低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞来源的巨噬细胞脂质代谢的影响

目的:研究动脉粥样硬化过程中低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)对单核细胞来源的巨噬细胞内脂质含量的影响。方法:以佛波酯刺激分化的THP-1细胞作为单核细胞来源巨噬细胞模型。固定后的细胞以苏丹Ⅳ染色,观察细胞内脂质含量变化。通过胆固醇酶联法测定细胞内胆固醇含量。结果:与LDL-IC孵育能使单核细胞来源巨噬细胞内胆固醇堆积,呈现泡沫细胞的外观。细胞内胆固醇水平随着LDL-IC的浓度增加与作用时间的延长而升高。在4组平行对照实验中,LDL-IC组细胞内胆固醇水平明显高于阴性对照组、LDL组和IgG-IC组(P<0.01)。结论:LDL-IC能通过增加细胞内脂质而在动脉粥样硬化过程中发挥作用。     

低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯蓄积和一氧化氮释放的影响

目的 探讨低密度脂蛋白免疫复合物对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯的蓄积和一氧化氮释放的影响。方法 密度梯度超速离心从新鲜人血浆分离天然低密度脂蛋白，与抗低密度脂蛋白抗血清IgG组分制备低密度脂蛋白免疫复合物，低密度脂蛋白免疫复合物与小鼠腹腔巨噬细胞孵育后采用酶荧光法检测细胞胆固醇酯含量，进行细胞形态学观察和组织化学分析．并用硝酸还原酶法测定细胞释放至培养基中的一氧化氮量。结果 低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地诱导巨噬细胞内胆固醇酯的大量堆积，其效应显著强于氧化型低密度脂蛋白（P〈0．01）。经低密度脂蛋白免疫复合物处理的巨噬细胞呈典型泡沫细胞状，与猩红强染色，而天然低密度脂蛋白、抗低密度脂蛋白IgG处理的巨噬细胞内未见胆固醇酯的蓄积。此外，低密度脂蛋白免疫复合物剂量依赖性地抑制巨噬细胞一氧化氮的分泌。结论 低密度脂蛋白免疫复合物不仅通过致小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化，也通过损伤巨噬细胞分泌一氧化氮的功能参与致动脉粥样硬化作用。     

C反应蛋白和高密度脂蛋白对血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的观察C反应蛋白和高密度脂蛋白对单核细胞株THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的影响,以及血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的变化与细胞内胆固醇含量变化的关系。方法THP-1单核细胞株经佛波酯诱导分化为巨噬细胞。用不同浓度C反应蛋白或高密度脂蛋白在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达的变化,并采用高效液相色谱测定巨噬细胞内胆固醇含量的变化。结果与对照组相比,C反应蛋白或高密度脂蛋白均可以诱导THP-1来源的巨噬细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),C反应蛋白使巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量显著增加(P<0.01),而高密度脂蛋白使细胞内总胆固醇和胆固醇酯显著降低(P<0.01)。结论C反应蛋白和高密度脂蛋白都能引起THP-1来源的巨噬细胞表面血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达上调,提示血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1并不是介导巨噬细胞参与炎症反应病理生理变化的关键性受体。     

氧化型低密度脂蛋白在人外周血单核巨噬细胞中的代谢

为探讨氧化型低密度脂蛋白在人外周血单核巨噬细胞中的代谢及其致动脉粥样硬化的机制，使用放射配基法观察了两种低密度脂蛋白在单核巨噬细胞中的代谢情况，并测定了细胞内胆固醇含量的变化。结果发现，人外周血单核巨噬细胞通过受体途径代谢低密度脂蛋白。该受体可饱和，最大结合量（Bmax）为274μg／g细胞蛋白，解离常数为35.7mg／L。低密度脂蛋白经氧化修饰后，人外周血单核巨噬细胞对其结合、摄取和降解均显著增加；与氧化型低密度脂蛋白共同孵育的人外周血单核巨噬细胞内总胆固醇含量明显高于低密度脂蛋白组。以上结果提示，低密度脂蛋白经氧化修饰后在人外周血单核巨噬细胞内的代谢途径发生改变并导致细胞内总胆固醇的堆积，促进了动脉粥样硬化的发生。     

低密度脂蛋白自身免疫在动脉粥样硬化发生中的作用

体液免疫和细胞免疫同时参与了动脉粥样硬化的发生和发展，修饰低密度脂蛋白、自身抗体及其循环免疫复合物在体内均可检测出，且同疾病的程度相关。低密度脂蛋白及自身抗体形成的免疫复合物可高效地引起细胞内胆固醇酯的堆积，并促进天然低密度脂蛋白受体表达和细胞因子合成增加，具一系列致病作用。     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。     

氧化型低密度脂蛋白经ERK1/2-COX-2途径对巨噬细胞NPC1表达的影响

目的观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞C型尼曼-匹克病蛋白1(NPC1)表达的影响,同时探讨其作用机制。方法THP-1单核细胞经PMA诱导贴壁后,加入氧化型低密度脂蛋白诱导其转化为泡沫细胞,经各种因素处理后,运用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,采用实时定量PCR和western blot方法分别检测NPC1mRNA和蛋白质的表达情况。结果氧化型低密度脂蛋白能在基因和蛋白水平呈剂量依赖性和时间剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞....     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白上调巨噬细胞清道夫受体CD36的表达

背景普罗布考是一降脂药，同时具有抗氧化特性，近年来的研究表明其可以通过多种机制抑制动脉粥样硬化的形成，降低经皮冠状动脉成形术后再狭窄的发生。目的探讨普罗布考对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）刺激巨噬细胞后清道夫受体CD36表达的抑制效应。方法用不同浓度的Ox-LDL刺激人单核细胞系THP-1源性巨噬细胞及用不同浓度普罗布考和核因子κBp65（NF-κBp65）特异性抑制剂（PDTC）预处理细胞后再用氧化低密度脂蛋白刺激，半定量RT—PCR方法检测CD36和NF-κBp65的mRNA的表达，Western-blot检测CD36和细胞核NF-κBp65蛋白表达水平。结果THP-1单核细胞分化成巨噬细胞后，CD36和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达上调；不同浓度的Ox-LDL刺激后，CD36mRNA和蛋白的表达呈浓度依赖性增加，同时伴NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达增加；PDTC和普罗布考干预后，NF-κBp65和CD36的mRNA和蛋白表达下调。结论Ox-LDL可以通过NF-κBp65途径上调巨噬细胞CD36的表达；而普罗布考则可以抑制CD36的表达，这种作用与抑制NF-κBp65有关。     

葡萄糖和厄贝沙坦对单核巨噬细胞系凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究不同浓度葡萄糖和厄贝沙坦对人单核巨噬细胞系(THP-1)凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制。方法 THP-1细胞经0.16μmol/L佛波酯诱导分化72 h后,将细胞分为对照组、不同浓度葡萄糖组(5、8、12和15 mmol/L)和厄贝沙坦干预组,葡萄糖组将不同浓度葡萄糖与诱导分化的巨噬细胞孵育24 h,厄贝沙坦干预组用厄贝沙坦预先孵育2 h后,再加入15 mmol/L葡萄糖共同孵育24 h。用荧光定量PCR和细胞酶联免疫法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,5 mmol/L葡萄糖组凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA及蛋白表达差异无显著性(P>0.05),其余高糖组该受体mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),并且其表达呈浓度依赖性;厄贝沙坦可显著抑制此作用,使该受体表达明显降低。结论高糖以浓度依赖方式上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,这可能是导致动脉粥样硬化发生的机制之一;厄贝沙坦可显著抑制这一作用,可能在抗动脉粥样硬化中起作用。     

内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的影响

目的:观察内肥素对THP-1源性泡沫细胞形成中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响,及其在动脉粥样硬化中的作用机制.方法:给予不同浓度的内肥素处理24 h和同一浓度的内肥素处理THP-1源性巨噬细胞0～36 h,运用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,运用逆转录聚合酶链反应和Western-blot检测LOX-1的mRNA和蛋白的表达水平.结果:高浓度的内肥素处理负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞24 h后,细胞浆内的脂滴明显增多.在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞上,内肥素上调LOX-1 mRNA和蛋白表达.结论:内肥素上调THP-1源性泡沫细胞中LOX-1的表达.     

亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的影响

目的观察胆固醇转运复合物中关键蛋白亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而分析亲环素A在巨噬源性泡沫细胞形成过程中的作用。方法采用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型;Western-blot、免疫荧光法检测亲环素A蛋白的表达水平;高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化。结果75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,亲环素A的蛋白表达逐渐减弱,48 h、72 h分别较未处理组下降了54.5%±6.3%、59.8%±5.9%(P<0.05)。间接免疫荧光定位检测发现氧化型低密度脂蛋白显著抑制RAW264.7细胞中亲环素A在胞膜、胞浆中的表达,且随着处理时间的延长作用更明显。细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值由未处理组的28.3%±1.2%上升至48 h的42.3%±5.9%(P均<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化过程中,亲环素A的表达下调与细胞胆固醇蓄积密切相关。     

亲环素A在巨噬细胞荷脂过程中的表达及普罗布考干预的影响

目的观察亲环素A在氧化型低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞荷脂过程中的表达变化及其与细胞内胆固醇蓄积的关系,进而探讨亲环素A在动脉粥样硬化形成中的作用机制。方法采用75 mg/L氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7巨噬细胞共同孵育,建立巨噬细胞荷脂化模型,油红O染色观察细胞内脂滴的形成,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量,Western-blot检测亲环素A的蛋白表达;用75 mg/L普罗布考干预对上述检测的影响。结果氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞共同孵育48 h后,油红O染色显示细胞内有大量脂滴形成,细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均明显增加,胆固醇酯/总胆固醇的比值为42.3%±5.9%,符合荷脂细胞特征;亲环素A的蛋白表达明显减弱。予普罗布考处理,细胞内脂滴明显减少,胆固醇酯/总胆固醇的比值降至32.9%±2.5%,亲环素A的蛋白表达增加81.3%±3.6%,较对照组差异有显著性(P均<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞荷脂过程中,亲环素A表达下调,促进细胞胆固醇蓄积;普罗布考干预可上调亲环素A蛋白表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积。     

姜黄素水解衍生物对血管平滑肌细胞增殖及低密度脂蛋白受体表达的影响

目的研究姜黄素水解衍生物对氧化型低密度脂蛋白促牛主动脉平滑肌细胞增殖和对牛血管平滑肌细胞膜低密度脂蛋白受体表达的影响。方法用盐酸加三氯化铝水解姜黄素,获得姜黄素水解衍生物;用氧化型低密度脂蛋白培养牛血管平滑肌细胞建立促增殖模型,MTT比色法观察姜黄素水解衍生物对牛血管平滑肌细胞增的抑制作用;流式细胞仪检测血管平滑肌细胞膜上低密度脂蛋白受体表达的影响;采用逆转录聚合酶链反应检测c-myc的表达。结果姜黄素水解衍生物对10mg/L氧化型低密度脂蛋白培养的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,高中低剂量组的抑制率分别为46%、37%和22%(P<0.01或0.05);对血管平滑肌细胞膜上的低密度脂蛋白受体的表达均有明显的上调作用,高中低剂量组低密度脂蛋白受体表达率分别比对照组高33.85%、17.95%和5.75%(P<0.01或0.05);能够下调c-myc的表达。结论姜黄素水解衍生物能明显抑制牛主动脉平滑肌细胞增殖,上调低密度脂蛋白受体的表达,从而延缓动脉粥样硬化的发生发展。     

氨氯地平对平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达和胆固醇蓄积的影响

目的 观察氨氯地平预处理对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对胆固醇蓄积的作用,从新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用.方法 实验分为6组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组、氨氯地平(0.1、1.0和10.0 μmol/L)处理细胞1 h后加入80 mg/L氧化型低密度脂蛋白共同孵育72 h组及10.0 μmol/L氨氯地平单独处理组,Western-blot和RT-PCR分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量变化.结果 氧化型低密度脂蛋白处理组的细胞内亲环素A的表达明显减少;经氨氯地平处理后,随着氨氯地平浓度的增加,细胞内亲环素A的表达逐渐增加,10.0μmoL/L氨氯地平预处理细胞组效果最明显,较氧化型低密度脂蛋白组差异有显著性(P<0.05).油红O染色显示,氧化型低密度脂蛋白组细胞内大量脂滴形成,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值为57.9%,符合泡沫细胞特征;预先予氨氯地平处理后,随着药物浓度的增加,细胞内脂滴逐渐减少,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值逐渐降低,10.0μmol/L氨氯地平预处理细胞组效果最明显,为37.8%;结论 氨氯地平预处理,可上调氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A的表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积.     

Cholesterol metabolism and expression of its relevant genes in cultured steatotic hepatocytes

OBJECTIVE: To investigate the cholesterol metabolism and mRNA expression of the relevant genes in cholesterol synthesis of the cultured steatotic hepatocytes model. METHODS: A steatotic model of hepatocytes was constructed by adding palmitic acid to the growing L‐02 cells. These cells were collected at day 3 and 6, respectively. Cells with the culture solution without palmitic acid added served as the control. The contents of intracellular triglyceride (TG) and total cholesterol (TC) were detected by the analysis kit. The expression of sterol‐regulatory element binding protein‐2 (SREBP‐2) and its target gene hydroxymethylglutaryl CoA reductase (HMGCR) and low‐density lipoprotein receptor (LDLR) were measured by RT‐PCR. RESULTS: Hepatocyte steatosis was observed at day 3 and became more intense at day 6. The contents of intracellular TG and TC were increased and the expression of the SREBP‐2, HMGCR and LDLR mRNA were upregulated in a time‐dependent manner in the model group. Compared with the control group, the content of intracellular TG was higher at both day 3 and 6 (P < 0.05), while the content of intracellular TC was significantly increased only at day 6; The expression of HMGCR and LDLR mRNA was upregulated in steatotic hepatocytes at both day 3 and 6 (P < 0.05), whereas the SREBP‐2 mRNA was increased only at day 6 (P < 0.05). CONCLUSION: Cholesterol accumulation is probably due to the upregulated expression of the relevant genes in the cholesterol synthesis of the steatotic hepatocytes.     

组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的观察组织蛋白酶L在动脉粥样硬化病变中的表达以及对巨噬细胞脂质蓄积的影响。方法颈总动脉套环并饲以高脂饮食建立兔颈总动脉粥样硬化模型,免疫组织化学方法检测斑块内组织蛋白酶L的表达。氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7巨噬细胞24 h,逆转录聚合酶链反应、Western blot以及荧光分光光度法检测组织蛋白酶L表达和活性。组织蛋白酶L抑制剂预处理巨噬细胞,油红O染色以及高效液相色谱法观察细胞内脂质蓄积。结果正常血管中不表达组织蛋白酶L,斑块内组织蛋白酶L高表达。巨噬细胞经不同浓度氧化型低密度脂蛋白孵育24 h后,组织蛋白酶L mRNA的表达量在各组间无明显差异(P>0.05),但蛋白表达量以及活性明显增加(P<0.05)。组织蛋白酶L抑制剂剂量依赖性地抑制巨噬细胞内脂质积蓄。结论组织蛋白酶L在动脉粥样硬化斑块中高表达并参与巨噬细胞脂质代谢。     

相关炎症因子与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一组主要累及全身大、中型弹力型动脉的血管硬化性疾病,以主动脉、冠状动脉和脑动脉多见,其特征是动脉内膜的脂质沉积和粥样斑块形成,且发病机制与高血压、血脂紊乱及血管内皮损伤等因素密切相关。近年来,各种细胞炎症因子与动脉粥样硬化的关系引起愈来愈多研究者的重视,现谨就择要作综述。     

丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响

目的通过体外细胞实验阐明丹参酮ⅡA对泡沫细胞胆固醇平衡的影响。方法体外培养小鼠RAW264.7细胞,以氧化型低密度脂蛋白诱导为泡沫细胞模型,并用不同浓度的丹参酮ⅡA进行处理,通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,荧光定量PCR和WesternBlot检测细胞中CD36、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、肝脏X受体α(LXRα)、过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)及PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果 0～20 mg/L的丹参酮ⅡA对泡沫细胞增殖活力无明显影响,20 mg/L丹参酮ⅡA干预后,泡沫细胞内胆固醇酯与总胆固醇的比值显著降低,细胞内脂质累积减少,并上调AB-CA1、LXRα和PPARα的mRNA和蛋白表达,但对CD36表达无明显作用。结论丹参酮ⅡA能抑制泡沫细胞的形成,其机制可能是通过诱导PPARα、LXRα和ABCA1表达,促进胆固醇的外排。