脂联素对转化生长因子β1致肝星状细胞低表达内皮型一氧化氮合酶的阻断作用

目的 探讨脂联素在非酒精性脂肪性肝纤维化中抑制肝星状细胞活化的分子机制. 方法 体内实验:用高脂饮食(标准饲料+2％胆固醇+ 10％猪油+5％玉米油)喂养大鼠建立非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型,应用RT-PCR法和Western blot法检测大鼠肝组织中脂联素和Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达.体外实验:用促进脂肪细胞分化的培养液诱导人肝星状细胞株LX-2细胞获得静止表型,分别用转化生长因子β 1 (TGF β 1)、脂联素、TGFβ1+脂联素处理静止型LX-2细胞,RT-PCR法和Western blot法检测各组LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型NOS (eNOS) mRNA及蛋白的变化.对多组间数据进行单因素方差分析,两两比较采用Student-Newman-Keuls法;相关分析采用直线相关分析法.结果 随造模时间延长,大鼠肝组织脂肪变性、炎症及纤维化程度逐渐加重,Ⅰ型胶原mRNA表达逐渐增加;与对照组相比,模型24周组大鼠血清脂联素水平降低(2.49±0.86与5.81±0.87,P值＜0.05),肝组织脂联素mRNA及蛋白表达均减少(0.26±0.04与0.72±0.08;0.21±0.07与0.64±0.07,P值均＜0.05),且与Ⅰ型胶原mRNA及蛋白表达呈负相关(相关系数分别为-0.47,-0.44,-0.88和-0.89,P值均＜0.01).体外实验,与对照组相比,TGFβ 1能促进静止型LX-2细胞活化(α-SMA蛋白由0.13±0.03升高至0.58±0.07,P＜0.05),减少eNOS mRNA及蛋白表达(0.30±0.10与0.44±0.08;0.30±0.09与0.46±0.07,值均＜0.05),增加iNOS mRNA和蛋白表达(0.53±0.07与0.37±0.04;0.55±0.07与0.39±0.05,P值均＜0.05),减弱AMPK活性(0.24±0.04与0.43±0.07,P＜0.05);脂联素能阻断此过程,上调eNOS mRNA和蛋白表达(0.43±0.08与0.30±0.10;0.42±0.07与0.30±0.09,P值均＜0.05),下调iNOS mRNA和蛋白表达(0.44±0.05与0.53±0.07;0.46±0.07与0.55±0.07,P值均＜0.05),增加AMPK活性(0.43±0.07与0.24±0.04,P值＜0.05).结论 脂联素通过上调由TGF β 1导致的LX-2细胞低表达eNOS的表达而阻止LX-2细胞活化,减少Ⅰ型胶原生成,这可能与脂联素增加LX-2细胞中AMPK活性有关.     

辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织纤维化的影响及分子机制

目的 探讨辛伐他汀对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝组织纤维化模型及肝星状细胞的作用及其分子机制.方法 ①体内实验应用高脂饮食建立NAFLD肝组织纤维化大鼠模型,并用辛伐他汀干预,RT-PCR法和Western印迹检测大鼠肝组织中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型NOS(iNOS)和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达.②体外实验采用促进脂肪细胞分化的培养基诱导人肝星状细胞株LX-2细胞获得静止表型,分别用转化生长因子β1( TGF-β1)、NOS抑制剂亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)、辛伐他汀、TGF-β1+辛伐他汀、L-NAME+辛伐他汀处理静止型LX-2细胞,RT-PCR法和Western印迹检测各组LX-2细胞中eNOS、iNOS、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的变化.结果 ①随造模时间延长,模型组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白表达逐渐减少,iNOS和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达逐渐增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P分别＜0.05和0.01).与24周末模型组相比,辛伐他汀干预组大鼠肝组织eNOS mRNA和蛋白的表达分别增加(0.30±0.02比0.24±0.01和0.45±0.04比0.22±0.02,P值均＜0.05),iNOS mRNA和蛋白的表达分别减少,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达分别减少(P值均＜0.05).模型组大鼠肝组织中eNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈负相关(P值均＜0.01);iNOS mRNA和蛋白表达与Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达均呈正相关(P值均＜0.01).②体外培养LX-2细胞中,L-NAME能抑制LX-2细胞活化,减少eNOS和iNOS的表达,增加α-SMA和Ⅰ型胶原表达,与TGF-β1作用一致;辛伐他汀能直接增加静止型及活化型LX-2细胞中eNOS的表达,减少iNOS的表达,维持其静止表型,抑制其活化.结论 辛伐他汀通过增加LX-2细胞中eNOS表达,减少iNOS表达,减少α-SMA和Ⅰ型胶原生成,抑制或逆转肝纤维化发生和发展.     

p38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂减少大鼠肝脏炎症细胞因子的表达

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580阻断p36 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达的作用.方法 雄性Wistar大鼠30只,体质量180～200 g,随机分3组,每组10只.脑死亡组:诱导大鼠及死亡;脑死亡+SB203580组:大鼠脑死亡诱导成功后,经阴茎背静脉注射SB203580(10 mg/kg);两组大鼠脑死亡诱导成功,行人工呼吸6 h后,若平均动脉压大于80 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),则为脑死亡供体,获取肝脏待检.对照组:正常大鼠麻醉后取肝脏待检.逆转录-聚合酶链反应检测肝脏肿瘤坏死因子(TNF)α和白细胞介素(IL)-1β的mRNA表达,Western blot检测肝脏TNF α和IL-1 β的蛋白质表达以及磷酸化p38 MAPK的表达.多个样本间比较行One-Way ANOVA分析,SNK法行两两样本间比较.结果 脑死亡组大鼠肝脏出现p38 MAPK磷酸化,磷酸化p38 MAPK的相对表达量比对照组明显增加(0.190±0.004比0.001±0.002),差异有统计学意义(q=172.53,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.670±0.012和0.240±0.003,较对照组(分别为0.130±0.013和0.001±0.002)明显增加(q值分别为123.99和243.09,P值均＜0.01);肝脏IL-1 β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.560±0.009和0.190±0.003,较对照组(分别为0.160±0.010和0.001±0.002)明显增加(q值分别为135.35和192.23,P值均＜0.01).脑死亡SB203580组大鼠肝脏p38 MAPK磷酸化下降,磷酸化p38 MAPK的表达量(0.120±0.004)比脑死亡组明显下降(q=63.90,P＜0.05),但仍明显高于对照组(q=108.63,P＜0.01);肝脏TNF α的mRNA和蛋白质表达量分别为0.430±0.016和0.180±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为55.11和61.03,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为68.89和182.06,P值均＜0.01);肝脏IL-1β的mRNA和蛋白质表达量分别为0.270±0.009和0.140±0.004,较脑死亡组明显下降(q值分别为98.13和50.85,P值均＜0.01),但仍高于对照组(q值分别为37.22和141.38,P值均＜0.01).结论 SB203580能抑制p38 MAPK的磷酸化,阻断p38 MAPK信号通路,减少脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达,降低肝脏免疫原性.     

大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中骨桥蛋白的表达及其意义

目的 通过观察非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中肝组织内骨桥蛋白(OPN)的变化规律,探讨OPN在非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中的作用. 方法选用纯系Wistar雄性大鼠56只,体质量180～200g,随机分为正常对照组和高脂饮食4、8、12,16、20、24周组(其中每组各8只).肝组织常规进行HE及Masson三色胶原染色,免疫组织化学染色检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白的表达,RT-PeR、Western blot观察肝组织中OPN动态变化.结果 与正常对照组相比,高脂饲料组大鼠肝脏内OPN含量明显升高,随着脂肪肝程度的加重,OPN表达逐渐增强,mRNA及蛋白质表达比较,F值分别为7.30和7.15,尸值均<0.01;与α-平滑肌肌动蛋白表达及肝组织胶原纤维面积百分比呈显著正相关(r值分别为0.94和0.82,P值均<0.01).结论 在非酒精性脂肪性肝纤维化形成过程中,OPN在肝组织中表达显著上调,可能在非酒精性脂肪性肝纤维化的形成过程中发挥重要作用.     

Fas/Fas配体系统及其下游信号转导通路的激活促进酒精性肝炎及酒精性肝纤维化的进展

目的 探明Fas/Fas配体(FasL)系统及其主导信号转导通路在酒精性肝炎和肝纤维化发生、发展中的作用及其机制. 方法 C57BL/6J小鼠以含4％(V/V)乙醇的Lieber-DeCarli液体饲料喂养4周,自第5周起联合微量CCl4腹腔注射至第8周,分别建立酒精性肝炎和肝纤维化模型.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡.分别采用逆转录-聚合酶链反应、westem blot及免疫组织化学染色检测肝组织Fas、FasL、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)及细胞色素P450 2E1(CYP 2E1)的mRNA及蛋白质表达.多组样本均数间差异比较用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验,组间比较用LSD-t检验或Mann-Whitney U检验. 结果 应用含4％(V/V)乙醇的Lieber-DeCarli液体饲料联合微量CCl4腹腔注射可快速建立小鼠酒精性肝炎和肝纤维化模型.肝细胞凋亡数随肝脏炎症及纤维化的加重而增高,并伴有凋亡相关基因表达增强.对照组、酒精性肝炎组、酒精性肝纤维化组小鼠细胞凋亡相关基因表达水平依次升高:Fas mRNA的相对表达量分别为0.50±0.05、0.61±0.10、0.76±0.03(H=12.137 P＜0.05),Fas蛋白的相对表达量分别为0.52±0.14、0.86±0.10、0.99±0.09(F=12.758P＜0.01);FasL mRNA相对表达量分别为0.31±0.03、0.53±0.02、1.02±0.04(F=153.260 P＜0.01);caspase3mRNA对表达量分别为0.86±0.11、0.85±0.05、1.33±0.16(F=8.740,P＜0.01),caspase 3蛋白相对表达量分别为0.40±0.03、0.69±0.06、1.02±0.10(F=90.785,P＜0.01);CYP 2E1 mRNA相对表达量分别为0.72±0.14、1.00±0.15、1.30±0.20(H=4.713,P＜ 0.01);各组间比较,P值均＜0.05.免疫组织化学染色结果显示,FasL及CYP 2E1的蛋白与mRNA的表达趋势一致. 结论 Fas/FasL系统及其下游信号转导通路的激活可能是酒精性肝病中诱导肝细胞凋亡的主导因素,可进一步促进酒精性肝炎和肝纤维化的发生与进展.     

内质网应激参与蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导大鼠脂肪性肝纤维化的发生与恢复

目的 探讨内质网应激在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用及饮食控制对脂肪性肝纤维化恢复的影响.方法 蛋氨酸-胆碱缺乏饮食 (MCDD) 喂养10周诱导非酒精性脂肪性肝纤维化大鼠模型,恢复组于第9周开始将MCDD转变为蛋氨酸-胆碱对照饮食 (MCCD) 喂养2周.纤维化和炎症程度采用组织病理染色方法检测,纤维化和炎症相关因子采用Western blot和实时定量聚合酶链反应 (RT-PCR) 方法检测,内质网应激标记物半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (caspase)12、7和葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 采用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法检测.计量资料采用统计分析软件SPSS13.0中的ANOVA程序进行单因素方差分析或q检验,并用LSD进行两两比较.结果 饮食由MCDD转变为MCCD后,组织病理学结果显示肝细胞脂肪沉积及炎症反应明显减轻,伴随着活化的肝星状细胞和枯否细胞减少,肝纤维化程度明显减轻.模型组大鼠肝细胞凋亡数为每5个高倍视野 (68.2±15.9) 个,明显高于正常组 (40.3±8.3) 个,P<0.05;肝细胞增殖/凋亡比值 (0.10±0.03) 明显低于正常组(0.19±0.03),P<0.01.恢复组大鼠肝细胞凋亡数为每5个高倍视野 (48.0±6.5)个,明显低于模型组 (68.2±15.9) 个,P<0.05;增殖数为每5个高倍视野 (17.2±4.4)个,明显高于模型组 (7.5±3.0) 个,P<0.01;肝细胞增殖/凋亡比值 (0.41±0.09) 也明显高于模型组 (0.10±0.03),P<0.01.模型组大鼠肝组织GRP78、caspase12、caspase7和cleaved caspase7蛋白质和mRNA表达均明显高于正常组(P<0.05或P<0.01),恢复组均明显低于模型组 (P<0.05或P<0.01).结论 大鼠饮食由MCDD转变为MCCD后,肝脏的炎症和纤维化程度迅速逆转,提示饮食摄取对于控制肝脏脂肪沉积和病理改变至关重要,且内质网应激参与了这一过程,阻断内质网应激尤其是Caspase12通路也许有助于非酒精性脂肪性肝纤维化的临床治疗.     

扶正化瘀方对非酒精性肝纤维化小鼠肝组织血管生成基因的调节作用及其对肝纤维化的影响*

目的 探讨血管生成基因在非酒精性脂肪性肝纤维化形成中的作用,以阐明扶正化瘀方治疗非酒精性脂肪性肝纤维化的作用机制。方法 选用7~8w龄健康雄性C57BL/6J小鼠,给予高脂、蛋氨酸-胆碱缺乏（MCD）饮食喂养8w,建立非酒精性脂肪性肝纤维化模型。采用扶正化瘀方进行干预,以蛋氨酸-胆碱充足饮食设立对照组。以HE和Masson染色观察小鼠肝组织脂肪变、炎症和纤维化程度;采用RT-PCR、免疫组化和Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及其下游因子血管内皮生成因子（VEGF)和诱导型一氧化氮合酶（iNOs）mRNA及其蛋白水平。结果 模型组小鼠肝细胞出现大泡性为主的脂肪变性,小叶内可见点灶状肝细胞坏死及炎细胞浸润、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生,纤维间隔形成;应用扶正化瘀方干预组动物肝损伤、炎症及纤维化程度显著改善,肝组织α-SMA、HIF-1α、VEGF和iNOs mRNA水平亦较模型组显著减低,依次为（3.83±0.53） 对 （8.33±2.32）、（3.02±0.55）对（4.50±0.78）、（3.23±0.94）对（7.40±1.54）和（3.60±0.96）对 （9.94±1.60）,（P<0.01）;上述蛋白表达水平与基因水平呈一致变化趋势,扶正化瘀方干预组与模型组α-SMA、HIF-1α、VEGF和iNOs表达水平依次为（0.53±0.04） 对 （1.08±0.20）、（0.44±0.02）对（0.55±0.08）、（0.54±0.07） 对 （1.08±0.03）、和（1.61±0.21）对（3.30±0.88）,（P<0.05）。结论 扶正化瘀方可通过抑制肝星状细胞活化,下调HIF-1α及其下游促血管生成因子VEGF和iNOs表达,阻止或减缓非酒精性脂肪性肝纤维化的进展。     

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其转录因子的影响

目的 探讨丹参酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGFβ1)活化的大鼠肝星状细胞(HSC)内p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的影响. 方法 分离并培养正常大鼠HSC,将TGFβ1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中,用p38信号通路特异性阻断剂SB203580和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性阻断剂PD98059分别阻断HSC内p38MAPK和ERK信号通路.细胞内总的P38蛋白、MKK3/6蛋白及MEF2A、MEF2C的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组和TGFβ1组;磷酸化P38蛋白、MKK3/6蛋白和α-SMA蛋白的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组、TGFβ1组、PD98059、PD98059+ SA-B组、PD98059+ TGFβ1组和SA-B+ PD98059+ TGFβ1组;SA-B对TGFβ1刺激的HSC内MEF2和Ⅰ型胶原报道基因的影响分为突变型(mt)对照组、野生型(wt)对照组、TGFβ1组、SA-B+ TGF β1组、SA-B组、SB203580+ TGF β1组、SB203580组.Western blot法检测HSC内磷酸化和总P38蛋白、MAPK激酶3/6 (MKK3/6)蛋白、肌细胞增强因子2(MEF2)A、MEF2C、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光素酶报道基因测定法检测MEF2报道基因和Ⅰ型胶原启动子的活性.多组间数据的多重比较用q检验.结果 SA-B组磷酸化P38蛋白相对表达量为0.33±0.05,明显低于空白对照组(q=7.08,P＜0.01); SA-B +TGF β1组的磷酸化P38蛋白相对表达量为0.46±0.04,明显低于TGFβ1组(q=10.45,P＜0.01);SA-B组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.11±0.07,明显低于空白对照组(q=3.944,P＜0.05);SA-B+ TGF β1组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.28±0.07,明显低于TGFβ1组(q=7.91,P＜0.01);SA-B+ TGFβ1组和SB203580+ TGF β1组MEF2报道基因的相对荧光素酶活性分别为2.93±0.09和2.50±0.05,均明显低于TGFβ1组(q值分别为35.35和37.2,P值均＜0.01);SA-B组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为15.82±0.97和13.00±0.40,均明显低于空白对照组(q值分别为5.18和13.32,P值均＜0.01);SA-B+ TGF β1组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为13.40±0.72和20.47±0.83,均明显低于TGF β1组(q值分别为43.93和12.52,P值均＜0.01); SA-B+ TGFβ1组α-SMA相对表达量为8.76±0.44,明显低于TGFβ1组(q=20.35,P＜0.01); SA-B+ SB203580+TGF β1组α-SMA相对表达量仅为3.57±0.49,明显低于TGFβ1组(q=39.78,P＜0.01);SA-B+ TGF β1组和SB203580+ TGF β1组Ⅰ型胶原报道基因的相对荧光素酶活性分别为1.61±0.05和1.42±0.07,较TGFβ1组明显降低(q值分别为26.4和27.62,P值均＜0.01).结论 SA-B可能通过抑制原代HSC内TGFβ 1的p38MAPK信号传导通路,抑制HSC的活化.     

肝纤维化过程中去甲肾上腺素各受体亚型表达的动态变化

目的 研究肝纤维化过程中去甲肾上腺素各受体亚型表达的动态变化.方法 胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型,HE,Masson染色观察肝脏病理形态学变化;免疫组织化学法检测肝星状细胞活化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;Western blot和实时荧光定量PCR检测α-肾上腺素受体(AR)、β1-AR、β2-AR蛋白和mRNA的表达水平.对数据进行单因素方差分析,LSD检验及相关分析.结果 HE及Masson三色染色显示:随着造模时间延长肝纤维化程度逐渐加重.α-SMA免疫组织化学染色显示:随着肝纤维化的发展,大鼠肝组织中α-SMA阳性细胞明显增多,造模1、2、3,4周时分别为10.58%±1.75%,24.14%±2.02%、29.74%±2.59%,34.28%±2.01%,而假手术组为4.12%±1.51%,P＜0.01.Western blot检测结果显示,造模1～4周大鼠肝组织α-AR、β1-AR,β2-AR蛋白表达量均明显升高(P＜0.05).实时荧光定量PCR结果证实,随着肝纤维化的发展,α-AR、β1-AR、β2-AR mRNA表达水平均逐渐上升(P＜0.01).α-SMA与α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白表达水平的相关分析显示,α-SMA与α-AR、β1-AR及β2-AR呈正相关,r值分别为0.564,0.753和0.606.结论 胆总管结扎法成功建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,在肝纤维化形成过程中肝星状细胞表达α-SMA增加.随着肝纤维化的进展,α-AR、β1-AR、β2-AR蛋白及mRNA水平明显增加,且与α-SMA呈正相关.     

大鼠纤维化肝组织中PTEN的动态表达及其与肝星状细胞增殖和活化的关系

目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)在大鼠纤维化肝组织中的动态表达及其对在体肝星状细胞(HSC)活化、增殖的影响. 方法 采用胆总管结扎法建立大鼠肝纤维化模型;应用免疫组织化学染色、Western blot和实时荧光定量PCR技术测定大鼠肝组织中PTEN的表达;应用免疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微术测定大鼠肝组织中活化HSC的PTEN表达;采用免疫组织化学染色检测大鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白的表达.结果 免疫组织化学染色显示正常大鼠肝组织中PTEN有广泛表达,主要表达于细胞质,随着肝纤维化的发展,PTEN表达逐渐减少(P<0.01),而α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞明显增多(P<0.01);造模1、2、3周及4周不同时间大鼠纤维化肝组织中PTEN的mRNA(分别为假手术组的0.66、0.53、0.44和0.37)及蛋白质表达(吸光度比值分别为1.20±0.13,1.07±0.16,0.88±0.08,0.73±0.07)均低于假手术组(P<0.01),并随着肝纤维化的进展逐渐降低(P<0.01);免疫荧光双标记共聚焦激光扫描显微术显示PTEN在活化HSC广泛表达,主要表达于细胞质,随着肝纤维化的进展,表达PTEN的活化HSC占总的活化HSC的比例逐渐减少(P<0.01). 结论 大鼠纤维化肝组织中PTEN的mRNA及蛋白质表达均下调;在体HSC的PTEN表达亦降低;肝组织中PTEN的动态表达与HSC的活化、增殖呈显著负相关.     

Reconstruction of integrin activation

Integrins are integral membrane proteins that mediate cell-matrix and cell-cell adhesion. They are important for vascular development and hematopoiesis, immune and inflammatory responses, and hemostasis. Integrins are also signaling receptors that can transmit information bidirectionally across plasma membranes. Research in the past 2 decades has made progress in unraveling the mechanisms of integrin signaling and brings the field to the moment of attempting synthetic reconstruction of the signaling pathways in vitro. Reconstruction of biologic processes provides stringent tests of our understanding of the process, as evidenced by studies of other biologic machines, such as ATP synthase, lactose permease, and G-protein-coupled receptors. Here, we review recent progress in reconstructing integrin signaling and the insights that we have gained through these experiments.     

Platelet activation responses in vitro to human mast cell activation

Mast cells are thought to play an important role in atherogenesis and plaque rupture, but their role in the subsequent platelet activation and thrombus formation is unclear. Tryptase positive cells (KU812T+) were established from the KU812 cell line as an in vitro model of human mast cells and used to study the effect of mast cell activation on human platelets. Overnight incubation of KU812T+ with IgE and subsequent challenge with anti-IgE caused the release of heparinoid substances which inhibited 1 microg/ml collagen-induced platelet aggregation. KU812T+ challenged with compound 48/80 produced a releasate that had no apparent heparinoid content but caused full platelet aggregation. These findings showed that, although activation of KU812T+ via FcepsilonR1 partially abrogated collagen-induced platelet aggregation, activation of the C5a receptor signalling pathway, by compound 48/80, caused the release of potent platelet-activating substances. This cell culture model offers a unique insight into the role of platelet-mast cell interactions in arterial thrombogenesis.