼠内嗅皮质体积明显缩小,APP/PS1组12月龄小鼠内嗅皮质和海马体积均明显缩小,差异具有统计学意义(P0.05)。③Th-s荧光染色检测结果:WT组、APP/PS1组2月龄小鼠均未检测出Aβ沉积;与WT组比较,APP/PS1组小鼠6月龄内嗅皮质和海马可检测到少量Aβ沉积,而12月龄时内嗅皮质和海马则可检测出大量致密Aβ斑块,差异具有统计学意义(P0.05)。④相关性分析结果:APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与逃避潜伏期呈明显负相关关系(r=-0.729,P0.001;r=-0.643,P0.001);APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与穿越平台次数呈明显正相关关系(r=0.705,P0.001;r=0.719,P0.001);APP/PS1组小鼠内嗅皮质和海马体积变化与Aβ沉积呈明显负相关关系(r=-0.865,P0.001;r=-0.885,P0.001)。结论:APP/PS1转基因小鼠可能于6月龄时就发生学习记忆功能障碍,且随时间渐进性加重;这种学习记忆功能障碍可能与大脑内嗅皮质和海马体积萎缩有关;而Aβ过度沉积可能是导致大脑灰质体积萎缩的因素之一。     

喹硫平对阿尔茨海默小鼠淀粉样β蛋白42表达的影响及机制研究

目的探索喹硫平对阿尔茨海默小鼠淀粉样β蛋白42(Aβ42)的表达的影响及其机制。方法C57BL/6小鼠20只作为对照组,APP/PS1小鼠40只分为APP/PS1组、APP/PS1+喹硫平组,各20只。APP/PS1+喹硫平组小鼠通过腹腔给予喹硫平溶液2.5 mg/(kg·d),连续给药2个月,对照组和APP/PS1组小鼠每天腹腔给予等量双蒸水。通过新事物识别实验检测三组小鼠的记忆功能;通过Western blot检测三组小鼠海马脑区Aβ42蛋白、核因子-κB(NF-κB)p65蛋白的表达水平;通过酶联免疫吸附(ELISA)检测海马脑区白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,免疫荧光染色计算小胶质细胞数量。结果与对照组比较,APP/PS1小鼠对新事物的探索时间显著降低(P<0.05),小胶质细胞明显激活,小胶质细胞的数量显著增加(P<0.05),IL-10和TNF-α的表达水平均显著增加(P<0.05),Aβ42、NF-κB p65蛋白表达水平显著增加(P<0.05);与APP/PS1组比较,APP/PS1+喹硫平组小鼠的探索时间显著延长(P<0.05),小胶质细胞数量显著减少(P<0.05),IL-10和TNF-α表达水平均显著降低(P<0.05),Aβ42、NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论喹硫平能降低Aβ42蛋白的产生,促进AD小鼠的记忆功能恢复,其发生机制可能与小胶质细胞激活和NF-κB信号通路活化相关。     

电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法将30只4月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组。百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,干预28 d,野生组和模型组不干预。采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力;免疫组化技术观察小鼠大脑皮质β-淀粉样蛋白的沉积;Western blotting和RT-PCR法检测小鼠皮质脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和基因的表达情况。结果与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),跨越平台次数明显增加(P0.01);β-淀粉样蛋白的沉积减少(P0.05);BDNF蛋白和基因的表达明显增多(P0.01)。非穴组与模型组相比无显著性差异(P0.05)。结论电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与增加大脑皮质BDNF蛋白和基因的表达,降低β-淀粉样蛋白的沉积有关。     

抗人甲状腺球蛋白人源化单克隆抗体的制备

目的获得抗人甲状腺球蛋白（hTg）人源化单克隆抗体。方法从分泌抗人甲状腺球蛋白的杂交瘤细胞株hTg-60中提取总RNA,逆转录-酶链聚合反应（RT-PCR）扩增出鼠源性单克隆抗体hTg-60的VH及VL基因,经基因测序分析,设计出人源化抗体的基因引物,获得抗Tg单克隆抗体人源化VH及VL基因并将其克隆入真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO）,表达人源化抗hTg抗体。结果成功获得了6株能稳定分泌抗hTg人源化抗体的细胞株。结论为进一步获得人源化的hTg抗体及临床应用奠定了基础。     

高强度间歇运动训练上调APP/PS1转基因阿尔兹海默病小鼠海马线粒体自噬的研究

目的:观察高强度间歇运动训练干预是否能改善APP/PS1转基因AD小鼠病理表现,并探讨线粒体自噬在其间的生物学效应。方法:8月龄雄性APP/PS1转基因小鼠分为转基因模型安静组(SED-Tg)和转基因模型+高强度间歇运动训练组(HIIT-Tg),C57BL/6野生型小鼠纳入野生型安静组(SED-Wt)。HIIT-Tg组动物进行12周高强度间歇运动训练。避暗被动回避实验检测学习记忆能力,JC-1荧光探针检测海马线粒体膜电位,二氯荧光素探针检测海马线粒体ROS,Western Blot法检测脑海马Aβ-42、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin、Bnip3蛋白表达。结果:(1)SED-Tg组与SED-Wt组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin和Bnip3蛋白表达显著降低(P0.05—0.01),线粒体ROS产生速率和Aβ-42蛋白表达显著升高(P0.01)。(2)HIIT-Tg组与SED-Tg组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1和Parkin蛋白表达显著升高(P0.01),线粒体ROS产生速率和Aβ-42蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:高强度间歇运动训练可通过上调AMPK-PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,改善线粒体功能,减少APP/PS1转基因AD小鼠脑海马Aβ积聚,提高记忆和学习能力。     

电针百会穴改善APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力及对磁共振波谱的影响

目的:探讨电针百会穴对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力及氢质子磁共振波谱(1H-MRS)的影响。方法:雄性APP/PS1转基因小鼠及雌性阴性小鼠育种后代,经PCR鉴定后将育种后代中15只转基因小鼠根据随机数字表分为模型组7只和电针组8只,8只同窝阴性小鼠作为正常组。电针百会穴干预4周,正常组及模型组同等条件抓取。Morris水迷宫观察小鼠空间学习记忆能力,1H-MRS检测小鼠脑内海马区N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、谷氨酸(Glu)水平。结果:Morris水迷宫试验显示,电针组小鼠逃避潜伏期较模型组显著缩短(P0.05),穿越平台次数增加(P0.05);与模型组小鼠比较,电针组小鼠海马区NAA、Glu水平均较高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:电针百会穴可改善APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与脑内海马区NAA、Glu含量增加有关。     

APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型前联合异常改变

背景:阿尔茨海默病研究大多主要集中在淀粉样β蛋白和神经元死亡之间的关系,但是对白质损害研究却鲜有报道.目的:观察APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型前联合病理改变特点.设计、时间及地点:以组织学改变为依据,分组对照观察,于2007-09/2008-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院神经科实验室完成.材料:雌性转基因APP/PS1小鼠(表达人突变的PS1(M1146L)基因和APP(KM670/671NL,V7171)基因,对照组老鼠选用的是没有淀粉样蛋白沉积的雌性PS1小鼠.分为年轻组(2月龄,包括8只APP/PS1,7只PS1)和老年组(24月龄,包括6只APP/PS1,7只PS1).方法:利用刚果红和免疫组织化学方法观测该AD转基因模型脑内淀粉样改变;采用氯化金髓鞘染色方法和轴突免疫组织化学染色,利用吸光度方法对前联合轴突密度和髓鞘化程度的染色进行相对吸光度定量分析.主要观察指标:①细胞内和细胞外淀粉样β蛋白的染色.②在冠状位前联合的平均面积大小测量.③前联合处轴突密度和髓鞘化程度定量相对吸光度值.结果:在老年组APP/PS1小鼠,大量的刚果红阳性染色出现在皮质,海马以及丘脑,前联合也出现阳性染色;细胞内淀粉样β蛋白仅出现在年轻组APP/PS1的皮质结构中.在老年组PS1组小鼠,前联合的表面积大小比年轻组PS1和老年组APP/PS1组小鼠都有显著的增长.老年组包括APP/PS1和PS1组轴突的染色都有显著的下降,髓鞘化程度比年轻组有增高趋势.不同表型分析显示,轴突密度和髓鞘化程度在年轻组APP/PS1和PS1组相当;老年APP/PS1组轴突密度比PS1组有显著的下降,老年组APP/PS1小鼠髓鞘化程度与PS1无显著差别.结论:随着年龄的增长,APP/PS1阿尔茨海默病转基因小鼠模型前联合存在着轴突的丢失,髓鞘相对保持完整.淀粉样β蛋白对轴突有直接的毒性作用.     

过表达精神分裂断裂基因1对APP/PS1转基因阿尔茨海默病小鼠突触可塑性及学习记忆能力的改善

目的 探索精神分裂断裂基因1(DISC1)对APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠突触可塑性及学习记忆能力的影响.方法 Western blot比较正常人和AD患者脑组织中DISC1的表达情况;体外培养C57胎鼠神经元,分为GFP组、GFP+Aβ组、DISC1+Aβ组,激光...     

淫羊藿黄酮对阿尔茨海默病模型神经炎性反应的影响

目的 观察淫羊藿黄酮(EF)对阿尔茨海默病(AD)小鼠模型神经炎性反应的影响.方法 2月龄ICR雄性小鼠侧脑室注射β淀粉样肽1-40(Aβ),建立AD小鼠模型.应用Morris水迷宫法和避暗试验检测小鼠的学习记忆功能,放射免疫法测定脑内白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,免疫组织化学法测定脑内神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞(星形胶质细胞)的表达.结果 与对照组比较,模型组小鼠学习记忆能力降低( P<0.05, P<0.01),脑内IL-1β和TNF-α含量增加( P<0.01),星形胶质细胞增生( P<0.05).与模型组比较,EF给药组(100 mg/kg、300 mg/kg)小鼠的学习记忆能力明显改善( P<0.05, P<0.01),IL-1β和TNF-α含量及GFAP阳性细胞表达数均降低( P<0.05, P<0.01).结论 EF可降低Aβ诱导的小鼠脑内炎性反应.     

电针百会穴对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠18F-FDGPET/CT成像及学习记忆的影响

目的:观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠葡萄糖代谢水平以及学习记忆的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法:将30只雌性12月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组。百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,每次30min,每天1次,每周5天,共治疗4周,野生组和模型组不干预。采用正电子发射断层扫描技术(PET)观察各组小鼠大脑18F-FDG摄取率的水平;Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆。结果:与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P0.05),跨越平台次数增加(P0.01);非穴组小鼠逃避潜伏期与模型组相比无显著性差异(P0.05);百会组小鼠18F-FDG摄取率高于野生组、模型组以及非穴组。结论:电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能是通过改善小鼠脑内葡萄糖代谢从而发挥神经保护作用。     

抗人甲状腺球蛋白人源化单克隆抗体的制备

目的获得抗人甲状腺球蛋白(hTg)人源化单克隆抗体。方法从分泌抗人甲状腺球蛋白的杂交瘤细胞株hTg-60中提取总RNA,逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)扩增出鼠源性单克隆抗体hTg-60的VH及VL基因,经基因测序分析,设计出人源化抗体的基因引物,获得抗Tg单克隆抗体人源化VH及VL基因并将其克隆入真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),表达人源化抗hTg抗体。结果成功获得了6株能稳定分泌抗hTg人源化抗体的细胞株。结论为进一步获得人源化的hTg抗体及临床应用奠定了基础。     

心脏骤停大鼠复苏后心脑内IL-1β和TNF-α的变化

目的探讨窒息至心脏骤停大鼠复苏后心脑IL-1β和TNF-α的变化。方法采用呼气末夹闭气管窒息法建立大鼠心脏骤停模型,并心肺复苏成功后生存24h,将20只健康Wistar大鼠随机2组分别为模型组,正常对照组。复苏24h后处死大鼠,取心、脑组织标本,电镜下观察心、脑组织的病理改变。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测心、脑组织中IL-1β和TNF-α的含量变化。结果心、脑组织病理观察显示,与对照组相比模型组心脑细胞超微结构出现损伤性改变;心、脑中IL-1β和TNF-α含量变化,与对照组相比模型组心、脑IL-1β和,TNF-α含量明显升高。结论心跳骤停复苏后大鼠心、脑组织内IL-1β和TNF-α等炎症细胞因子含量增多,提示心脑内存在着炎症介质泛滥,失控,并加重心脑损伤。     

转基因阿尔茨海默病小鼠脑内炎症反应的诱发因素研究

目的 观察炎症反应在转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠脑组织中的变化,探讨AD脑内炎症反应的诱发因素.方法 选用3、12个月龄转人β-淀粉样前体蛋白/早老素-1(APP/PS1)基因AD小鼠及正常野生型(WT)小鼠,分别应用免疫组织化学法和ELISA法观察脑内淀粉样斑块、炎性因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)α、前列腺素(PGE)2]的变化.结果 3个月龄APP/PS1基因AD小鼠脑组织中无淀粉样斑块沉积,未发现激活的星型胶质细胞和小胶质细胞,炎性因子IL-1β、IL-6、TNFα、PGE2的含量与WT小鼠差异无统计学意义(P均＞0.05).12个月龄转APP/PS1基因AD小鼠脑组织中有大量淀粉样斑块沉积,并伴有大量激活的星型胶质细胞和小胶质细胞,炎性因子IL-1β、IL-6、TNFα、PGE2的含量[分别为(56.02±9.04)、(8.66±0.83)、(97.48±26.58)、(72.18±21.01)ng/g]较WT小鼠[分别为(29.81±6.03)、(7.73±0.74)、(61.98±11.11)、(37.23±10.96)ng/g]及3个月龄转APP/PS1基因AD小鼠[分别为(30.05±3.53)、(7.43±1.17)、(59.34±10.47)、(42.56±5.93)ng/g]显著增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 在淀粉样斑块形成之前,转APP/PS1基因AD小鼠脑组织中无明确的炎症反应;而淀粉样斑块沉积之后,脑组织中有显著的炎症反应;AD脑内炎症反应与淀粉样斑块形成密切相关,淀粉样蛋白(Aβ)沉积是导致脑内炎症反应的直接诱发因素.

Abstract：

Objective To observe the changes of cerebral inflammation-related markers in brain of a transgenic mouse model of Alzheimer's disease (AD) ,and to determine the causative factor to the development of cerebral inflammation in AD. Methods 3- and 12-month-old β-amyloid protein precursor ( APP)/presenilin (PSI) transgenic mice and age-matched wild-type mice (WT) were used in the study. The changes of amyloid plaques, inflammatory factors ( interleukin 1β ( IL-1β ); interleukin 6( IL-6 ); tumor necrosis factor α (TNFα) ;prostaglandin E2 (PGE2)) in the brains among these mice were measured by immunohistochemistry and ELISA. Results Immunohistochemical analysis revealed that no amyloid plaques and activated astrocytes as well as microglia were observed in the 3-month-old APP/PS1 mice. There were no significant differences in the levels of inflammatory factors (IL-1β, IL-6 ,TNFα,and PGE2) between the 3-month-old APP/PS1 and WT mice ( Ps ＞ 0. 05 ). However, abundant amyloid plaques accompanied by a remarkable increase of activated astrocytes and microglia were found in the brain of the 12-month-old APP/PS1 mice. The levels of inflammatory factors (IL-1β,IL-6,TNFα, and PGE2 ) were significantly increased in the 12-month-old APP/PS1 mice ([56. 02 ±9. 04] ng/g, [8. 66 ±0.83] ng/g, [97.48 ±26.58] ng/g, [72. 18 ±21.01] ng/g) than in the WT mice ([29. 18 ± 6. 03] ng/g, [7. 73 ± 0. 74] ng/g, [61.98 ±11.11] ng/g, [37. 23 ± 10. 96] ng/g) and the 3-month-old APP/PS1 mice ( [30. 05 ± 3.53] ng/g, [7.43 ± 1.17] ng/g, [59.34 ± 10. 07] ng/g, [42. 56 ±5.93] ng/g) (P＜0.05,or P＜0.01,respectively). Conclusion This study demonstrates that the APP/PS1mice did not show cerebral inflammation before the appearance of amyloid plaques, and exhibited remarkable inflammation after amyloid plaque deposition. These findings suggest that the induction of cerebral inflammation is tightly associated with amyloid plaque formation, and deposition of amyloid-beta protein (Aβ) may be the direct causative factor to the development of cerebral inflammation in AD.     

二苯乙烯苷对APP/PS1小鼠老年斑形成和炎症反应的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对APP/PS1双转基因小鼠脑内皮层及海马老年斑和β淀粉样蛋白(Aβ)的形成,以及小胶质细胞和星形胶质细胞活化的影响。方法 64只5月龄APP/PS1小鼠,随机分为模型组(n=16)、多奈哌齐组(n=16)、TSG低剂量(0.05 g/kg)组(n=16)和TSG高剂量(0.1 g/kg)组(n=16);32只同月龄野生型(WT)小鼠随机分为正常对照组(n=16)和TSG高剂量(0.1 g/kg)WT组(n=16)。正常对照组与模型组予蒸馏水灌胃,其余各组分别予相应药物灌胃。给药7个月(12月龄)后,应用新物体识别实验检测各组学习记忆功能,刚果红染色法检测脑部淀粉样斑块沉积情况,免疫组化法观察脑部Aβ_(40/42)沉积以及离子钙结合蛋白(Iba1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达。结果与模型组相比,各治疗组小鼠新物体识别指数明显增加(P0.01),脑部斑块沉积减少(P0.05),Aβ_(40/42)沉积下降(P0.05),Iba1和GFAP表达降低(P0.05)。结论 TSG能改善APP/PS1小鼠的学习记忆,减少Aβ的沉积和老年斑形成,降低炎症反应,小剂量即可发挥作用,作用与多奈哌齐类似。     

肿瘤坏死因子-α和白介素-1β对小鼠腹主动脉炎症反应及内皮P-选择素表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和(或)白介素-1β(IL-1β)作用后小鼠腹主动脉的炎症反应及内皮P-选择素的表达.方法:32只小鼠随机平均分为3个实验组(1L-1β组、TNF-α组、TNF-α+IL-1β组)和1个对照组,实验组在小鼠腹主动脉周围无菌注射炎性因子TNF-α和(或)IL-1β(对照组用PBS),4 h后取出腹主动脉行HE染色和内皮P-选择素免疫组化染色,定量分析动脉病理形态学的改变和半定量分析内皮P-选择素表达强度.结果:对照组动脉未见明显的病理改变及内皮P-选择素表达,3个实验组的动脉组织则发生不同程度的急性炎症改变,并以TNF-α+IL-1β组为甚,该组动脉发生的病理改变程度和内皮P-选择素表达的强度与范围明显大于IL-1β组和TNF-α组(P<0.05).结论:联合应用TNF-α和IL-1β诱导的大动脉内皮的炎性病变稳定可靠,可用于急性冠状动脉综合症和相关大动脉内皮炎性病变早期的研究.     

神经干细胞联合神经生长因子纳米粒海马移植对阿尔茨海默病转基因鼠的影响

目的:观察神经生长因子(NGF)纳米粒对神经干细胞(NSC)在APP/PS1转基因鼠脑内存活、迁移、分化的影响,以及NSC联合NGF纳米粒移植对基底前脑胆碱能神经元及海马、皮层β-淀粉样蛋白(Aβ)的影响。方法:36只12月龄雄性APP/PS1转基因小鼠采用随机数字表法分为AD对照组、NSC移植组、联合移植组,每组12只。另外选取12只12月龄野生型(WT)小鼠作为WT对照组。体外分离培养表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转基因小鼠胎脑来源的NSC。WT对照组和AD对照组于双侧海马分别注射5μL磷酸盐缓冲液(PBS),NSC移植组和联合移植组于双侧海马分别注射等量NSC悬液和NSC联合NGF纳米粒悬液。移植4周后,采用免疫荧光法检测移植NSC的存活、迁移、分化以及基底前脑胆碱能神经元(ChAT)的变化;采用实时荧光定量PCR法(Q-PCR)检测基底前脑ChAT和Lhx8 mRNA表达;采用Western blotting检测各组基底前脑ChAT蛋白表达情况;采用硫磺素T染色检测各组小鼠海马及皮层Aβ斑块的数量。结果:(1)移植4周后,EGFP阳性NSC在脑内存活,广泛迁移至胼胝体远端、皮层及海马深部,并能分化为神经元及星形胶质细胞,联合移植组细胞存活数量更多,并且NSC显示更多复杂的突起形态。(2) NSC移植组和联合移植组基底前脑ChAT神经元数量增加(P0.05),联合移植组ChAT及Lhx8基因表达明显高于NSC移植组(P0.05)。(3) NSC移植组和联合移植组海马及皮层Aβ斑块的数量均未明显减少(P0.05)。结论:NSC联合NGF纳米粒移植可以间接保护基底前脑胆碱能神经元和NSC的存活与成熟,并促进基底前脑ChAT和Lhx8的基因表达,但不能减少海马和皮层中Aβ斑块数量。