丹参为主的中药舒肝颗粒对活化大鼠肝星状细胞表达转化生长因子β1的影响

目的:观察舒肝颗粒对活化大鼠肝星状细胞表达转化生长因子TGF-β1的影响,以探讨舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞活化的影响及相关机制,为舒肝颗粒临床应用提供进一步理论依据。方法:用空白对照组,0.01、0.02、0.04 mg/mL的舒肝颗粒分组处理活化的HSC 24 h后,用放射免疫法测定各组HSCTNF-α表达情况,荧光定量PCR法测定各组HSC TGF-β1表达情况。结果:用荧光定量PCR法测各组TGF-β1的表达情况:空白对照组、舒肝颗粒0.01 mg/mL组、舒肝颗粒0.02 mg/mL组及舒肝颗粒0.04mg/mL组TGF-β1表达水平通过计算2-△△Ct值分别为:(1.00±0.09)、(0.71±0.08)、(0.55±0.07)、(0.44±0.03),且组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:舒肝颗粒可通过抑制HSC TGF-β1的表达,发挥其抗纤维化作用。     

叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号体外对肝星状细胞（HSC-T6）TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达及其蛋白合成的影响,进一步探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制。方法体外培养HSC-T6细胞,分为对照组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组（3.60mg/ml）、中剂量组（1.80mg/ml）和低剂量组（0.9mg/ml）,采用MTT法检测药物对HSC-T6细胞增殖的影响,SYBR染料法实时荧光定量PCR检测药物处理后HSC-T6细胞TGF-β1及Ⅰ型胶原mRNA的表达变化,Western Blot法检测I型胶原蛋白表达的改变。结果叶下珠复方Ⅱ号处理HSC-T6细胞后,高、中、低各剂量组对HSC-T6细胞增殖、TGF-β1mRNA及Ⅰ型胶原合成呈现显著的抑制作用,与细胞对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05和0.01）,而且随着药物浓度的增加其抑制作用明显加强。结论叶下珠复方Ⅱ号能显著抑制HSC-T6细胞增殖、明显降低TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA的表达及其蛋白合成,具有明显的抗肝纤维化作用。     

氧化苦参碱对大鼠肝星状细胞产生转化生长因子β1的影响

目的 观察氧化苦参碱对传代大鼠肝星状细胞自分泌产生TGFβ1的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏，Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞并传一代，药物作用于传代HSC，以貂肺上皮细胞(My—l—Ln)生长抑制MTI’法检测培养上清中他隋活性及分泌总量，并抽取HSC的mRNA，RT—PCR半定量分析药物对HSC他F住mRNA的表达。结果氧化苦参碱可减少HSC’rG耶。的分泌总量，并抑制‘IGF任的活化及mRNA的表达。结论氧化苦参碱能抑制肝星状细胞‘rGFA产生并活化可能是与其具有抗肝纤维化的作用有关。     

丹参素对转化生长因子β1刺激肝星状细胞信号传导的影响

目的:探讨丹参素对转化生长因子β1(Transformation growth factor,TGFβ1)刺激大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)信号传导通路的影响.方法:体外分离、培养大鼠肝HSC,检测丹参素(O.062 5～0.2500 mmol/L)对TGFβ1促进HSC活化、HSC表达α-SMA和HSC表达Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的影响.结果:丹参素(0.062 5-0.250 0 mmol/L)对TGFβ1引起的HSC增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P相似文献   

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和I、III 型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法 培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1及其I、II受体（TβRI、TβRII）和I、III型胶原（Col-I、Col-III）mRNA的表达。结果 姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论 姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

Smad7抑制肝星状细胞胶原蛋白表达

目的 探讨Smad7对TGF-β1刺激肝星状细胞系HSC-T6细胞的I型胶原蛋(Co1l I)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 以pTRE-Smad7-M2-flag和pTet-on共转染HSC-T6细胞,筛选出稳定表达标记蛋白(M2-flag)的细胞克隆,确定强力霉素诱导Smad7表达的最佳使用剂量.分组比较Smad7对TGF-131刺激的Col I和α-SMA蛋白表达的影响,以及Smad7对Smad2/3磷酸化的调节作用.结果 强力霉素诱导Smad7表达的最佳使用剂量为2 mg/L,强力霉素诱导过表达的Smad7可抑制TGF-β1刺激HSC-T6细胞的Col I和α-SMA蛋白的表达.与单纯使用TGF-β1刺激HSC-T6细胞组比较,Smad7表达可下调HSC-T6细胞的Smad2/3的磷酸化水平.结论 过表达的Smad7可下调TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的Smad2/3磷酸化,抑制TGF-β1刺激HSC-T6细胞的Col I和α-SMA蛋白的表达,达到抑制肝纤维化的形成.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Smad7 on the expressions of collagen I and α-smooth muscle actin (α-SMA) in HSC-T6 cell line activated by transforming growth factor-pi (TGF-pi). Methods HSC-T6 cells stably expressing M2-flag protein were selected after co-infection of the cells with pTRE-Smad7-M2-flag and pTet-on. The optimal dose of doxycycline for inducing Smad7 was determined, and the effects of Smad7 over-expression on the expressions of collagen I and a-SMA in the cells activated by TGF-β1 and on Smad2/3 phosphorylation were evaluated using Western blotting. Results The optimal dose of doxycycline for inducing Srnad7 expression was 2 mg/L. Smad7 over-expression induced by doxycycline decreased the expressions of collagen I and α-SMA in HSC-T6 cells activated by TGF-β1, and down-regulated the level of Smad2/3 phosphorylation. Conclusion Smad7 over-expression inhibits Smad2/3 phosphorylation, and decreases the expression of collagen I and α-SMA in HSC-T6 cells induced by TGF-β1 to inhibit the progression of liver fibrosis.     

黄芪注射液对肝纤维化大鼠模型肝细胞胶原及TGF-β_1表达的影响

目的探讨黄芪注射液抗肝纤维化及对TGF-β1、Col-Ⅰ表达的影响。方法将35只SD大鼠随机分为正常对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和黄芪干预组。至造模第10周,处死所有大鼠,采用PV免疫组化方法检测Col-Ⅰ在各组肝组织中的表达,ELISA法检测TGF-β1在各组血清中的表达。结果经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型,随着肝纤维化程度的进展,肝组织中Col-Ⅰ和血清中TGF-β1表达明显增强。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组肝组织中Col-Ⅰ表达的平均光密度值分别为0.298、0.315、0.503,模型组与前两组比较差异均有显著性（P〈0.01）,而黄芪干预组与正常组肝组织比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组大鼠血清中TGF-β1表达含量分别为491.29pg/L、629.91pg/L、959.09pg/L,呈递增趋势。模型组与前两组比较差异均有显著性（P〈0.01）,黄芪干预组与正常组比较其表达含量无显著差异（P〉0.05）。结论黄芪注射液可以显著抑制实验性肝纤维化大鼠模型的肝纤维化,这种抑制作用可能与抑制I型胶原蛋白及TGF-β1的表达有关。     

激活素A对肝星状细胞胶原合成的影响

目的：探讨激活素A(ACTA)对肝星状细胞(HSC)细胞外基质(ECM)合成的影响。方法：采用原位酶灌注法和密度梯度离心法分离HSC。初次传代后，HSC随机分为八组，分别加入不同浓度的ACT A和TGF-β1。加药后24h，采用放射免疫法检测培养液Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原含量。结果：ACTA能刺激体外培养HSC分泌ECM，在一定浓度范围内(1～100μg/L)呈剂量依赖关系；100μg/L ACT A刺激HSC分泌ECM的能力与10μg/L TGF-β1。相当，而且ACTA能协同TGF-β1发挥该生物学效应。结论：ACTA参与肝纤维化形成。     

丹参酸乙对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的：观察丹参酸乙对大鼠肝星状细胞α－平滑肌肌动蛋白的影响。方法：原位灌注、消化法分离正常大鼠肝星状细胞,异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA,RT－PCR法检测α－平滑肌肌动蛋白基因表达,免疫印迹法分析α－平滑肌肌动蛋白量。结果：10μmol/L SAB可抑制肝星状细胞α平滑肌肌动蛋白的基因表达,但不能抑制其蛋白表达。细胞经TGFβ1刺激后,不仅1μmol/L SAB甚至10μmol/L SAB均不能抑制α-平滑肌肌动蛋白的基因表达。结论：丹参酸乙在肝星状细胞活化的启动阶段可延缓其活化,对于已活化的细胞丹参酸乙则无逆转作用。     

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内细胞外信号调节激酶信号转导通路的抑制作用

目的：探讨丹参酚酸B盐（salvianolicacidB,SA—B）对转化生长因子βl（transforminggrowthfactor-β1,TGF—β1）活化的大鼠肝星状细胞（hepaticstellatecell,HSC）内细胞外信号调节激酶（extracellularsignal—regulatedkinase,ERK）信号转导通路的影响。方法：采用原位灌流酶消化及Nycodenz密度梯度离心的方法分离正常大鼠HSC,将TGF—β1和SA—B直接添加于原代HSC的无血清培养液中。蛋白印记法检测HSC内磷酸化和总ERK,以及有丝分裂原激活蛋白激酶激酶MEK、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶Raf、α平滑肌肌动蛋白（α—smoothmuscleactin,α—SMA）和工型胶原蛋白的表达。结果：SA—B可抑制正常原代HSC及TGFp1刺激的HSC内ERK上游激酶MEK的磷酸化;而对正常原代HSC及TGF—β1刺激的HSC内MEK上游激酶Raf-1的磷酸化无明显抑制。SA—B对TGF-β1刺激的HSC内α—SMA表达有明显的抑制作用,SA—B与ERK阻断剂联用,几乎接近完全阻断α-SMA的表达。SA—B对正常培养的HSC和经TGF—β1刺激的HSCI型胶原蛋白的合成都有明显的抑制作用。结论：SA—B抑制TGF—β1刺激的HSC内ERK信号转导通路的作用环节在于抑制了MEK的磷酸化。SA—B通过抑制TGF-β1的ERK信号转导通路,减少了因HSC活化导致的α—SMA表达和工型胶原蛋白合成增加。     

丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内细胞外信号调节激酶信号转导通路的抑制作用

目的:探讨丹参酚酸B盐(salvianolic acid B,SA-B)对转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-31)活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)内细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号转导通路的影响.方法:采用原位灌流酶消化及Nycodenz密度梯度离心的方法分离正常大鼠HSC,将TGF-β1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中.蛋白印记法检测HSC内磷酸化和总ERK,以及有丝分裂原激活蛋白激酶激酶MEK、有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶Raf、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原蛋白的表达.结果:SA-B可抑制正常原代HSC及TGF-β1刺激的HSC内ERK上游激酶MEK的磷酸化;而对正常原代HSC及TGF-β1刺激的HSC内MEK上游激酶Raf-1的磷酸化无明显抑制.SA-B对TGF-β1刺激的HSC内α-SMA表达有明显的抑制作用,SA-B与ERK阻断剂联用,几乎接近完全阻断α-SMA的表达.SA-B对正常培养的HSC和经TGF-β1刺激的HSC Ⅰ型胶原蛋白的合成都有明显的抑制作用.结论:SA-B抑制TGF-β1刺激的HSC内ERK信号转导通路的作用环节在于抑制了MEK的磷酸化.SA-B通过抑制TGF-β1的ERK信号转导通路,减少了因HSC活化导致的α-SMA表达和Ⅰ型胶原蛋白合成增加.     

转化生长因子-β1抗体对体外培养肝星状细胞内皮素和一氧化氮的影响

目的:研究转化生长因子-β1 (TGF-β1)抗体对肝星状细胞(HSC)分泌一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的影响. 方法: HSC以1×108/L的密度接种于细胞培养皿中,37℃,50 mL/L CO2条件下培养24 h进行以下分组实验,每组重复4个培养皿:① HSC空白对照组;② HSC TGF-β1抗体. TGF-β1抗体为5～20 mg/L,继续培养24 h. 取培养上清液,用硝酸还原酶法测定NO水平,化学比色法测定一氧化氮合成酶(NOS)活性,酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法检测ET-1含量. 结果: TGF-β1抗体能明显抑制HSC分泌ET-1,且随着抗体剂量的增加ET-1含量降低,对照组、10,15 mg/L TGF-β1抗体组分别为(8.50±0.46),(5.33±0.27), (3.69±0.33)μg /L,且各剂量组之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);随着TGF-β1抗体剂量加大,iNOS活性和NO的合成增加,对照组,10,15 mg/L TGF-β1抗体组分别为(1.94±0.16),(3.29±0.42),(3.88±0.32) ku/L和(46.75±4.72), (80.68±5.44), (88.58±2.84) μmol/L. 结论: TGF-β1抗体能降低HSC ET-1水平,增加NO含量.     

黄芪注射液对肝纤维化大鼠模型肝细胞胶原及TGF-β1表达的影响

目的探讨黄芪注射液抗肝纤维化及对TGF-β1、Col-Ⅰ表达的影响。方法将35只SD大鼠随机分为正常对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和黄芪干预组。至造模第10周,处死所有大鼠,采用PV免疫组化方法检测Col-Ⅰ在各组肝组织中的表达,ELISA法检测TGF-β1在各组血清中的表达。结果经CCl4诱导成功建立大鼠肝纤维化模型,随着肝纤维化程度的进展,肝组织中Col-Ⅰ和血清中TGF-β1表达明显增强。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组肝组织中Col-Ⅰ表达的平均光密度值分别为0.298、0.315、0.503,模型组与前两组比较差异均有显著性(P<0.01),而黄芪干预组与正常组肝组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。在正常对照组、黄芪干预组和肝纤维化模型组大鼠血清中TGF-β1表达含量分别为491.29pg/L、629.91pg/L、959.09pg/L,呈递增趋势。模型组与前两组比较差异均有显著性(P<0.01),黄芪干预组与正常组比较其表达含量无显著差异(P>0.05)。结论黄芪注射液可以显著抑制实验性肝纤维化大鼠模型的肝纤维化,这种抑制作用可能与抑制I型胶原蛋白及TGF-β1的表达有关。     

人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA对TGF-β1诱导Ⅰ型胶原表达的抑制效应

目的 观察人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原高表达的有效性.方法 首先构建人鼠同源的Ⅰ型胶原siRNA表达质粒.转染大鼠系膜细胞,用KT-PCR.方法 观察对Ⅰ型胶原的直接抑制作用;经不同浓度(1 ng、5 ng、10 ng)的TGF-β1刺激后,再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒,KT-PCK方法观察其抑制效应.结果 1～4 μg的Ⅰ型胶原siRNA质粒均能使COL1A1基因条带表达下调,并随siRNA质粒浓度增加,抑制作用逐渐增强.大鼠系膜细胞经TGF-β1刺激,Ⅰ型胶原基因表达明显增强,并具剂量依赖性.再转染Ⅰ型胶原siRNA质粒后,TGF-β1+Ⅰ型胶原siRNA质粒各组与相应浓度的单纯TGF-β1各组比较COL1A1基因条带均减弱,显示出抑制效应.结论 本实验构建的人鼠同源Ⅰ型胶原siRNA质粒,在大鼠系膜细胞内不仅能够直接抑制Ⅰ型胶原的基因表达,而且对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原表达增加同样具有较好的抑制作用.本实验结果可望为肾脏纤维化的防治提供思路.     

水飞蓟宾对人肝星状细胞LX-2凋亡及α1(Ⅰ)胶原mRNA表达的影响

目的:观察水飞蓟宾对人肝星状细胞LX-2凋亡与a1(Ⅰ)胶原mRNA表达的影响.方法:人肝星状细胞株LX-2分为对照组与实验组,对照组以体积分数10%胎牛血清处理,实验组分别以体积分数10%胎牛血清和终浓度分别为6.25 mg/L、12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L的水飞蓟宾处理48 h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测细胞凋亡.应用RT-PCR检测各组细胞α1(Ⅰ)胶原mRNA的表达.结果:12.5 mg/L、25 mg/L、50 mg/L水飞蓟宾可促进Lx-2细胞凋亡,细胞凋亡率随水飞蓟宾浓度增加而升高(P<0.05);不同浓度的水飞蓟宾明显降低LX-2细胞α1(Ⅰ)胶原mRNA的表达(P<0.05).结论:水飞蓟宾可促进肝星状细胞凋亡,抑制α1(Ⅰ)胶原mRNA的表达.     

内皮素受体拮抗剂对肝硬化大鼠转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的:探讨内皮素受体拮抗剂对肝硬化大鼠转化生长因子β1和I型胶原mRNA表达的影响.方法:40只雄性SD大鼠,随机分成四氯化碳组、正常对照组、内皮素A受体拮抗剂治疗组、内皮素B受体拮抗剂治疗组和联合治疗组5组,每组8只.后3组在四氯化碳灌胃的基础上2次/d(间隔10 h)分别皮下注射BQ-123(12.5μg/kg)和...     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞XⅧ型胶原表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对XⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响，以及两者在大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT-PCR、Western blot法观察外源性TGF-β1阻对大鼠肾小球系膜细胞中中XⅧ型胶原表达的影响；制备大鼠抗Tny-1肾小球肾炎模型，应用免疫组织化学．ABC分别观察TGF-β1和XⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1阻作用后，大鼠肾小球系膜细胞中胞中XⅧ型胶原的表达升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中TGF-β1阻的表达在1、3和5d仅有微量表达，第7天开始其表达明显且随时间增强；XⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF-β1阻吻合，XⅧ型胶原的表达与TGF-β1阻的表达间具有显著的相关性。结论 XⅧ型胶原的表达与TGF-β1的作用相关，可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程．并且可能在肾小球纤维化中纤维化中起一定的作用。     

加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子β1影响的免疫组化研究

目的 :观察研究加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子 β1(TGFβ1)的影响效果及不同剂量与疗效的关系 ,从而探讨该方抗肝纤维化的机理和合适用量。方法 :采用二甲基亚硝胺 (DMN)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型 ,加味四逆散大、中、小不同剂量灌胃给药 ,免疫组织化学方法 (SP法 )检测分析各组大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子 β1的含量。结果 :加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅳ型胶原和转化生长因子 β1的含量 ,与病理模型组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;加味四逆散中剂量影响效果好于小剂量和大剂量 ,三组之间的疗效呈中 >小 >大剂量的关系 ,中剂量与小、大剂量比较有显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而小剂量与大剂量比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅳ型胶原的沉积和拮抗转化生长因子 β1的生成 ,对肝纤维化有肯定的治疗作用 ,而且中剂量疗效较好。     

丹参素对PDGF-BB刺激下肝星状细胞的抑制作用

目的观察丹参素对PDGF-BB刺激下大鼠肝星状细胞活化增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原合成与分泌,ERK1/2和PI3K通道蛋白表达的影响,探讨丹参素抑制肝纤维化的分子机制。方法用不同浓度丹参素(0.250、0.125、0.062 mmol/L)、ERK通道特异性抑制剂UO126(20 nmol/L)和PI3K通道特异性抑制剂LY294002(20 nmol/L)分别作用于经血小板衍生生长因子PDGF-BB(10 ng/ml)处理的大鼠肝星状细胞(HSC)48 h,CCK8法检测HSC增殖活性,免疫化学染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌,Western blot测定ERK1/2、p-ERK1/2、AKT和p-AKT蛋白表达。结果 PDGF-BB 10 ng/ml处理后,HSC增殖明显增加(0.139±0.009),丹参素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用,并随丹参素浓度增加(0.062、0.125、0.250 mmol/L)细胞增殖受到的抑制作用越强(0.102±0.008、0.083±0.007、0.066±0.014,P<0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及分泌均显著减少(P<0.05),p-ERK1/2和p-AKT蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论丹参素可通过抑制PDGF-BB诱导的HSC增殖和活化,同时抑制与肝纤维化密切相关的MAPK、PI3K途径中ERK、AKT蛋白的磷酸化,负性调控肝纤维化过程,其机制可能与抑制ERK1/2和PI3K信号转导通路有关。