亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达p38MAPK和MCP-1的影响

目的:观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病(DN)中的作用机制. 方法:分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物(AGEs)刺激HBZY-1细胞;先给予100 nmol/L亚硒酸钠预处理后,再分别以上述4种刺激因素孵育HBZY-1细胞,分别检测HBZY-1细胞p38MAPK和MCP-1的表达并比较. 结果:4种刺激因素均可作为独立因素,导致HBZY-1细胞p38MAPK和MCP-1表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的p38MAPK和MCP-1的表达. 结论:亚硒酸钠通过抑制p38MAPK和MCP-1在HBZY-1细胞的表达, 从而有效防治DN的发生发展,表明硒在DN的防治过程中发挥积极作用.     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF的调控

目的 观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的影响,从而研究硒在防治糖尿病肾病中的作用机制。方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育细胞系HBZY-1;先给予亚硒酸钠预处理细胞后,再分别给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1VEGF蛋白表达。结果 4种刺激因素均可作为独立因素,导致细胞系HBZY-1VEGF蛋白表达量增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的VEGF蛋白表达。结论 亚硒酸钠通过抑制VEGF在细胞系HBZY-1中的表达,从而有效地防治糖尿病肾病的发生发展。     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达p38丝裂原活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体γ的影响

目的:观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1表达p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的影响,从而研究p38MAPK和PPARγ在糖尿病肾病形成中的作用及硒在防治糖尿病肾病中的作用机制.方法:在以下3种条件下培养细胞系:(1)分别以一定浓度高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和AGEs刺激细胞系HBZY-1一定时间;(2)先给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580或亚硒酸钠预处理细胞后,再分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物4种因素孵育细胞系HBZY-1;(3)以不加任何刺激培养细胞系作为对照.RT-PCR法观察各种情况下细胞系HBZY-1 PPARγ mRNA的表达,Western印迹法观察磷酸化p38MAPK的表达.结果:4种刺激因素均可作为独立因素激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,PPARγ表达量显著减少;SB203580能显著增加细胞系HBZY-1 PPARγ表达;亚硒酸钠能明显抑制细胞系HBZY-1p38MAPK磷酸化表达,而显著增加细胞系HBZY-1 PPARγ表达(P＜0.01).结论:在大鼠肾小球系膜细胞,p38MAPK对PPARγ具有拮抗作用,亚硒酸钠明显增加细胞系HBZY-1 PPARγ表达,并具有类似PPARγ激动剂的作用.     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达COX-2mRNA的调控

目的:观察亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC)表达环氧化酶-2(COX-2)的影响,从而研究硒在抗糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以高葡萄糖、糖基化终产物,高胰岛素和过氧化氢孵育RGMC;先给予亚硒酸钠预处理细胞后,再分别给予上述4种因素孵育RGMC,观察细胞COX-2 mRNA的表达.结果:4种刺激因素均可作为独立因素,导致RGMC COX-2 mRNA表达量的增加;亚硒酸钠能抑制上述4种因素所致的COX-2 mRNA的表达.结论:亚硒酸钠通过抑制COX-2 mRNA在RGMC中的表达,从而有效地防治糖尿病肾病的发生发展.     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞p38MAPK和VEGF表达的调控

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)和血管内皮生长因子(VEGF)的关系,从而研究p38MAPK和VEGF在糖尿病肾病中的作用及硒在抗糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以高葡萄糖、糖基化终产物,高胰岛素和过氧化氢孵育大鼠肾小球系膜细胞(RMCs);以p38MAPK特异抑制剂SB203580和亚硒酸钠分别预处理RMCs,再给予上述四种刺激因素孵育RMCs,观察RMCs p38MAPK和VEGF蛋白表达.结果:高葡萄糖、糖基化终产物、高胰岛素和过氧化氢均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,VEGF表达也明显增加:SB203580预处理后,VEGF表达被显著抑制;亚硒酸钠预处理后,p38MAPK磷酸化被明显抑制,同时VEGF表达显著降低.结论:p38MAPK调控VEGF的表达,表明p38MAPK和VEGF参与了糖尿病肾病的发生发展;亚硒酸钠可通过抑制p38信号通路而抑制VEGF的表达,从而有效地防治糖尿病肾病.     

亚硒酸钠对糖尿病肾病大鼠肾脏脂联素表达的影响

目的:探讨亚硒酸钠对糖尿病肾病大鼠肾脏脂联素表达的影响及二者间的关系,从而研究亚硒酸钠和脂联素在糖尿病肾病中的作用机制。 方法:通过链脲佐菌素法并给予高脂饮食诱导模拟大鼠糖尿病肾病模型,实验设空白对照组、糖尿病肾病对照组、亚硒酸钠干预组,每组10只。亚硒酸钠干预组每日给予亚硒酸钠溶液1 μg/kg灌胃,其他各组给予等量盐水溶液灌胃。灌胃10周后处死大鼠,取大鼠血、尿标本测相关生化指标。快速切取小块肾皮质组织,4%戊二醛固定,制电镜切片扫描电镜观察超微结构。取肾脏组织标本制石蜡切片光镜下观察病理改变及免疫组化分析定位蛋白表达,定量PCR法检测脂联素的mRNA表达、蛋白质印迹法检测脂联素蛋白表达。结果:亚硒酸钠干预组大鼠基本状况和生化指标较糖尿病肾病对照组明显改善,光镜下亚硒酸钠干预组病理改变和电镜下超微结构较糖尿病肾病对照组明显减轻。免疫组化分析,亚硒酸钠干预组脂联素蛋白着色较糖尿病肾病对照组明显增强,且肾小管、肾小球内均有着色。亚硒酸钠干预组脂联素mRNA是空白对照组的2.043倍,糖尿病肾病对照组脂联素mRNA是空白对照组的1.373倍。亚硒酸钠干预组脂联素蛋白表达水平高于糖尿病肾病对照组及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:亚硒酸钠通过抗氧化应激、增加外周组织对胰岛素的敏感性从而促进肾脏脂联素表达,表明亚硒酸钠和脂联素在延缓和防治糖尿病肾病的发生发展中可能起重要作用。     

亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基IV的下调机制

目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基IV(COX IV)表达的变化情况及其机制和意义.方法 用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX IV蛋白和mRNA表达的变化.活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化以及caspase-3的激活.caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化.瞬时转染干扰NB4细胞中COX IV表达后,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 亚硒酸钠诱导NB4细胞COX IV蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化.活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调与caspase-3激活.caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调.干扰COX IV表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加.结论 在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX IV在蛋白水平显著下调.活性氧介导COX IV下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX IV表达下调,抑制COX IV能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性.     

己酮可可碱对高糖时人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1(nonocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响及己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对其干预作用.方法 将培养的人肾小球系膜细胞分为6组:正常对照组、高糖组、甘露醇组、PTX甲组、PTX乙组、PTX丙组,分别在24、48和72 h采用RT-PCR法和ELISA法检测PTX对高糖条件下系膜细胞内MCP-1mRNA及蛋白、细胞外基质纤维连接蛋白(fi-bronectin,FN)表达的影响.结果 高糖组人肾小球系膜细胞MCP-1mRNA及蛋白、FN的表达较正常对照组明显增加(P<0.01);己酮可可碱各组比高糖组有明显下降(P<0.01);不同浓度的己酮可可碱对高糖诱导的系膜细胞MCP-1的表达抑制程度不同(P<0.05).结论 己酮可可碱可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞MCP-1的表达以及FN的分泌,呈时间、剂量依赖关系,己酮可可碱可能对糖尿病肾病的防治起到有益的作用.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌MCP-1的影响

目的 研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖和表达MCP-1的影响.方法 以大鼠MC为研究对象,高糖组浓度为30 mmol/L,分别以不同浓度rHuEPO(1,10,50,100 IU/ml)分别干预24,48,72 h,CCK-8比色法检测细胞增殖情况.用ELISA法和reahime PCR法测定干预24,48,72h时细胞MCP-1表达水平.结果 rHuEPO能促进高糖诱导的MCs增生,呈剂量和时间依赖性.正常培养的系膜细胞MCP-1蛋白和mRNA有低水平的表达,高糖组刺激24,48,72h均有高水平的表达,rHuEPO在1,10,50,100 IU/ml时,作用于高糖培养的MCs,细胞MCP-1的表达均显著降低.结论 rHuEPO能刺激高糖培养的系膜细胞增殖,抑制高糖培养的系膜细胞表达MCP-1.     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

PPARα激动剂对高糖刺激的肾系膜细胞PEDF和VEGF mRNA表达的影响

目的:研究色素上皮细胞衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病中的作用以及PPARα激动剂与糖尿病肾病的关系。方法:将培养的大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞株分为6组,高糖作为刺激因子,PPARα激动剂WY14643作为干预因素。分别设正常组,高糖组,高糖加WY14643治疗组(包括不同的WY14643浓度)以及高糖加WY14643溶剂对照组。用实时定量PCR法测定各组系膜细胞PEDF以及VEGF mRNA表达。结果:(1)与正常组相比较,高糖组肾系膜细胞PEDF mRNA的表达明显降低,而WY14643可逆转高糖导致的肾系膜细胞PEDF mRNA表达的降低。(2)高糖组肾系膜细胞VEGF mRNA的表达较正常组明显增加,而WY14643可减少高糖导致的肾系膜细胞VEGF mRNA表达的增加。结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF并增加VEGF的表达,而PPARα激动剂可在一定程度上逆转高糖导致的这种改变。     

P38信号通路在人脐静脉内皮细胞表达环氧化酶-2中的作用

目的：探讨P38信号通路(P38MAPK)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达环氧化酶-2(COX-2)的作用，从而研究P38MAPK在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法：分别以高葡萄糖、糖基化终产物(AGE)、高胰岛素和过氧化氢刺激HUVEC；检测P38MAPK和COX-2在HUVEC的蛋白表达。以P38MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HUVEC后，再用上述四种因素刺激HUVEC，检测COX-2在HUVEC的蛋白表达。结果：高葡萄糖、AGE、高胰岛素和过氧化氢均可独立激活P38MAPK，使磷酸化P38MAPK表达量增加，COX-2蛋白表达量也增加；SB203580预处理后，COX-2表达被显著抑制。结论：P38MAPK调控COX-2的表达，它是COX-2的上游信号分子，可能是动脉粥样硬化发生的始动信号之一。     

辛伐他汀对人脐静脉内皮细胞中p38MAPK表达的影响

目的探讨辛伐他汀对p38信号通路在人脐静脉内皮细胞中表达的影响，以期阐明其在防治糖尿病大血管并发症中的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，分别以糖尿病特有因素：高葡萄糖、高胰岛素、糖基化终末产物(AGE)和过氧化氢刺激人脐静脉内皮细胞，同时用辛伐他汀进行干预，用ELISA法检测不同刺激及干预因素条件对HUVEC中p38MAPK磷酸化蛋白表达的影响。结果高葡萄糖、高胰岛素、AGE和过氧化氢均可激活p38MAPK，使其磷酸化表达量增加，辛伐他汀可抑制p38MAPK磷酸化蛋白表达增加。结论辛伐他汀在预防糖尿病大血管并发症的作用机制中，可能与p38MAPK有关。     

姜黄素通过miR-146a抑制NF-κB信号通路保护大鼠糖尿病肾病的机制研究

目的 探讨姜黄素对糖尿病肾病肾脏损伤的保护作用及机制研究.方法 将SD大鼠随机分为对照组(N组)、糖尿病肾病模型组(DN组)和姜黄素干预治疗组(CT组).干预治疗4周后,检测各组大鼠肾脏组织的病理改变以及Nephrin蛋白变化情况;实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测m...     

多种病理因素对血管内皮细胞增殖与凋亡的影响及VEGF的干预作用

目的 研究缺氧、H2O2、氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对血管内皮细胞(VEC)增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及血管内皮生长因子(VEGF)的干预作用,探讨VEGF预防经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄和支架内血栓形成的机制.方法 将VEC分成对照组、缺氧处理组、缺氧+VEGF处理组、H2O2处理组、H2O2+VEGF处理组、OX-LDL处理组、OX-LDL+VEGF处理组、TNF-α处理组和TNF-α+VEGF处理组.利用四氮唑盐比色法检测各组细胞吸光度值,观察VEC增殖情况,采用原位末端标记法和流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,通过RT-PCR法了解各组细胞凋亡相关基因Bcl-2与Apo-1/Fas mRNA表达情况.结果 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α处理组凋亡细胞和Apo-1/Fas mRNA表达明显多于对照组和相应VEGF处理组,而细胞增殖和Bcl-2 mRNA表达则明显低于对照组和相应VEGF处理组(均P<0.01).结论 缺氧、H2O2、OX-LDL和TNF-α能抑制VEC增殖,诱导VEC凋亡,而VEGF能部分拮抗上述作用,其抗凋亡作用可能与Bcl-2 mRNA表达上调和Apo-1/Fas mRNA表达下调有关,为VEGF用于预防PCI后再狭窄和支架内血栓形成进一步提供了理论依据.     

糖尿病大鼠肾内小动脉早期动脉粥样硬化的实验研究

目的:探讨糖尿病大鼠大血管发生动脉粥样硬化(AS)时,肾内小动脉上有无MCP-1、ICAM-1等早期促AS形成的细胞因子的表达。方法:建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型加高脂、高糖饲养,12周时处死大鼠,HE染色行大鼠主动脉、肾组织病理组织形态检查,免疫组化方法检测MCP-1、ICAM-1表达。结果:DM组血脂、血肌酐及尿蛋白较对照组明显增高。DM大鼠主动脉出现明显动脉粥样硬化改变,同时肾内小动脉上出现MCP-1、ICAM-1的表达,且与血肌酐、尿蛋白水平呈正相关。结论:糖尿病大鼠主动脉发生AS时,肾内小动脉上已有MCP-1、ICAM-1等早期促AS形成的细胞因子的表达,可能参与了糖尿病肾病的发生、发展。     

Effects of rosiglitazone on the expression of beta1, integrin and ICAM-1 in high glucose-induced rat glomerular mesangial cells]

OBJECTIVE: To observe the effects of PPARgamma activators thiazolidinediones (Rosiglitazone) on the expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and beta1 integrin in high glucose-induced rat glomerular mesangial cells (GMC) in order to elucidate the relationship between PPARgamma and adhesion molecules. METHODS: Rat HBZY-1 GMCs were cultured in vitro and divided into 9 groups: Normal Glucose group (N), High Glucose group (H), Mannitiol group (M), Normal and High Glucose plus 1, 5, 10 micromol/L Rosiglitazone. Every group was treated for 24 hours. The expression of ICAM-1 was measured by immunohistochemistry, the expression of beta1 integrin by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry. RESULTS: It was found that high glucose can significantly increase the expression of ICAM-1 and beta1 integrin in GMCs, which is independent of the osmotic pressure. Rosiglitazone can inhibit the expression of ICAM-1 and beta1 integrin in normal and high glucose treated GMCs, and the inhibition is stronger in high glucose treated-group, which is in a dose-dependent manner. The expression of beta1 integrin is positively correlated with ICAM-1. CONCLUSION: Adhesion molecules involves in the pathogenesis of diabetic nephropathy (DN). PPARgamma activators-Rosiglitazone may exert effect on mesangial expansion and glomerulosclerosis in DN through the inhibition of expressions of adhesion molecules induced by high glucose.