假单胞菌胆固醇酯酶的生产工艺Ⅱ 提取、纯化和酶学性质的研究

用疏水离子层析技术从假单胞菌菌株的细胞提取液中分离胆固醇酯酶,提纯效果好,可革除脱盐工序。与国外报道的同菌属来源的胆固醇酯酶的酶学性质进行了比较。     

硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及发酵工艺研究

从成都井研生猪屠宰厂等地采集的样品中平板分离粗筛到 4 8株硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌 ,进一步复筛出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶 ABC产生菌株 GT38,初步鉴定为彭氏变形菌 (P.pen-neri)。通过单因素实验和正交分析研究了摇瓶最适产酶条件和 2 L 实验室小罐发酵工艺 ,该菌的最适发酵工艺为培养基大豆蛋白胨 2 .5 % ,蔗糖 1.5 % ,Na Cl0 .4 % ,硅油 0 .0 5 % ,p H7.5 ,接种量 5 % ,通气量 1∶ 1～1∶ 1.2 (v/ v) ,搅拌转速为 6 0 0 r/ min,30℃发酵 10 h,酶活力单位高达 32 2 U/ L。     

临床耐头孢噻肟菌所产β-内酰胺酶的基因分析及活性

目的:分析临床耐头孢噻肟(CTX)菌株所产β-内酰胺酶的基因型,测定酶对头孢噻肟/舒巴坦(CTX/SBT,1∶1,2∶1,4∶1,8∶1)的水解率。方法:肉汤二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。超声波破碎法提取酶粗提液,Nitrocefin显色法检测产β-内酰胺酶。PCR检测耐药酶基因,生物法测定β-内酰胺酶对CTX的相对水解率及抑酶保护率。结果:从临床耐药菌544株中筛出产β-内酰胺酶并耐CTX G-菌339株。其中,331株(肠杆菌科细菌327株和铜绿假单胞菌4株)产能水解CTX的β-内酰胺酶,酶的基因型主要为TEM或/和CTX-M型。所产TEM或/和CTX-M型酶24 h对CTX的相对水解率为100%。CTX/SBT(1∶1~8∶1)的抑酶保护率高于82%。其中,CTX/SBT(1∶1~2∶1)的抑酶保护率最高(>88%)。331株中的330株耐药菌(除1株铜绿假单胞菌外)对CTX/SBT(2∶1)的MIC90比CTX下降了2倍以上。结论:介导临床菌株耐CTX的β-内酰胺酶的基因型主要为TEM和CTX-M型,该酶水解CTX活性强,能被SBT有效抑制(有效配比范围为1∶1~8∶1)。     

慢性单纯性筛窦、上颌窦炎脓液细菌培养结果及耐药性分析

目的探讨慢性单纯性筛窦、上颌窦炎患者的鼻窦开口处脓液的细菌谱及耐药性的特征。方法对123例已确诊为慢性单纯性筛窦、上颌窦炎患者,行鼻内镜手术采集脓液标本进行细菌培养及药敏试验。结果在204份分泌物标本中,共检出298株。其中上颌窦炎组标本148份,检出细菌204株,需氧菌156(76.47%)株,厌氧菌48(23.53%)株;另外筛窦炎组标本56份,检出细菌94株,需氧菌58(61.70%)株,厌氧菌36(38.30%)株。结论慢性单纯性筛窦、上颌窦炎患者感染的细菌主要是革兰阳性球菌,其中表皮葡萄球菌占首位,而头哌酮钠舒巴坦为主要耐药机会致病菌。     

广州地区产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的再调查

目的 调查广州地区部分医院2007年10月到2008年11月的铜绿假单胞菌泛耐株,筛榆出其中产IMP-9金属酶的菌株并分析其同源性,对比2005-2007年初广州地区多家医院曾出现的产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的克隆株,分析近期广州地区是否还有该流行株的存在.方法 Q-PCR筛选产IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌,ERIC-PCR对产酶株进行同源性分析.结果 从2007年10月到2008年11月收集广州7家大型医院的269株铜绿假单胞菌泛耐株,共检测出携带IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌10株,均来自同一医院.ERIC-PCR检测,10株均为同一基因型的克隆株,但与前期曾出现的产IMP-9金属酶克隆株无同源性.结论 产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的院内克隆传播仍然存在,而医院间的传播在本次调查中没有发现.因此,仍需继续加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控和加强院内感染的管理控制.     

革兰阴性杆菌产酶耐药表型的检测

目的 探讨革兰阴性杆菌的产酶表型及耐药分析。方法 分别用纸片扩散法及双纸片协同法检测5282株革兰阴性杆菌中超广谱β-内酰胺酶（extanded spectrum β—lactamases，ESBLs）、头孢西丁初筛试验筛选头孢菌素酶（AmpC酶）。再应用头孢西丁提取物三维试验确认AmpC酶。抗菌药物敏感试验用K—B琼脂扩散法。结果 282株革兰阴性杆菌中检出ESBLs 146株，占51．8％，其中以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌多见，分别为41株（28％）、28株（19．2％）、15株（10．3％）。检出AmpC酶41株，占14．5％，以阴沟肠杆菌、不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为多，分别为12株（29．3％）、6株（14．6％）、5株（12．2％）、3株（7．3％）。同时检出ESBLs和AmpC酶者21株，占7．4％，其中大肠埃希菌7株、肺炎克雷伯菌6株、阴沟肠杆菌5株、不动杆菌3株。大部分产酶菌对临床常用抗菌药耐药。结论 当前耐药产酶菌株已成为患者感染的主要病原菌。     

CTX-M型和CMY型耐药基因的检测与传播机制的探讨

目的 筛查广州医学院第一附属医院临床分离的80株革兰氏阴性杆菌的CTX-M型或CMY型耐药基因,检测含CTX-M型或CMY型菌株的耐药情况以及初步探讨耐药传播机制中质粒介导耐药这一途径.方法 对该细菌进行总DNA的提取,PCR扩增该80株细菌的DNA.结合K-B法药物敏感试验,分析菌株的耐药特征,提取基因筛选为阳性的细菌,判定其质粒是否存在耐药基因,质粒接合试验判断是否为可接合质粒.结果 检出ESBLs产酶菌CTX-M型4株,占5%,AmpC产酶茵CMY型3株,占3.75%.对耐药基因的筛选为阳性的7株菌株质粒提取,有6株菌为阳性,质粒接合试验结果显示有2株菌的质粒为可接合质粒,野生茵和接合茵的质粒中均存在耐药基因.结论 CTX-M和CMY菌株呈现多重性耐药性,CTX-M和CMY菌株的耐药基因大部分位于质粒上,其中2株为可接合质粒,这一初步探讨为耐药传播机制的研究打下基础.     

茅尾海桐花树根际土壤来源几丁质降解菌株多样性及抗植物真菌活性的研究

摘要：目的 以胶体几丁质为唯一碳源的培养基,从广西茅尾海红树林桐花树根际土壤中分离几丁质降解菌株,并应用复 筛培养基筛选产几丁质酶菌株,结合平板对峙法挖掘能高效抑制植物病原真菌生长的活性菌株,为红树林来源微生物农用生物 防治药物的研发奠定基础。方法 采用平板稀释涂布法和划线法分离纯化菌株,并应用复筛培养基通过透明圈观察法检测菌株 几丁质酶活;采用Chelex-100法提取菌株基因组DNA,通过PCR扩增菌株的16S rRNA基因序列,上传至EzBioCloud数据库进行 在线比对;采用平板对峙法筛选抗植物病原真菌的活性菌株;采用PKS和NRPS基因的扩增引物分别检测基因组聚酮合酶基因与 非核糖体肽合成酶基因。结果 从桐花树根际土壤中分离获得28株几丁质降解菌,隶属于10目10科17属;其中5株几丁质降解 菌对4种植物病原真菌均显示出抑菌活性,抑菌活性阳性率为17.86%;并在17株几丁质降解菌中检测到抗生素生物合成基因。 结论 广西茅尾海红树林桐花树根际土壤来源的细菌及放线菌是重要的几丁质酶菌种资源,它们在抗植物病原真菌方面表现出 良好的应用潜力,在新型绿色海洋生物农药、新颖结构海洋药物及其他高赋值产品开发和利用方面具有应用前景。     

下呼吸道标本肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的检测及耐药分析

目的探讨下呼吸道标本肺炎克雷伯菌产头抱菌素酶（Ampc酶）和超广谱6-内酰胺酶（ESBLs）的情况及耐药分析。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs,酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。并检测肺炎克雷伯菌对15种抗生素的耐药率。结果120株肺炎克雷伯菌中检出产酶菌株69株。检出率57．5％,其中单产ESBLs38株,单产AmpC酶17株．同时产ESBLs和AmpC酶14株,检出率分别为31．7％、14．2％和11．7％。肺炎克雷伯菌产酶菌株对15种抗生素的耐药率均高于平均水平（除亚胺培南）。结论我院下呼吸道标本肺炎克雷伯菌对抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

腹腔与胆道感染产酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的探讨腹腔与胆道感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）大肠埃希菌的耐药性。方法采用改良三维试验法检测80株大肠埃希菌产ESBLs和AmpC酶的情况,并采用纸片扩散（K-B）法检测大肠埃希菌对16种抗生素的耐药率。结果从80株临床分离的大肠埃希菌中检出单产ESBLs25株,单产AmpC酶8株,同时产AmpC酶和ESBLs4株,检出率分别为31.25%,10.00%,5.00%。产酶菌株对抗生素的耐药率均高于不产酶菌株（除哌拉西林他巴唑外）。结论腹腔与胆道感染大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药应首选碳青霉烯类抗生素。     

产碳青霉烯酶与非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性临床分析

目的 探讨产碳青霉烯酶与非产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况.方法 选取2019年1—12月北京中医药大学东直门医院临床送检的标本中分离出的肺炎克雷伯菌365株,根据改良Hodge试验结果分为产碳青霉烯酶组(199株)和非产碳青霉烯酶组(166株).分析365株肺炎克雷伯菌的标本来源和检出科室分布情况,比较产碳青霉烯酶...     

产生ESBLs和AmpC酶的肠杆菌科细菌检测及耐药性分析

目的了解我院产ESBLs和AmpC酶细菌的耐药性。方法对产ESBLs菌和产生AmpC酶菌进行表型的筛选和确证,测定21种药物的耐药性。结果 268株菌中检出ESBLs菌136株,检出率50.75%,AmpC酶菌116株,检出率43.28%。单产AmpC酶菌,单产ESBLs菌及产AmpC和ESBLs的菌对青霉素、第二、三代头孢菌素类药物的耐药率明显高于非产酶菌的耐药率,两者相比有显著性差异(P<0.05),多重耐药及泛耐药常见。结论 ESBLs与Amp酶已成为我院肠杆菌科细菌耐药的主要原因。碳青霉烯类、第四代头孢菌素、哌拉西林/三唑巴坦成为我院治疗院内感染的首选药。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶的检测

目的了解我院大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌中AmpC酶产生情况.方法按NCCLS推荐的超广谱β内酰胺酶（ESBLs）确证试验,对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测.结果236株大肠埃希菌和135株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs大肠埃希菌104株和产ESBLs肺炎克雷伯菌29株,其中106株耐头孢西丁菌株检到3株产AmpC酶.结论我院这两种细菌主要耐药机制仍是产生ESBLs,耐头孢西丁可能是膜孔蛋白缺失所致.     

碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌IMP型金属β-内酰胺酶研究

目的:探讨肺炎克雷伯菌产金属酶的临床分离情况并对产金属酶菌株进行耐药性分析,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法:收集2009年1月—2009年10月天津医科大学总医院142株临床分离肺炎克雷伯菌,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测其碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验检测金属酶,PCR法扩增金属酶基因,用纸片法和VITEK2-Compact全自动微生物分析仪进行药物敏感性试验。结果:142株肺炎克雷伯菌中,通过改良Hodge试验、改良三维试验检测出2株产碳青霉烯酶菌株,这2株菌通过EDTA协同试验检测为阳性,提示这2株菌产金属酶经PCR证实为产IMP型金属酶,MIC方法显示2株产金属酶的菌株对氨曲南敏感,而对青霉素类、头孢菌素类耐药,κ-B法检测显示碳青霉烯类抗菌药物耐药。结论:天津地区已出现产金属酶肺炎克雷伯菌,该酶是引起肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因。     

儿童感染革兰阴性杆菌中产AmpC酶的基因型分析

目的:研究儿童常见革兰阴性杆菌ampC基因和AmpC酶发生率,分析其产酶与非产酶菌株对抗生素的耐药性。方法:对2002年~2004年我院临床分离的革兰阴性杆菌4 022株进行细菌鉴定,K-B法进行药敏试验;选择确认的产超广谱-β内酰胺酶(ESBLs)菌108株,用聚合酶链反应(PCR)扩增ampC基因;用酶粗提物头孢西丁三维试验检测AmpC酶菌,对产酶株与非产酶株的药敏进行对比分析。结果:108株ESBLs菌中检出70株ampC基因阳性株(占64.8%),7株细菌产AmpC酶(占6.5%)。产AmpC酶菌株对头孢他啶、头孢曲松钠、氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、氨曲南的耐药率分别为85.7%、85.7%、71.4%、79.4%、79.4%;非产AmpC酶菌株对头孢曲松钠、氧哌嗪青霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、氨曲南的耐药率分别为50.8%、55.6%、55.6%、70.3%、54.0%;2种菌株对亚胺培南的耐药率都最低,环丙沙星次之。结论:ampC基因检出率明显高于产AmpC酶,而产AmpC酶菌对常见抗生素的耐药性高于非产AmpC酶菌。     

肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药性分析

目的对肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测结果与耐药性情况进行分析探讨,为今后的临床合理用药提供可靠的参考依据。方法抽取2011年1月至2013年3月间我院患者标本培养的肠杆菌236株,分别采取用双纸片氯唑西林增效试验和双纸片确诊试验对AmpC酶与ESBLs表型进行检测,并展开相应的药敏试验。结果本组236株菌株中检出AmpC酶菌102株,检出ESBLs菌120株;单产AmpC酶菌、单产AmpC酶菌和产ESBLs和AmpC酶菌对氨曲南、头孢噻肟的耐药率较非产AmpC酶菌高（P〈0.05）;所有肠杆菌对青霉素具有较高的耐药率。结论 ESBLs和AmpC酶为肠杆菌科细菌耐药的主要因素,临床应给予关注。     

尿路感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶的检测及耐药性分析

目的探讨尿路感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的情况及其耐药性分析。方法采用纸片扩散确证法检测ESBLs,酶提取物三维试验方法检测AmpC酶,并检测大肠埃希菌对15种抗生素的耐药率。结果120株大肠埃希菌中检出产酶菌株69株,检出率为57．50％,其中单产ESBLs38株（31．67％）,单产AmpC酶17株（14．17％）,同时产ESBLs和AmpC酶14株（11．67％）;大肠埃希菌产酶菌株对15种抗生素的耐药率均高于平均水平（除亚胺培南外）。结论尿路感染对抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药时应首选碳青霉烯类抗生素。     

肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药分析

目的 观察肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和β-内酰胺酶（AmpC）酶检测结果,分析其耐药情况.方法 抽取本院自2010年5月～2012年5月收治的68例患者标本培养的135株肠杆菌,分别经双纸片确证试验与双纸片氯唑西林增效试验检测细菌ESBLs和AmpC酶,并经相关药敏试验观察其耐药性.结果 135株肠杆菌中检出ESBLs菌82株,AmpC酶菌53株,其中单产AmpC酶菌、单株ESBLs菌、产ESBLs及AmpC酶菌对头孢噻肟、氨曲南等药物耐药性明显高于非产AmpC酶菌,P＜0.05;所有肠杆菌耐药率均较高.结论 ESBLs菌和AmpC酶菌作为肠杆菌科细菌耐药重要因素,临床诊断及检测时应高度重视.     

阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制研究

目的 探讨阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制。方法 运用双纸片协同试验和正交三维试验检测耐药菌株的产酶情况，通过接合传递试验和质粒谱分析等方法探讨耐药性播散的规律。结果 37株耐药菌中，产ESBLs的有2l株菌，占56．8％；产去阻遏型AmpC酶的有13株菌，占35．1％；两种酶均阳性的菌株有2株，均阴性的有l株。在同时产两种酶的2株菌中，其中l株菌CH29的两种酶均在质粒上，耐药表型可通过质粒传递到受体菌株大肠埃希氏菌ECNK5449，属于超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)。结论 产生ESBLs和去阻遏型AmpC酶是阴沟肠杆菌临床株对第三代头孢菌素耐药的主要机制。发现l株产SSBLs的临床分离株，可能与耐药性的水平传播有关。