简便快速的PCR产物回收方法

目的分析比较几种PCR产物回收方法的回收效果.方法针对PCR DNA的回收效果及回收特点,采用内皮素(Endothelin)基因PCR反应产物,分别利用本室建立的二种新方法--速冻-快速离心法、凝胶浸泡法和传统方法--玻璃珠试剂盒回收法对PCR产物DNA进行回收,用琼脂糖凝胶电泳鉴定3种方法回收PCR产物的效果.结果发现两种新方法回收DNA带的亮度强,与传统方法相比,差异无显著性(P＞0.10).结论说明速冻-快速离心法与凝胶浸泡法不仅具有玻璃珠试剂盒回收PCR 产物的效果,而且经济、方便、可靠,是两种可行的PCR产物回收方法.     

三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

目的 比较3种血细胞DNA提取方法（进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法）对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异。 方法 收集20例胰腺癌患者5 mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞。新鲜血细胞不经冻存,在12 h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72 h后,室温解冻后抽提DNA。抽提方法分别采用进口试剂盒（Qiagen公司）、国产试剂盒（天根生化科技有限公司）和改良苯酚方法。琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率。 结果 在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段。在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰。在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低。在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高。 结论 改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提。     

人类外周血基因组DNA提取方法的比较分析

目的:对2种提取外周血基因组DNA的实验方法进行了比较,建立一种本实验室有效的外周血基因组DNA的提取方法.方法:采用常规试剂盒和本实验室设计的2种外周血液DNA提取法.结果:本实验室使用的外周血基因组DNA提取方法与试剂盒提取外周血基因组DNA的纯度比较无明显差异.结论:本实验室使用的外周血液DNA提取方法简便、有效、经济,满足于基因组的研究.     

几种miniprep提取质粒DNA方法的比较与改良

目的 比较并建立一种简单的、稳定的质粒DNA提取改良方法,探讨其在分子生物学实验研究中的应用价值.方法 采用琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA提取的试剂盒法、煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法四种方法进行比较.结果 试剂盒法的电泳谱带亮度最高且无RNA条带,煮沸法、碱裂解法、碱裂解结合酚氯仿法的电泳谱带亮度依次增高.结论 试剂盒法制备DNA纯度最高,且操作简便省时.     

改良国产试剂盒提取血浆DNA的方法

目的建立一种高效、简便快速、成本低的提取血浆DNA的方法。方法对国产试剂盒提取血浆DNA的方法进行改良,并比较了4种方法提取的DNA的质量、所需时间及其费用。结果改良国产试剂盒提取血浆DNA的质量不仅能达到相关分子生物学实验的要求,而且与其他3种提取血浆DNA的方法相比,具有操作简单,耗时短,成本低等优点。结论改良国产试剂盒提取血浆DNA方法操作简单快捷、价格便宜,适合于大样本的血浆DNA提取。     

一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法

目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。     

改良国产试剂盒提取血浆DNA的方法研究

目的 建立一种高效、简便快速、成本低的提取血浆DNA 的方法。方法 对国产试剂盒提取血浆DNA的方法进行改良,并比较了4 种方法提取的DNA 的质量、所需时间及其费用。结果 改良国产试剂盒提取血浆DNA的质量不仅能达到相关分子生物学实验的要求,而且与其它3种提取血浆DNA的方法相比,具有操作简单,耗时短,成本低等优点。结论 改良国产试剂盒提取血浆DNA方法操作简单快捷、价格便宜,适合于大样本的血浆DNA提取。     

提高柱式胶回收试剂盒DNA回收效率的最佳条件

目的　确定提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件 .方法　回收的基本步骤遵循试剂盒附带的厂家说明 ,在此基础上 ,改变其中所用试剂的剂量 ,或者添加原试剂盒中没有的试剂 ,并在不同条件组合下分别进行 DNA回收 .电泳后 ,通过比较条带的亮度来比较不同条件下 DNA回收效率的大小 ,逐步确定最佳的胶回收条件 .结果　提高柱式胶回收试剂盒 DNA回收效率的最佳条件为 :切胶要尽量的小 ;每 l g胶用 6 0 0 μL的 S1;溶胶时间 :5 5℃ ,10 min;沉淀时加入 3/ 5总体积的异丙醇和 1/ 10总体积的乙酸钠 (3mol· L- 1 ,p H5 .2 ) ;沉淀时间 2 0 m in;沉淀温度为 2 5℃ (室温 ) ;用 T1液溶解效率高于用水溶 ;溶解时间为 2 0 m in (5 5℃ ) .这些最佳条件中 ,大部分都对原来的条件进行了改良 .结论　应用了改良后的胶回收条件后 ,胶回收的效率提高到原来的3～ 4倍     

骨肉瘤基因组DNA的提取及部分酶切分析

目的比较提取骨肉瘤基因组DNA,建立基因组DNA的最佳部分酶切条件并制备其部分酶切产物.方法采用经典的基因组DNA提取法和改良玻璃棒缠绕法提取骨肉瘤基因组DNA,以限制内切酶Sau3A I部分酶切,采用玻璃珠(Silver Beads)DNA胶回收试剂盒与蔗糖梯度离心回收分离目的片段DNA.结果提取基因组DNA片段大于150 kb,37℃,Sau3AI 14(u/μg)部分酶切骨肉瘤基因组DNA 30 min获得18 kb ～23kb基因片段的富集,制备目的片段DNA.结论经改良玻璃棒缠绕法提取骨肉瘤基因组DNA具有纯度、产量高,方法简单,无蛋白和RNA污染,片段足够长,可被Sau3AI部分酶切,玻璃珠(Silver Beads)DNA胶回收试剂盒和蔗糖梯度离心回收分离目的片段DNA纯度高,无小的DNA片段混入,可满足构建入噬菌体载体(EMBL3)基因组文库.为构建骨肉瘤的入EMBL3载体基因组文库做好了前期工作.     

不同方法提取石蜡包埋组织DNA的比较分析

目的:比较福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中3种提取DNA的方法对DNA质量和回收率的影响,探讨一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法. 方法:选取新疆医科大学第一附属医院2004～2007年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋甲状腺癌组织标本,分别以试剂盒法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳分析. 结果:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得样本DNA的OD260/OD280比值为(1.82±0.15),改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法为(1.86±0.17),两者比较无明显差异(P>0.05);分别与试剂盒法(1.75±0.14)相比,差异有统计学意义(P<0.01).改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得 DNA产量和质量均高于试剂盒法. 结论:改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯法简单快捷,是较理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。