裸小鼠肺癌模型的建立

目的：建立皮下异种肿瘤移植的裸小鼠肺癌模型。方法：采用培养细胞移植法,将人肺腺癌细胞系Ａ５４９ 接种于ＢａｌＢ／ＣＡｎｕ 品系裸小鼠背部皮下,观察肿瘤移植成功率,测量瘤体大小,并进行病理形态学检查。结果：裸小鼠皮下异种肺癌移植成功率为６０％ ～８５％ 。结论：利用人肺腺癌细胞系Ａ５４９ 可以建立皮下异种种瘤移植的裸小鼠肺癌模型。     

裸小鼠肺癌模型的建立

目的：建立皮下异种肿瘤移植的裸小鼠肺癌模型。方法：采用培养细胞移植法,将人肺腺癌细胞系Ａ５４９ 接种于ＢａｌＢ／ＣＡ ｎｕ 品系裸小鼠背部皮下,观察肿瘤移植成功率,测量瘤体大小,并进行病理形态学检查。结果：裸小鼠皮下异种肺癌移植成功率为６０％ ～８５％ 。结论     

应用环孢菌素A制备BALB/C小鼠肺癌模型的实验研究

目的 探讨环孢菌素A(CsA)对建立皮下肺腺癌异种移植的BALB/C小鼠模型成瘤率的影响.方法 取50只BALB/C小鼠腋窝皮下接种人肺腺癌细胞系A549后,随机分为实验组和对照组各25只.实验组于接种第24h起每天腹腔注射CsA,连续10天.对照组则给予腹腔注射同体积的生理盐水.比较两组的成瘤率以及胸腺、脾脏重量指数、CD4+、CD8+T移植瘤免疫组化细胞数.结果 实验组移植成瘤率为88.00％,显著高于对照组的52.00％(P＜0.05).与对照组相比,实验组胸腺指数显著降低(P＜0.05),CD4+、CD8+T细胞数以及CD4+/CD8+T细胞比值亦显著降低(P均＜0.01),但脾脏指数差异无显著性(P＞0.05).结论 使用CsA可以提高人肺腺癌细胞系A549制备皮下异种移植的BALB/C小鼠肺癌模型的成功率.     

姜黄素Ⅲ抑制A549裸小鼠移植瘤生长及其血管生成的实验研究

目的初步探讨中药姜黄的主要活性单体成分双脱甲氧基姜黄素(姜黄素Ⅲ)对人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤的生长及其血管生成的影响.方法选用人肺腺癌细胞株A549建立裸小鼠皮下移植瘤模型,腹腔注射姜黄素Ⅲ,测量移植瘤的重量、体积,同时应用CD34免疫组化染色,观测瘤组织内的微血管密度.结果姜黄素Ⅲ具有较好的抗人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤生长作用,移植瘤重量及体积显著低于阴性对照组(P＜0.01);瘤组织内可见微血管形态不规则,并可见无明显管腔形成的新生血管,姜黄素Ⅲ组微血管密度明显低于阴性对照组(P＜0.01).结论姜黄素Ⅲ能明显抑制人肺腺癌细胞系A549裸小鼠移植瘤的生长,其机制之一可能与其抑制瘤组织内血管生成有关.     

A549人肺癌细胞系/615-SCID小鼠转移瘤的生物学特征

目的通过建立A549人肺腺癌细胞/615-SCID小鼠模型,评价重度联合免疫缺陷615-SCID小鼠在建立人类肺癌转移模型方面的应用价值.方法将1×107A549细胞接种到615-SCID及SCID小鼠右上肢背部皮下,观察成瘤时间、成瘤率、肿瘤生长速度及转移发生.结果两品系小鼠接种后的成瘤率均为100%,615-SCID小鼠移植瘤潜伏期较长、生长较缓慢,更容易发生转移.结论 615-SCID小鼠比SCID小鼠更易于构建人类肺腺癌转移模型,对于肺癌转移特性研究具有较大的意义.     

生长抑制因子5抑制肺癌细胞增殖作用的研究

目的探讨生长抑制因子5(ING5)抑制肺癌细胞增殖的作用。方法采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞ING5高表达细胞系A549-ING5-OE和A549细胞空质粒对照细胞系A549-control。采用细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;采用皮下接种方法建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察ING5对裸鼠皮下成瘤能力及肿瘤体积大小的影响。结果本实验成功构建了肺癌A549-ING5过表达细胞系,与A549-control比较,细胞系A549-ING5-OE中ING5表达显著增高;增殖实验结果显示ING5高表达显著抑制了肺癌细胞的增殖能力;克隆形成实验结果显示细胞系A549-ING5-OE中ING5高表达的肺癌细胞克隆形成能力明显低于A549-control肺癌细胞(P<0.01);裸鼠在体水平研究结果显示ING5高表达可以抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长。结论 ING5可以抑制肺癌细胞的增殖,为临床治疗肺癌提供新的治疗靶点。     

耐紫杉醇肺癌细胞BNX动物模型的建立

目的建立一种耐药性稳定的人肺癌BNX小鼠皮下移植瘤模型,为研究体内肿瘤耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础。方法将体外培养的对数生长期的肺癌耐药细胞株A549-Taxol,接种在免疫缺陷小鼠的皮下,形成肿瘤,采用肿瘤组织块或肿瘤组织原代培养的细胞,分别于动物皮下接种致瘤;体内外交叉进行致瘤,提高耐药细胞株A549-Taxol的致瘤率和缩短致瘤时间。通过免疫组化鉴定该耐药细胞的特性。用MTT法检测细胞的耐药指数。结果耐药细胞接种于SCID小鼠4个月后在皮下形成肿瘤灶。用该肿瘤组织块或细胞悬液移植于SCID小鼠,通过反复3次后,细胞生长速度变快,2个月后皮下即可形成肿瘤。将该细胞移植于BNX小鼠,以同样的方法将瘤组织体内外交叉进行致瘤,最终BNX小鼠种植成功率达到80%。致瘤时间为3周。耐药细胞和组织块P-gp170、GST-π和MMP-7均高表达。A549-Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50)是亲代A549细胞的520倍。结论初步建立了人肺腺癌耐药细胞(A549-Taxol)的动物模型,为肺癌临床个体化治疗及耐药逆转研究等提供了良好的实验动物平台。     

槲皮素对人肺癌细胞和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的：研究槲皮素对人肺腺癌细胞株A549和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖的抑制作用，并探讨其可能的机制。方法：①以不同剂量的槲皮素作用于人肺腺癌细胞株A549，用噻唑蓝(MTT)试验观察槲皮素对人肺癌细胞株增殖的影响。②将移植有Lewis肺癌的ICR小鼠随机分为模型对照组、槲皮素组及顺铂组，均采取腹腔内注射方式给药。给药结束后，测定各组小鼠的瘤重，计算抑瘤率；用免疫组化方法测定肿瘤的增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平。结果：①槲皮素对3．549细胞增殖有明显的抑制作用，对细胞增殖的抑制率呈剂量效应关系。②槲皮素对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长有明显的抑制作用，并显著下调小鼠Lewis肺癌移植瘤的PCNA表达水平。结论：槲皮素对人肺腺癌细胞A549和小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞增殖有明显的抑制作用，其机制可能与抑制PCNA蛋白的表达有关。     

罗格列酮活化PPARγ促进顺铂抑制人肺腺癌裸鼠移植瘤生长作用研究

观察过氧化酶体增殖物激活受体,配体罗格列酮与顺铂联合应用时人肺腺癌细胞系A549裸鼠移植瘤的作用,探讨ROZ活化PPAR γ.下调NFκB,从而诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用机制.方法体外培养人肺康癌A549细胞,建立人肺腺癌(A549)细胞裸鼠移植瘤模型,28只荷瘤裸鼠随机分组进行实验.结果罗格列嗣,顺铂及两药合用均能抑制裸鼠移植瘤的生长.结论罗格列酮通过上调PPAR γ蛋白表达,下调NFκB蛋白表达,增强顺铂抑制人肺癌裸鼠移植瘤生长.     

尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁抗肺癌作用研究

目的 探讨尿胰蛋白酶抑制剂(urinary trypsin inhibitor,UTI)对人肺癌细胞系A549细胞体内外抗肿瘤作用.方法 选用尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁(ulinastatin),设置乌司他丁 0、100、200、400 U/mL四个浓度组及CTX3 μg/mL阳性对照组,采用MTT比色法检测乌司他丁对A549细胞增殖抑制作用,采用侵袭小室法检测乌司他丁对A549细胞的侵袭抑制作用.建立人肺腺癌(A549)细胞裸鼠异种抑制瘤模型,设置乌司他丁 0万单位、2.5万单位、5万单位组、10万单位组及CTX 0.1 g阳性对照组,通过绘制移植瘤生长曲线、统计分析瘤重和肺转移灶,检测乌司他丁对裸鼠体内肺腺癌抑制增殖和转移的作用.结果 增殖抑制率分别为0%、17.82%、25.46%、42.73%、57.46%,显示乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有增殖抑制作用;侵袭指数分别为16.44%、13.06%、11.73%、7.63%、8.12%,表明乌司他丁能有效抑制人肺癌细胞系A549细胞的侵袭;瘤重抑制率分别为0%、56.19%、61.11%、68.53%、89.17%;抗肺转移率分别为0%、75.36%、85.51%、90.75%、86.94%,显示乌司他丁能有效抑制裸鼠肺癌移植瘤的生长及转移.结论 乌司他丁对人肺癌细胞系A549细胞具有体内外抗肿瘤作用,该作用表现为抑制肿瘤增殖并突出表现于抑制肿瘤转移.     

CEA高表达人肺腺癌裸鼠移植瘤模型的建立

将1例人肺高分化腺癌手术标本直接移植于NIH裸小鼠皮下，建立了CEA高表达人肺高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型（LAX-91），裸鼠间已传32代，历时2年余，LAX-91潜伏期短，生长稳定，移植成功率100%，各代移植瘤病理组织学观察均保持了原病人肿瘤的结构。并且有分泌功能，染色体分析显示人恶性肿瘤特征。血清CEA含量多次测定结果表明，LAX-91具有稳定高分泌CEA的生物学特性。该移植瘤模型的建立，为进一步研究人肺癌和癌胚抗原的关系提供了有用的手段。     

肺癌细胞裂解物刺激树突状细胞诱导产生免疫应答的实验研究

目的采用肺癌细胞裂解物致敏树突状细胞（DCs）的方法制备肺癌疫苗并进一步通过实验验证其疗效。方法利用外周血的单个核细胞经粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子（GM-CSF）和人白细胞介素4（IL-4）体外诱导产生树突状细胞,用A549（人肺腺癌细胞系）细胞冻融抗原对其进行冲击诱导自体细胞毒T淋巴细胞（CTLs）产生。通过细胞毒试验及ELISA测定细胞因子的分泌和CTLs杀伤活性。制备荷瘤裸鼠模型,不同分组裸鼠经过一次或多次皮下注射CTLs。结果 A549冻融抗原致敏的DCs增加CTLs增殖,诱导的CTLs对A549细胞产生特异性杀伤,经过一次及多次接种后荷瘤裸鼠肿瘤生长减缓,并且肿瘤变小及生存时间较对照组明显延长,起到抑制肿瘤生长和延长生存时间的作用。结论通过实验证实了肺癌细胞裂解物抗原来刺激树突状细胞治疗肺癌A549荷瘤裸鼠模型是安全有效、可行的。为临床应用以树突状细胞为基础的肺癌疫苗免疫治疗提供了实验依据。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

Influence of site and method of implantation on growth and invasion of human lung adenocarcinoma in nude mice]

In the present study, the growth and invasion of human lung adenocarcinoma cells (LTEP-a-2) transplanted into different sites (s.c. and footpad) and using different methods (including inoculation of tumor cell suspension and tumor fragment) in 12 nude mice were examined. The animals were divided into two groups; namely, subcutaneous inoculation (6 nude mice) and footpad inoculation (6 nude mice). Two transplantation sites were selected in each mouse; i.e. the tumor cell suspension was implanted into one site, and the tumor fragment was implanted into the opposing site of the same mouse. In the subcutaneous inoculation group, tumor growth (100%) was accompanied by no invasive behavior (including suspension and fragment). In the footpad inoculation group, 3/6 cases of inoculation by suspension saw tumor growth with invasive behavior; but in the case of tumor fragment transplantation no tumor growth was found. One murine sarcoma was found in the tissues surrounding the human lung adenocarcinoma cells. The mechanism of formation of this murine sarcoma is discussed. Our results show that human tumor growth in nude mice is obviously influenced by the site of inoculation.     

载顺铂转铁蛋白长循环脂质体对肺癌A549小鼠移植瘤的抑制作用

目的研究载顺铂转铁蛋白长循环脂质体（transferrin modified cisplatin—loaded long circulating liposome,Tf-LDDP）对肺癌A549小鼠移植瘤的抑制作用。方法采用薄膜分散一超声法制备空白脂质体,硫酸铵梯度法包载顺铂,巯基化TfR（transferrin receptor）共价结合顺铂脂质体制备Tf-LDDP。建立肺癌A549小鼠移植瘤模型,以顺铂（cisplatin—loaded long circulating liposome,CDDP）组为阳性对照,生理盐水（normal saline,NS）为阴性对照组,Tf-LDDP为实验组,经尾静脉注射给药,然后观察实验组对肺癌A549小鼠移植瘤生长的影响。结果各组小鼠移植瘤接种成活率均为80％。Tf-LDDP组移植瘤体积明显小于CDDP组[（309．24±160．90）mm’vs（386．33±129．12）mm^3,P〈0．01];同时Tf-LDDP组移植瘤体积增殖率显著低于CDDP组[（1．38±0．19）I）vs（2．46±0．25）,P〈0．01]。结论Tf-LDDP对肺癌A549小鼠移植瘤的生长具有一定的抑制作用。     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

利用GFP/A549建立人NSCLC裸鼠原位种植转移模型

目的：利用人肺腺癌细胞株GFP/A549建立非小细胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)转移模型。方法：将表达GFP的质粒pRNAT U6.1/Neo转染人肺腺癌细胞A549，G418筛选获得稳定表达GFP细胞，对比转染前后细胞的生长活性和成瘤性。将转染后细胞原位种植裸鼠预定标准处死。HE染色和免疫组化检测转移灶的位置和数目。利用KODAK IS2000MM系统检测肿瘤播散情况。结果:获得了稳定表达GFP的转染后细胞；细胞的体外和体内生长未受转染的影响。裸鼠原位种植GFP/A549，利用KODAK IS2000MM确认4只有肝转移，9只有脑转移。HE染色、免疫组化确认4只有肝转移，11只有脑转移，与KODAK IS2000MM检测结果对比差异无统计学意义(P＞0.05)。结论:GFP标记人肺腺癌细胞A549原位种植法能更简便的建立NSCLC转移模型；KODAK IS2000MM能够非侵入性和无创性检测肿瘤转移。