套式聚合酶链反应加限制酶谱分析检测母婴垂直传播巨细…

目的：克服一次性ＰＣＲ是性及非特异性条带干扰。方法：建立磁式ＰＣＲ技术，对１０５份母－脐配对血进行套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ以及特异性ＩｇＡ测定。结果：母血ＨＣＭＶＤＮＡ阳性６份，脐血３份，母－脐传播率为３／６。３对被主这为母婴生趣传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＭ均阳性、１对套式ＰＣＲ病毒分离，特异性ＩｇＡ阳性，但特异性ＩｇＭ阴性。结论：套式ＰＣＲ是一种     

肾移植患者人巨细胞病毒的检测

采用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对１１例肾移植者的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染情况进行了研究。在术前及术后的４周内，对其外周血及尿中病毒和血清中ＩｇＡ及ＩｇＭ抗体进行了连续检测。结果显示：有６例在移植后出现巨细胞病毒感染，感染率为５４％（６／１１）。血、尿中ＨＣＭＶＤＮＡ或ＨＣＭＶ抗体（ＩｇＡ或ＩｇＭ）阳性。提示：用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ方法对肾移植病人的ＨＣＭＶ感染情况进行监测，对预防和治疗ＨＣＭＶ感染和提高肾移植的成功率有着重要的意义。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体,建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ,以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示,以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ,批内变异系数为３．４７％,批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中,有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

妊娠早期妇女巨细胞病毒感染状况的研究

目的：检查孕妇绒毛巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染，了解孕妇ＣＭＶ的早期感染状况。方法：采用ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、病毒分离方法检测３２例早孕妇女血清ＣＭＶ－ＩｇＭ、宫颈和绒毛ＣＭＶ－ＤＮＡ。结果：孕妇血清ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率９．３８％（３／３２）；宫颈ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率为１２．５％（４／３２）；绒毛ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性１例，分离阳性１例，阳性率为６．２５％（２／３２）；２例绒毛ＣＭＶ感染，但血清及宫颈检查正常。结论：妊娠早期绒毛的ＣＭＶ感染率为６．２５％，母亲血清和宫颈检查正常并不能排除胎儿先天感染的可能。     

用多聚酶链反应检测母乳HBV和CMV在乳源筛选中的意义

采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测产妇初乳中ＨＢＶＤＮＡ和ＣＭＶＤＮＡ。结果显示：母血ＨＢＶＭ阴性者其初乳全呈ＰＣＲ阴性;母血ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ及ＨＢｃＡｂ阳性者其初乳排毒率为８１２５％;ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｂ及ＨＢｃＡｂ阳性者其初乳排毒率为４５２４％;仅ＨＢｅＡｂ与ＨＢｃＡｂ阳性者其初乳排毒率为２３０８％。说明产妇体内ＨＢＶ复制活跃、乳汁排毒率高,传播给婴儿的危险性大。母血ＣＭＶＩｇＭ阳性者其初乳ＣＭＶＤＮＡ阳性率为４２８６％～７０００％,传播给婴儿的可能性较大。提示母乳入库条件应为母血ＨＢＶＭ及ＣＭＶＩｇＭ阴性且ＨＢＶＤＮＡ与ＣＭＶＤＮＡ阴性者。ＰＣＲ是筛选乳源特异而敏感的方法     

抗-HCV阴性献血员丙肝病毒感染及意义

目的：探讨抗－ＨＣＶ阴性献血员隐匿性ＨＣＶ感染情况。方法：采用逆转录套式ＰＣＲ检测１００例抗ＨＣＶ阴性献血员血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果：血清中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性２例,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性６例;有１例血清及ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论：抗－ＨＣＶ阴性的献血员中仍有少数存在ＨＣＶ输血传播的可能,对献血员仅筛查抗－ＨＣＶ是不够的,应对血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－     

应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％，其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％，与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．     

孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的分子生物学诊断

目的 :建立套式聚合酶链反应 ( n PCR)检测人巨细胞病毒 ( HCMV)。方法 :建立套式 PCR检测 HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本。结果 :在 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及套式 PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但套式 PCR阳性。对 58例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,套式 PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论 :套式 PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段。     

Rapid detection of human cytomegalovirus DNA in urine samples by polymerase chain reaction in vitro gene amplification

In the detection of human cytomegalovirus (HCMV) DNA in the urine by polymerase chain reaction (PCR). We have designed and synthesized two pairs of oligonucleotide primers (patent pending) corresponding to the specific and conserved DNA sequences of HCMV AD 169 strain. The sequences of the primers were checked that they did not have cross reaction with either normal human genomic DNA or with other herpesviruses. As less as 1fg of HCMV DNA (equal to the amount of DNA from four HCMV virions) in urine can be detected by the method A total of 47 urine specimens from infants suspected of HCMV infection was examined by PCR and conventional virus isolation simultaneously 31 samples were positive in both PCR and virus isolation; 12 samples were negative in either; 4 samples were positive in PCR but negative in virus isolation. So the samples were further examined by serology and the data showed that there was HCMV-specific IgM in all the virus isolation negative sera examined. The result suggests that HCMV in the above samples is possibly underdetected by virus isolation. Therefore the method described in the paper is a specific, sensitive, rapid conventional and non radioisotopic one for detection of HCMV in urine samples.     

胃癌组织中人巨细胞病毒感染及其临床意义

目的：初步探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染与胃癌的关系。方法：采用化学发光（CLIA）法对胃癌组（n=80）及健康对照组（n=80）的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基因;统计分析HCMV感染与胃癌临床特征的关系。结果：胃癌组血清HCMV-Ig G阳性率为95%（76/80）,HCMV-Ig M阳性率为6.25%（5/80）;在健康对照组血清中,HCMV-Ig G阳性率为97.5%（78/80）,HCMV-Ig M阳性率为3.75%（3/80）,HCMV Ig G、Ig M在胃癌组与健康对照组血清中差异无统计学意义（P〉0.05）。HCMV UL55阳性检出率在22例胃癌组织中为50%（11/22）,在相应正常胃黏膜组织中为9.09%（2/22）,胃癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高（P〈0.01）。此外,未发现HCMV感染与胃癌的TMN分期、组织病理分化及肿块大小有显著性关联。结论：胃癌组织中存在HCMV感染,且HCMV相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与胃癌的发生发展过程。     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ，分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因，ＰＣＲ共检出１０份阳性，巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性，而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性，ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明，从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况，本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

FQ—PCR法与IBT法在人巨细胞病毒检测中的价值比较

目的对荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒进行比较分析。方法分别应用FQ—PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMVDNA和血清HCMV IgM。结果42例小儿尿HCMVDNA阳性检出率为57．14％,血HCMV IgM阳性检出率为35．71％。前者的诊断阳性率高于后者（χ2=3．88,P〈0．05）,有统计学差异;42例成人尿HCMVDNA阳性检出率为14．29％,血HCMVIsM阳性检出率为71．43％。后者的诊断阳性率显著高于前者（χ2=28,P〈0．005）,有统计学差异;84例患者尿HCMVDNA阳性检出率为38．10％,血HCMVIgM阳性检出率为48．81％。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ2=1．96,P〉0．1）。结论FQ—PCR检测HCMVDNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的检测及临床意义

目的：建立快速、早期、敏感的诊断人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV)感染的DNA检测方法,旨在了解异基因造血干细胞移植受的HCMV的感染情况及指导临床诊治。方法：利用ELISA和巢式PCR方法对30例异基因造血干细胞移植受进行检测。结果：检测异基因造血干细胞移植受30例,PCR和ELISA方法HCMV阳性分别为20例和18例;其阳性率分别为66.7%和60%。作为阴性对照的20名正常同时进行HCMV的检测,其结果均为阴性。结论：PCR具有早期、快速、简便的优点,适用于临床对HCMV的早期快速诊断和作为指导临床用药及愈后判断的主要手段。     

器官移植病人HHV—6和HCMV感染的追踪研究

用病毒分离，ＰＣＲ和血清学方法追踪研究３１例器官移植病人ＨＣＭＶ和ＨＨＶ－６感染情况及其对移植的影响。结果显示：ＨＣＭＶ和ＨＨＶ－６分离率分别为３５。．５％和４５．２％。术后ＤＮＡ阳性率分别为２５．８％和３２．３％，术前相应的ＩｇＭ阳性率为０％和３．２％，术后ＩｇＭ阳性率分别为１９．４％和２５．８％；术前ＤＮＡ阳性率分别为３５．５％和４５．２％。术后ＤＮＡ阳性率分别高达４５．２％和６１．３％，并在     

人巨细胞病毒的PCR检测

①目的 寻找早期快速检测人类巨细胞病毒（HCMV）感染的敏感方法。②方法 用HCMV即刻早期（IE）基因和晚期（LA）基因的7对待异性引物分别进行普通聚合酶链的反应（PCR），套式PCR（nPCR)和双重PCR，检测血清中的HCMV DNA，比较不同引物及不同PCR方法的灵敏度。③结果 同一基因的不同引物扩增HCMV DNA灵敏度差别无显著意义；LA基因的引物扩增灵敏度高于IE基因的引物；3种方法中以nPCR灵敏度最高，其次为双重PCR，普通PCR最低。④结论 用LA基因的特异性引物进行nPCR是早期快速检测HCMV感染的敏感方法。     

用聚合酶链反应技术检测流产和死胎组织的巨细胞病毒与弓形虫

作者通过人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）分离、套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及限制酶切分析、弓形虫分离及一次性ＰＣＲ，对不明原因的流产、死胎组织进行ＨＣＭＶ与弓形虫检测。结果发现，２８份流产、死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，但病毒分离阴性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺、眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫滋养体，但心、肾结果阴性。结果提示：临床上有些不明原因的流产、死胎可能是由于胎儿感染ＨＣＭＶ或弓形虫所致。ＰＣＲ技术较常规病原体分离敏感、快速，适合于ＨＣＭＶ／弓形虫感染所致流产、死胎的早期诊断。