指数富集的配体系统进化技术的发展及其在临床治疗中的应用

基于作为配基的寡核苷酸的三维立体结构,指数富集的配体系统进化（SELEX）技术能够筛选获得高效、特异结合靶分子的寡核苷酸适体。该配基由于其亲和力高、特异性强、免疫原性低、筛选周期短及适用范围广等特性,在临床诊断和疾病治疗中拥有多项优势,具有被研制成新型适体药物应用于临床的巨大潜力。本文从SELEX技术的发展、配基的修饰改造、临床治疗的优势、配基作为靶蛋白功能阻断剂和药物分子靶向载体进行的临床应用等几个方面,对寡核苷酸适体在临床疾病治疗中的应用进行综述。     

指数式富集法配体进化组合化学技术的新进展

指数式富集法配体进化是一种从随机寡核苷酸文库中筛选靶分子的特异性配基的组合化学。利用该技术筛选到的寡核苷酸配基具有很高的亲和力和特异性,在基础研究、临床诊断以及治疗性药物的研制方面,均具有广泛的应用前景。     

核酸适配体在抗肿瘤药物主动靶向传递中的应用

核酸适配体是通过指数级富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从合成的大容量单链随机寡核苷酸文库中筛选并富集的对某些靶点具有高特异性和高结合率的小分子DNA或RNA片段.核酸适配体具有直接抑制肿瘤细胞增殖的作用,通过结构修饰可增强在体内的稳定性.此外,它可与载药纳米结构键合,用于肿瘤诊断和治疗.本文综述了核酸适配体的肿瘤靶点、筛选方法及其在肿瘤诊断和治疗中的应用.     

系统进化指数富集法筛选抑制人乙酰胆碱酯酶的RNA分子

目的：获得针对人红细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的特异性核酸配基．方法：利用微孔板法筛选人红细胞膜AChE的核酸配基．利用凝胶阻滞实验检测核酸配基与AChE特异性的结合．微量碱羟胺比色法测定AChE的活性．结果：经过9轮筛选得到针对人红细胞AChE的核酸配基．在相同浓度(2．25μmol/L)下,它们不与人重组丁酰胆碱酯酶(rhBChE)作用,而与人RBCAChE特异结合并抑制AChE的活性．结论：用SELEX技术可以高效地从大容量寡核苷酸组合文库中得到AChE特异性抑制剂．     

SELEX技术及寡核苷酸适配体的近期研究进展

指数富集的配体系统进化（SELEX）技术是一类具备蓬勃发展前景的体外筛选技术,在生物学、药学及化学领域已引起广泛关注。本文即针对2004年以来SELEX技术的发展特点,主要介绍两类新型SELEX策略,即毛细管电泳-SELEX和针对复杂靶标的SELEX方法,并简要总结了寡核苷酸适配体在生物医学和药学相关方面的最新应用进展。     

Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子的初步研究

目的利用Cell SELEX技术筛选巨噬细胞源性泡沫细胞适配子。方法通过80mg/L氧化性低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞为泡沫细胞;聚合酶链反应扩增文库;生物素-链霉亲和素磁珠分离法构建单链DNA文库;以巨噬细胞源性泡沫细胞为靶细胞,巨噬细胞和血管平滑肌细胞为反筛细胞,利用Cell SELEX技术筛选与巨噬细胞源性泡沫细胞结合的寡核苷酸序列,并对最后一轮筛选结果进行克隆测序。结果 PCR的退火温度对PCR产物的量有显著的影响,退火温度由65℃提高为72℃时的产物量明显增加。利用生物素-链霉亲和素磁珠分离法获得了纯度高、产量大的ssDNA文库;经过18轮筛选后,成功获得了28个与预期大小相同的ssDNA序列。结论利用Cell SELEX技术筛选出了巨噬细胞源性泡沫细胞的适配子,为研发用于动脉粥样硬化的早期无创诊断试剂和靶向治疗药物奠定了基础。     

特异性结合白色念珠菌（1，3）-β-D-葡聚糖单链 DNA 适配子的筛选及其应用

目的：通过指数富集的配基系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment ,SELEX）筛选能与高亲和力（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的适配子,并用该适配子建立双适配子夹心酶联寡聚核苷酸吸附试验（enzyme‐linked oligonucleotide assay ,ELONA）来对深部真菌感染血浆进行辅助诊断。方法提取白色念珠菌 ATCC10231株细胞壁（1,3）‐β‐D‐葡聚糖,通过 SELEX 筛选获得能与（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异性结合的高亲和力单链 DNA 适配子,并用该适配子建立双适配子夹心ELONA 来检测深部真菌感染血浆中的（1,3）‐β‐D‐葡聚糖。结果从白色念珠菌细胞壁中成功提取了高聚合度（1,3）‐β‐D‐葡聚糖,并通过体外酶解获得可溶性低聚合度（1,3）‐β‐D‐葡聚糖作为筛选靶标。用SELEX 进行12轮筛选后,从初始单链 DNA 文库中获得2个高亲和力适配子 AU1和 AD1,检测发现它们并非结合于（1,3）‐β‐D‐葡聚糖的同一表位。双适配子夹心 ELONA 检测深部真菌感染血浆中（1,3）‐β‐D‐葡聚糖的特异性和敏感度分别为91．94％和92．31％。结论从初始单链 DNA 文库中成功获得可与（1,3）‐β‐D‐葡聚糖特异结合的高亲和力适配子,为深部真菌感染新型诊断试剂的研发奠定了基础。     

体外诊断试剂监管分析

随着医学事业不断发展,体外诊断试剂越来越广泛地用于医学科研和临床检验,体外诊断试剂在疾病预防、控制、疗效评估等方面具有重要的意义,本文通过分析和探讨体外诊断试剂监管中存在的问题,提出建议和解决方案,倡导科学监管,促进诊断行业高速发展。     

加强体外诊断试剂的管理工作

体外诊断试剂是指采用免疫学、微生物学、分子生物学等原理或方法制备的、在体外用于对人类疾病的诊断、检测及流行病学调查等的诊断试剂.体外诊断试剂的品种和种类繁多,以方法学分类有酶免、放免、荧光和化学发光、分子生物学、免疫组化、免疫细胞化学等,以检测对象分类有细胞水平、蛋白分子水平以及基因水平等的检测对象,以临床应用上分类有初筛、初筛后确证、诊断和疗效观察等,以所使用的技术分类有标记免疫技术、分子杂交技术、基因扩增技术等.由此可见体外诊断试剂的多样性和复杂性.     

反义寡核苷酸药用的基础研究

反义寡核苷酸可选择性地抑制基因的表达，在基因表达及调控研究中具有重要意义。近年来，反义寡核苷酸作为药理学工具及治疗制剂的在细胞水平较为广泛的基础研究，在动物体内及Ｉ期临床试验中亦有不少研究报道。反义寡核苷酸作为药物制剂在抗肿瘤、抗病毒和遗传病的治疗等方面均具有重要的应用前景。     

编者按

<正>科学技术的发展,推动了医学检验技术的进步,经过近20多年的努力,我国的体外诊断试剂产业已经取得了长足的发展,自主产品和关键技术方面取得了一系列突破。在“大健康”的发展需求下,以及全球健康老龄化需求加深和精准医疗兴起的发展趋势下,体外诊断（in vitro Diagnosis,IVD）产品和技术将在预防、早筛、治疗、筛选药物以及治疗预后的监护中发挥重要作用。推进IVD领域高质量发展,对于筑牢公共卫生防护网、推进健康中国建设具有重要意义。IVD在体外通过对人体血液、体液、组织等样本进行检测而获取临床诊断信息,对于疾病预防、确定病因和减少医疗成本具有重要意义。新型冠状病毒肺炎疫情发生以来,IVD担负起了疾病早期诊断的先锋重任,核酸检测成为早期判断病情、阻断疫情传播的重要依据,抗体和抗原检测助力快速筛查。     

透析基层医疗机构使用体外诊断试剂现状

体外诊断试剂在20多年的发展中，先后经历了化学、酶、免疫测定和探针技术4次技术革命，在疾病的预防诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测等方面正发挥着越来越大的作用。笔者通过几年来对医疗机构的监督检查发现，医疗机构对检验室使用体外诊断试的管理还存在不少漏洞，     

体外诊断试剂监管目前面临的问题及对策

随着我国医疗卫生事业的发展,现代医学检验学和诊断学也有了长足的进步,体外诊断试剂已广泛应用于医学科研、临床检验和血源筛查。体外诊断试剂的用途是诊断疾病、治疗疾病的先决条件。目前,依靠体外诊断试剂的诊断水平已成为医院医疗实力的一项重要标志。近年来体外诊断试剂生产、经营企业数量大幅增长。药监部门必须按照该类产品的特点,加强监管,进行科学、合理、严谨、高效的审查。     

SSCP在寡核苷酸适配子ssDNA多克隆筛选中的应用

目的利用单链构象多态性技术弥补SELEX(systematic evolution of ligands by exponential en-richment,SELEX)实验在寡核苷酸适配子克隆、测序环节中的不足,减少SELEX实验的环节。方法利用单链构象多态性技术(singel-strand conformation polymorphism,SSCP)将多轮SELEX筛选的198个寡核苷酸适配子克隆在测序前进行SSCP筛查。结果对198个克隆的SSCP电泳条带位置分析,挑选出58个克隆测序。SSCP筛查得到有效克隆的检出率为20.69%,是不用SSCP筛查检出率6.07%的3.4倍;如果去除组间误差,有效克隆的检出率44.44%是不用SSCP筛查检出率的7.32倍。结论通过对198个克隆的20批次SSCP电泳筛查,并经58个克隆测序后的实验结果证明:同一SSCP电泳胶片上电泳条带泳动位置相同的克隆片段,基因序列相同;电泳条带泳动位置不同的片段,基因序列不同。根据SSCP电泳条带泳动位置,挑选有代表性的克隆测序,避免对多克隆盲目测序,为多克隆测序前的筛查探索一条新的途径。     

加强对体外诊断试剂监管的必要性探析

随着我国医药卫生改革的不断推进,体外诊断试剂作为医学检验事业的重要组成部分,得到了前所未有的开发应用和更新换代,对疾病的临床诊断和治疗发挥着越来越重要的作用.     

临床诊断试剂监管不可忽视

临床诊断试剂又称临床检验分析仪器诊断试剂,是用于临床诊断检查用的一种化学试剂。由于体外诊断试剂的特殊作用,它的医源性影响因素特别多,正品的体外诊断试剂可以帮助医生准确地诊断疾病,     

生物技术在医药领域中的研究与应用

生物技术的飞速发展促进了生物医药产业的发展,其在医药领域的应用涉及到新药开发、基因工程疫苗、诊断试剂、诊断技术和治疗技术等方面,具有广阔的发展前景.     

体外诊断试剂临床试验的质量控制

随着体外诊断技术的发展和体外诊断试剂生产企业研发水平的不断提高,体外诊断试剂临床试验日益增多。部分体外诊断试剂在获得食品药品监督管理部门注册许可进入临床使用前,必须要经过临床试验,但体外诊断试剂临床试验在实施过程中存在较多质量问题。本文从体外诊断试剂临床试验项目预试验实施、知情同意、方案入排标准设计及执行、生物样本管理、伴随诊断试剂盒肿瘤疗效评价数据收集、临床试验记录和报告等临床试验项目实施关键点,分析了体外诊断试剂临床试验质量控制中存在的问题,为体外诊断试剂临床试验的规范化实施提供参考。     

基因体外定点突变技术的研究进展

目前分子生物学技术在医学检验工作中得到广泛的应用。分子生物学技术对于疾病的快速诊断及从分子水平上阐明疾病的发病机理都具有重要意义。定点突变 (ｓｉｔｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ)技术除用于改变编码特定氨基酸的碱基 ,获得突变体蛋白质来研究基因的结构与功能关系的基础研究之外 ,还有用于医学检验的趋势。了解该技术的原理 ,对于理解疾病的基因诊断以及医学检验工作中相关分子生物学技术有一定的作用。目前成熟的定点突变方法有寡核苷酸引物突变、ＰＣＲ突变及盒式突变。1　寡核苷酸引物突变1 .1　寡核苷酸引物突…     

抗肿瘤药物伴随诊断试剂临床试验设计探究及案例分析

目的：系统阐述我国伴随诊断试剂临床试验设计原则，为相关伴随诊断试剂产品临床试验提供参考。方法：基于不同伴随诊断试剂的开发模式，介绍我国与抗肿瘤药物同步开发的原研伴随诊断试剂及非原研伴随诊断试剂的临床试验设计，结合相关产品技术审评过程中的考虑，深入分析伴随诊断试剂临床试验设计的科学性与合理性。结果与结论：伴随诊断试剂在抗肿瘤药物临床应用中具有非常重要的作用，伴随诊断试剂的临床试验与抗肿瘤药物的临床试验息息相关，该类产品临床试验有多种设计类型，临床试验主要研究者应结合产品开发模式、产品检测的标志物等具体情况，选择合适的临床试验设计，能够更加科学合理地评价产品临床意义，促进产品尽快上市。