银杏叶提取物对鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba leaves,EGB)对PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用细胞培养的方法,建立PC12细胞的鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )损伤的模型.用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测胞外多巴胺(DA)水平.结果:同毒物组比较,EGB在0.35、0.70、1.40 mg/ml浓度下能减轻MPP 引起的PC12细胞损伤,在1.40 mg/ml浓度下能减轻鱼藤酮引起的损伤,明显提高细胞的存活率, 增高胞外DA水平:2 mmol/L MPP 和10 μmol/L鱼藤酮作用下胞外DA分别为(6.875±0.201)和(5.321±0.167) ng/ml,而1.40 mg/ml EGB分别与2 mmol/L MPP 或10 μmol/L鱼藤酮共同作用,DA升高至(7.595±0.139) ng/ml(P<0.05)和(6.917±0.201) ng/ml(P<0.01).结论:EGB对鱼藤酮和MPP 体外诱导PC12 细胞的损伤具有明显的保护作用.     

银杏提取物对细胞毒素MPP+致小脑颗粒细胞损伤的保护作用

目的 探讨银杏提取物(Ginkgo biloba L．extract，GBE)对1-甲基-4苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridiniumion，MPP^ )所致大鼠小脑颗粒细胞损伤的保护作用。方法 用GBE预先孵育大鼠小脑颗粒细胞，然后用MPP^ 处理细胞，分别用MTT法和神经丝蛋白的免疫组织化学方法进行检测。结果 50μmol／L的MPP^ 使小脑颗粒细胞损伤，20μg／mL的GBE具有保护作用。结论 GBE对神经毒素MPP^ 致细胞损伤有保护作用，提示GBE可能具有抗帕金森病(Parkinson’s Disease，PD)的潜在功效。     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

乌梅总黄酮对MPP+诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究乌梅总黄酮(Fructus mume,FMF)对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的修复作用,同时探讨其可能机制.方法:采用体外细胞培养的方法,MPP+诱导损伤建立SH-SY5Y细胞模型,将细胞分为5组:正常对照组、模型组(250μmol/L MPP+)、FMF...     

胞二磷胆碱对1-甲基-4-苯基吡啶诱导的多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的：探讨胞二磷胆碱对1-甲基-4-苯基吡啶(MPP⁺)诱导的多巴胺能神经元数量减少及形态学改变的影响。方法：体外原代培养怀孕第14 天小鼠胚胎中脑神经元，采用MPP⁺（10 μmol•L^-1）在体外建立多巴胺能神经元损伤细胞模型。实验分为对照组、单纯MPP⁺药物组及5个不同浓度胞二磷胆碱（0.01、0.101.00、10.00和100.00 μmol•L^-1）与MPP⁺共同给药组。应用酪氨酸脱氢酶免疫化学染色方法观察不同浓度胞二磷胆碱对MPP⁺诱导多巴胺能神经元损伤的形态及数量的变化。结果：体外培养第12天，单纯MPP⁺药物组中多巴胺能神经元的数量明显少于对照组（P<0.05）；0.10μmol•L^-1和100.00μmol•L^-1 胞二磷胆碱治疗组，多巴胺能神经元的数量分别高于单纯MPP⁺药物组(11.83%和21.26%)（P<0.05）。0.10和100.00 μmol•L^-1胞二磷胆碱加MPP⁺药物组中多巴胺能神经元的突起长度明显高于单纯MPP⁺药物组（P<0.05）。结论：胞二磷胆碱可有效地防止MPP⁺的多巴胺能神经元的损伤和死亡，可能为帕金森氏病的防治提供一个新途径。     

肉苁蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作用

目的:探讨肉苁蓉提取物对帕金森病的神经保护作用及其作用机制。方法:以1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridiniumion,MPP )介导的SH-SY5Y细胞损伤模型为帕金森病细胞模型,观察不同浓度肉苁蓉提取物对模型细胞生存率、生长抑制和DNA损伤诱导基因153(growth arrest-and DNAdamage-induced gene153,GADD153)及其蛋白表达的影响。结果:100μg/ml肉苁蓉提取物明显提高了1mmol/L MPP 作用48h后的SH-SY5Y细胞的生存率(P<0.01);降低了GADD153 mRNA与蛋白表达(P<0.01)。结论:肉苁蓉提取物对MPP 介导的细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与GADD153的mRNA和蛋白水平的表达有关。     

银杏叶提取物对大鼠中脑原代细胞的作用

目的:观察银杏叶提取物(EGB761)对中脑原代培养细胞的作用.方法:采用大鼠胚胎中脑原代细胞培养法,培养了中脑神经细胞,再将细胞分为对照组、阳性对照组(神经生长因子,NGF组)、实验组(EGB761组),给予EGB761和NGF进行配组干预,然后观察细胞生长状况,同时运用MTT(四唑盐)比色法检测神经细胞活性;用抗酪氨酸羟化酶(TH)对多巴胺(DA)能免疫细胞化学染色,比较各组阳性神经元数目及突起的变化情况.结果:实验组细胞生长旺盛,轴突延长明显.MTT法测得细胞A值,实验组0.677及免疫细胞化学TH阳性细胞数(实验组61.90)与空白对照组(A值0.596,TH阳性细胞数50.88)相比差异显著(P<0.05),但与阳性对照组比较二者均无统计学意义(P>0.05).结论:EGB761对中脑原代培养细胞有一定的保护作用.     

MPP+诱导SK-N-SH细胞热休克蛋白的表达研究

目的研究SK-N-SH细胞在受到1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP )损伤时,细胞内热休克蛋白(HSPs)的表达。方法SK-N-SH细胞中加入不同浓度的MPP 制备帕金森病(PD)细胞模型,分别于培养24 h和48 h时,检测细胞存活率,选择合适的MPP 实验浓度。免疫印迹法(W estern b lot)和免疫细胞化学法观察细胞内Hsp70、Hsp40(HD J-1和HD J-2)和Hsp90的变化。结果细胞存活率检测表明MPP 合适的实验浓度为10~500μmol/L。W estern b lot和免疫细胞化学法检测均显示250μmol/L MPP 处理24 h,细胞内Hsp70含量明显升高(P<0.05);MPP 处理48 h,Hsp70含量随MPP 浓度的升高而下降;Hsp40/HD J-1和Hsp90的变化趋势基本与Hsp70相同;而HD J-2在细胞内的含量无明显改变(P>0.05)。结论HSPs的含量在MPP 制备的PD细胞模型中,随MPP 作用时间的延长而呈现先增加后降低的趋势。     

MPP+对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨1－methyl-4-phenylpyridium iodide(MPP^ )对SHSY5Y细胞的毒性作用。方法 采用体外培养的SHSY5Y细胞,通过TUNEL染色、细胞超微结构观察和DNA倍体分析检测MPP^＋对SHSY5Y细胞凋亡的诱导作用。结果 MPP^ 可明显地抑制SHSY5Y细胞的生长,并诱导SHSY5Y细胞发生凋亡,主要表现为TUNEL染色阳性的细胞增多,细胞核异染色质增多,线粒体肿胀、嵴断裂、消失,在DNA周期中的G0－G1期前出现明显的亚二倍体峰。结论 MPP^ 通过诱导SHSY5Y细胞凋亡的方式发挥毒性作用。     

银杏叶提取物对损伤后中脑多巴胺能神经细胞活性的影响

目的 探讨银杏叶提取物(EGB761)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)及脂多糖(LPS)损伤后的中脑多巴胺能神经细胞是否具有保护作用.方法 采用胚胎大鼠中脑原代细胞培养法,分离培养中脑神经细胞,培养细胞随机分为空白对照组、MPP+组、MPP++EGB761组、MPP++LPS组、MPP++EGB761+LPS组;给予MPP+、EGB761和LPS进行配组干预,然后观察细胞生长状况;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)微量比色法检测细胞活性;酪氨酸羟化酶(TH)免疫荧光法(FITC),比较各组阳性神经元的变化,了解多巴胺能神经元的表达情况;同时硝酸还原法检测培养细胞中一氧化氮(NO)的表达情况.结果 空白对照组、MPP++EGB761组:细胞生长旺盛,轴突延长明显;MPP++EGB761+LPS组:细胞生长受抑制,轴突较短MPP+组、MPP++LPS组细胞数量少,仅少数细胞稍有突起,大多数细胞无轴突.MTT法测得细胞吸光度值(A值)、免疫荧光TH阳性细胞表达及培养细胞NO的表达:空白对照组、MPP++EGB761组NO含量与MPP++EGB761+LPS组、MPP+组、MPP++LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05).MPP++EGB761+LPS组NO含量与MPP+组、MPP++LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05),MPP+组与MPP++LPS组比较差异亦有统计学意义(P<0.05,见表1).结论 LPS可加重MPP+对多巴胺能神经元的损伤作用,小胶质的活化及其释放的NO有可能参与该细胞凋亡过程.EGB761对损伤后的胚胎大鼠中脑原代培养细胞具有保护作用,此作用可能通过抑制小胶质的活化完成.     

MPP+诱导小鼠胚胎中脑组织原代培养多巴胺能神经元的损伤与死亡

目的：探讨1-甲基-4-苯基-四氢吡啶离子（1-methyl-4-phenyl-[BF]1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPP⁺）诱导小鼠胚胎中脑原代培养多巴胺能神经元损伤。方法：采用OF1/SPF小鼠胚胎（孕14 d）中脑进行原代细胞培养，将培养细胞分为对照组和MPP⁺给药组。于体外培养第10天,在MPP⁺给药组分别加入含有0.1、1.0、10.0 和15.0 μmol•L^-1 ４个不同浓度的MPP⁺的培养液，持续作用48 h后，经酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色，显微镜下观察、计数多巴胺能神经元。 于体外培养10 d,在MPP⁺给药组的培养液中加入终浓度为10 μmol•L^-1MPP⁺,分别于给药后2、4、8、24、48、72和96 h进行TH免疫组化染色，显微镜下计数TH染色阳性神经元，明确MPP⁺引起多巴胺能神经元损伤和死亡的时程变化。结果：0.1、1.0、10.0和15.0 μmol•L^-1浓度的MPP⁺给药组中平均每培养孔中的TH染色阳性神经元的数量分别为对照组的(70.30±6.38)%、(67.39±4.92)%、(51.68±2.95)% 和(50.91±5.60)% 。MPP⁺给药组中，多巴胺能神经元的损伤表现为两种不同形态:绝大多数多巴胺能神经元表现为神经突起的数目及长度明显减少，极少数为胞体空虚、丢失,仅存神经突起。10 μmol•L^-1 MPP⁺分别作用24、48、72和96 h的MPP⁺给药组中,TH染色阳性神经元的数量每培养孔分别为(677.2±6.1)、(411.5±26.6)、(229.0±20.3)和(191.3±15.2)个，与对照组［(839.8±15.5)个/培养孔］相比明显减少（P<0.05）。 结论: 0.1、1.0、10.0和15.0 μmol•L^-1 浓度的MPP⁺均可诱导的多巴胺能神经元的损伤和死亡，其损伤程度与MPP⁺药物浓度和持续作用的时间呈依赖关系；MPP⁺诱导多巴胺能神经元的损伤和死亡可能存在2种不同的机制。     

EGB761 on retinal light injury in rats

Background  Retinal light injury can lead to degeneration of the photoreceptor cell layer. It has been hypothesized that the mechanism for this process is the photochemical damage. Ginkgo balboa extract (Ginkgo biloba extract EGB761) EGB761 is a free radical scavenger. The purpose of this study was to investigate the possible effect of orally administered EGB761 on retinal light damage of mouse photoreceptor cells.

Methods  Kunming mice were randomly chosen for the following groups containing 20 animals in each: control group, light damage group, saline control group, and drug treatment group. The drug treatment group and saline control group were given daily gavage of EGB761 (150 mg∙kg^-1∙d^-1) one week before light exposure. At 7, 14, and 30 days after light exposure, animals were sacrificed and eyes were examined by light microscopy, electron microscopy, and retinal histopathology using in situ detection of apoptotic cells.

Results  In the light damage group after 7 days there was visible edema, and the outer nuclear layer appeared withered with deeply stained dead cells, leaving only a thin nuclear layer of 7–8 cells. After 14 days, the photoreceptor cell layer disappeared, leaving only the outer nuclear layer of 1–3 cells with an average thickness of (37.988±1.207) μm. The average thickness of the retina was (126.32±2.31) μm. In the drug treatment group, the photoreceptor cell layer and outer nuclear layer damage were significantly lower than the saline group (t=21.993, P <0.001), demonstrating that EGB761, especially at 14 days after light exposure, can reduce retinal light damage in mice.

Conclusion  Oral administration of EGB761 can partially inhibit apoptosis of photoreceptor cells, resulting in increased photoreceptor cell survival.

     

DJ-1对MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤的保护机制研究

目的 探讨DJ-1基因对MPP+诱导的多巴胺能神经元损伤模型的保护机制.方法 用神经生长因子(NGF)将PC12诱导成神经元样分化的细胞株(多巴胺能神经元).用1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导帕金森病PC12细胞损伤模型,用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,DHE染色法检测ROS水平变化.Western blot检测DJ-1和TH蛋白表达变化,RT-qPCR检测α-synuclein和凋亡相关基因的RNA水平.用pCDH1-cmv载体过表达DJ-1后检测DJ-1对MPP+环境中细胞的保护作用.用RT-qPCR检测α-synuclein、p53和Bax的表达变化.结果 160μmol/L的MPP+处理18 h后,PC12细胞活性降低,细胞内ROS水平升高,处理48 h后细胞凋亡增加.DJ-1和TH蛋白表达均明显下调,RNA水平上α-synuclein、p53和Bax表达增加.过表达DJ-1能够保护MPP+中的细胞活性,抑制ROS水平升高.α-synuclein以及凋亡基因p53和Bax的表达升高受到抑制,细胞凋亡减少.结论 MPP+作用于多巴胺神经元,可以下调DJ-1和TH蛋白,促进α-synuclein积累ROS水平升高,并使p53和Bax表达增加,导致细胞凋亡增加.DJ-1基因能够能够在MPP+处理时抑制p53和Bax的表达,减少α-synuclein积累,降低细胞内ROS水平,保护细胞免受MPP+引起的损伤.     

银杏叶提取物EGB761对高胆固醇血症家兔血脑屏障通透性的影响*

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对高胆陶醇血症家兔血脑屏障是否具有保护作用。【方法】以2％高胆阎醇饲料喂养雄性新西兰大白兔,建立高胆固醇血症家兔模型。模型建立后,用50mg／（kg&#183;d）EGB761灌胃3周作为EGB761组,以5mg／（kg&#183;d）辛伐他汀灌胃3周作为阳性药辛伐他汀组。干预结束后,耳缘静脉给予25g／L伊文思蓝（EB）,3h后麻醉,生理盐水心脏灌流后取材,通过比色法测定皮质、海马和嗅球EB含量。[结果]银杏叶提取物EGB761可以降低海马和嗅球EB含量,与模型组相比分别为P〈0．01、P〈0．05;与阳性药辛伐他汀疗效相比差异无显著性,P〉0．05。【结论】银杏叶提取物EGB761能够降低由高胆同醇血症导致的血脑屏障通透性。     

银杏叶提取物EGB761对高胆固醇血症家兔血脑屏障通透性的影响

[目的]观察银杏叶提取物EGB761对高胆陶醇血症家兔血脑屏障是否具有保护作用。【方法】以2％高胆阎醇饲料喂养雄性新西兰大白兔，建立高胆固醇血症家兔模型。模型建立后，用50mg／（kg·d）EGB761灌胃3周作为EGB761组，以5mg／（kg·d）辛伐他汀灌胃3周作为阳性药辛伐他汀组。干预结束后，耳缘静脉给予25g／L伊文思蓝（EB），3h后麻醉，生理盐水心脏灌流后取材，通过比色法测定皮质、海马和嗅球EB含量。[结果]银杏叶提取物EGB761可以降低海马和嗅球EB含量，与模型组相比分别为P〈0．01、P〈0．05；与阳性药辛伐他汀疗效相比差异无显著性，P〉0．05。【结论】银杏叶提取物EGB761能够降低由高胆同醇血症导致的血脑屏障通透性。     

MPTP/MPP~+诱导的帕金森病实验模型的研究进展

建立一个稳定可靠的实验模型对研究帕金森病(PD)的发病和治疗是尤其必要的。自从发现1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)能在人类诱发PD以来,人们对其神经毒性作了大量研究。MPTP及其有效成分1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对中脑黑质多巴胺能神经元有选择性的破坏作用,从而发挥其诱导PD的毒性作用。在过去的几十年里对MPTP/MPP+诱导的PD实验模型的研究取得了显著的进展,目前MPTP/MPP+诱导的PD实验模型已广泛地用于PD研究。